免疫學(xué)技術(shù)-免疫血清制備課件

抗體制備一、免疫動物動物選擇：種類多。哺乳類或禽類。選擇適齡、健壯的動物原則：需要血清量、抗原從何種種屬動物分離獲得，需要單抗時，有多少抗原可使用。常用種類：兔、小鼠、大鼠、豚鼠、中國倉鼠商品用動物：豬、馬、牛、羊多抗制備常用兔（得到500ml血清?。┒嗫寺】贵w制備動物選擇動物血清最大量單抗可能性純系評價兔500有可能否常用于多抗制備小鼠2是是常用單抗制備大鼠20是是生產(chǎn)單抗中國倉鼠20否否抗原少時生產(chǎn)多抗豚鼠30否否難以采血雞50否否對高度保守的哺乳動物抗原較好小鼠6周左右成熟，大鼠6-8周，兔12周成熟數(shù)量：小鼠3-5只，兔最少兩只抗原及抗原劑量的選擇：所用抗原應(yīng)具備抗原特異性和較高的純度。而且可被降解抗原劑量根據(jù)其種類、免疫次數(shù)、注射途徑及動物種類、免疫周期等不同。抗原劑量過低或過高均不能誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體在一定范圍內(nèi)，抗體效價隨注射抗原劑量而增高二、抗原抗原溶液最好為中性生理學(xué)緩沖液（如PBS）從丙烯酰胺凝膠中純化抗原：電泳后蛋白定位、制備凝膠碎片（對于大動物）、電洗脫凝膠、轉(zhuǎn)膜（硝酸纖維素膜）后超聲半抗原：交聯(lián)載體（BSA，KLH，藍(lán)載體）多肽抗原：肽長度、合成難度，肽的活動性。最安全的選擇是制備多個不同區(qū)域的10-15個氨基酸的合成肽。偶聯(lián)策略三、佐劑的應(yīng)用顆粒性抗原或全細(xì)胞抗原不需要佐劑可溶性抗原須用佐劑，以增強抗原的免疫原性或改變免疫反應(yīng)的類型，刺激機體產(chǎn)生較強的免疫應(yīng)答佐劑種類：弗氏（Freund’s）佐劑、脂質(zhì)體佐劑、氫氧化鋁佐劑，SAF-1和RASIFA：羊毛脂1份，石蠟油5份，每毫升IFA中加入1-20mg卡介苗即為CFA。四、注射途徑兔：較大體積注射采用多點皮下小鼠：大體積顆粒性抗原通過腹腔注射、皮下注射（含佐劑可溶性抗原），靜脈注射不適于顆粒性抗原或含佐劑。緩慢釋放抗原：肌肉或皮下注射、皮下注射立即釋放抗原：靜脈注射（常在強化免疫時用）靜脈注射防止發(fā)生過敏性休克含佐劑的抗原不可只在一點注射用于小鼠的免疫原推薦劑量、免疫方式抗原類型例子基礎(chǔ)或加強免疫終加強免疫途徑劑量佐劑途徑劑量佐劑可溶性蛋白酶等ip,sc5-50ug+iv5-50ug-顆粒性蛋白病毒、細(xì)菌ip,sc5-50ug+iv5-50ug-不溶性蛋白包涵體等ip,sc5-50ug+iv5-50ug-活細(xì)胞ip105-107-iv

106-活瘤細(xì)胞ip104-106-iv106-碳水化合物ip10-50ugiv10-50ug-六、免疫效果評價檢測免疫血清以免疫前血清作為陰性對照鑒定抗體特異性、效價、交叉反應(yīng)性。方法：ELISA，W