溫度、pH、激活劑、抑制劑對(duì)酶活性的影響

1、溫度、pH、激活劑、抑制劑對(duì)酶活性的影響（間接碘量法）（effects of temperature pH activitor and inhibitor to activity of enzyme）一、目的了解溫度、pH、激活劑、抑制劑對(duì)酶活性的影響學(xué)習(xí)酶活性的判定酶活性大小可以用反應(yīng)速度來(lái)表示，即在單位時(shí)間內(nèi)，酶所催化底物的 消耗量或產(chǎn)物的生成量來(lái)衡量。酶活性大，反應(yīng)速度就快。反之則慢。酶促 反應(yīng)速度受多種因素的影響。如溫度、pH、激活劑、抑制劑等。本實(shí)驗(yàn)是觀察在不同溫度，pH，以及缺乏激活劑或有抑制劑的條件下唾 液淀粉酶的活性大小。借以驗(yàn)證各種因素對(duì)酶活性的影響。唾液中含有唾液淀粉酶，此

2、酶可以使淀粉逐步水解，最后生成麥芽糖。 麥芽糖具有還原性。根據(jù)淀粉被唾液淀粉酶水解后產(chǎn)物的生成量（即還原性 麥芽糖的多少）判定酶活性的大小。用碘的反滴定法測(cè)定還原物的量，還原 物多，酶活性大。具體反應(yīng)如下：1、試劑成分（S、H、S 試劑）：CuSO、Na CO、NaHCO、KI、KIO、酒石42333酸鉀鈉、草酸鉀。2、判定酶活性大小的化學(xué)反應(yīng)過(guò)程：Na CO +2HO - 2NaOH + H COCuSoJ +2NaOH - Cu（OH）+ Na2SO45KI +KIO + 3H SO - 3I +3K SO +3HO TOC o 1-5 h z 3242242酶淀粉一麥芽糖麥芽糖+Cu+

3、一一麥芽糖氧化產(chǎn)物+Cu+Cu+ + I2 - Cu+ + 2I-COO- 草酸鉀COO-Cu+ | CuCO0防止逆反應(yīng)CO剩余I+ Na SO -2I- + Na SO22 2 32 4 6（與淀粉呈蘭色（與淀粉無(wú)色）3、判定酶活性大小的標(biāo)志酶活性大一麥芽糖多一Cu+生成量多一 I2消耗量多一剩余I少一Na SO消耗量少 22 2 3酶活性越大，NaSO消耗量越少?？瞻讓?shí)驗(yàn)無(wú)酶活性，因此NaSO消耗量最223223多。與空白實(shí)驗(yàn)進(jìn)行對(duì)比，差值越大，說(shuō)明此條件下酶活性越大。三、實(shí)驗(yàn)用品：（一）器材中試管16支。試管架1個(gè)。恒溫水浴箱1臺(tái)。溫度計(jì)1支。量筒1個(gè)。吸管：1 支，1ml 2 支，2

4、ml 1支，5ml 1 支，10ml 1 支。25ml、100ml 燒杯各 1 個(gè)。電爐子一個(gè)。（二）試劑%淀粉溶液NaCl溶液：稱取，溶于1000ml水中。磷酸鹽緩沖液甲液：稱取Na HPO - 12HO溶于1000ml水中，既為M/15 Na HPO溶液，此 -一 24224溶液pH為。乙液：稱取溶于1000ml水中，既為M/15 KH PO溶液，此溶液pH為。取甲液，乙液，兩液混勻后既為pH磷酸鹽緩沖4液。0.01% HgCl2HSO溶液：取水約250ml，加入濃H SO 28ml，稀釋至1000ml。2424試劑（S、H、S試劑）溶液A：結(jié)晶硫酸銅（）溶于100m l水中。溶液B：酒石

5、酸鉀鈉12g，無(wú)水碳酸鈉20g，碳酸氫鈉25g溶于500ml水 中。溶液C：碘化鉀10g，碘酸鉀，草酸鉀18g溶于300ml水中。將溶液B倒入溶液A中混勻，再倒入溶液C混勻后定容至1000ml。7.標(biāo)準(zhǔn)NaS O溶液：取硫代硫酸鈉（）25g溶于1000ml水中。此溶液濃度 約為，其準(zhǔn)確濃度須用碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)方法標(biāo)定。（方法略）取已調(diào)整至 標(biāo)準(zhǔn)Na SO溶液50ml稀釋至1000ml即為。2 2 3四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、制備稀釋唾液：收集唾液于小燒杯內(nèi)，吸取下層唾液（要求無(wú)氣泡）加 入量筒內(nèi)，用蒸餾水稀釋至25ml，混勻備用。2、取中試管8支，標(biāo)號(hào)07, 0號(hào)為空白對(duì)照，1-3號(hào)為測(cè)定溫度對(duì)酶活 性的影

6、響，4-5號(hào)為pH對(duì)酶活性的影響，6-7號(hào)為激活劑和抑制劑對(duì)酶活性的影 響按下表操作。加入試劑及唾液后各管充分混勻。影響因素管號(hào)淀粉 NaCl 緩沖溶液H歹溫度 稀釋 溫度（ml） （ml） pH ml ml 時(shí)間 唾液 時(shí)間空白037C 10-37C20 溫度的137C 1037C20影響210C 1010 C20 380 C10 80C20pH值的437C 1037C20影響537C 1037C20激活劑66 .637 C1037C20 抑制劑7HgCL26 .637 C1037C20 的影響(2ml)3、充分混勻后開(kāi)始保溫，保溫后立即由各管吸取2ml分別加入已預(yù)先加入 2ml S、H、S試劑相應(yīng)號(hào)碼的試管中，并充分混勻。4、各管放入沸水中加熱8分鐘。5、向各管加入5 HSO 2ml，輕輕搖動(dòng)至不產(chǎn)生氣泡為止。6、以NaS O滴定各管；至藍(lán)色消退為止。并記錄結(jié)果。7、由零號(hào)試管消耗NaSO ml數(shù)分別減去其余各管所消耗ml數(shù)，以此結(jié)果 判定各種因素對(duì)酶活性的影響3五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析（略）管號(hào)01234567消耗ml數(shù)差值思考