微生物實驗室病原微生物評估報告

1、 微生物實驗室病原微生物風險評估報告山丹縣人民醫(yī)院檢驗科目錄檢驗科實驗活動生物危害評估報告錯誤！未定義書簽金黃色葡萄球菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽淋病奈瑟菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽結(jié)核桿菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽蠟樣芽胞桿菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽假結(jié)核棒狀桿菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽志賀氏菌屬的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽陰溝腸桿菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽銅綠假單胞菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽嗜水氣單胞菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽傷寒、副傷寒沙門菌的生物危害評估報

2、告錯誤！未定義書簽沙門氏菌屬的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽諾卡菌屬的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽?zāi)X膜炎奈瑟氏菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽流感嗜血桿菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽黃桿菌屬細菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽紅斑丹毒絲菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽肺炎鏈球菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽肺炎克雷伯菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽大腸埃希菌的生物危害評估報告錯誤！未定義書簽產(chǎn)單核李斯特菌的危害評估報告錯誤！未定義書簽不動桿菌的危害評估報告錯誤！未定義書簽變形桿菌屬、摩根氏菌屬和普雷威登氏菌屬細菌的危害評估報告錯誤！未定義書簽遲鈍愛德華氏桿菌的危害

3、評估報告錯誤！未定義書簽溶血性鏈球菌評估報告錯誤！未定義書簽檢驗科實驗活動生物危害評估報告為保證實驗室工作人員在工作中不被危害性生物及物品所侵害，保證危害性物品不外泄，對實驗室工作環(huán)境進行評估，以鑒定生物安全防護等級，保證生物安全。一、危害程度分類及生物安全防護水平評估本檢驗科是為醫(yī)院診斷、預(yù)防、治療人體疾病或評估人體健康提供信息為目的，對來自人體的材料進行臨床生物化學、臨床微生物、臨床免疫學、臨床血液、細胞遺傳學等檢驗的實驗室。生物源危害主要是由各種檢驗標本中的微生物，尤其是病原微生物引起的，包括細菌、病毒、寄生蟲等，具有潛在危險性，可能引起實驗室感染；檢驗科微生物室還進行一定數(shù)量的各種條件

4、致病性細菌及真菌的分離培養(yǎng)工作，工作過程存在病原微生物對實驗人員、環(huán)境污染的風險；除之以外實驗室還存在觸電、火災(zāi)、化學品腐蝕、偷盜等危險。根據(jù)實驗室生物安全通用要求，本檢驗科不涉及人間傳染的病原微生物名錄中高致病性微生物的分離培養(yǎng)及高致病性微生物的菌、毒種的保藏，實驗室采用一定防護措施就能控制感染或防范災(zāi)害，或者對相應(yīng)病原體存在有效的免疫方法。評估我檢驗科生物安全防護水平按二級實驗室（BSL-2）生物安全要求。二、實驗人員和實驗室安全防護的一般要求吸煙危害評估及防護（1）實驗室工作區(qū)內(nèi)絕對禁止吸煙；（2）點燃的香煙是易燃液體的潛在火種；（3）香煙、雪茄或煙斗都是傳染細菌和接觸毒物的途徑。實驗區(qū)

5、內(nèi)食用食物、飲料及其它危害評估及防護（1）實驗工作區(qū)內(nèi)不得有食物、飲料及存在“手口”接觸可能的其它物質(zhì)（2）實驗室工作區(qū)內(nèi)的冰箱禁止存放食物。專用存放食物的冰箱應(yīng)放置在允許進食、喝水的休息區(qū)內(nèi)。使用化妝品危害評估及防護實驗工作區(qū)內(nèi)禁止使用化妝品進行化妝，但允許并建議經(jīng)常洗手的實驗人員使用護手霜。實驗中眼睛和面部的風險評估及防護（1）處理腐蝕性或毒性物質(zhì)時，須使用安全鏡、面罩或其它保護眼睛和面部的防護用品。（2）工作人員在實驗室的危險區(qū)內(nèi)不要佩戴隱形眼鏡，除非同時使用護目鏡或面罩。（3）使用、處理能夠通過粘膜和皮膚感染的試劑，或有可能發(fā)生試劑濺溢的情況時，必須佩帶護目鏡、面罩或面具式呼吸器。實驗

6、中服裝和個人防護裝備的一般要求（1）應(yīng)穿著符合實驗室工作需要的服裝，工作服應(yīng)干凈、整潔。當工作中有危險物噴濺到身上的可能時，應(yīng)使用一次性塑料圍裙或防滲外罩。有時還需要佩戴其它防護裝備如：手套、護目鏡、披肩或面罩等（2）采血員和其他需要接觸病員的工作人員，在接觸病員時需穿實驗服或工作服。（3）個人防護服裝應(yīng)定期更換以保持清潔，遇被危險物品嚴重污染，則應(yīng)立即更換。（4）不得在實驗室內(nèi)設(shè)值班床，嚴禁在實驗室內(nèi)住宿。實驗中足部防護的一般要求在工作區(qū)內(nèi)，應(yīng)穿舒適、防滑、并能保護整個腳面的鞋。在有可能發(fā)生液體濺溢的工作崗位，可加套一次性防滲漏鞋套。帆布鞋可吸收化學物品和有傳染性的液體，所以最好穿皮革或其它

7、防滲漏的合成材料的鞋。實驗中頭發(fā)和飾物的風險評估及防護留長發(fā)的工作人員應(yīng)將頭發(fā)盤在腦后，以防止頭發(fā)接觸到被污染物和避免人體脫屑落入工作區(qū)。頭發(fā)不得垂肩，應(yīng)與離心機、切片機等正在運轉(zhuǎn)的器械保持一定距離實驗中胡須的風險評估及防護蓄有胡須的男性工作人員必須遵守上項（7）的規(guī)定。洗手的要求實驗室工作人員在脫下手套后、離開實驗室前、接觸患者前后、以及在進食或吸煙前都應(yīng)該洗手。接觸血液、體液或其它污染物時，應(yīng)立即洗手。用口移液的危害評估及防護用口液移可導致多種病原體的實驗室感染。所有實驗室操作禁止用口液移，應(yīng)使用助吸器具。銳利物品的危害評估及防護謹慎處理針頭、解剖刀、和碎玻璃等銳利物品。使用后的針具不要折

8、斷、彎曲、破損、重復使用或用手重裝在針管上。一次性注射器上的針頭用后不要取下。銳利物品應(yīng)立即放置在專用銳器盒內(nèi)，在完全裝滿之前或48小時之內(nèi)更換。隔離措施的要求接觸患者時，實驗室工作人員應(yīng)遵守醫(yī)院的隔離措施。工作環(huán)境的要求（1）“清潔”區(qū)和“非清潔”區(qū)根據(jù)實驗室的具體工作情況由主任選擇并確定“清潔”和“非清潔”工作區(qū)，在清潔區(qū)和非清潔區(qū)之間設(shè)“緩沖室”。被指定為“清潔”的區(qū)域，則應(yīng)努力保持清潔，如采取預(yù)防措施，防止電話、視頻顯示器終端、鍵盤、門柄及其它經(jīng)常被手或手上的手套觸摸的物品的污染，要求工作人員在觸摸設(shè)備（如計算機鍵盤及電話的保護罩等）前取下手套，制定儀器設(shè)備和工作面的常規(guī)消毒和清潔制度

9、和對嚴重污染的緊急處理措施辦法。被指定為“非清潔”的區(qū)域，允許戴手套接觸所有物品（如電話、門柄、計算機終端和其它物品），所有這些物品的表面都認為是不清潔的。未戴手套的人員如果使用該區(qū)域內(nèi)的電話、計算機終端或其它設(shè)備，應(yīng)該戴上手套，或在使用后立即徹底洗手?！扒鍧崱焙汀胺乔鍧崱眳^(qū)都應(yīng)保持整潔。實驗臺至少應(yīng)每天清潔、消毒一次，如有必要可以多次清洗、消毒。在處理濺溢的樣品或嚴重污染的工作面時，應(yīng)戴上手套和其它個人防護裝備、使用相應(yīng)合適的清潔劑清除所有的濺溢物。（2）冰箱、冷凍柜、水浴和離心機應(yīng)該定期清洗和消毒（時間由實驗室主任來決定），在發(fā)生嚴重污染后應(yīng)立即進行清洗和消毒。進行清洗、消毒時要戴上手套，

10、穿上工作服或其它合適的防護服。（3）外衣：外衣（實驗服、工作服、和圍裙）應(yīng)懸掛在遠離散熱器、蒸汽管道、供暖裝置、以及有明火的地方，不要掛在壓縮氣瓶或滅火器上，也不要掛在門的玻璃隔板上，妨礙視線?！扒鍧崱钡暮汀胺乔鍧崱钡膫€人防護服要分開存放。（4）垃圾處理：每天至少清理垃圾一次。（5）裝飾：不得在電燈、燈座或儀器上進行裝飾，更不要使用電子裝飾物、蠟燭、圣誕樹等有引起火災(zāi)危險的裝飾品。（6）為便于清潔消毒，實驗室內(nèi)不應(yīng)有織物裝飾的用具或椅子。（7）個人物品：實驗工作區(qū)不得存放個人物品，如錢包、外套、皮靴、咖啡杯、運動服、預(yù)包裝的食品和藥品等。（8）實驗室內(nèi)應(yīng)配備應(yīng)急設(shè)備，如應(yīng)急洗眼裝置，酒精等消毒

11、用品。（9）實驗室應(yīng)安裝非手觸式洗手裝置。（10）實驗室內(nèi)應(yīng)安裝防蚊蠅裝置，應(yīng)定期投撒滅蟑螂、老鼠的藥（11）用后的廢棄物品：實驗工作區(qū)內(nèi)的用后廢棄物品存量不要太大。具危險性的液體如酸或堿性液體應(yīng)放在視平線以下。較大的廢棄物容器應(yīng)靠近地面存放。（12）出口通路：實驗室的出口和通道必須保持暢通無阻，不準堆放物品、垃圾、裝置、或設(shè)備。安全門必須保持暢通，不得堵塞。注意：無論任何時間、何種原因都不得阻塞通往滅火器、火警箱、防火毯、安全淋浴或出口的道路。使用玻璃器具的危害評估及防護操作玻璃器具時應(yīng)遵循下述安全規(guī)則：（1）不使用破裂或有缺口的玻璃器具。（2）不要用猛力取下玻璃試管上的塞子，粘緊的試管可用

12、刀切開分離。（3）接觸過傳染性物的玻璃器具，清洗之前，應(yīng)先行消毒。（4）破裂的玻璃器具和玻璃碎片應(yīng)丟棄在有專門標記的、單獨的、不易刺破的容器里。（5）高熱操作玻璃器具時應(yīng)戴隔熱手套。（6）在不影響實驗質(zhì)量的前提下，應(yīng)盡量減少使用玻璃器具。使用離心機的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）極少經(jīng)血（蟲媒介）極少（1）氣溶膠：離心過程中應(yīng)控制氣溶膠的產(chǎn)生在最低水平。（2）操作：離心機只有在蓋好蓋板后，才能啟動。（3）傳染性物品：所有能夠產(chǎn)生氣溶膠進行播散的生物制品或標本，都應(yīng)使用密封的離心管，并

13、在蓋緊的離心頭或轉(zhuǎn)頭中進行。（4）為防止氣溶膠飛溢，應(yīng)在離心停止30分鐘后打開離心物（5）清洗：按照消毒隔離制度要求清洗離心機。（6）平衡：離心時應(yīng)保持合適的平衡，以保證離心的順利進行。采集血樣的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）極少呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學腐蝕極少放射無（1）每天早晨用500mg/L的”84”消毒液擦拭抽血臺面及其它物表，并開紫外燈消毒至少30分鐘，并做好記錄。（2）工人每天早晨更換消毒液，包括浸泡銳器、止血帶的消毒液 和手消毒液。（3）工作人員必須穿工作服，戴好

14、口罩、帽子、和手套。（4）使用合格的一次性用品。嚴禁使用包裝破損，超過有效期的一次性用品。（5）嚴格執(zhí)行無菌技術(shù)操作規(guī)程、靜脈采血必須一人一針一管一巾一帶。微量采血應(yīng)做到一人一針一管一片，對每位病人操作前洗手或手消毒。（6）無菌物品如棉球需每天更換，開啟后使用不得超過24小時（7）工作人員需對銳器如采血針采取高度預(yù)防措施，用過的采血針需浸泡在含有消毒液的厚壁容器中。標本（血清、血漿、全血、尿）上檢驗分析儀檢測過程的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）極少經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學腐蝕無

15、放射無（1）為了避免液滴和氣溶膠和擴散，實驗室儀器加樣、加液，清洗等過程應(yīng)在圭寸閉罩內(nèi)進行的（2）實驗中使后的比色盤，反應(yīng)杯等廢棄物應(yīng)當收集在封閉的容器內(nèi)，集中處置。（3）在每一步完成后應(yīng)根據(jù)操作指南對對儀器進行消毒。血液、體液污染物表時，應(yīng)立即消毒。（4）工作人員要戴手套進行操作。標本（血清、血漿、全血、尿、糞）手工檢測過程的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚可能粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）可能經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學腐蝕可能放射無（1）每天早晨做好實驗室的清潔消毒工作。（2）工作人員要戴口罩、手套進行操作。（

16、3）實驗中使用的竹簽用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（4）廢棄的標本連同試管、蓋帽要用1000mg/L“84”消毒液浸泡，由工人統(tǒng)一清潔后進行無害化處理。（5）實驗中使用的吸頭、一次性塑料杯用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡 標本污染物表時，應(yīng)立即消毒。離心時，發(fā)生試管破裂或標本濺出，由操作者負責用有效消毒劑對離心機內(nèi)部進行及時消毒處置。19.微生物分離鑒定藥敏試驗及基因擴增試驗活動的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚可能粘膜(眼結(jié)膜)可能呼吸道可能消化道(經(jīng)手-口)可能經(jīng)血(針刺傷、切割傷)可能經(jīng)血(蟲媒介)可能盜竊可能化學腐蝕極少放射無(

17、1)每天早晨開紫外燈消毒空氣至少30分鐘，同時做好各物表、儀器的清潔消毒工作。實驗人員要戴手套、帽子進行操作。當估計會出現(xiàn)微生物和危險物濺出時要戴好眼罩或面罩。操作中使用的接種環(huán)、鑷子等金屬物品要在酒精燈火焰上燒灼滅菌?？赡墚a(chǎn)生致病性微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作如涂片、接種時，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作，并使用個體防護設(shè)備。實驗室內(nèi)的各種標本、菌種、培養(yǎng)基和其它廢棄物在運出實驗室前必須滅活（高壓、浸泡），需運出實驗室滅活的物品必須放在專用的密閉容器中。（6）操作過程中發(fā)生菌種污染物表時，應(yīng)馬上采取措施進行物表消毒。（7）當發(fā)生致病性微生物氣溶膠污染時，應(yīng)馬上進行人員疏散，通知負責人到現(xiàn)場進行指導消毒

18、。（8）對菌種的保存應(yīng)嚴格遵守菌種保存制度，嚴禁擅自保存各種國家法定傳染病菌株或毒株。（9）實驗人員離開實驗室前要去除手套，確認無污染或污染已排除，后方可洗手離去。（10）微生物、PCR實驗室要設(shè)置紗窗、擋鼠板。三、特定實驗活動危害評估（見以下章節(jié)之各種病原體的危害評估）四、工作人員素質(zhì)本實驗室共有技術(shù)人員13名，其中申請進入BSL-2實驗室13名。學士學位3名，5名曾經(jīng)從事微生物學實驗，3名曾經(jīng)從事無菌實驗室活動經(jīng)歷，5名技術(shù)人員學習過生物安全手冊并通過定期培訓及考核成績合格，經(jīng)體檢無現(xiàn)患嚴重疾病，健康狀態(tài)良好。五、評估結(jié)論本次評估本實驗室共19項可能潛在危險的實驗活動，在實驗操作實驗施過程

19、中在無控制措施情況下可能產(chǎn)生的高危害度5項，中度14項，低度0項；對危害發(fā)生的可能性分析，實驗危害較大可能發(fā)生的有0項，可能發(fā)生5項，較少可能發(fā)生14項；這些危害造成高度嚴重后果的5項，后果嚴重性中度的14項，后果嚴重性低度的00項，項。根據(jù)擬采取的預(yù)防控制措施后依然存在的殘留風險為高度中度0項，低度危害19項。評估：山丹縣人民醫(yī)院檢驗科評估人：審核：審核人：時間：金黃色葡萄球菌的生物危害評估報告一、金黃色葡萄球菌的傳播與致病金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，在空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的機會很多。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球

20、菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。金黃色葡萄球菌的流行病學一般有如下特點：季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道；上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶牛患化膿性乳腺炎或禽畜局部化膿時，對肉體其他

21、部位的污染。而腸毒素形成條件包括：存放溫度，在37C內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時間越短；存放地點，通風不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。葡萄球菌性菌血癥可發(fā)生于任何與血管內(nèi)導管或其他異物有關(guān)的局限性葡萄球菌膿腫或感染,它是嚴重燒傷病人死亡的常見原因。持續(xù)性發(fā)熱常見,而且可伴有休克。葡萄球菌性心內(nèi)膜炎特別好發(fā)于靜脈注射給藥者和裝有人工心臟瓣膜的病人。突然出現(xiàn)心臟雜音,膿毒性栓子和其他經(jīng)典體征便可作出可疑診斷,確診

22、需依據(jù)超聲心動圖和血培養(yǎng)。葡萄球菌性骨髓炎主要見于兒童,可引起寒戰(zhàn),發(fā)熱和受累骨疼痛,繼之出現(xiàn)紅腫。關(guān)節(jié)周圍感染常引起關(guān)節(jié)積液,提示為化膿性關(guān)節(jié)炎而不是骨髓炎。白細胞計數(shù)常15000/卩I并且血培養(yǎng)常陽性。X線變化在1014日內(nèi)不明顯，骨質(zhì)疏松和骨皮質(zhì)反應(yīng)甚至更長時間仍不能測出,而放射性核素骨掃描則常能較早出現(xiàn)異常?，F(xiàn)在葡萄球菌性小腸結(jié)腸炎很罕見,但若住院病人出現(xiàn)發(fā)熱,腸梗阻,腹痛和腹脹,低血壓或腹瀉,特別是新近作過腹部手術(shù)或接受過抗生素者,可提示本病。若糞便鏡檢發(fā)現(xiàn)大片的嗜中性白細胞和革蘭氏陽性球菌,則可能作出診斷,但必須排除產(chǎn)毒性艱難梭狀芽胞桿菌感染,這是抗生素相關(guān)性結(jié)腸炎最常見的原因。金

23、黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血毒素：外毒素，分a、B、Y、$四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.殺白細胞素：可破壞人的白細胞和巨噬細胞；c.血漿凝固酶：當金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)；d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E及F五種血清型。腸毒素可耐受100C煮沸30分鐘而不被破壞

24、。它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。二、金黃色葡萄球菌的生物學特性典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8卩m左右，顯微鏡下呈單個、成雙以及排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬，無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性衰老、死亡和被白細胞吞噬后的菌體革蘭染色呈陰性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度3537C、最適生長pH7.47.6。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10-15%NaCl肉湯中生長?？煞纸馄咸烟恰Ⅺ溠刻?、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽

25、性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。三、金黃色葡萄球菌的檢測與診斷標本采集：采自不同感染部位的各種標本，包括血液、腦脊液、穿刺液；痰液、膿液、創(chuàng)傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等。直接涂片鏡檢：直接涂片檢查在正常情況下呈無菌狀態(tài)的體液標本如血液、腦脊液、穿刺液等，若有檢出革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列、無芽胞、莢膜，直徑0.5-1卩m的球菌。即具有重要的臨床價值。分離培養(yǎng)：可以選用普通營養(yǎng)瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)基。該菌在普通肉湯中呈均勻迅速混濁生長；若接

26、種于瓊脂平板上35C過夜后可形成直徑約23mm的厚菌落、濕潤有光澤、呈金黃色不透明圓形凸起。若接種于血平板，菌落周圍可形成明顯的透明的B溶血環(huán)。在高甘露醇平板上金黃色葡萄球菌生成淡橙黃色菌落，以此可與其他凝固酶陰性的葡萄球菌相鑒別。鑒別實驗（1）血漿凝固酶試驗：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產(chǎn)生的，與其致病力有關(guān)的一種侵襲性酶，其作用是使血漿中的纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細胞的吞噬。血漿凝固酶分為結(jié)合型和游離型。前者結(jié)合在細菌的細胞壁上，能直接作用于血漿中的纖維蛋白原，使之轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，環(huán)繞菌體而形成凝塊。而游離型血漿凝固酶則在產(chǎn)生后被分泌到菌體外，不能直接作用于纖維蛋白原，但可以

27、激活血漿凝血酶原，使之轉(zhuǎn)化成凝血酶，后者再作用于纖維蛋白原使其轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。具體的測量方法也因此分為玻片法和試管法兩種。玻片法：將待試菌落乳化于玻片上的鹽水中，經(jīng)1020S證實無自凝后，用接種環(huán)取人或兔血漿一環(huán)，與乳化菌液混合，出現(xiàn)凝集者為陽性，另設(shè)生理鹽水為陰性對照。試管法：吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時培養(yǎng)物充分混勻，置37C培養(yǎng)，每隔半小時觀察一次，連續(xù)觀察6小時，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內(nèi)容物不流動，判為陽性。（2）耐熱核酸酶試驗：將24小時肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA平板，35C培養(yǎng)24小時，在刺種線

28、周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。（3）甘露醇發(fā)酵實驗金黃色葡萄球菌可發(fā)酵甘露醇。（4）Staphaurex膠乳凝集實驗是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡便的商品化直接凝集試驗。其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，然后用接種環(huán)挑取待鑒定菌株的新鮮培養(yǎng)物加入混勻，若出現(xiàn)凝集塊現(xiàn)象即為陽性。生化鑒定如上述，注意與其他凝固酶陽性的葡萄球菌的鑒別要點：PYR（吡咯烷酮-B-萘基酰胺試驗陰性；VP試驗陽性；鳥氨酸脫羧酶試驗陰性。免疫學方法用酶聯(lián)免疫吸附試驗和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌的磷壁酸抗體。分子生物學方法包括PFGE脈沖場凝膠電泳以及酶切圖譜分析

29、等。四、金黃色葡萄球菌的防治及生物安全防護一、細菌的防治金黃色葡萄球菌的控制主要包括：1）防止金黃色葡萄球菌污染食品，防止帶菌人群對各種食物的污染：定期對生產(chǎn)加工人員進行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時停止其工作或調(diào)換崗位。防止金黃色葡萄球菌對奶及其制品的污染：如牛奶廠要定期檢查奶牛的乳房，不能擠用患化膿性乳腺炎的牛奶；奶擠出后，要迅速冷至-10C以下，以防毒素生成、細菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶為原料，注意低溫保存。對肉制品加工廠，患局部化膿感染的禽、畜尸體應(yīng)除去病變部位，經(jīng)高溫或其他適當方式處理后進行加工生產(chǎn)。2）

30、防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成應(yīng)在低溫和通風良好的條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風陰涼地方也不應(yīng)超過6小時，并且食用前要徹底加熱。3）無菌措施（如檢查病人前后徹底洗手和消毒合用的器械）至關(guān)重要。已被感染的病人應(yīng)與其他易感病人隔離,患有活動性葡萄球菌感染,即使是局部性的感染（如癤）的醫(yī)護人員,在其感染治愈前不得接觸病人或器械。無癥狀的鼻腔帶菌者,除非所帶菌株十分危險或被懷疑為暴發(fā)流行的傳染源,一般不必隔離。治療包括膿腫引流,抗生素（重癥病人需腸外給藥）和全身支持療法。培養(yǎng)標本應(yīng)在開始治療前或更換抗生素之前獲取?？股氐倪x擇和劑量取決于感染的部位,疾病的嚴重程度和

31、細菌對藥物的敏感性。醫(yī)院獲得的葡萄球菌和大多數(shù)社區(qū)獲得的菌株,通常對青霉素G,氨芐青霉素和抗假單胞菌青霉素有耐藥性。大多數(shù)菌株對耐青霉素酶青霉素（甲氧苯青霉素,苯甲異噁唑青霉素,乙氧萘青霉素,鄰氯青霉素，雙氯青霉素）,頭孢菌素（頭孢菌素I,頭孢唑啉,頭孢菌素W,頭孢拉定，頭孢羥唑,頭孢西丁和第三代頭孢菌素）,卡巴培南類（亞胺培南,美羅匹寧）,慶大霉素,萬古霉素,替考拉寧,林可霉素和氯林可霉素,是敏感的。雖然頭孢菌素和萬古霉素都有效,但通常首選一種耐青霉素酶的青霉素。很多葡萄球菌菌株對紅霉素,四環(huán)素類藥物,氨基糖苷類,桿菌肽和氯霉素也敏感,但因有更好更安全的藥可用,故很少使用氯霉素和桿菌肽。目前

32、耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌（MRSA菌株日益增多，這種細菌雖可從社區(qū)獲得感染的病人中分離得到,但多數(shù)是從感染的靜脈吸毒者和重癥監(jiān)護室的病人中分離獲得。MRSA菌株通常對耐B-內(nèi)酰胺酶青霉素，頭孢菌素和卡巴培南類有耐藥性。這些細菌對氨基糖苷類和大環(huán)內(nèi)酯類（紅霉素,克拉霉素,阿齊霉素,林可霉素和氯林可霉素）的耐藥性也很普遍。雖然亞胺培南-西拉司丁或喹諾酮類對某些MRSA感染是有效的，但靜脈注射萬古霉素為首選。腎功能正常成人的通用劑量是每6小時靜脈注射500mg或每12小時靜滴注1000mg,至少在1小時內(nèi)滴完。腎功能受損時,劑量應(yīng)根據(jù)血清中藥物的濃度加以調(diào)整,療程視感染部位及病人的反應(yīng)而定,但一

33、般為24周。某些嚴重的或有并發(fā)癥的感染,可能需要靜脈給藥治療68周,然后再口服治療1個月或更長時間。可用于替代萬古霉素治療MRSA感染的藥物有：TMP-SMZ成人劑量為TMP1015mg/（kg.d）加SMZ5075mg/（kg.d）,分劑口服或腸外給藥,每次間隔8小時或12小時,連續(xù)24周；利福平（600mg/d）口服或腸外給藥；腸外給亞胺培南-西拉司?。?00mg每6小時1次）或美羅匹寧(0.51.0g每8小時1次。但利福平不要單獨應(yīng)用,因為細菌很易產(chǎn)生抗藥性。在治療異物相關(guān)性MRSA感染或漿膜腔MRSA感染時,利福平和氨基糖苷類是有用的輔助藥物。鄰氯青霉素,雙氯青霉素,TMP-SMZ,環(huán)

34、丙沙星及局部用莫匹羅星(mupirocin)可用于治療MRSA帶菌狀態(tài)，但MRSA寸這些藥物可產(chǎn)生抗藥性?？谷f古霉素的腸球菌(VRE)菌株的流行日益增加，這種菌株在實驗室中可將引起抗萬古霉素的基因轉(zhuǎn)為凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌菌株,而在感染的病人中則轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂戈幮云咸亚蚓蛛x株?？墒沁@些葡萄球菌很容易寸治療這類感染的其他藥物產(chǎn)生抗藥性。桿菌肽,若有的話,可試用于治療抗萬古霉素的葡萄球菌感染。寸這些病人應(yīng)嚴格隔離,以防他們的細菌傳播。二、細菌的生物安全防護根據(jù)病原微生物生物實驗室生物安全管理條例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄(待頒布)金黃色葡萄球菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)的防護事宜包括：

35、(1)操作要求1、實驗時，未經(jīng)實驗室主任同意，限制或禁止進入實驗室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。3、所有的操作過程應(yīng)盡量細心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。4、寸于污染的銳器，必須時刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。5、注射和吸取感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。

36、6、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進行消毒。7、所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實驗室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運出實驗室。離開該系統(tǒng)進行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。8、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時，要立即向?qū)嶒炇抑魅螆蟾妗＿M行適當?shù)尼t(yī)學評估、觀察、治療，保留書面記錄。9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其他傳染源污染后，實驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當

37、使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護設(shè)施、或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或濺出物的實驗過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實驗室內(nèi)離心。4、當必須在生物安全柜外處理標本時，需采取面部保護措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有

38、害物濺或灑到面上。5、在實驗室內(nèi)，必須使用專用的防護性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實驗室區(qū)域時，防護服必須留在實驗室內(nèi)。防護服可以在實驗室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)當戴著到實驗室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。淋病奈瑟菌的生物危害評估報告一、淋病奈瑟菌的傳播與致病淋病奈瑟菌又稱淋球菌，是淋病的病原菌，人類是本菌的唯一天然宿主和傳染源。淋病是淋菌性尿道炎的簡稱，是由淋球菌引起的泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎性疾病，它是人類很古

39、老的，也是當前世界范圍內(nèi)流行非常廣泛的一種性傳播疾病。淋病患者是主要傳染源，有癥狀或無癥狀的患者均可通過性接觸傳播，其中輕癥或無癥狀的淋病患者是重要的傳染源。其傳播途徑主要包括性交傳染，還可通過非性接觸傳播，如通過接觸患者分泌物污染的用品（衣褲、床上用品、毛巾、浴盆、馬桶等）間接感染；孕婦淋病患者當羊膜破裂，可繼發(fā)羊膜腔內(nèi)及胎兒感染；新生兒經(jīng)過患淋病的母體產(chǎn)道時常可引起淋菌性眼炎；另外尚可通過醫(yī)護人員的手和器具引起醫(yī)源性感染。本病最初多侵犯尿道、宮頸內(nèi)膜，繼而可波及前列腺、精囊、副睪、子宮內(nèi)膜及輸卵管。有時肛門、直腸、咽粘膜、眼結(jié)膜也可受染。尚可經(jīng)血行播散引起菌血癥、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及腦膜炎，

40、可引起死亡或不育、不孕、失明及尿道狹窄等后果。由于本病潛伏期短、傳染性強、后果嚴重，因此它是我國當前重點防治的性病之一。二、淋病奈瑟菌的生物學特性淋病奈瑟菌屬奈瑟菌屬，鏡下呈腎形，常成雙排列，鄰近面扁平或稍凹，像兩瓣黃豆對在一起，大小0.6卩mK0.8卩m革蘭氏染色陰性，呈粉紅色，美藍染色呈藍色。急性炎癥期細菌多在患者分泌物的少部分中性粒細胞的胞漿中，慢性期則多在細胞外，且有些可呈單個球形或四聯(lián)狀。人工培養(yǎng)后形態(tài)亦常呈球形、單個、成雙或四聯(lián)排列。淋球菌適于潮濕（相對溫度80%85%）、溫暖（35.5C36.5C）、中性偏堿（pH7.27.6）、含5%10%二氧化碳的條件下生長。最怕干燥，在完全

41、干燥環(huán)境下只能存活12小時，對溫度變化敏感，超過38C或低于30C則不能生長，在培養(yǎng)基上室溫放置12天即可死亡，在39C存活13小時，42C存活15分鐘，50C存活5分鐘。如在不完全干燥的衣褲、被褥、毛巾、玩具上則可存活1824小時。一般消毒劑容易將它殺滅，在1:4000硝酸銀溶液中7分鐘死亡，1%石炭酸溶液中3分鐘內(nèi)死亡。淋球菌較為嬌嫩，酶系統(tǒng)不完整，初代培養(yǎng)普通培養(yǎng)基不易成功，需在含有動物蛋白的培養(yǎng)基上，且含有二氧化碳的條件下才能生長。淋球菌在血瓊脂培養(yǎng)基孵育24小時后，可形成直徑0.51mm的圓形稍隆起，濕潤光滑，半透明，邊緣呈花瓣狀，有粘性的露滴狀菌。淋球菌的生化反應(yīng)不發(fā)達，只分解葡萄

42、糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解麥芽糖及蔗糖。藉助上述生化特性亦可與腦膜炎球菌及其他奈瑟菌相鑒別。淋球菌能產(chǎn)生氧化酶和過氧化氫酶，在診斷上有一定意義。三、淋病奈瑟菌的實驗室檢查及其診斷細菌的實驗室檢查及其它檢查（1）涂片檢查：取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物，作革蘭氏染色，在多形核白細胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者，此法陽性率在90%左右，可以初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽性率僅為50-60%，且有假陽性，因此世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少，陽性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高檢出率。咽部涂片發(fā)現(xiàn)革蘭氏

43、陰性雙球菌不能診斷淋病，因為其他奈瑟菌屬在咽部是正常的菌群。另外對癥狀不典型的涂片陽性應(yīng)作進一步檢查。（2）培養(yǎng)檢查：淋球菌培養(yǎng)是診斷的重要佐證，培養(yǎng)法對癥狀很輕或無癥狀的男性、女性病人都是較敏感的方法，只要培養(yǎng)陽性就可確診，在基因診斷問世以前，培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病的唯一方法。目前國外推薦選擇培養(yǎng)基有改良的Thayer-Martin(TM培養(yǎng)基和NewYorkCity(NYC培養(yǎng)基。國內(nèi)采用巧克力瓊脂或血瓊脂培養(yǎng)基，均含有抗生素，可選擇地抑制許多其他細菌生長。在36C,70%濕度，含5%-10%CO2(燭缸)環(huán)境中培養(yǎng)，24-48小時觀察結(jié)果。培養(yǎng)后還需進行菌落形態(tài)，革蘭氏染色，氧

44、化酶試驗和糖發(fā)酵試驗等鑒定。培養(yǎng)陽性率男性80%-95%，女性80-90%。培養(yǎng)后需根據(jù)菌落形態(tài)、革蘭染色、氧化酶試驗和糖發(fā)酵試驗做出鑒定。培養(yǎng)陽性率男性為80%95%，女性為80%90%。(3)抗原檢測固相酶免疫試驗(EIA):可用來檢測臨床標本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地區(qū)而又不能作培養(yǎng)或標本需長時間遠送時使用，可以在婦女人群中用來診斷淋球菌感染。直接免疫熒光試驗：通過檢測淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免疫熒光試驗。但目前在男女二性標本的敏感不高，特異性差，加之實驗人員的判斷水平，故該實驗尚不能推薦用來診斷淋球菌感染。(4)基因診斷淋球菌的基因探針診斷:淋球菌的基因探針診斷，所用的

45、探針有：質(zhì)粒DNA探針，染色體基因探針和rRNA基因探針。2、淋球菌的基因擴增檢測PCR技術(shù)和連接酶鏈反應(yīng)的出現(xiàn)進一步提高了檢測淋球菌的靈敏性，它具有快速、靈敏、特異、簡便的優(yōu)點，可以直接檢測臨床標本中極微量的病原體。（5）藥敏試驗對培養(yǎng)陽性者可進一步用紙片擴散法做藥敏試驗，或用瓊脂平皿稀釋法測定藥物最小抑菌濃度（MIC）,以及用紙片酸度定量法檢測B內(nèi)酰胺酶（使用WhatmanI號濾紙PP-NG菌株能使其顏色由藍變黃，陽性為PPNG陰性為N-PPNG，以確定淋球菌對抗生素的敏感性，合理選擇用藥。四、淋病的預(yù)防淋病奈瑟菌的預(yù)防要點如下：避免婚外性行為。在性生活中提倡使用避孕套等理化屏障，以防止淋

46、球菌感染。預(yù)防性使用抗生素可減少感染的危險，可應(yīng)用于已知與淋病患者有性接觸者。按淋病治療方案對病人進行合理治療，徹底消滅傳染源。對性伴侶應(yīng)進行檢查和治療?；颊咭俗⒁鈧€人衛(wèi)生與隔離，不與家人、小孩（尤其女孩）同床、共浴。執(zhí)行對新生兒硝酸銀溶液或紅霉素溶液預(yù)防滴眼的規(guī)定，防止新生兒淋病性眼炎發(fā)生。病人需經(jīng)徹底治愈后，方可結(jié)婚、生育和安排工作。五、淋病奈瑟菌的生物安全防護根據(jù)病原微生物生物實驗室生物安全管理條例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）霍亂弧菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)的防護事宜包括：（1）操作要求1、實驗時，未經(jīng)實驗室主任同意，限制或禁止進入實驗室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、

47、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。3、對于污染的銳器，必須時刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。4、注射和吸取感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。5、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進行消毒。6、

48、所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實驗室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運出實驗室。離開該系統(tǒng)進行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。7、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時，要立即向?qū)嶒炇抑魅螆蟾?。進行適當?shù)尼t(yī)學評估、觀察、治療，保留書面記錄。8、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其他傳染源污染后，實驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)

49、生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護設(shè)施、或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性濺出物的實驗過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實驗室內(nèi)離心。4、當必須在生物安全柜外處理標本時，需采取面部保護措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或灑到面上。5、在實驗室內(nèi)，必須使用專用的防護性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實驗室區(qū)域時，防護服必須留在實驗室內(nèi)。防護服可以在實驗室內(nèi)處理，也可以在

50、洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)當戴著到實驗室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。結(jié)核桿菌的生物危害評估報告一、結(jié)核桿菌的傳播與致病結(jié)核桿菌通常指結(jié)核分枝桿菌和牛分枝桿菌，其中結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）是引起人類結(jié)核病的主要病原體。結(jié)核分枝桿菌的主要傳染途徑是經(jīng)呼吸道傳播，由排菌的肺結(jié)核病人在咳嗽、噴嚏或大聲說話時隨呼吸道分泌物排出到空氣中，或排菌的肺結(jié)核病人隨地吐痰通過再生氣溶膠（塵埃），攜帶結(jié)核桿菌，

51、飛揚在空氣中，被健康的人吸入后發(fā)生感染和發(fā)病，因此排菌的肺結(jié)核患者（尤其是痰涂片陽性未經(jīng)治療者）是結(jié)核病的主要傳染源。一般結(jié)核病患者痰中結(jié)核桿菌越多，傳播的危險性越大。患者排出的飛沫在1-10微米者，在空氣中漂浮時間長，傳染性越大?；颊卟∽兒桶Y狀越嚴重，傳染性也越大。周圍人群與患者接觸越密切者，受感染的機會越多。與患者同處于空氣不流通的室內(nèi)的密切接觸者，受感染的可能性增大。未受結(jié)核感染的人是結(jié)核病易感人群，由于結(jié)核病是人畜共患病，哺乳類動物如牛、鹿、猴、豬、貓、狗等也都可以患結(jié)核病。感染結(jié)核桿菌后，終身都有可能發(fā)病，發(fā)病時間因人而異，一般2個月20年才發(fā)病。典型肺結(jié)核起病緩慢，病程較長，有低熱

52、、倦怠、食欲不振、咳嗽及少量咯血。但多數(shù)患者病灶輕微，無顯著癥狀。（1）癥狀全身癥狀表現(xiàn)為午后低熱、乏力、食欲不振、消瘦、盜汗等。呼吸系統(tǒng)癥狀通常為干咳或帶少量黏液痰；繼發(fā)感染時，痰呈粘液膿性。約1/3患者有不同程度咯血，咯血后常有低熱。大咯血時可發(fā)生失血性休克，偶因血塊阻塞大氣道引起窒息。病灶炎癥累及壁層胸膜時，相應(yīng)胸壁有刺痛，一般多不劇烈，隨呼吸及咳嗽而加重。若并發(fā)氣胸或大量胸腔積液，呼吸困難癥狀尤為嚴重。（2）體征早期病灶小或位于肺組織深部，多無異常體征。若病變范圍較大，患側(cè)肺部呼吸運動減弱，叩診呈濁音，聽診時呼吸音減低，或為支氣管肺泡呼吸音。因肺結(jié)核好發(fā)于肺上葉尖后段及下葉背段，故鎖骨

53、上下、肩胛區(qū)叩診略濁，咳嗽后偶可聞及濕啰音，對診斷有參考意義。肺部病變發(fā)生廣泛纖維化或胸膜粘連增厚時，患側(cè)胸廓常呈下陷、肋間隙變窄、氣管移位與叩濁，對側(cè)可有代償性肺氣腫征。二、結(jié)核桿菌的生物學特性從分類學上看結(jié)核桿菌屬于裂殖菌綱、放線菌目、分枝桿菌科、分枝桿菌屬。結(jié)核分枝桿菌正常典型的形態(tài)是直或稍彎曲、兩端鈍圓的桿菌，菌體長1-4納米，寬0.3-0.6納米，無芽胞、無莢膜、無鞭毛，生長發(fā)育期間有分枝生長傾向。鏡下常呈單個散在或呈“人、V、T、丫”形排列，菌體多時細菌扭集一起呈繩索狀、束狀或叢狀。此外結(jié)核桿菌菌體還具有多形態(tài)特征，受不良生長條件的影響可分別表現(xiàn)為桿菌型（基本形態(tài)）、濾過型、顆粒型

54、和球菌型（L型）4種不同的類型。分枝桿菌生長緩慢，在人工培養(yǎng)基內(nèi)繁殖一代約需15-20小時，一般需2-4周或更長時間始見菌落生長，甚至有極少數(shù)生長極為緩慢者需8周以上才開始有菌落生長。它為專性需氧菌，生長的溫度范圍是35-40C,pH5.5-7.2。培養(yǎng)營養(yǎng)要求較高且特殊，培養(yǎng)基需含雞蛋、血清、氨基酸、甘油等營養(yǎng)豐富的復雜有機物及少量無機鹽類。而且結(jié)核桿菌隨著環(huán)境的改變易發(fā)生菌落形態(tài)、毒力、L型及藥物耐藥性變異，如在人工培養(yǎng)基上反復連續(xù)傳代，可產(chǎn)生變異而致毒力降低，三、結(jié)核桿菌的檢測與診斷（1）細菌的實驗室檢查及其它檢查結(jié)核菌檢查：是確診肺結(jié)核最特異性的方法，痰中找到結(jié)核菌為確診肺結(jié)核的主要依

55、據(jù)。涂片抗酸染色鏡檢快速簡便。在我國非典型分枝桿菌尚屬少見，故抗酸桿菌陽性，肺結(jié)核診斷基本即可成立。痰菌陽性表明其病灶是開放性的，具有傳染性。培養(yǎng)法更為精確，尚可作藥物敏感試驗與菌型鑒定。但結(jié)核菌生長緩慢，培養(yǎng)較為費時，但精確可靠，特異性高。若涂片陰性或診斷有疑問時，培養(yǎng)尤其重要；而且，培養(yǎng)后可做藥物敏感性測定，指導臨床用藥。PCR技術(shù)檢測結(jié)核菌DNA快速、簡便，并可鑒定菌型，不足之處是可能出現(xiàn)假陽性或假陰性。影像學檢查：胸部X線檢查可以發(fā)現(xiàn)肺內(nèi)病變的部位、范圍、有無空洞或空洞大小、洞壁厚薄等。X線對各類結(jié)核病的透過度不同，通過X線檢查能大致估計結(jié)核病灶的病理性質(zhì)，并能早期發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核，以及判斷

56、病情發(fā)展及治療效果，有助于決定治療方案。肺結(jié)核的常見X線表現(xiàn)包括：纖維鈣化的硬結(jié)病灶、浸潤性病灶以及干酪樣病灶等。胸部CT檢查對于發(fā)現(xiàn)微小或隱蔽性病變，了解病變范圍及病變鑒別等方面均有幫助。結(jié)核菌素試驗：是診斷結(jié)核感染的參考指標。使用的變應(yīng)原有舊結(jié)核菌素(oldtuberculin,OT)和結(jié)核菌素的純化蛋白衍化物(purifiedproteinderivative,PPD)，現(xiàn)臨床多用PPD皮內(nèi)注射0.1ml(5IU)，硬結(jié)平均直徑5mm為陽性反應(yīng)。結(jié)核菌素試驗有助于判斷有無結(jié)核菌感染。若呈強陽性反應(yīng)，常表示為活動性結(jié)核病。結(jié)核菌素試驗陽性反應(yīng)僅表示曾有結(jié)核感染，并不一定現(xiàn)在患病。結(jié)核菌素試

57、驗陰性反應(yīng)除表示沒有結(jié)核菌感染外，尚需考慮以下情況：結(jié)核菌在感染48周后才建立充分變態(tài)反應(yīng)，在這之前，結(jié)核菌素試驗可呈陰性；應(yīng)用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑，或營養(yǎng)不良、麻疹、百日咳等患者，結(jié)核菌素反應(yīng)亦可暫時消失。其它檢查結(jié)核病患者血像通常無改變，嚴重病例常有繼發(fā)性貧血，急性粟粒型肺結(jié)核時白細胞總數(shù)減低或出現(xiàn)類白血病反應(yīng)。血沉增快常見于活動性肺結(jié)核。用ELISA法檢測患者血清中特異性抗體，可對無痰或痰菌陰性者和肺外結(jié)核的診斷提供參考。纖支鏡檢查對于發(fā)現(xiàn)氣管內(nèi)膜結(jié)核、了解有無腫瘤、吸取分泌物、解除阻塞或作病原菌及脫落細胞檢查，以及取活組織作病理檢查等，均有重要診斷價值。淺表淋巴結(jié)活檢，有助于結(jié)核的鑒

58、別診斷。(2)診斷和鑒別診斷痰結(jié)核菌檢查不僅是診斷肺結(jié)核的主要依據(jù)，亦是考核療效、隨訪病情的重要指標。X線檢查是診斷肺結(jié)核的必要手段，對早期診斷、確定病變部位、范圍、性質(zhì)、了解其演變及選擇治療等均具有重要價值。在臨床診斷中，我國現(xiàn)用的分類法包括四部分，即肺結(jié)核類型、病變范圍及空洞部位、痰菌檢查、活動性及轉(zhuǎn)歸。肺結(jié)核分為五型：1型為原發(fā)型肺結(jié)核；H型為血行播散型肺結(jié)核；川型為浸潤型肺結(jié)核；W型為慢性纖維空洞型肺結(jié)核；V型為結(jié)核性胸膜炎。還應(yīng)注意將結(jié)核病與肺癌、肺炎、支氣管擴張、慢性支氣管哮喘和其它發(fā)熱性疾病如傷寒、敗血癥、白血病、縱隔淋巴瘤及結(jié)節(jié)病等進行鑒別。四、結(jié)核桿菌的防治及生物安全防護細菌

59、的防治根據(jù)中華人民共和國傳染病防治法和實驗室生物安全通用要求中的有關(guān)規(guī)定，結(jié)核病屬于乙類傳染病，按照乙類傳染病進行預(yù)防控制。在結(jié)核病的預(yù)防方面要針對傳染源、傳播途徑、易感人群三個環(huán)節(jié)，采取以管理和控制傳染源為主的綜合性防治措施，努力做到“早發(fā)現(xiàn)、早報告、早治療”，以利于控制和管理傳染源。臨床上肺結(jié)核化學治療的原則是早期、規(guī)律、全程、適量、聯(lián)合。整個治療方案分強化和鞏固兩個階段。我國結(jié)核病防治規(guī)劃指南規(guī)定采用統(tǒng)一標準的化學治療方案。表1國家防癆規(guī)劃的結(jié)核病化療方案療程化療方案6個月2RHZ/4RH2ERHZ/4RH或4R2H22SRHZ/4RH或4R2H28個月2SRHZ/6TH或6EH2SRH

60、Z/6S2H2Z2R代表利福平，H代表異煙肼，Z代表吡嗪酰胺，E代表乙胺丁醇，S代表鏈霉素，T代表丙硫異煙胺。下標數(shù)字表示每日用藥次數(shù)；其余數(shù)字表示用藥月數(shù)，斜線前數(shù)字表示前2個月，斜線后字表示后幾個月。對復治病例，一般可用以下幾種方案：2S(E)RHZ/4RH(E)，督促化療，保證規(guī)律用藥。初治規(guī)則治療失敗的患者，可用2S3H3Z3E3/6H3R3E3慢性排菌者可用敏感的一線藥與二線藥聯(lián)用，應(yīng)嚴密觀察藥物不良反應(yīng)，療程以612個月為宜。對毒性癥狀嚴重者，可加用糖皮質(zhì)激素，以減輕炎癥及過敏反應(yīng)，促進滲液吸收，減少纖維組織形成及胸膜粘連。對咯血患者，應(yīng)對癥治療，包括休息、止咳、鎮(zhèn)靜以及應(yīng)用止血藥