半薄切片技術(shù)介紹

1、半薄切片技術(shù)介紹第1頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二半薄切片圖片第2頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二鈣化骨組織切片 眼球附近組織的連續(xù)切片 第3頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二半薄切片：(厚度為 0.5m 1m )第4頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二半薄切片進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察的目的：可以根據(jù)半薄切片精確定位。了解樣品包埋質(zhì)量，以確定是否繼續(xù)做超薄切片；與石蠟切片、超薄切片進(jìn)行對(duì)比研究第5頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二半薄切片的優(yōu)點(diǎn)：克服了超薄切片的盲目性和電鏡視野的局限性清晰度、分辨

2、率遠(yuǎn)優(yōu)于石蠟切片，視野也大于超薄切片，有利于獲得高質(zhì)量的光鏡圖像也是電鏡超薄切片技術(shù)中一種有效的定位方法。第6頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二電鏡超薄技術(shù)中如何應(yīng)用呢？電鏡是觀察組織細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的一種手段。但由于切片太小，有時(shí)難于觀察到目標(biāo)結(jié)構(gòu)，為此需大量制備樣品，造成工作量大且消耗多。為使超薄切片能精確地切到目標(biāo)部位，在做超薄切片前要做半薄切片來(lái)進(jìn)行定位。第7頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二應(yīng)用： 胚胎學(xué)，病理學(xué)，動(dòng)植物細(xì)胞學(xué)研究中一種普遍的切片方式第8頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二半薄切片主要步驟取材固定漂洗、脫水滲透、包

3、埋半薄切片半薄切片染色每一步都是關(guān)鍵,任何環(huán)節(jié)的疏忽都會(huì)導(dǎo)致制片的失敗第9頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二FAA固定液制備：福爾馬林5-冰醋酸5-70%酒精90應(yīng)用：半薄/石蠟切片適用：一般固定根、莖、葉、花藥、子房組 織切片。補(bǔ)充說(shuō)明： 幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，防止材料收縮；加入5%甘油可防固定液蒸發(fā)和材料變硬。第10頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二卡諾固定液12純酒精15ml30ml氯仿5ml 冰醋酸5ml1ml滲透迅速，固定根尖和花藥只需30-60分鐘，但固定時(shí)間不能太久，一般不超過(guò)一天第11頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2

4、點(diǎn)4分，星期二Leica RM2265旋轉(zhuǎn)薄切片機(jī)第12頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二Leica RM2265旋轉(zhuǎn)薄切片機(jī)制作半薄切片（厚度0.25-5m）使用步驟：1接通電源，打開(kāi)主開(kāi)關(guān)2選擇切片厚度3安放包埋塊于切片頭中央位置，旋轉(zhuǎn)固定螺絲，將樣品按要求固定挾緊4安放粘有水槽的玻璃刀，并將玻璃刀口對(duì)準(zhǔn)樣品5選擇切片模式（自動(dòng)/手動(dòng)），切片計(jì)數(shù)開(kāi)始6取切片的材料：撈片，置于載玻片上，加熱，脫樹(shù)脂處理，對(duì)材料染色，著色后沖洗、封藏、烘干第13頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二半薄切片染色常規(guī)染色方法有： 甲苯胺蘭染色法、天青美蘭染色法、堿性復(fù)紅法、蘇

5、木素-伊紅法、HE染色法和Giemsa染色法等。無(wú)論哪種方法都需預(yù)先做處脫樹(shù)脂處理，否則染料不宜滲入，影響染色效果。第14頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二脫樹(shù)脂處理：過(guò)程將干燥切片插入氫氧化鉀無(wú)水酒精飽和溶液l015 min后，無(wú)水酒精洗三次，經(jīng)梯度酒精下行，水洗后染色。此過(guò)程即繁瑣又費(fèi)時(shí)，所以選擇理想的染色劑非常重要。第15頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二染色方法現(xiàn) 象番紅固綠對(duì)染法木質(zhì)化的細(xì)胞壁及細(xì)胞核紅纖維素的細(xì)胞壁及細(xì)胞壁綠鐵礬蘇木精法細(xì)胞一般結(jié)構(gòu)及細(xì)胞分裂時(shí)期的優(yōu)良染劑，細(xì)胞分裂時(shí)期的染色體染成黑色高碘酸席夫反應(yīng)法（PAS法）植物組織染成不同程度的紅色，可將纖維素細(xì)胞壁及淀粉粒染成紅色第16頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，2點(diǎn)4分，星期二細(xì)胞壁的染料酸性品紅 番紅 固綠 甲苯胺藍(lán) 蘇木精 結(jié)晶紫 亮綠 蘇丹IV細(xì)胞核染料（堿性）堿性品紅 蘇木精 洋紅 番紅 地衣紅 結(jié)晶紫 細(xì)胞質(zhì)染料（酸性）酸性品紅 甲苯胺藍(lán) 曙紅 固綠 苦味酸各種熒