選修1《生物技術(shù)實(shí)踐》知識(shí)點(diǎn)歸納

1、文檔編碼 : CR7L9K4S10W6 HZ2Q4D3S6H2 ZZ3Y10E9W9M72022 選修 1生物技術(shù)實(shí)踐學(xué)問(wèn)點(diǎn)歸納試驗(yàn) 1 大腸桿菌的培養(yǎng)和分別1. 微生物是指結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)潔、形體微小的單細(xì)胞、多細(xì)胞或沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物,包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌；細(xì)菌是單細(xì)胞的原核生物,有細(xì)胞壁（肽聚糖）、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì),無(wú)成型的細(xì)胞核,只有一環(huán)狀DNA分子（擬核）；以分裂（二分裂）的方式繁殖,分裂速度很快；用革蘭氏染色法將細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性菌（革蘭氏染液染色后,再脫色處理,細(xì)菌仍保留染色液的顏色）和革蘭氏陰性菌兩大類,區(qū)分在細(xì)胞壁的成分不同；大腸桿菌是革蘭氏 陰性 （細(xì)胞壁薄,有莢

2、膜） 、兼性厭氧 的腸道桿菌；2. 細(xì)菌的分別方法有兩種：劃線分別法和涂布分別法；是排除污染雜菌的通用方法,也是用于挑選高表達(dá)量菌株的最簡(jiǎn)便方法之一；劃線分別 就是用接種環(huán)蘸菌液后在含有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿平板上劃線,在劃線的過(guò)程中菌液逐步削減,細(xì)菌也逐步削減, ；劃線最終,可使細(xì)菌間的距離加大；將接種后的固體培養(yǎng)基培養(yǎng) 1020 小時(shí)后,一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞就會(huì)繁殖成許多細(xì)菌細(xì)胞,形成菌落,不會(huì)重疊；在斜面上劃線, 就每個(gè)斜面的菌群就是有一個(gè)細(xì)菌產(chǎn)生的后代；用于基因工程的大腸桿菌的工程菌,可以用劃線分別法獲得產(chǎn)物表達(dá)能力高的菌株；由于工程菌的質(zhì)粒中通常有抗性基因（如抗氨芐青霉素基因）,如在培養(yǎng)基中加入

3、確定量的氨芐青霉素,由于非工程菌的其他雜菌都沒(méi)有抗性基因,所以在劃線后只有存在抗性基因的工程菌能生存下來(lái)；涂布分別 時(shí),需要先將培養(yǎng)的菌液稀釋,通常稀釋到 10-5 10-7 之間,然后去 0.1ml 不同稀釋度的稀釋菌液放在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上,用 玻璃刮刀 涂布在培養(yǎng)基平面上進(jìn)行培養(yǎng),在適當(dāng)?shù)?稀釋度 下,可產(chǎn)生相互分開(kāi)的菌落；通常每個(gè)培養(yǎng)皿中有 20 個(gè)以內(nèi) 的單菌落為最合適；劃線分別法,方法簡(jiǎn)潔；涂布分別法,單菌落更易分開(kāi),但操作復(fù)雜；3. 在培養(yǎng)微生物時(shí),必需進(jìn)行 無(wú)菌操作 ；其首要條件是各種器皿必需是無(wú)菌的,各種培養(yǎng)基也必需是無(wú)菌的,轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基、倒平板、接種、平板劃線、平板稀釋涂布

4、等操作中的每一步都要做到無(wú)菌（防止雜菌污染）；進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí),要將 培養(yǎng)皿倒置 ,是由于培養(yǎng)基中的水分會(huì)以水蒸氣的形式蒸發(fā),倒放培養(yǎng)皿會(huì)使水蒸氣凝結(jié)成水滴后,落入培養(yǎng)基的表面并且擴(kuò)散,菌落中的細(xì)菌也會(huì)隨水?dāng)U散,菌落見(jiàn)相互影響,很難在分成單菌落,達(dá)不到分別的目的；4. 細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)要用 LB液體培養(yǎng)基（通用培養(yǎng)基、常用于做生理學(xué)爭(zhēng)辯和發(fā)酵工業(yè)）,劃線分別要用 LB 固體培養(yǎng)基（常用于微生物分離、鑒定、計(jì)數(shù)和菌種儲(chǔ)存） ；“ 細(xì)菌喜葷,霉菌喜素 ” ,通常細(xì)菌培養(yǎng)基要用蛋白胨和酵母提取物來(lái)配制,仍要加入確定的 氯化鈉,以保護(hù)確定的滲透壓 ；霉菌培養(yǎng)基一般用 無(wú)機(jī)物配制或添加蔗糖的豆芽汁 人及動(dòng)物的

5、養(yǎng)分物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類；植物的養(yǎng)分物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類；微生物的養(yǎng)分物質(zhì)： 水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源及生長(zhǎng)因子 等五類；4. 無(wú)菌技術(shù)（ 1）獲得純潔培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵,要留意 以下幾個(gè)方面：對(duì)試驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手,進(jìn)行清潔和 消毒 ；將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行 滅菌 ；為防止四周環(huán)境中微生物的污染,試驗(yàn)操作應(yīng)在 酒精燈火 焰鄰近 進(jìn)行；試驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)防止已經(jīng)滅菌處理的材料用具與四周的物品 相接觸；（ 2）消毒與滅菌的區(qū)分 消毒指使用較為溫存的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi) 部一部分對(duì)人體有害的微生物（

6、不包括芽孢和孢子）；消毒方 法常用煮沸消毒法,仍有化學(xué)藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸即可；盡管培養(yǎng)基的配方各不相同, 但其基本成分都一樣 （五類）；等）消毒、紅外線消毒；滅菌就是指使用猛烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物,包括芽孢和孢子；滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸 汽滅菌 121；C 15 MIN ；5. 培養(yǎng)基（ 1）培養(yǎng)基可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基（依據(jù)物理性質(zhì)）；在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂后,制成瓊脂固體培養(yǎng)基；微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng),可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落；依據(jù)菌落的特點(diǎn)可以判定是哪一種菌；（ 2）各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四種養(yǎng)分物質(zhì)；中意微生物生長(zhǎng)仍

7、需要適宜的 pH、氧氣的要求（依據(jù)微生物的需 求供應(yīng)有氧或無(wú)氧環(huán)境） 、特殊養(yǎng)分物質(zhì)等；碳源：能為微生物的代謝供應(yīng)碳元素的物質(zhì)；如 碳源；單質(zhì)碳不能作為碳源；氮源：能為微生物的代謝供應(yīng)氮元素的物質(zhì)；如CO 2、NaHCO 3 等無(wú)機(jī)碳源；糖類、蛋白質(zhì)、脂肪等有機(jī)碳源；異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)N2、NH3、NO- 、蛋白質(zhì)、氨基酸等；只有固氮微生物才能利用N2；（ 3）培養(yǎng)基配制的原就：目的要明確、 PH值要適宜、養(yǎng)分要和諧和要經(jīng)濟(jì)節(jié)約；5爭(zhēng)辯和摸索（ P24）（1）如何操作可以盡量防止被雜菌污染？答：膽大心細(xì),操作快捷；留意滅菌 操作原就,滅菌完全；手和試驗(yàn)服要清潔；留意微生物生長(zhǎng)條件；（2）在

8、培養(yǎng)后如何判定是否有雜菌污染？答：可依據(jù)菌落外形特點(diǎn)來(lái)判定；用顯微鏡鏡檢菌的外形和大小；上述方法較難區(qū)分同類的物種,需要用化學(xué)方 法進(jìn)一步觀看,如用革蘭氏染色法；（3）進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí)為什么要培養(yǎng)皿倒置？答：冷凝后,皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠,凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高,將平板倒置,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好 地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染；（4）試驗(yàn)完成后,接觸過(guò)細(xì)菌的器皿應(yīng)如何處理？答：試驗(yàn)完成后,全部接觸過(guò)細(xì)菌的器皿都必需先高壓滅菌后再洗滌,特殊是培養(yǎng)基,有可能被有害菌體污染,在培養(yǎng) 繁殖后,大量有害菌體影響人畜健康,也污染環(huán)境,因此必需高壓滅菌；使用后的廢棄物也要 高壓

9、滅菌后再拋棄；試驗(yàn) 2 分別以尿素為氮源的微生物 一、教學(xué)要求基本要求進(jìn)展要求1進(jìn)行微生物分別,使用含有尿素的培養(yǎng)基 分別有脲酶的細(xì)菌；2使用 酚紅指示劑 檢測(cè)以尿素為氮源的細(xì)菌的存在；1說(shuō)明分別以尿素為氮源的細(xì)菌的試驗(yàn)原理；2舉例說(shuō)明本試驗(yàn)分別出來(lái)的細(xì)菌不愿定都是以尿素為氮源的細(xì)菌；說(shuō)明二、基本內(nèi)容 1試驗(yàn)原理：本試驗(yàn)以 LB全養(yǎng)分培養(yǎng)基與尿素固體培養(yǎng)基 為對(duì)比, 通過(guò)觀看兩者的細(xì)菌菌落數(shù)說(shuō)明能利用尿素的細(xì)菌在土壤菌群中較 少；這兩種培養(yǎng)基在配制時(shí)均要用 瓊脂糖代替瓊脂 使之固化；另外,由于尿素在高溫下會(huì)分解,所以對(duì)尿素溶液的滅菌要接受 G6玻璃漏斗 過(guò)濾的方法；在尿素固體培養(yǎng)基中仍要加入

10、酚紅 ,這是一種酸堿指示劑, 有脲酶的細(xì)菌菌落四周會(huì)顯現(xiàn) 著色的環(huán)帶 ；2試驗(yàn)步驟：（ 1）土壤取樣從肥沃、潮濕的土壤中取樣；先鏟去表層土（ 2）制備培養(yǎng)基3 cm 左右,再取樣,將樣品裝入事先預(yù)備好的信封中；預(yù)備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和挑選培養(yǎng)基將菌液稀釋相同的倍數(shù),在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目,因此,LB全養(yǎng)分培養(yǎng)基可以作為對(duì)比,用來(lái)判定挑選培養(yǎng)基是否起到了挑選作用；（ 3）制備細(xì)菌懸液參考課本中 P26圖 5 的試驗(yàn)流程示意圖,將 1 g 土樣加入盛有 99mL無(wú)菌水的錐形瓶中（錐形瓶體積為 250 mL）,充分搖勻,吸取上清液 0.5mL,轉(zhuǎn)移至盛有 4

11、.5 mL 的無(wú)菌水的大試管中,依次等比稀釋至 10 4和 10 5稀釋度,并依據(jù)由 104 和 10 5稀釋度的次序分別吸取 0.1 mL 進(jìn)行平板涂布操作,各做 三個(gè)培養(yǎng)皿 ；依據(jù)濃度從低到高的次序涂布平板,不必更換移液管；（ 4）微生物的培養(yǎng)與觀看將涂布好的培養(yǎng)皿放在 37 溫度下培養(yǎng) 2448h；隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),會(huì)有不同的菌落產(chǎn)生；比較牛肉膏培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、外形等,并做好記錄；挑選挑選培養(yǎng)基中不同外形的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中,觀看能否產(chǎn)生 3爭(zhēng)辯和摸索（ P28）著色的環(huán)帶 的顏色反應(yīng)；（1）為什么本試驗(yàn)中要用 瓊脂糖來(lái)代替瓊脂 配制固體培養(yǎng)基呢？瓊脂糖與瓊脂

12、有何區(qū)分？答：瓊脂在制作固體培養(yǎng)基時(shí)起凝固劑的作用；但它卻是一種未被純化的混合物,里面有確定量的含氮化合物；在本實(shí) 驗(yàn)中所使用的尿素培養(yǎng)基卻要求供應(yīng)氮元素的物質(zhì)只有尿素,用這種培養(yǎng)基才能分別得到含脲酶的細(xì)菌；如用瓊脂來(lái)制備本實(shí) 驗(yàn)的尿素固體培養(yǎng)基,就供應(yīng)氮元素的物質(zhì)除了尿素仍有瓊脂,用這種培養(yǎng)基就不難只得到含脲酶的細(xì)菌,仍會(huì)得到大量以非 尿素為氮源的細(xì)菌,這樣就達(dá)不到分別出以尿素為氮源的細(xì)菌這一試驗(yàn)?zāi)康牧?；所以要將瓊脂純?去除那些含氮化合物,這 樣經(jīng)純化得到的瓊脂糖就可以代替瓊脂做固體劑且不會(huì)帶來(lái)含氮化合物對(duì)本試驗(yàn)的干擾了；（2）有脲酶的細(xì)菌在 生態(tài)穩(wěn)態(tài) 上起什么作用？答：有脲酶的細(xì)菌使植物

13、廢棄物和動(dòng)物尸體降解,并利用了所形成的氨,有利于自然界中氮的循環(huán)；假如土壤中有許多尿素,在自然界較高溫度下就會(huì)被水解,水解后的NH3會(huì)使土壤變成堿性, NH3與其他陰離子物質(zhì)如CO、NO等形成化合物,就會(huì)使土壤板結(jié)；（3）有脲酶的細(xì)菌 四周會(huì)為什么顯現(xiàn)著色的環(huán)帶？答： 細(xì)菌向胞外分泌脲酶,使培養(yǎng)基中的尿素水解,尿素分解后產(chǎn)生氨,氨為堿性,酚紅在酸性環(huán)境中是黃色,在堿性 環(huán)境中是紅色；（4）與全養(yǎng)分培養(yǎng)基上的菌落比較,為什么尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落？答：全養(yǎng)分培養(yǎng)基數(shù)量和種類都明顯多于尿素培養(yǎng)基上的；由于全養(yǎng)分培養(yǎng)基中的氮源是蛋白胨,許多細(xì)菌都能利用它,只有含脲酶的細(xì)菌才能利用尿素,能存活；而尿

14、素培養(yǎng)基中的氮源只有尿素,（5）本試驗(yàn)的微生物分別與上一試驗(yàn)中大腸桿菌的分別實(shí)質(zhì)上一樣嗎？?jī)烧叩募?xì)菌分別有很大的不同；試驗(yàn) 1：大腸桿菌培養(yǎng)和分別, 利用劃線分別法, 從同種菌種中分別得到同種菌的單菌落,在劃線的末端顯現(xiàn)大腸桿菌單 菌落；試驗(yàn) 2：分別以尿素為氮源的微生物,來(lái),只顯現(xiàn)含有脲酶的細(xì)菌菌落；利用涂布分別法, 從土壤浸出液里所存在的各種細(xì)菌中只將含有脲酶的細(xì)菌分別出試驗(yàn) 4 果汁中的果膠和果膠酶1. 果膠是植物 細(xì)胞壁 的以及 胞間層 的主要成分之一,由 半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯 組成；下面是果膠的結(jié)構(gòu)式：山楂的果實(shí)中果膠含量最多,煮沸的山楂泥可制成山楂糕,就是由于果膠的作用；果膠

15、起著將植物細(xì)胞粘合在一起的作用,去掉果膠,就會(huì)使植物組織變得松散；果膠不溶于乙醇 ,這是鑒別果膠的一種簡(jiǎn)易方法；2. 果膠是 植物細(xì)胞壁和胞間層 的主要組成成分之一； 在果汁加工中, 果膠的存在易導(dǎo)致果汁出汁率低,果汁渾濁；果膠酶分解果膠的作 用是： 瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層,使榨取果汁更簡(jiǎn)潔；把果膠分解為可溶性的半乳糖醛酸,使渾濁的果汁變得澄清,因此可以解 決果汁加工中顯現(xiàn)的問(wèn)題；果膠酶是一類酶的總稱,包括：多聚半乳糖醛酸酶、 果膠分解酶和果膠酯酶；在植物細(xì)胞工程中果膠酶的作 用是與纖維素酶一起除去植物細(xì)胞的細(xì)胞壁；3. 黑曲霉 蘋(píng)果青霉 可用于生產(chǎn)果膠酶；（1）制作果汁的正確條件是什么？答

16、：制作果汁的正確條件是方法要溫存,且對(duì)人體無(wú)害,能使最多的水果成分溶解或分散在果汁中,能盡量保留水果的 養(yǎng)分成分,具有水果的原始顏色和口味；有更多的固形物,分散程度好,不沉淀,不上??；除去全部的機(jī)械組織,更易消化；（2）果膠酶在制作果汁中起什么作用？答：可將細(xì)胞離析,增加固形物的分散度；降低水果勻漿懸液黏度,有利于過(guò)濾掉不溶物,并使果膠分解成半乳糖醛酸；（3）果膠酶仍可能起什么作用？答：果酒澄清,同時(shí)也作為洗衣粉的添加劑,有利于洗去衣服上的果汁等污垢；（4）果膠酶水解果膠的最終產(chǎn)物是什么？要使果汁澄清,是否應(yīng)當(dāng)同時(shí)使用果膠酶和果膠甲酯酶中的哪一種？仍是同時(shí) 使用兩種酶？為什么？答：果膠酶水解果

17、膠的最終產(chǎn)物是半乳糖醛酸,要使果汁澄清,應(yīng)當(dāng)同時(shí)使用果膠酶和果膠甲酯酶；從微生物中獲得的 果膠酶都包括這兩種酶；由于,假如不使用果膠完全降解成半乳糖醛酸,就不行能削減組織的分散性,許多水果中的固形物不 能除去,這樣會(huì)降低果汁的養(yǎng)分成分,也影響其澄清度；試驗(yàn) 7 - 淀粉酶的固定化及淀粉水解 1試驗(yàn)原理 固定化酶：將水溶性的酶用 物理或化學(xué)的方法 固定在某種介質(zhì)上,使之成為 不溶于水而又有酶活性 的制劑；固定化酶方法：吸附法、交聯(lián)法、包埋法、共價(jià)偶連法 等； 固定化酶技術(shù)；即將酶固定在確定空間內(nèi)的技術(shù)（如固定在不溶于水的載體上）；固定化酶的優(yōu)點(diǎn)：使酶既能與反應(yīng)物接觸,又能與產(chǎn)物分別；固定在載體上

18、的沒(méi)可以被反復(fù)利用；試驗(yàn)操作 試驗(yàn)原理：本試驗(yàn)是用 吸附法 將 a- 淀粉酶固定在 石英砂 上,確定濃度的淀粉溶液經(jīng)過(guò)固定化酶柱后,可使淀粉水解成糊精,用淀粉指示劑溶液測(cè)試,流出物呈紅色說(shuō)明水解產(chǎn)物糊精生成；2試驗(yàn)步驟（1） 淀粉酶的固定化； 5mg 淀粉酶溶于 4ml 蒸餾水,加入 5mg石英砂,攪拌 30min；（2）將石英砂裝入含氣門(mén)心并用夾子封住的注射器中；用 40ml 蒸餾水用流速 1ml/min 來(lái)洗滌除去未吸附的游離淀粉酶；（3）使淀粉溶液以 0.3ml/min 的流速過(guò)柱,在流出 5ml 后接收 0.5ml 流出液；加入 1-2 滴 KI-I 2溶液,觀看顏色變化；試驗(yàn)預(yù)期結(jié)果

19、：水解產(chǎn)物糊精遇碘呈紅色；3爭(zhēng)辯和摸索（ P40）（1）如何證明洗滌固定化酶柱的流出液中沒(méi)有淀粉酶？答：可在試管中加入 1ml 可溶性淀粉,再加幾滴淀粉酶柱流出液,保溫幾分鐘后 用碘液檢驗(yàn)；如仍顯藍(lán)色,就流出液中沒(méi)有淀粉酶了；（2）耐高溫的淀粉酶有哪些可能的用途？答：在高溫下使淀粉水解快,不會(huì)由于溫度高而失活,發(fā)酵生產(chǎn)中經(jīng)常要用到植 物淀粉水解；試驗(yàn) 8 果酒及果醋的制作（一）試驗(yàn)原理 1酵母菌的細(xì)胞呼吸酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖,反應(yīng)式：C6H12O6+O2 CO 2+H2O+能量酶酵母菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精和二氧化碳,表達(dá)式為：C6H12O6 C 2H5OH+CO 2+能量酶2酵母菌發(fā)酵的

20、正確環(huán)境酵母菌在有氧和無(wú)氧的條件下都能生活：在有氧時(shí),酵母菌大量繁殖,但是不起到發(fā)酵成效；在無(wú)氧時(shí),繁殖速度減慢,但是此時(shí)可以進(jìn)行發(fā)酵； 在利用酵母菌發(fā)酵時(shí)最好是先通入足夠的無(wú)菌空氣在有氧環(huán)境下一段時(shí)間使其繁殖,再隔絕氧氣進(jìn)行發(fā)酵； 25左右最適合酵母菌繁殖,酒精發(fā)酵的正確溫度是在 25-30 ,pH最好是弱酸性；3醋酸菌好氧性細(xì)菌,當(dāng)缺少糖源時(shí)和有氧條件下,可將乙醇（酒精）氧化成醋酸；表達(dá)式為：C2H5OH CH 3COOH+H 2O；當(dāng)氧氣、糖源都充分時(shí),醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；酶醋酸菌生長(zhǎng)的正確溫度是在30 35 二 試驗(yàn)步驟挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵果酒（醋酸發(fā)酵果醋）1. 對(duì)發(fā)

21、酵瓶、紗布、榨汁機(jī)、盛葡萄汁的器皿等試驗(yàn)用具進(jìn)行清洗并消毒；先用溫水反復(fù)沖洗幾次, 再用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精擦拭消毒,晾干待用；2. 取葡萄 500g,去除枝梗和腐爛的子粒；3. 用清水沖洗葡萄 12 遍除去污物,留意不要反復(fù)多次沖洗；4. 用榨汁機(jī)榨取葡萄汁后, 將其裝入發(fā)酵瓶中或?qū)⑵咸汛虺蓾{后,用潔凈的紗布過(guò)濾至發(fā)酵瓶中,蓋好瓶蓋； 假如沒(méi)有合適的發(fā)酵裝置,可以用 500mL的塑料瓶替代,但注入的果汁量不要超過(guò)塑料瓶總體積的 2/3；5. 將發(fā)酵瓶置于適宜的溫度下發(fā)酵；酵母菌, 18 25, 1012d；醋酸菌, 30 35, 78d；6. 由于發(fā)酵旺盛期 CO 2的產(chǎn)量特殊大,因此需要

22、準(zhǔn)時(shí)排氣,防止發(fā)酵瓶爆裂；假如使用簡(jiǎn)易的發(fā)酵裝置,如瓶子（最好選用塑料瓶）,每天要擰松瓶蓋 24 次,進(jìn)行排氣；7.10d 以后,可以開(kāi)頭進(jìn)行取樣檢驗(yàn)工作；例如,可以檢驗(yàn)酒味、酒精的含量、進(jìn)行酵母菌的鏡檢等工作；8. 當(dāng)果酒制成以后,可以在發(fā)酵液中加入醋酸菌或醋曲,然后將裝置轉(zhuǎn)移至 3035 的條件下發(fā)酵,適時(shí)向發(fā)酵液中充氣；假如找不到醋酸菌菌種或醋曲,可嘗試自然接種,但成效不是很好；假如沒(méi)有充氣裝置,可以將瓶蓋打開(kāi),在瓶口蓋上紗布,以削減空氣中塵土等的污染； 三 留意事項(xiàng)請(qǐng)分析此裝置中的充氣口、 排氣口和出料口分別有哪些作用；為什么排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接？結(jié)合果酒、果醋的制

23、作原理,你認(rèn)為應(yīng)當(dāng)如何使用這個(gè)發(fā)酵裝置？答：充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來(lái)排出 CO 2的；出料口是用來(lái)取樣的； 排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接,其目的是防止空氣中微生物的污染；使用該裝置制酒時(shí),應(yīng)當(dāng)關(guān)閉充氣口；制醋時(shí),應(yīng)將充氣口連接氣泵,輸入氧氣；（四）學(xué)問(wèn)重點(diǎn)1. 釀酒和制醋有關(guān)的微生物分別是 酵母菌（真菌）和醋桿菌（細(xì)菌） ；制作酒和醋的過(guò)程：在糯米或大米與酒曲混勻后,放在溫度較高的地方, 米先變甜, 即生成了糖, 這是由于黑曲霉或黑根霉的淀粉酶將淀粉水解成糖；甜度增加后, 再放到溫度低的地方保持厭氧條件,酵母就開(kāi)頭工作,使糖變成酒（糖酵解

24、） ；假如時(shí)間太長(zhǎng),在有氧條件下,醋酸菌就開(kāi)頭作用,將乙醇氧化成乙酸,也就是變酸生成醋；2. 用葡萄制作葡萄酒時(shí),一般不加蔗糖,都只用 野生酵母 ,但是本試驗(yàn)為了加速反應(yīng),使觀看更直觀,需要有更多底物參加反應(yīng),所以加入酵母使酒精發(fā)酵占有優(yōu)勢(shì)；使用高錳酸鉀溶液浸泡葡萄的目的是為了防止雜菌污染,也是毀滅了野生酵母； 發(fā)酵瓶中的液體不能裝滿是由于發(fā)酵過(guò)程中氣體產(chǎn)生,假如裝滿會(huì)使液體外溢, 導(dǎo)致發(fā)酵液缺失和瓶口等處污染雜菌,影響產(chǎn)物品質(zhì)； 用裝著水的彎曲玻璃管可以防止氧氣進(jìn)入,發(fā)酵產(chǎn)生的二氧化碳可以出去,仍可以防止空氣中雜菌的污染；3. 制醋有固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵,本試驗(yàn)屬于 固定化菌體 連續(xù)發(fā)酵工藝；

25、 制醋時(shí)要向發(fā)酵瓶中通入空氣,保證發(fā)酵是一個(gè)氧化過(guò)程,要用棉花過(guò)濾是防止空氣中的微生物進(jìn)入；試驗(yàn) 10 泡菜的腌制和亞硝酸的測(cè)定1. 泡菜腌制過(guò)程中起作用的主要是 假絲酵母 和乳酸菌 ；這類食品含有乳酸和豐富的維生素、 礦物質(zhì)等養(yǎng)分成分, 但蛋白質(zhì)含量低,仍含有確定量的亞硝酸鹽； 所用原料是白菜、 洋白菜等； 在無(wú)氧的條件 （由所用容器的凹槽加水在加蓋造成）下,微生物利用菜中的糖和其他養(yǎng)分物進(jìn)行發(fā)酵,乳酸菌將糖分轉(zhuǎn)化為乳酸, 這是需氧菌被殺死； 當(dāng)有機(jī)酸增加到確定程度時(shí),乳酸菌被殺死, 出現(xiàn)酵母和霉菌, 并逐步產(chǎn)生亞硝酸； 加白酒的作用是可抑制雜菌的生長(zhǎng), 也是一種調(diào)味劑, 增加醇香感 ；加鹽

26、不要太多, 否就會(huì)使乳酸菌發(fā)酵遲緩；溫度高就發(fā)酵快,但口味差些；2. 雜菌較少的緣由是乳酸菌產(chǎn)生的乳酸球菌肽對(duì)許多革蘭氏陽(yáng)性菌有抗菌作用,蛋白質(zhì)含量低,白酒的抑制作用等；3. 亞硝酸鹽是對(duì)人體有害,引起中毒,可致癌的物質(zhì),由假絲酵母產(chǎn)生；可與 對(duì)氨基本磺酸 發(fā)生 重氮化反應(yīng) ,這一產(chǎn)物再與 N1萘基乙二胺 偶聯(lián),形成 紫紅色產(chǎn)物 ,可用 光電比色法定量 ；試驗(yàn)步驟包括樣品處理、測(cè)定、標(biāo)準(zhǔn)曲線（以亞硝酸鈉質(zhì)量為橫坐標(biāo)以 光密度OD值為縱坐標(biāo) ）、運(yùn)算 亞硝酸鹽含量（ mg/kg）X1=通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的亞硝酸鹽質(zhì)量（ug）m2 1000 樣品處理液總體積 V1/ 樣品質(zhì)量m1 測(cè)定樣品液總體積

27、V2 1000） ；試驗(yàn) 11 植物組織培養(yǎng)一、教學(xué)要求基本要求1進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)；2嘗試植物激素的應(yīng)用；進(jìn)展要求說(shuō)明二、基本內(nèi)容1原理：植物細(xì)胞的全能性；2影響植物組織培養(yǎng)的條件（1）材料植物的種類、材料的年齡和儲(chǔ)存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果；菊花組織培養(yǎng)一般挑選未開(kāi)花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料；一般來(lái)說(shuō),簡(jiǎn)潔進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物簡(jiǎn)潔進(jìn)行組織培養(yǎng)；選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好,簡(jiǎn)潔誘導(dǎo)脫分化和再分化；（2）激素在培養(yǎng)基中需要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素,其濃度、使用的（3）養(yǎng)分先后次序、用量的比例 等都影響結(jié)果；常用的培養(yǎng)基是 MS培養(yǎng)基,其中含有的大量元素是 N、P、S、K、Ca、Mg,微量元素是 Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni、I 、Co,有機(jī)物有 甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖 等；培養(yǎng)基中通常加確定量的 蔗糖 是除作為 養(yǎng)分成分 外,仍用于 保護(hù)確定的滲透壓 ；（4）環(huán)境條件PH、溫度、光等環(huán)境條件；3操作流程培養(yǎng)過(guò)程應(yīng)當(dāng)在無(wú)菌的條件下進(jìn)行,試驗(yàn)經(jīng)過(guò)外植體愈傷組織的條件；（1）配制 MS固體培養(yǎng)基叢狀苗生根苗 移栽植株；需要確定的光照和溫度最常用的 MS培養(yǎng)基（生芽培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基）；配制過(guò)程包括稱量、溶解、調(diào)PH、融解、分裝（三角瓶）、加蓋滅菌等步驟；配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的