專性厭氧菌的培養(yǎng)方法及注意事項

1、Word文檔 專性厭氧菌的培養(yǎng)方法及注意事項 一、專性厭氧菌的介紹 依據細菌生長對氧的需求，主要可分為四大類：專性需氧菌、兼性厭氧菌、專性厭氧菌、微需氧菌。 專性厭氧菌需要在嚴格無氧的氣體環(huán)境中生長，氧氣會對菌產生毒害作用，也有一些厭氧菌在含5%-10%二氧化碳氣體環(huán)境中可耐受低濃度的氧氣。常見的專性厭氧菌有梭菌屬（如產氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風梭菌、困難梭菌等）、雙歧桿菌屬（如嬰兒雙歧桿菌、動物雙歧桿菌等）、擬桿菌屬、梭桿菌屬、厭氧消化鏈球菌屬等。 二、厭氧培育環(huán)境的構造 （1）使用厭氧培育箱，通氣培育。一些厭氧培育箱可同時進行接種等微生物操作，并直接進行培育，操作便利，勝利率高，缺點是多

2、數試驗室不具備，損耗較大，對于小規(guī)模的培育試驗來說，成本較高。 （2）使用厭氧罐、厭氧盒或厭氧培育袋+厭氧產氣包，可制作小型或中型空間的厭氧環(huán)境，操作便利，不需要任何簡單的特地設備，可在全部試驗室中使用，特別適合試驗室中小規(guī)模的試驗操作。 留意事項：培育基必需與厭氧環(huán)境氣體流通，如使用試管、錐形瓶等容器培育，必需確保塞子透氣；培育平皿時，必需保證平皿的透氣性良好，不能使用封口膜密閉纏繞。 （3）液體培育基可采納掩蓋石蠟隔絕氧氣的方法，如皰肉培育基、梭菌增菌培育基等，在培育基配制完成分裝后，在培育基上方掩蓋約0.5-1cm厚度的液體石蠟，再進行滅菌處理，可直接進行厭氧菌的培育，無需使用厭氧培育箱

3、或厭氧罐等設備。 注：在滅菌前掩蓋石蠟，滅菌過程中培育基中溶解的氧氣會逸出，冷卻后石蠟會阻隔空氣中氧氣的進入，可以更好的制造厭氧環(huán)境；培育基中也可補加肯定量的還原性鐵粉或硫乙醇酸鈉、半胱氨酸等還原性成分，關心維持厭氧環(huán)境。 （4）有些培育基可自然的形成厭氧環(huán)境，無需厭氧培育，如硫乙醇酸鹽流體培育基，靜置過程會自發(fā)分層，下層為無氧環(huán)境，無需任何厭氧設備，也無需掩蓋液體石蠟，即可培育厭氧菌。 三、常見厭氧菌的培育基 1.硫乙醇酸鹽流體培育基 此培育基常用于梭菌的活化及增菌培育，也可對養(yǎng)分成分進行改良用于一些養(yǎng)分要求較高的厭氧菌的培育，此培育基可自然的形成厭氧環(huán)境，無需厭氧培育，此培育基靜置過程會自

4、發(fā)分層，下層為無氧環(huán)境，無需任何厭氧設備，也無需掩蓋液體石蠟，即可培育厭氧菌。 2.皰肉培育基 相比較于硫乙醇酸鹽流體培育基，此培育基需掩蓋液體石蠟，用于培育梭菌時，可以存活更長時間（如生孢梭菌，在硫乙醇酸鹽流體培育基中只能存活數天，而在皰肉培育基中可存活數月以上）。 3.GAM/改良GAM培育基 此培育基養(yǎng)分特別豐富，適用于絕大多數的厭氧菌培育，特殊是用于比較難培育的養(yǎng)分苛求型細菌（如擬桿菌屬）。 4.血平板/CDC厭氧菌瓊脂 養(yǎng)分豐富，適用于絕大多數厭氧菌的培育（梭菌、擬桿菌等均可培育）。 5.MRS瓊脂/肉湯 用于雙歧桿菌的培育，制備好的MRS肉湯培育基澄清透亮無沉淀，常用于乳酸菌或雙歧桿菌的活化、增菌及收集菌體。 四、留意事項 （1）培育基的制備 需掩蓋石蠟的液體培育基，應在滅菌前完成分裝并掩蓋液體石蠟；流體培育基或半固體培育基在有氧條件下培育厭氧菌時，使用前可采納沸水浴或其他除氧方式排出培育基內溶解的氧氣. （2）操作過程 因氧氣會對厭氧菌產生毒害作用，因此整個操作過程應在特地的無氧設備中進行。如在正?？諝庵胁僮?，從厭氧菌暴露在空氣中開頭到放入厭氧環(huán)境中培育結束，整個過程應盡可能快速操作，一般不超過15分鐘，暴露時間越長，厭氧菌越簡單死亡。 （3）培育環(huán)境 可采納厭氧罐、厭氧培育箱、厭氧產氣包等方式供應厭氧環(huán)境，除了確保氣體環(huán)境無氧之