孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術

1、孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第1頁 前 言 對于咱們醫(yī)務工作者在醫(yī)療活動中針對符合一定條件就診者提供艾滋病和梅毒、乙肝檢測，咱們稱之為“篩查”。篩查是預防艾滋病和梅毒、乙肝一項主要策略，為世界衛(wèi)生組織和我國所提倡。它目標是早期發(fā)覺感染者，及早得到診療和治療，到達治愈感染者、消除傳染源、阻斷深入傳染目標。同時，這種篩查也是“有放矢”，它是針對特定人群、特定情況而進行，并非亂檢驗、亂收費。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第2頁傳染病傳染過程：病原體侵入病原體與機體相互作用與斗爭結(jié)局隱性感染病原攜帶顯性感染 死亡宿主病原體被去除3孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第3頁傳染病傳輸基

2、礎條件 三個基礎步驟：傳染源易感人群傳輸路徑4孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第4頁5孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第5頁傳染病流行過程 傳染源 自然和 社會原因傳輸路徑 易感人群6孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第6頁潛伏期 傳染期病原侵入排出病原體出現(xiàn)癥狀時間過程潛伏期停頓排出病原體（痊愈、死亡等）傳染期7孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第7頁 傳染病種類繁多，為了保障公眾健康與安全，國家以法律形式將一些傳染病列為法定傳染病以加強管理。 年新頒布中華人民共和國傳染病防治法要求了甲類、乙類和丙類共37種法定傳染病。其中： 1、甲類傳染病2種：鼠疫、霍亂 法定傳染病8孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第8頁 乙類

3、傳染病25種： 傳染性非經(jīng)典肺炎、艾滋病、病毒性肝炎、脊髓灰質(zhì)炎、人感染高致病性禽流感、麻疹、流行性出血熱、狂犬病、流行性乙型腦炎、登革熱、炭疽、細菌性和阿米巴性痢疾、肺結(jié)核、傷寒和副傷寒、流行性腦脊髓膜炎、百日咳、白喉、新生兒破傷風、猩紅熱、布魯氏菌病、淋病、梅毒、鉤端螺旋體病、血吸蟲病、瘧疾。 (其中傳染性非經(jīng)典肺炎、炭疽中肺炭疽和人感染高致病性禽流感按甲類管理。) 9孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第9頁艾滋病和梅毒、乙肝離咱們遠嗎？ 艾滋病和梅毒、乙肝是一個危害性極大傳染病，尤其是多年來, 我國艾滋病和梅毒、乙肝感染者和病人呈逐年上升趨勢，從0.4%上升到2017年21.45%；并從高危人

4、群向普通人群擴散, 經(jīng)過母嬰傳輸路徑感染百分比也在增加。若不采取預防干預辦法，感染了艾滋病和梅毒、乙肝病毒母親，生下染有艾滋病和梅毒、乙肝病毒嬰兒百分比很大, 嚴重威脅著廣大婦女和兒童健康。所以, 預防艾滋病和梅毒、乙肝母嬰傳輸是保護兒童免遭艾滋病和梅毒、乙肝侵害、降低兒童感染艾滋病和梅毒、乙肝主要辦法，這就需要咱們提升警覺，認識到艾滋病感染危險性，而接收專業(yè)人員咨詢和篩查是有效處理路徑。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第10頁艾滋病、梅毒、乙肝-概況艾滋病梅毒乙肝病原體HIV病毒梅毒螺旋體HBV病毒傳染源HIV感染者/AIDS梅毒患者急慢性乙肝患者和攜帶者傳輸路徑血液/性/母嬰傳輸性/母嬰傳輸/

5、接觸/血液血液/母嬰傳輸/性預防獻血員篩查/高危行為改變/孕婦篩查獻血員篩查/高危行為改變/孕婦篩查主動免疫與被動免疫/孕婦篩查孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第11頁母嬰傳輸路徑1、艾滋?。杭s1535% HIV陽性孕婦會發(fā)生母嬰傳輸。90%以上兒童HIV感染者是由母親垂直傳輸而感染 。2、梅毒：流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或馬鞍鼻、先天性耳聾等。3、乙肝：在我國，人群中40-50%是由母嬰傳輸積累而成。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第12頁 介紹相關檢測技術一.艾滋病試驗室檢測技術HIV抗體檢測核酸檢測CD4+T淋巴細胞檢測二.梅毒檢測技術顯微鏡檢驗法血清學檢驗法三.乙肝檢測技術HBV免疫標志物檢測HBV-D

6、NA 孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第13頁檢測時要注意什么？ 作為受檢者，應該注意是：一是要向醫(yī)生提供較為詳盡病史，尤其是危險性行為，不要因為不好意思而隱瞞。只有這么，醫(yī)生才能正確判斷感染危險性，有利于分析檢測結(jié)果并做出診療和處理決斷。二是注意檢測“窗口期”問題，也就是從病原體進入人體到血液中產(chǎn)生足夠量、能用檢測方法查出抗體這段時期。對于艾滋病“窗口期”，伴隨新一代、敏感艾滋病抗體檢測伎倆出現(xiàn)后，艾滋病窗口期已經(jīng)縮短到最為保守艾滋病抗體峰值出現(xiàn)第6周。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第14頁就當前廣泛采取第三、四代雙原夾心法和酶聯(lián)法以及化學發(fā)光法等檢測伎倆而言，艾滋病窗口期能夠縮短到1421天。而

7、梅毒雖無“窗口期”說法，但從感染到可檢測到抗體也需要34周甚至更長時間。所以，在有高危性行為后接收檢測，結(jié)果雖為陰性但未渡過“窗口期”，仍不可掉以輕心，需要繼續(xù)隨訪直到確認已渡過“窗口期”。三是結(jié)果解釋和分析要聽從醫(yī)生專業(yè)提議。艾滋病、梅毒檢測結(jié)果意義隨受檢者不一樣情況而有差異。所以受檢者應該聽從醫(yī)生對結(jié)果解釋和提議，不可盲目消極或盲目樂觀。乙肝，丙肝，梅毒，艾滋檢測必要性孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第15頁 艾滋病、梅毒、 乙肝試驗室檢測技術孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第16頁艾滋病抗體檢測及 樣品處理試驗室質(zhì)量管理生物安全質(zhì)量控制梅毒乙肝 檢測關鍵點孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第17頁檢測

8、技術一、艾滋病檢測技術HIV抗體檢測酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）核酸檢測CD4+T淋巴細胞檢測快速檢測（RT） （提議配置合格快速檢測試劑，灰區(qū)。）孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第18頁HIV抗體檢測試劑有國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊同意文號試劑在使用期內(nèi)酶聯(lián)免疫試劑應批批檢合格證件采購試劑選擇敏感性和特異性高試劑孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第19頁HIV抗體篩查樣品血清/血漿/全血濾紙干血斑唾液尿液孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第20頁普通篩查方法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學發(fā)光或免疫熒光試驗：采取發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果?？焖贆z測（RT）及其它檢測試驗 (1)明膠顆粒凝集試

9、驗(PA) (2)免疫滲濾試驗 (3)免疫層析試驗孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第21頁(1)酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）HIV抗體檢測試劑：檢測HIV-1/2抗體HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑：可同時檢測血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體用酶標儀測定結(jié)果孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第22頁四代艾滋病酶聯(lián)免疫試劑比較solidphasespecificdetection ofconjugate第一代病毒裂解液HIV-1IgG 抗體HIV-1 -IgG抗體第二代病毒裂解液重組抗原合成肽HIV-1 / -2IgG 抗體HIV-1 / -2 IgG抗體第三代病毒裂解液重組抗原合成肽HIV-1

10、 / -2 / -OIgM / IgG 抗體HIV-1 / -2 / -O病毒裂解液重組抗原合成肽HIV-1 / -2 / -O第四代病毒裂解液重組抗原合成肽HIV-1 / -2 / -Oanti-p24 AbIgM / IgG 抗體HIV-1 / -2 / -Op24 抗原病毒裂解液重組抗原合成肽HIV-1 / -2 / -Oanti-p24 抗體孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第23頁ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗 ELISA HIV 抗原包被平板病人抗體酶顯色劑+ ve- ve孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第24頁陰性對照陽性對照陰性陽性質(zhì)控孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第25頁酶聯(lián)免疫吸附試驗（E

11、LISA）優(yōu)點：準確性高、價格低廉、判斷結(jié)果標準客觀、結(jié)果便于統(tǒng)計和保留用途：流行病學監(jiān)測及臨床大量標本檢測孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第26頁(2)化學發(fā)光或免疫熒光試驗采取發(fā)光或熒光底物既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體酶或熒光標識HIV抗原或抗體，加發(fā)光或熒光底物用發(fā)光儀或熒光儀測定結(jié)果孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第27頁全血樣品 加50ul樣品于樣品墊中手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果（3）快速檢測（RT）及其它檢測試驗孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第28頁快速檢測（RT）及其它檢測試驗優(yōu)點:試驗簡便快速，適合用于應急檢測、門診急診檢測。不需專門設備和人員培訓,普通可在

12、1030分鐘內(nèi)得出結(jié)果。缺點:肉眼判斷較主觀、價格較貴、結(jié)果不易保留。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第29頁樣品初篩試驗一陰一陽均陽性反應匯報陰性確證試驗復檢試驗匯報陰性均陰性反應陽性反應原有試劑另一不一樣原理（或廠家）試劑或另外兩種不一樣原理（或廠家）試劑選取篩查試劑陰性反應HIV抗體篩查檢測流程圖孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第30頁HIV抗體確證試驗確證試驗試劑： 必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊同意、在使用期內(nèi)試劑。確證樣品： 可采取血清、血漿、濾紙干血斑確證試驗方法： 免疫印跡試驗(WB)、條帶免疫試驗(LIATEK HIV)、放射免疫沉淀試驗(RIPA)及免疫熒光試驗(IFA)。我國

13、常見確實證試驗方法是WB。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第31頁HIV抗體確證試驗結(jié)果a 強陽性對照（HIV-1和HIV-2）b弱陽性對照（HIV-1）c陰性對照d經(jīng)典HIV-2血清陽性反應 a b c dgp160gp120 p66p55p51 gp41p39 p31P24p17 血清對照HIV-2特異帶孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第32頁初篩檢測陽性標本兩種篩查試劑匯報陰性陰性反應一陰一陽陽性反應確證試劑復檢試驗依據(jù)詳細情況深入檢測HIV-2匯報陰性出現(xiàn)HIV-2指示條帶陰性反應不確定反應匯報HIV-1 陽性HIV-1 陽性反應結(jié)合流行病學資料，能夠在4周后隨訪檢測，如帶型沒有進展或呈陰性反

14、應，則匯報陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽性反應，則匯報陽性；如隨訪期間帶型有進展，但不滿足陽性標準，應繼續(xù)隨訪到8周。如帶型沒有進展或呈陰性反應則匯報陰性；滿足HIV抗體陽性診療標準則匯報陽性，不滿足陽性判斷標準可視情況決定是否繼續(xù)隨訪。HIV抗體確證檢測流程圖孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第33頁試驗室需備有：12種HIV-1/2抗體ELISA（化學發(fā)光）試劑2種HIV-1/2抗體快速試劑baidu網(wǎng)每年進行體外診療試劑評定如：“HIV抗體試劑臨床評定”孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第34頁HIV抗體母親 HIV 抗體經(jīng)胎盤進入胎兒，出生時新生兒和嬰兒早期抗體陽性，不一定是感染出生時母親抗體，8090%

15、 在生后 912 個月消失，出生后 18 個月基礎上全部消失18 個月后兒童 HIV抗體依然陽性，視為本身感染產(chǎn)生抗體18個月以下嬰幼兒HIV診療孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第35頁嬰幼兒HIV感染抗體檢測適合用于：HIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒；母親HIV感染狀態(tài)不詳，兒童出現(xiàn)HIV相關臨床表現(xiàn)，臨床懷疑HIV感染兒童。嬰兒12個月時進行HIV抗體檢測 陰性排除感染，納入正常兒童保健； 陽性者繼續(xù)追蹤隨訪，至18個月再次進行HIV抗體檢測，結(jié)果陰性排除感染。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第36頁艾滋病病毒感染產(chǎn)婦所生兒童陽陰用另一個不一樣原理或不一樣廠家生產(chǎn)篩查試劑再次檢測12個月進行HIV抗體篩查

16、試驗確證試驗18個月時再進行HIV抗體篩查試驗匯報HIV抗體檢測結(jié)果陰性艾滋病感染產(chǎn)婦所生兒童HIV抗體檢測流程陽性陰性陰性陽性用另一個不一樣原理或不一樣廠家生產(chǎn)篩查試劑再次檢測陰性陰性陽性匯報HIV抗體檢測結(jié)果陽性提供咨詢，繼續(xù)隨訪，4周后再次進行確證試驗不確定陽性孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第37頁18個月以下嬰幼兒HIV診療核酸檢測HIV 前病毒 DNA（HIV DNA）檢測已整合到外周血液中血細胞基因組上 HIV DNA基于 PCR 技術高特異度(98%)和高靈敏度 (99%)孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第38頁18個月以下嬰幼兒HIV診療HIV 病毒載量（HIV RNA）用來監(jiān)測已知

17、HIV 感染病人病毒載量試驗；真陽性結(jié)果通常 100,000 拷貝/毫升, 而假陽性結(jié)果350/mm3艾滋病感染孕產(chǎn)婦，采取預防性抗病毒用藥方案；對于CD4+T淋巴細胞計數(shù)350/mm3艾滋病感染孕產(chǎn)婦，采取治療性抗病毒用藥方案。 孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第68頁常規(guī)CD4+T淋巴細胞檢測方法和程序 流式細胞儀檢測方法 雙平臺方法 單平臺方法樣品：EDTA、枸櫞酸（ACD）或肝素抗凝全血運輸條件：室溫（1825）保留和運輸樣品防止極端溫度（結(jié)冰或大于37）高溫季節(jié)，需用隔熱容器盛裝樣品，并將其置于有冰袋和吸熱物質(zhì)容器中。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第69頁常規(guī)CD4+T淋巴細胞檢測方法和程

18、序48小時內(nèi)染色，染色后6小時內(nèi)分析；如采血后24小時內(nèi)染色，可在染色后24小時內(nèi)分析；利用CD45單克隆抗體設淋巴細胞門，可檢測放置72小時樣品；在血球分析儀生產(chǎn)商允許樣品采集時間范圍內(nèi)檢測。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第70頁FACSCalibur流式細胞儀孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第71頁二、梅毒檢測技術顯微鏡檢驗法血清學檢驗法 梅毒特異性抗原血清學檢測 梅毒非特異性抗原血清學檢測孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第72頁各期梅毒取材部位和檢驗方法臨床表現(xiàn) 取材部位 檢驗方法一期梅毒 潰瘍、淋巴結(jié) 暗視野檢驗 血液 血清學檢驗二期梅毒 皮損、淋巴結(jié) 暗視野檢驗 血液 血清學檢驗三期梅毒 血液

19、、腦脊液 血清學檢驗隱性梅毒 血液 血清學檢驗胎傳梅毒 皮損、胎盤 暗視野檢驗 血液 血清學檢驗孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第73頁（一)、顯微鏡檢驗法1.暗視野顯微鏡檢驗2.直接免疫熒光試驗（DFA）3.渡銀染色檢驗孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第74頁1.暗視野顯微鏡檢驗暗視野顯微鏡下，經(jīng)典梅毒螺旋體呈白色發(fā)光, 其螺旋較密而均勻。運動規(guī)律，運動性較強，其運動方式包含旋轉(zhuǎn)式，圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)；蛇行式, 全身彎曲如蛇行；伸縮其螺旋間距離而移動。觀察其運動形式有利于與其它螺旋體相判別。未檢出螺旋體不能排除梅毒診療，陰性結(jié)果可能說明：螺旋體數(shù)量不足(單次暗視野顯微鏡檢驗陽性率小于50%)。患者已接收

20、抗生素或殺滅梅毒螺旋體藥品治療。損害靠近自然消退。損害不是梅毒。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第75頁2.直接免疫熒光試驗（DFA)在熒光顯微鏡下可見到發(fā)蘋果綠色梅毒螺旋體。臨床意義與暗視野顯微鏡檢測相同。DFA特異性及敏感性均大于暗視野顯微鏡檢測。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第76頁3.梅毒螺旋體渡銀染色檢驗梅毒螺旋體含有親銀性，顯微鏡下可見到染成棕色梅毒螺旋體。臨床意義基礎同暗視野顯微鏡檢驗法。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第77頁(二)、血清學檢驗法血清學檢驗是輔助診療梅毒主要伎倆。當人體感染梅毒螺旋體后410周左右，血清中可產(chǎn)生一定數(shù)量抗類脂質(zhì)抗原非特異性反應素（主要是IgM、IgG）和抗

21、梅毒螺旋體抗原特異性抗體（主要是IgM、IgG）。這些抗體均可用免疫學方法進行檢測。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第78頁梅毒血清學檢測方法孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第79頁1.非梅毒螺旋體抗原血清試驗1.1 性病研究試驗室試驗（Venereal Disease Research Laboratory test，VDRL）1.2 快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（Rapid plasma reagin circle card test，RPR）1.3 甲苯胺紅試驗（Toluidine red unheated serum test，TRUST） 方法簡便、快速，敏感性和特異性很好。對一期梅毒敏感性為

22、7487，二期梅毒達100，三期梅毒3494。特異性9699。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第80頁非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義適合用于各期梅毒診療。早期梅毒經(jīng)治療后血清滴度可下降或轉(zhuǎn)陰，故可用于療效觀察、判愈、判定復發(fā)或再感染。也適合用于人群篩查、產(chǎn)前檢驗及健康體檢等。VDRL試驗適合用于神經(jīng)梅毒腦脊液檢驗, 特異性高，但敏感性低?？稍谝恍﹤魅静〖澳z原病時出現(xiàn)假陽性反應，所以對陽性反應應結(jié)合臨床進行判別，或做梅毒螺旋體抗原血清試驗以深入證實之。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第81頁2.梅毒螺旋體抗原血清試驗 采取梅毒螺旋體作抗原，為特異性抗原，檢測血清中抗梅毒螺旋體IgG或IgM抗體。敏感性

23、和特異性均較高。一期梅毒敏感性為70100，二期梅毒達100，三期梅毒9598，特異性94100。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第82頁梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）原理TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清中抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見凝集反應。明膠顆粒為玫瑰紅色，便于肉眼觀察結(jié)果。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第83頁梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）原理用經(jīng)純化及超聲裂解處理梅毒螺旋體為抗原包被固相板條加入待檢血清和辣根過氧化酶標識抗人IgG抗體，利用酶免疫法檢測患者血清中抗梅毒螺旋體特異性抗體。采取特異梅毒螺旋體重組蛋白作為抗原，使試驗愈加敏感、特異

24、。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第84頁梅毒IgM抗體血清學試驗梅毒特異性IgM抗體是梅毒感染最早期產(chǎn)生抗體。IgM分子量較大不能經(jīng)過胎盤屏障。所以在新生兒血中檢測到IgM抗體表明有先天感染。如在患者腦脊液檢測到IgM抗體表明有活動性神經(jīng)梅毒。血液中或腦脊液中出現(xiàn)抗梅毒IgM抗體均表示需要治療。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第85頁梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義梅毒螺旋體抗原血清試驗多用作證實試驗，尤其是隱性梅毒及一些非螺旋體抗原血清試驗陰性而又懷疑為梅毒患者。但不能用于觀察療效、判斷復發(fā)及再感染。梅毒螺旋體抗原血清試驗偶可出現(xiàn)生物學假陽性反應。孕婦艾滋病梅毒和乙肝檢測技術第86頁梅毒血清學試驗合理應用非梅毒螺旋體