醫(yī)學(xué)免疫學(xué) 實(shí)驗(yàn)二 流式細(xì)胞術(shù)

1、醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)二 流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞儀的檢測(cè)信號(hào)-散射光流式細(xì)胞儀的檢測(cè)信號(hào)-熒光信號(hào)常用熒光染料光譜重疊補(bǔ)償技術(shù)特點(diǎn)流式細(xì)胞儀的應(yīng)用細(xì)胞表面抗原分子的測(cè)定細(xì)胞凋亡檢測(cè)細(xì)胞因子測(cè)定（胞內(nèi)，胞外）在腫瘤學(xué)方面的應(yīng)用在血液學(xué)方面的應(yīng)用細(xì)胞分選步驟昆明小鼠拉頸處死，取出脾臟，放入PBS中，盡量去除筋膜，過篩網(wǎng):將脾臟放在篩網(wǎng)上，用玻璃針筒的針芯碾壓，注意要少碾多壓，這樣可以減少對(duì)細(xì)胞的損傷，用少量PBS沖洗，放入離心管中，終體積為5ml，3000轉(zhuǎn)/分,10分鐘。離心后棄上清。再次洗細(xì)胞1次。離心后棄上清，用細(xì)胞裂解液破紅細(xì)胞，一般每只小鼠的脾臟用3ml置于4冰箱中，20分鐘，其間輕輕混勻2次。用P

2、BS加到7ml,離心洗細(xì)胞2次。最后一次棄上清后，加入3mlBSA-PBS混勻，分裝在1mlEP管中，成為3份。將1mlEP管中的細(xì)胞分裝,體積為0.4ml，0.3ml，0.3ml，分別是空白管，陰性對(duì)照管和實(shí)驗(yàn)管。加入1ml左右BSA-PBS配平離心，棄上清。陰性對(duì)照管加入PE同型對(duì)照抗體2l，實(shí)驗(yàn)管加入PE-anti- CD19 2l，混勻4避光孵育45min。加入1mlBSA-PBS離心洗2次。最后一次用PBS洗3000轉(zhuǎn)，2分鐘。棄上清，加入固定液500l，篩網(wǎng)過濾，4避光存放。C6檢測(cè)。步驟昆明小鼠拉頸處死，取出脾臟，放入PBS中，盡量去除筋膜，平均分成3份。過篩網(wǎng):將脾臟1/3放在

3、篩網(wǎng)上，用玻璃針筒的針芯碾壓，注意要少碾多壓，這樣可以減少對(duì)細(xì)胞的損傷，用少量PBS沖洗，放入離心管中，終體積為1ml，3000轉(zhuǎn)/分,10分鐘。離心后棄上清。再次洗細(xì)胞1次。離心后棄上清，用細(xì)胞裂解液破紅細(xì)胞，一般1/3小鼠的脾臟用1ml置于4冰箱中，20分鐘，其間輕輕混勻2次。加1mlPBS,離心洗細(xì)胞2次。最后一次棄上清后，加入1mlBSA-PBS混勻，離心，棄上清。加入100lBSA-PBS混勻，平均分成3管，每管約50l細(xì)胞懸液。6915646569156465空白管不加任何試劑，陰性對(duì)照管加入PE同型對(duì)照抗體2l，實(shí)驗(yàn)管加入PE-anti- CD19 2l，混勻4避光孵育45min。加入1mlBSA-PBS離心洗2次。最后一次用PBS洗3000轉(zhuǎn)，2分鐘。棄上清，加入固定液500l，篩網(wǎng)過濾，4避光存放。C6檢測(cè)。注意：熒光劑有毒，請(qǐng)?jiān)谑褂脽晒鈩r(shí)帶乳膠手套！熒光劑應(yīng)避光，否則易淬滅！自行分析流式結(jié)果，實(shí)驗(yàn)報(bào)告交付時(shí)間另行通知。所用試劑PE anti-mouse CD 19 BioLegend 115507PE Mou