牛海綿狀腦病課件

1、牛海綿狀腦病牛海綿狀腦病 病名 發(fā)現(xiàn)年代 證實(shí)年代 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 發(fā)生機(jī)理 克雅氏病 1920-1921 1966 黑猩猩、猴、水貂、貓、（CJD） 倉鼠、小鼠、豚鼠 散發(fā)性（spCJD） 體細(xì)胞突變或PrPc自發(fā)轉(zhuǎn) 變?yōu)镻rPsc 家族性（fCJD） PrP基因種子突變 醫(yī)源性（iCJD） 因接受污染的硬腦膜、角 膜移植物或手術(shù)器械污染 庫魯病 1951（1957） 1965 黑猩猩、猴、水貂、 因食庫魯病死者腦而感染 雪貂、山羊格斯綜合癥 1928 1961 猩猩、猴 PrP基因種子突變（GSS）致死性家族 1986 1995 小鼠 PrP基因種子突變 性失眠癥（FFI）新型克雅氏病 1994

2、 1995 猴、小鼠 BSE朊病毒感染（vCJD) 朊病毒病的疾病譜 病名 發(fā)現(xiàn)年代 證實(shí)病名 發(fā)現(xiàn)年代 證實(shí)年代 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 發(fā)病機(jī)理癢病 1730 1936 小鼠、大鼠、倉鼠、沙鼠 具有遺傳性易感性（Scrapie） 水貂、猴、黑猩貍 綿羊的傳染性疾病傳染性水貂 1947 1965 倉鼠、雪貂、綿羊、山羊 被綿羊或牛的朊病腦病（TME） 黑猩猩、猴、浣熊、臭鼬 毒感染動(dòng)物慢性消耗 1967 1982 猩猩、猴、雪貂 不明性疾?。–WD）牛海綿狀腦病 1985 1988 小鼠、水貂、綿羊、山羊 通過朊病毒污染的 （BSE） 豬、猴 肉骨粉感染貓海綿狀腦病 1989 1984 鼠 通過朊病毒污染

3、的 （FSE） 肉骨物（MBM）感染被囚禁野生 1986-1993 1992 小鼠 同上，或種間自然動(dòng)物的海綿 垂直或水平傳播狀腦?。⊿E）病名 發(fā)現(xiàn)年代 證實(shí)年代 實(shí)驗(yàn)動(dòng) 1 、克雅氏?。–reutzfeldt-Jakob disease,CJD）最常見的人朊病毒病，全球分布，年發(fā)病率為0.5-1%。我國1989首次報(bào)道 散發(fā)性（spCJD）：占總病例85%-90%，平均年齡65歲，懷疑源于癢病，但無可靠證據(jù)。PrP基因無突變，PrPc自發(fā)轉(zhuǎn)變或體細(xì)胞突變。 家族性（fCJD）：10%-15%，40歲發(fā)病約1%，50歲發(fā)病80%，50歲以上100% ， PrP基因突變約有10多種 。 醫(yī)源性

4、（iCJD）：1% 醫(yī)療診斷器械（腦波電極、腦手術(shù)器械），組織移植物（角膜、硬腦膜），腦垂體生長(zhǎng)激素或促性腺激素，PrP基因突變。 1 、克雅氏病（Creutzfeldt-Jakob d 驢跑病、搔癢病，主要是成年綿羊，偶爾發(fā)生于山羊的一種緩慢發(fā)展的傳染性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，表現(xiàn)劇癢，肌肉震顫，運(yùn)動(dòng)失調(diào)，癱瘓終歸死亡，是最古老的朊病毒病，朊病毒病的許多重大進(jìn)展大多是借鑒癢病的研究經(jīng)驗(yàn)取得的，我國1983年從英國進(jìn)口的邊區(qū)萊斯特羊（Brode Leicefer）中發(fā)現(xiàn)5例，于1988年被撲滅。2癢?。⊿crapie） 驢跑病、搔癢病，主要是成年綿羊，偶爾發(fā)生于山羊的一種3庫魯?。↘uru） 僅發(fā)

5、生于大洋州巴布亞新幾內(nèi)亞東部高地福爾（Fore）人聚集地。從1956年以來已記錄病例約2600個(gè)，發(fā)生和傳播是與食用死亡親屬腦組織所致，最初的庫魯病可能是食用克雅二氏病病人腦細(xì)胞引起，潛伏期4-30年。革除此陋習(xí)，發(fā)病迅速下降，現(xiàn)幾乎消滅。3庫魯病（Kuru） 僅發(fā)生于大洋州巴布亞新幾4致死性家族性失眠癥（Fatal familial insomeia,FFI） 臨床上以治療無效的頑固失眠，自主神經(jīng)機(jī)能失調(diào)和運(yùn)動(dòng)體征（語言障礙，共濟(jì)失調(diào)）為特征，發(fā)病年齡20-71歲平均51歲，病程6-32個(gè)月，平均14個(gè)月，F(xiàn)FI是常染色體顯性遺傳性疾病。4致死性家族性失眠癥（Fatal familial i

6、n5牛海綿狀腦病（BSE） 特征是精神狀態(tài)失常，共濟(jì)失調(diào)，感覺過敏和CNS灰質(zhì)空泡化。5牛海綿狀腦?。˙SE） 特征是精神狀態(tài)牛海綿狀腦病課件牛海綿狀腦病課件對(duì)物理化學(xué)因素具有非常強(qiáng)的抵抗力 高壓蒸氣134-138 18min不能使之完全滅活；37、20%福爾馬林18小時(shí)不能使之完全滅活；室溫下，10-12%福爾馬林中可存活28個(gè)月；對(duì)紫外線，離子輻射，超聲波抵抗力均很強(qiáng)；不被多種核酸酶（RNA酶和DNA酶）滅活。獨(dú)特的生物學(xué)特性 見不到病毒顆粒，但可檢出癢病相關(guān)纖維（SAF,Scrapie associated fibrils）；不形成包涵體；不含非宿主蛋白；不誘生干擾素，對(duì)干擾素不敏感，不

7、干擾其它病毒誘生干擾素，也不受普通病毒干擾；至今未能證明其含感染性核酸；免疫抑制和免疫增強(qiáng)劑不能改變TSES的發(fā)生和發(fā)展過程；不破壞宿主B細(xì)胞和T細(xì)胞的免疫機(jī)能；也不引起宿主的免疫反應(yīng)。朊病毒的異常特性一、病原對(duì)物理化學(xué)因素具有非常強(qiáng)的抵抗力朊病毒的異常特性一、病原PrPc和PrPsc 抗蛋白酶蛋白（Protease-resistant Protein,PrP ） , PrPc和PrPsc為異構(gòu)體,分子質(zhì)量均為33-35Ku，PrPc和PrPsc在mRNA和氨酸酸水平無任何差異，但理化特性和二級(jí)結(jié)構(gòu)顯著不同。正常動(dòng)物僅有PrPc，癢病感染動(dòng)物則兩者兼?zhèn)?。PrPc和PrPsc 抗蛋白酶蛋白（Pr

8、otease-res正常動(dòng)物僅有PrPc，癢病感染動(dòng)物則兩者兼?zhèn)?。vJCD是感染BSE引起的?；?，產(chǎn)生PrP27-30，PrPsc和野型PrP轉(zhuǎn)基因過度表達(dá)轉(zhuǎn)基因的老齡小鼠自發(fā)地發(fā)生癢病樣疾病。貓海綿狀腦病 1989 1984 鼠 通過朊病毒污染的2000年頭10個(gè)月英國即發(fā)生30例，顯著多于往年。BSE平均潛伏期約為5年，發(fā)病年齡多為4-6歲，2歲以下和6歲以上牛很少發(fā)生。（CJD） 倉鼠、小鼠、豚鼠蛋白酶K 高度敏感，完全消化，無感染性 部分消化，移去N末端67個(gè)aa殘防制必須永久禁止使用動(dòng)物性飼料（肉骨粉，血粉等），飼喂家畜（包括魚），銷毀現(xiàn)有的這類飼料。75:1，癢病患病率達(dá)0. Pr

9、Pc PrPsc 形態(tài) 不聚合為大分子纖維或短桿結(jié)構(gòu) 大量聚合為SAF或短桿結(jié)構(gòu)有抗性，蛋白酶K 高度敏感，完全消化，無感染性 部分消化，移去N末端67個(gè)aa殘 基，產(chǎn)生PrP27-30，PrPsc和 PrP27-30均有感染性存在位置 細(xì)胞表面 細(xì)胞內(nèi)半衰期 短 長(zhǎng)二級(jí)結(jié)構(gòu) 螺旋 42% 螺旋 38% 片層 3% 片層 43%正常動(dòng)物僅有PrPc，癢病感染動(dòng)物則兩者兼?zhèn)洹?牛海綿狀腦病課件BSE發(fā)生和流行期間，潛伏期未見縮短。vJCD是感染BSE引起的。牛海綿狀腦病 1985 1988 小鼠、水貂、綿羊、山羊 通過朊病毒污染的1993年 呈負(fù)增長(zhǎng)，以后逐年下降為降低乳牛飼養(yǎng)費(fèi)用，飼料中BMB

10、含量由1%猛增到12%，乳牛群牛犢4周齡前用代乳品喂養(yǎng)，代乳品蛋白含量約為16%，大部分為MBM。ab分別需時(shí)8和4h、c法需時(shí)不到24h。形態(tài) 不聚合為大分子纖維或短桿結(jié)構(gòu) 大量聚合為SAF或短桿結(jié)構(gòu)有抗性，5牛海綿狀腦?。˙SE）高壓蒸氣134-138 18min不能使之完全滅活；BSE平均潛伏期約為5年，發(fā)病年齡多為4-6歲，2歲以下和6歲以上牛很少發(fā)生。b以多克隆抗體檢測(cè)PrPsc的化學(xué)發(fā)光ELISA。有些試驗(yàn)結(jié)果表明，朊病毒病的發(fā)生可能是正常的PrPc缺失，而不是PrPsc的積果所引起的。PrPc和PrPsc存在位置 細(xì)胞表面 細(xì)胞內(nèi)5牛海綿狀腦病（BSE）外源朊病毒，作為模板促使P

11、rP*轉(zhuǎn)變?yōu)镻rPsc根據(jù)臨床癥狀只能作出朊病毒病的可疑診斷，確診必須依賴腦組織病理學(xué)檢查（包括活檢）。朊病毒形成機(jī)制PrPc PrP* PrPsc（PrPscPrPsc，PrPscPrP*）外源朊病毒，作為模板促使PrP*轉(zhuǎn)變?yōu)镻rPsc散發(fā)性，無外源朊病毒參與，PRP*蓄積至自發(fā)產(chǎn)生PrPsc。 野型PrP轉(zhuǎn)基因過度表達(dá)轉(zhuǎn)基因的老齡小鼠自發(fā)地發(fā)生癢病樣疾病。體細(xì)胞突變可使PrPc失穩(wěn)轉(zhuǎn)變?yōu)镻rP*，進(jìn)而形成PrPsc。遺傳性朊病毒病，突變PrPc（PrPc）結(jié)構(gòu)的隨機(jī)不穩(wěn)定性比PrPc，易產(chǎn)生PrP*，從而產(chǎn)生PrPsc蛋白質(zhì)XBSE發(fā)生和流行期間，潛伏期未見縮短。朊病毒形成機(jī)制PrPrP

12、在朊病毒形成過程中的作用PrP基因缺失小鼠發(fā)育正常，至600日齡時(shí)仍健活，接種癢病朊病毒的小鼠存活350天以上，而PrP+/+ 的PrP+/0 小鼠則均發(fā)病死亡，且前者的潛伏期和病程都明顯短于后者，PrP0/0小鼠插入PrP基因后，獲得癢病的易感性。有些試驗(yàn)結(jié)果表明，朊病毒病的發(fā)生可能是正常的PrPc缺失，而不是PrPsc的積果所引起的。1缺失PrP的小鼠在晝夜節(jié)律和睡眠方式上發(fā)生改變（FFI）。2PrP蛋白對(duì)潛伏期學(xué)習(xí)和長(zhǎng)期記憶的保持是必需的。3PrP缺失鼠，Cu/zn超氧化物歧化酶活性降低，因此對(duì)細(xì)胞內(nèi)氧化壓力更敏感導(dǎo)致細(xì)胞更快死亡。PrP在朊病毒形成過程中的作用PrP基因缺失小鼠發(fā)育正常

13、，至朊病毒病原的假說聯(lián)合學(xué)說：感染因子是完全朊病毒組成，一是分離朊病毒，即PrPsc，由宿主基因組復(fù)制，本身可致病，另一成分是協(xié)同朊病毒，即核酸。它決定毒株的株特性，可能連結(jié)于PrPsc上 ，也存在于正常宿主細(xì)胞中。朊病毒病原的假說聯(lián)合學(xué)說：感染因子是完全朊病毒組成，一是分離朊病毒研究有待解決的問題1個(gè)感染單位和PrPsc分子的比值約為1：100000，1個(gè)感染單位是許多相同PrPsc分子的聚合物還是若干不同PrPsc分子混合物中為數(shù)不多的某種特殊分子PrPc和PrPsc的精確結(jié)構(gòu)及前者轉(zhuǎn)變?yōu)楹笳咂陂g究竟產(chǎn)生了哪些結(jié)構(gòu)變化是否存在抗蛋白酶而無感染性和有感染性而無抗蛋白酶的PrPsc體外試驗(yàn)產(chǎn)生

14、的PrPsc有無感染性PrPc的生理機(jī)能朊病毒進(jìn)入腦的通路和其與腦病變的關(guān)系。朊病毒研究有待解決的問題1個(gè)感染單位和PrPsc分子的比值約BSE的傳染來源錯(cuò)誤推論 BSE是高蛋白補(bǔ)充飼料肉骨粉（MBM）被癢病朊病毒污染所致，MBM是從綿羊、牛、雞的下水化制生產(chǎn)的。英國綿羊：牛=3.75:1，癢病患病率達(dá)0.2% 70-80年，MBM生產(chǎn)工藝由碳?xì)浠衔锶軇┨崛〉呐畏ǜ臑檫B續(xù)法，導(dǎo)致癢病朊病毒未被完全滅活殘存于MBM中。為降低乳牛飼養(yǎng)費(fèi)用，飼料中BMB含量由1%猛增到12%，乳牛群牛犢4周齡前用代乳品喂養(yǎng)，代乳品蛋白含量約為16%，大部分為MBM。二、流行病學(xué)BSE的傳染來源錯(cuò)誤推論二、流行病

15、學(xué)英國BSE的流行過程1986年 12頭1987年 461頭1988年 3000頭1992年 36000頭1993年 呈負(fù)增長(zhǎng)，以后逐年下降 至累計(jì)168578例，涉及33000多個(gè)牛群，平均每群約5例。1988年7月起，英國頒布了反多動(dòng)物飼喂含反多動(dòng)物蛋白的飼料，采取措施后5a，即1993年，發(fā)病數(shù)開始下降，以后逐年減少，1993年后出生的牛很少發(fā)病，說明上述預(yù)防措施有效。 英國BSE的流行過程牛海綿狀腦病課件 結(jié)論：飼喂了污染癢病的MBM導(dǎo)致BSE。 美國和冰島科學(xué)家則認(rèn)為，BSE蔓延原因是與生活在干草中的螨蟲有關(guān)，從螨蟲身上提取的化學(xué)物質(zhì)注射小鼠，小鼠患癢病，這似乎可以解釋英國禁食反多動(dòng)

16、物飼料后仍未消滅BSE。 結(jié)論：飼喂了污染癢病的MBM導(dǎo)致BSE。 法國2000年BSE發(fā)病數(shù)急劇上升，1991-2000年11月末累計(jì)發(fā)病183，而2000年11個(gè)月即發(fā)生100余例。這些病牛絕大多數(shù)是歐洲1996年3月禁止英國出口牛肉、牛肉制成品、半成品和醫(yī)藥原料以及哺乳動(dòng)物原料生產(chǎn)飼料后，本國出生的土生土長(zhǎng)的牛。以前認(rèn)為除英國外，其他國家不具備該病發(fā)生流行的全部條件不會(huì)嚴(yán)重流行觀點(diǎn)，顯然已過時(shí)。 法國2000年BSE發(fā)病數(shù)急劇上升，1991-2牛海綿狀腦病課件 英國2000年10月26日發(fā)表了牛海綿狀腦病調(diào)查報(bào)告報(bào)告否定了BSE源于綿羊癢病。認(rèn)為它是牛十分罕見的散發(fā)性朊病毒病。肉骨粉生產(chǎn)

17、方式的改變與BSE發(fā)生無關(guān)。BSE朊病毒和癢朊病毒的生物學(xué)和生物特性不同，后者雖可實(shí)驗(yàn)感染牛使之發(fā)病，但臨床表現(xiàn)和病理變化與BSE不同，BSE單一傳染來源、屬同一毒株，而癢病朊毒有明顯的多樣性、具有許多不同的毒株。BSE發(fā)生和流行期間，潛伏期未見縮短。BSE流行期，英國癢病的發(fā)病率未見增多。實(shí)驗(yàn)證實(shí)連續(xù)法和批次法生產(chǎn)的肉骨粉在感染性上并無明顯不同。因此，在以不可供人食用的牛尸體生產(chǎn)飼料條件下，任何國家一旦發(fā)生牛散發(fā)性朊病毒病就可引發(fā)BSE流行。 英國2000年10月26日發(fā)表了牛海綿狀腦病調(diào)查BSE平均潛伏期約為5年，發(fā)病年齡多為4-6歲，2歲以下和6歲以上牛很少發(fā)生。牛的概率壽命為3年，大多

18、數(shù)牛于2-3歲即被屠宰食用。乳牛發(fā)病率顯著高于肉牛，性別、品種和遺傳因素與BSE的易感性無關(guān)。BSE水平傳播和垂直傳播情況很少或沒有。流行特點(diǎn)BSE平均潛伏期約為5年，發(fā)病年齡多為4-6歲，2歲以下和6三、診斷 根據(jù)臨床癥狀只能作出朊病毒病的可疑診斷，確診必須依賴腦組織病理學(xué)檢查（包括活檢）。PrPsc檢測(cè)（細(xì)胞免疫化學(xué)檢查、免疫印跡、組織印跡、ELESA等）及PrP基因分析，腦組織SAF檢查。腦組織病理學(xué)檢查、PrP斑塊，中心致密，嗜伊紅、邊緣較暗淡，周圍被海綿狀空泡病變帶環(huán)繞。如雛菊樣生物學(xué)測(cè)定法：潛伏期長(zhǎng)、費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、花費(fèi)大，但轉(zhuǎn)基因小鼠有優(yōu)勢(shì)，用對(duì)BSE高度易感的轉(zhuǎn)基因小鼠檢測(cè)BSE、

19、實(shí)驗(yàn)鼠約在200天發(fā)病，潛伏期可望進(jìn)一步縮短。三、診斷 根據(jù)臨床癥狀只能作出朊病毒病的可疑診斷，確診必BSE免疫學(xué)檢測(cè)方法a以一種單抗檢測(cè)PrPsc的免疫印跡法。b以多克隆抗體檢測(cè)PrPsc的化學(xué)發(fā)光ELISA。c在變性和濃縮后用兩種單抗檢測(cè)PrPsc的夾心免疫測(cè)定法。ab分別需時(shí)8和4h、c法需時(shí)不到24h。最小檢測(cè)值，c為10-2.5,b為，a為?，F(xiàn)已有各種特異的單抗可區(qū)分小鼠，倉鼠和人的PrPsc。制備了只和各種動(dòng)物PrPsc共有位點(diǎn)而不和PrPc反應(yīng)的特異單抗，應(yīng)用此單抗，標(biāo)本無需蛋白酶K處理即可檢測(cè)。BSE免疫學(xué)檢測(cè)方法a以一種單抗檢測(cè)PrPsc的免疫印跡四、防治防制必須永久禁止使用

20、動(dòng)物性飼料（肉骨粉，血粉等），飼喂家畜（包括魚），銷毀現(xiàn)有的這類飼料。最有效的消毒方法是焚燒病畜及產(chǎn)品對(duì)病原因子需以136高壓蒸汽消毒1h,12ml/L的NaoH溶液消毒1h以上，5mol/L的次氯酸鈉溶液消毒2h以上，固定組織的甲醛對(duì)病料消毒不徹底，需再用乙酸溶液浸泡1h以上。四、防治防制必須永久禁止使用動(dòng)物性飼料（肉骨粉，血粉等），飼治療：阻止PrPc轉(zhuǎn)變?yōu)镻rPsc 研制使PrPc結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的藥物 改變蛋白質(zhì)作用的藥物 使PrPsc結(jié)構(gòu)失穩(wěn)的藥物用轉(zhuǎn)基技術(shù)培養(yǎng)抗朊病毒病的家畜，以供生產(chǎn)某些重要藥品用。治療：阻止PrPc轉(zhuǎn)變?yōu)镻rPsc 新克雅氏病（vJCD）和BSE病原的關(guān)系1994年2月

21、首次發(fā)現(xiàn)于英國，至于997年9月已報(bào)道22例，其中法國1例，英國21例。vJCD 主要發(fā)生于青年，14-40歲，平均歲，病程9-53個(gè)月，平均14個(gè)月，明顯小于和短于spCJD，臨床表現(xiàn)較致，主要是行為改變，感覺異常和共濟(jì)失調(diào)。vCJD于BSE發(fā)生和流行后約10年出現(xiàn)，且集中分布于英國有時(shí)間和空間上與BSE一致。vJCD是感染BSE引起的。 五、公共衛(wèi)生新克雅氏?。╲JCD）和BSE病原的關(guān)系1994年2月首次 用BSE接種3只長(zhǎng)尾猴腦內(nèi)，3年發(fā)病，臨床表現(xiàn)，CNS組織病理變化（海綿狀病變，PrP塊和PrP沉淀的形態(tài)和分布）與vCJD十分相似。 PrPvCJD和PrPBSE的蛋白免疫印跡圖譜相同。雙糖化