生物學(xué)實用技術(shù)實驗講義

1、PAGE PAGE 54生物學(xué)實用技術(shù)實驗講義 化生院 前 言本實驗課程是生物技術(shù)專業(yè)開設(shè)的一門專業(yè)實驗技術(shù)課，本實驗課在本專業(yè)人才培養(yǎng)中起著重要地位和作用，它是培養(yǎng)學(xué)生今后從事教學(xué)科研及技術(shù)應(yīng)用開發(fā)工作重要的教學(xué)實驗環(huán)節(jié)之一。本實驗課程具有知識面寬、實用性大、實驗性強(qiáng)等特點，有細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、動植物標(biāo)本制作技術(shù)、一些生物大分子物質(zhì)的分離純化、分析技術(shù)、食用菌制作技術(shù)等方面實驗內(nèi)容和環(huán)節(jié)，能提高學(xué)生的動手能力，增強(qiáng)學(xué)生的應(yīng)用技術(shù)，為其今后從事教學(xué)科研和實際生產(chǎn)工作打下堅實的理論基礎(chǔ)和實際操作能力。 袁維風(fēng) 2008目 錄前言 1第一部分 植物組織培養(yǎng)技術(shù)實驗一 組織培養(yǎng)實驗室基本設(shè)備及其用途的識

2、別 3實驗二 培養(yǎng)基母液的配制 7實驗三 MS培養(yǎng)基配制與滅菌 11實驗四 外植體選擇、消毒滅菌和接種 14實驗五 外植體無菌培養(yǎng)和愈傷組織繼代、增殖 15實驗六 分化成苗、生根和馴化移栽 第二部分 動植物標(biāo)本制作技術(shù) 實驗六 動物剝制標(biāo)本的制作 16實驗七 動物骨骼標(biāo)本的制作 19實驗八 植物蠟葉標(biāo)本的制作 21第三部分 現(xiàn)代生物分子技術(shù)實驗九 真核生物高分子量DNA制備 23實驗十 瓊脂糖凝膠電泳技術(shù) 25實驗十一 PCR基因擴(kuò)增技術(shù) 26第四部分 食用菌栽培技術(shù)實驗十二 食用菌的母種制作及擴(kuò)大培養(yǎng) 27實驗十三 食用菌的原種制作 29實驗十四 食用菌的栽培種及栽培技術(shù) 31參考教材 32

3、第一部分 植物組織培養(yǎng)技術(shù) 植物組織培養(yǎng)是指植物的任何器官、 組織或細(xì)胞，在人工預(yù)知的控制條件下，放在含有營養(yǎng)物質(zhì)和植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)等組成的培養(yǎng)基中，使其生長、分化并形成完整植株的過程。其理論依據(jù)是植物細(xì)胞具有全能性。組織培養(yǎng)的特點是：取材少，培養(yǎng)材料經(jīng)濟(jì)；人為控制培養(yǎng)條件，不受自然條件影響；生長周期短，繁殖率高；管理方便，利于自動化控制。組織培養(yǎng)不但是進(jìn)行細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、育種學(xué)、生物化學(xué)和藥物學(xué)等學(xué)科研究的重要手段；而且在農(nóng)學(xué)、園藝、林業(yè)和次生代謝產(chǎn)物工程等生產(chǎn)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。實驗一 組織培養(yǎng)實驗室基本設(shè)備及其用途的識別一、目的1.認(rèn)識植物組織培養(yǎng)實驗室的基本結(jié)構(gòu)，必須的基本設(shè)備及其用途

4、、方法。2.認(rèn)識植物組織培養(yǎng)必需的儀器、器皿，幾種主要設(shè)備的使用方法、常用幾種藥劑的配制。二、實驗室的基本結(jié)構(gòu)（一）準(zhǔn)備室（工作室）：要求明亮，通風(fēng)。準(zhǔn)備室的任務(wù)很繁重，器皿洗滌，培養(yǎng)基藥品稱量、配制、分裝、高壓滅菌；植物材料的預(yù)處理，重蒸餾水的制備以及進(jìn)行生理、生化因素的分析等各種操作都要在此室中進(jìn)行。要有大型工作臺12張，大桌子12張，藥柜13個用以放置藥品、培養(yǎng)瓶和物品。此外還配有各種培養(yǎng)基所需的化學(xué)藥劑，儀器設(shè)備，各種器皿，烘箱、冰箱、天平、酸度計、蒸餾水發(fā)生器或純水發(fā)生器、高壓滅菌器、電爐、不銹鋼鍋、培養(yǎng)基分注器、盆與桶等。（二）緩沖室：為避免進(jìn)出時帶進(jìn)雜菌，無菌室外應(yīng)設(shè)置緩沖室，面

5、積約3m25m2。進(jìn)入無菌室前需在緩沖室里換上經(jīng)過滅菌的衛(wèi)生服、拖鞋，戴上口罩。最好安裝1盞紫外燈，用以滅菌。墻上設(shè)衣帽鉤，門邊擺拖鞋或設(shè)1鞋箱。（三）無菌操作室（也稱接種室）：具體視生產(chǎn)規(guī)模和超凈工作臺數(shù)量而定。它是進(jìn)行無菌工作的場所，如材料的滅菌接種，無菌材料的繼代，叢生苗的增殖或切割嫩莖插植生根等等，它是植物組織培養(yǎng)研究或生產(chǎn)工作中的最關(guān)鍵的部分，關(guān)系到培養(yǎng)物的污染率、接種工作效率等重要指標(biāo)。無菌室要求干爽安靜、清潔明亮，墻壁光滑平整不易積染灰塵，地面平坦無縫，便于清洗和滅菌。最好采用水磨石地面或水磨石砌塊地面，白瓷磚墻面或防菌漆天花板板面等結(jié)構(gòu)。門窗要密閉，一般用移動門窗，以減少空氣的

6、擾動。在適當(dāng)?shù)奈恢冒惭b紫外燈，使室內(nèi)保持良好的無菌或低密度有菌狀態(tài)。主要儀器有接種箱、超凈工作臺等，超凈工作臺上放酒精燈和裝有刀、剪、鑷子的工具合（常用飯盒或搪瓷盤），滅菌用的酒精（75%與95%兩種）、外植體表面滅菌劑（0.1%HgCl2等）以及吐溫、無菌水等。（四）培養(yǎng)室：培養(yǎng)室是將接種到培養(yǎng)瓶等器皿中的植物材料進(jìn)行培養(yǎng)的場所。其面積根據(jù)培養(yǎng)規(guī)模和經(jīng)濟(jì)條件來確定。為了滿足外植體的生長和發(fā)育，培養(yǎng)室要具備適宜的溫度、濕度、光照、通風(fēng)等條件。培養(yǎng)室主要有：培養(yǎng)架子和燈光、通風(fēng)設(shè)施、空調(diào)機(jī)、除濕機(jī)、各類顯微鏡、溫度濕度計等。（五）溫室（培養(yǎng)大棚）：進(jìn)行練苗、移栽等。圖11 組織培養(yǎng)實驗室設(shè)計平面

7、圖Z.準(zhǔn)備室 H.緩沖室 P.培養(yǎng)室 S.水槽 B.白瓷磚面邊臺,下有備品柜 d.電爐 b.冰箱 G1.放置培養(yǎng)瓶用的擱架 T.大實驗臺 G.藥品及儀器柜 M.門 L.拉門 W.無菌操作室 C.超凈工作臺 Y.椅子 D.圓橙 G2.放置滅過菌待用培養(yǎng)瓶的擱架 F.分析天平 LC.拉窗,用于遞送培養(yǎng)瓶 p.培養(yǎng)架，高200cm，寬60cm，長126cm，分作5或6層三、常用的儀器蒸餾水器手提式高壓消毒鍋、臥式高壓消毒鍋天平 = 1 * GB2 藥物天平（工業(yè)天平）、粗天平、（精密度1/10） = 2 * GB2 扭力天平（精密度1/100） = 3 * GB2 分析天平（精密度1/10000）超

8、凈工作臺（學(xué)習(xí)、使用、操作）電熱干燥箱（烘箱）恒溫光照培養(yǎng)箱電冰箱顯微鏡和解剖鏡旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)機(jī)離心機(jī)酸度測定儀 四、必要的器皿（一）玻璃器皿1.培養(yǎng)器皿試管三角燒瓶（錐形瓶）圓形高形培養(yǎng)瓶（罐頭瓶）培養(yǎng)皿扁身培養(yǎng)瓶L型和T型管凹面載玻片2.盛裝器皿試劑瓶燒杯3.計量器皿量筒容量瓶吸管4.其它器皿滴瓶、稱量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等實驗室常用器皿。（二）金屬器械1.鑷子類2025cm長型鑷子（接種或轉(zhuǎn)移愈傷組織）尖端彎曲“槍型”鑷子（鑷取較小的植物組織）尖頭鐘表鑷子和鴨嘴鑷子（剝離表皮用）尖端為小鏟狀鑷子（挖取帶瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)物）2.解剖刀和刀類眼科用刀種牛痘疫苗的菱形刀（切割柔軟組織中小細(xì)胞團(tuán)）

9、解剖刀（手術(shù)刀）雙面刀片焊接在玻棒上（切取莖尖用）鋒利小刀、大刀和小鐵鍬3.剪刀類解剖剪眉剪眼科剪 1825cm彎頭剪 俢枝剪4.接種針五、幾種常用藥劑的配制（一）用95%嘗試酒精配比不同濃度的酒精的配制。學(xué)習(xí)配制70%和75%酒精。（二）消毒劑1.20%次氯酸鈉溶液稱取20g次氯酸鈉用少許水溶解，100ml水定容。2.0.1%升汞（HgCl2）溶液稱取0.1g HgCl2少許水溶解，100ml水定容。（三）洗滌劑1.2HCl酒精95%酒精100ml加入2mlHCl2.硫酸重鉻酸鉀洗液稱取10g重鉻酸鉀加入蒸餾水90ml，加熱溶解冷卻后，逐漸加入濃硫酸175ml，放入棕色玻璃瓶備用，（注意：切

10、記不可將盛過灑精，甲醛等原劑的藥品玻璃器皿直接泡入洗液在，因為重鉻酸鉀是一種強(qiáng)的氧化劑，一旦被還原氧化，洗液變綠，失去洗滌作用）。這些器皿必須用自來水沖洗干凈并晾干再浸入洗液。（四）1摩爾濃度(mg/L )NaOH 和1摩爾濃度（mg/L）HCl配制。摩爾濃度是指用1升（1000ml）溶液中所含溶質(zhì)的分子量數(shù)來表示的溶液的濃度。用M表示。1.NaOH摩爾濃度（M）1M NaOH是指1000ml溶液中含有40克摩爾質(zhì)量的NaOH，現(xiàn)要配制100ml 400.14g稱取NaOH4g，用少量溶解，定容100ml.2.HCl的摩爾濃度具體配制酸的mol濃度時，應(yīng)考慮原濃酸的比重mol濃度。要求配制的m

11、ol濃度需配制的體積原酸分子量V原酸的百分濃度原酸的比重1000配制1.0MHCl 100ml，量取38%，比重為1.19的HCl8.06ml加蒸餾水，定容至100ml。六、實驗報告.組織培養(yǎng)實驗室一般包括哪幾個部分？各自有什么用途及怎樣使用？.了解和掌握組織培養(yǎng)的幾種主要設(shè)備使用方法、常用幾種藥劑的配制。實驗二 培養(yǎng)基母液的制備 一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握培養(yǎng)基母液的配制方法。二 、意義在配制培養(yǎng)基前，為了使用方便和用量準(zhǔn)確，常常將大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物質(zhì)、激素類分別配制成10-100倍濃縮液（即）母液。當(dāng)配制培養(yǎng)基時，只需要按稀釋比例吸取母液即可。三、實驗器材 1、電光分析天平（感量

12、為0.0001g）、扭力天平（感量為0.01g）、燒杯（500ml、100ml、50ml）、容量瓶（1000ml、100 ml、50 ml、25 ml）、細(xì)口瓶、藥勺、玻璃棒、稱量紙、電爐。2、實驗藥品MS培養(yǎng)基各種藥品：NH4NO3、 KNO3 、CaCl22H2O 、MgSO47H2O、KH2PO4 ； KI、 H3BO3 、 MnSO44H2O、 ZnSO47H2O、 Na2MoO42H2O 、CuSO45H2O 、CoCl26H2O；FeSO47H2O、Na2-EDTA2H2O ；肌醇 、煙酸 、 鹽酸吡哆醇(維生素B6) 、鹽酸硫胺素(維生素B1) 、甘氨酸；蔗糖、瓊脂； 四、實驗步

13、驟1、1L大量元素母液的配制按照表培養(yǎng)基濃度含量擴(kuò)大20倍，用感量為0.01g的扭力天平稱取，配制培養(yǎng)基時，每配1L培養(yǎng)基取此液50ml。用蒸餾水分別溶解，按順序逐步混合，后用蒸餾水定容到1000ml的容量瓶中，即為20倍的大量元素母液。到入細(xì)口瓶，貼好標(biāo)簽保存于冰箱中。Ca2+鹽也可單獨配制； 注意：(1) 配制大量元素母液時，某些無機(jī)成分如Ca2+、Mn2+和SO42、PO43+等在一起可能會產(chǎn)生沉淀。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，注意混合先后順序。把Ca2+、Mn2+和SO42、PO43+等錯開混合，速度宜慢，邊攪拌邊混合。另外要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級較高的分析純；各種化學(xué)試劑必須先以

14、少量重蒸餾水單獨溶解后才能混合； (2)CaCl22H2O要在最后單獨加入；Ca2+鹽也可單獨配制；在溶解CaCl22H2O時，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl22H2O放入沸水中易沸騰，操作時要防止其溢出。、微量元素母液的配制擴(kuò)大100倍，用感量為0.0001g的電光分析天平稱取，配制1升培養(yǎng)基取10ml母液。MS培養(yǎng)基的微量元素?zé)o機(jī)鹽由7種化合物（除Fe ）組成。微量元素用量較少，特別是 CuSO45H2O、 CoCl26H2O （有的在配制中單獨將分微量CuSO45H2O、 CoCl26H2O擴(kuò)大1000倍，再稀釋成100倍）。 注意：使用電子分析天平時注意不

15、要把藥品撒到稱盤上，用完以后，用吸耳球?qū)⑻炱絻?nèi)的臟物清理干凈。3、鐵鹽母液的配制擴(kuò)大100倍，配制培養(yǎng)基時，配制1L取此液10ml。目前常用的鐵鹽是硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，必須單獨配成母液。這種螯合物使用起來方便，又比較穩(wěn)定，不易發(fā)生沉淀。配制方法同上，直接用蒸餾水加熱攪拌溶解。 注意：在配制鐵鹽時，如果加熱攪拌時間過短，會造成Fe S 04和Na2EDTA鰲合不徹底，此時若將其冷藏，F(xiàn)e S 04會結(jié)晶析出。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，配制鐵鹽母液時，F(xiàn)e S 04和Na2EDTA應(yīng)分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色(約加熱20 - 30 min)，調(diào)pH值至5

16、.5，室溫放置冷卻后，再冷藏。4、有機(jī)母液的配制擴(kuò)大100倍，配制培養(yǎng)基時，配制1L取此液10ml。MS培養(yǎng)基的有機(jī)成分有甘氨酸、肌醇、煙酸、鹽酸硫胺素和鹽酸吡哆素。培養(yǎng)基中的有機(jī)成分原則上應(yīng)分別單獨配制。配制直接用蒸餾水溶解，注意稱量時用電子分析天平。注意：由于維生素母液營養(yǎng)豐富，因此貯藏時極易染菌。被菌類污染的維生素母液，有效濃度降低，并且易給后期培養(yǎng)造成傷害，不宜再用。避免此現(xiàn)象發(fā)生的方法是:配制母液時用無菌重蒸餾水溶解維生素，并貯存在棕色無菌瓶中，或縮短貯藏時間。表3 MS培養(yǎng)基母液的配制母液名稱母液I（大量元素）20倍NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4.2H2O

17、 KH2PO4 1000ml母液擴(kuò)大倍數(shù)和用量（mg）165020=33000190020=38000440020=8800037020=740017020=3400配制每升培養(yǎng)基取用量50ml母液II（微量元素）100倍KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.83100=836.2100=62022.3100=22308.6100=8600.25100=250.025100=2.50.025100=2.510ml母液III（鐵鹽 ）100倍FeSO4.7H2O Na2EDTA.2H2O 27.81

18、00=278037.3100=373010ml母液IV（有機(jī)成分）100倍肌醇煙酸鹽酸吡哆醇 鹽酸硫胺素 甘氨酸 100100=100000.5100=500.5100=500.1100=102.010010ml5、 激素母液配制植物組織培養(yǎng)中使用的激素種類及含量需要根據(jù)不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的終濃度以0.5mg/ml為好，需要注意的是：（）配制生長素類，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，應(yīng)先用少量95%乙醇或無水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸餾水定容到一定的濃度。（）細(xì)胞分裂素，例如KT，應(yīng)先用少量95%乙醇或無水乙醇加34滴1mol/L的鹽酸

19、溶解，再用蒸餾水定容。（）配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。注意：所有的母液都應(yīng)保存在04冰箱中，若母液出現(xiàn)沉淀或霉團(tuán)則不能繼續(xù)使用。五、思考題：1、 配制母液時為什么要按順序加入各藥品？溶解CaCl22H2O時，為什么要將蒸餾水加熱？2、 根據(jù)所給母液濃度、蔗糖、瓊脂用量、pH值，按給出的培養(yǎng)基配方計算各種母液吸取量，填入下表。培養(yǎng)基配方：MS+KT1.0+BA2.0+NAA0.2+蔗糖3%+瓊脂0.7%，pH5.8。 實驗二 MS培養(yǎng)基配制與滅菌一、實驗?zāi)康?1.了解培養(yǎng)基的化學(xué)組成及MS培養(yǎng)基的配方組成，掌握MS培養(yǎng)基配制方法；2.掌握滅菌技術(shù)；二、原理1. 培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)中的主

20、要部分，除了培養(yǎng)材料本身因素外，培養(yǎng)基的種類和成分等直接影響培養(yǎng)材料的生長和發(fā)育，應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)材料的種類和培養(yǎng)部位選擇適宜的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的種類很多，不同的培養(yǎng)基有其不同的特點。所培養(yǎng)的植物已有前人作過研究的，可以從文獻(xiàn)中找到可供采用的合適培養(yǎng)條件；若前人從未培養(yǎng)過，就要選擇和建立一個最適于該植物的營養(yǎng)培養(yǎng)基。可采用一種已知培養(yǎng)基如MS、B5或SH，對一些成分進(jìn)行改變，進(jìn)行一系列試驗，找到合適的培養(yǎng)條件。表1 培養(yǎng)基的主要成分無機(jī)成分無機(jī)大量元素氮：銨態(tài)氮、硝態(tài)氮混合；磷：磷酸鹽；鉀： 鉀鹽；鈣、硫、鎂無機(jī)微量元素主要有：鐵、硼、錳、鋅、銅、鉬、鈷、氯有機(jī)成分糖、 維生素、肌醇、氨基酸及有機(jī)附加

21、物。植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)生長素類：NAA、IAA、IBA、2,4-D 細(xì)胞分裂素類：BAP, KT，TDz，ZT其他類： GA3, ABA， PP333水瓊脂pH值表2 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)類別名稱縮寫詞分子量使用濃度范圍母液配制說明生長素2，4二氯苯氧乙酸2，4D221.00.00110mg/L生長素通常用NaOH溶液滴至溶解成溶液。能溶于乙醇IAA易被植物細(xì)胞所氧化。故培養(yǎng)基中很少單獨使用，不能高壓滅菌。萘乙酸NAA186.20.00110mg/L吲哚3乙酸IAA175.20.00110mg/L吲哚3丁酸IBA203.20.00110mg/L細(xì)胞分裂6芐基氨基嘌呤BA225.2分裂素通常能溶于稀N

22、aOH，含水乙醇或稀鹽酸玉米素不耐熱，不能高壓滅菌。6糠基氨基嘌呤KT215.2N異戊烯氨基嘌呤（玉米素）ZT219.2赤霉素赤霉素GA3346.4能溶于乙醇不耐熱不能高壓滅菌在愈傷組織和懸浮培養(yǎng)物的啟動和保持生長時才需要有時小植株再生時也需要三、主要器材1培養(yǎng)基藥品：MS基本培養(yǎng)基各種成分，蒸餾水，生長素和細(xì)胞分裂素，1MNAOH，1MHCL，0.1 mg/ml的2,4-D溶液：稱取10 mg的 2,4-D，加入少量95%的酒精和1 N的NaOH溶解，再加蒸餾水定容至100ml。用同樣的方法配制NAA母液。稱取 50 mg 6-BA, 加少量的1 mol/L HCl，使其充分溶解，然后加水至

23、50 ml (濃度為1 mg/ml)。2儀器：量筒，燒杯，玻棒， 試管、三角燒瓶（錐形瓶）、圓形高形培養(yǎng)瓶（罐頭瓶）、培養(yǎng)皿、量筒、容量瓶、吸管；PH試紙，高壓滅菌鍋，100 ml三角燒瓶、250 ml三角瓶、試劑瓶、解剖刀柄與刀片、單面刀片、剪刀、長鑷子、培養(yǎng)皿、移液管、漏斗、量筒、燒杯（50、100、500、1000 m1），酒精燈、火柴、玻璃棒、吸耳球、封口薄膜、牛皮紙、線繩、牛皮筋、脫脂棉、濾紙、pH試紙（5.4-7.0）、標(biāo)簽紙、稱量紙、藥勺等。四、步驟1器皿清洗：準(zhǔn)備好三角瓶、罐頭瓶；量筒、燒杯、容量瓶、吸管、不銹鋼鍋等；對于新購置的玻璃器皿的洗滌，因有游離堿性物質(zhì)，使用前先用1%

24、稀鹽酸浸泡一夜，然后用肥皂水洗凈，清水沖洗，最后用蒸餾水沖洗一次，干后備用。已用過玻璃器皿，先將殘渣除去；用清水洗凈，再用熱肥皂水或洗衣粉洗凈，清水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗一次，干后備用。2、培養(yǎng)基母液的配制（具體配方見表2）按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱取，進(jìn)行配制。（1）大量元素配制成20倍的母液：（2）微量元素配制成100倍的母液：（3）鐵鹽單獨配制成100倍的母液：其配法為2.78g 的硫酸亞鐵（Fe SO4.7H2O）和3.73g乙二胺四乙酸二鈉（Na2-EDTA）溶于1L水中，用時每配1L培養(yǎng)基，取該溶液10ml。（4）有機(jī)成分配制成100倍的母液母液配制好后放在4 冰箱中保存，特別是有機(jī)

25、類物質(zhì)，貯存時間不宜過長，無機(jī)鹽母液最好在一個月內(nèi)用完，如發(fā)現(xiàn)有霉菌和沉淀產(chǎn)生，就不能再使用。3 MS培養(yǎng)基的配制（1升培養(yǎng)基）（1）瓊脂: 稱取5-7g瓊脂，加入300ml蒸餾水，在電爐上加熱，直至完全溶解為止。（2）蔗糖3%用質(zhì)量較好的白糖代替，稱取30g白糖，溶于溶有瓊脂的300ml蒸餾水中。（3）按比例吸取各種母液用筒量取大量元素母液（I）50ml；分別用10ml移液管或吸管吸取微量元素母液（II），鐵鹽（III）母液各10ml；用10ml移液管或吸管吸取有機(jī)物母液（IV）10ml；用移液管吸?。ㄒ谰唧w情況）加入適宜的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)6-BA、2，4-D、NAA、IAA等（有的生長調(diào)節(jié)

26、物質(zhì)需滅菌后再通過過濾滅菌加入，如IAA）；將上述溶液全部混合于瓊脂與蔗糖溶液中，熔化混合均勻后，然后加水至1000ml。（4）調(diào)節(jié)pH值pH值對培養(yǎng)基的凝固情況和植物材料的生長有很大的影響，因此，等培養(yǎng)基配好后，應(yīng)該立即調(diào)整培養(yǎng)基的pH,最好用酸度計，既快又準(zhǔn)。也可用精密PH試紙（干燥保存），過酸用1NNaOH調(diào)節(jié)，過堿用1NHCl調(diào)節(jié)，經(jīng)高壓滅菌后，由于某些成分的分解（如蔗糖分解）或氧化，酸度會增加，PH一般可降低（0.2），培養(yǎng)基PH一般調(diào)至5.65.8的范圍。 （5）培養(yǎng)基配好后應(yīng)該立即分裝，體積一般為容器的 1/4 或者1/5為好。 將配制好的培養(yǎng)基分裝于三角瓶或罐頭瓶中，注意不要讓

27、培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上，蓋上封口膜，并用牛皮紙包扎。（6）用具清理和洗滌各種母液按原位置擺整齊，用過的量筒，移液管、燒杯、鋁鍋等用水洗滌干凈，然后按次序放回原處。4 MS培養(yǎng)基的滅菌滅菌高壓鍋有大型臥式、中型立式、小型手提式等多種型號和規(guī)格，無論哪種型號，操作的步驟都很相近。具體操作步驟：（1）高壓鍋加水至平把架（自動滅菌鍋的綠指示燈亮）；（2）把包扎好的培養(yǎng)基裝入高壓鍋;（3）蓋上熱壓鍋蓋，上緊螺帽(注意對角擰緊螺帽)關(guān)上氣閥和安全閥.（4）把熱壓鍋放在3000W電爐座上,然后接通電源（自動滅菌鍋只要打開電源）.（5）壓力計升至0.5Kg時，打開放氣閥，排除冷空氣(此步很重要)反復(fù)兩次至完全

28、把冷空氣排除（觀察放氣閥的氣體，若冒出的熱氣較急沖就可以了）。（6）排除冷空氣后，關(guān)閉放氣閥，待壓力升到1Kg位置時，開始計算滅菌時間，一般在1Kg壓力(121)下滅菌2025分鐘即可，但要注意保持穩(wěn)定壓力。（7）滅菌時間達(dá)到20分鐘后，除去電源，待壓力降至0時，打開放氣閥，開蓋，取出滅菌物品。（在壓力未完全下降前，切勿打開鍋蓋）。 經(jīng)過滅菌的營養(yǎng)培養(yǎng)基不宜放置太長，應(yīng)盡早使用，但為了在使用前能檢查培養(yǎng)基有無微生物污染，可將培養(yǎng)基置于25下保存4天，如果培養(yǎng)基需要貯存較長時間，可在4低溫下保存。五、注意事項1.在加熱瓊脂、制備培養(yǎng)基的過程中，操作者千萬不能離開，否則沸騰的瓊脂外溢，就需要重新稱

29、量、制備。2.配制培養(yǎng)基時，一定要注意調(diào)節(jié)pH。3.滅菌時一定要將鍋內(nèi)的冷空氣已由排氣孔排盡。六、實驗報告1. 檢查培養(yǎng)基母液配制、MS培養(yǎng)基的配制及滅菌情況。2. 培養(yǎng)基的成分主要有那幾類？實驗四 培養(yǎng)材料外植體選擇、消毒滅菌和接種一、實驗?zāi)康?.熟悉不同外植體取材、沖洗等預(yù)處理方法；2.外植體表面消毒滅菌技術(shù)；3.掌握在超靜工作臺進(jìn)行外植體剝離切割方法、無菌接種方法。4.學(xué)習(xí)胡蘿卜離體根和酢漿草培養(yǎng)的基本方法二、實驗原理植物組織培養(yǎng)的成功首先在于初代培養(yǎng)，即能否建全起于無菌外植體。要建立初代培養(yǎng)，首先，一定要選擇好合適的植物種類，品種及外植體類型，組織培養(yǎng)已經(jīng)獲得成功的植物，幾乎包括植物的

30、各個部位（如莖尖、根、莖、胚、花藥、葉等等）。第二，外植體材料消毒滅菌重要，注意選擇滅菌劑類型和滅菌時間。第三，選擇好合適的培養(yǎng)基激素及其他添加物，并注意掌握適宜的培養(yǎng)條件，如光照、溫度、濕度。同時，操作技術(shù)亦十分重要，無菌操作快，動作熟練，縮短可能污染的時間。三、器材1材料外植體胡蘿卜酢漿草酢漿草2試劑次氯酸鈉消毒液、0.1%升汞溶液、70%酒精、95%酒精、無菌雙蒸水；3儀器及用具盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(已滅菌)、滅過菌的空三角瓶；超凈工作臺、橡皮筋、酒精燈、火柴、酒精、棉花球。接種器械（接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針、記號筆等）四、步驟1.實驗前準(zhǔn)備接種室的清潔和消毒，接種前半小時，可用75

31、%酒精或新潔爾滅噴灑，地板用濕拖把拖刷。超凈工作臺在接種前用95%酒精揩抹工作臺面和有關(guān)用具，并先開機(jī)鼓風(fēng)15-20分鐘后才能使用。無菌操作注意：在緩沖室內(nèi)改穿經(jīng)過滅菌的白色工作服及拖鞋，戴上白布帽和口罩，才能進(jìn)入無菌室。進(jìn)入無菌室前工作人員雙手須用肥皂洗凈，進(jìn)行操作前用75%酒精擦抹雙手。2.外植體的選擇、預(yù)處理先選擇好外植體類型，如莖、葉、芽、根等進(jìn)行預(yù)處理。對于莖尖、莖段及葉片等因暴露于空氣中，有較多的茸毛、油脂和刺等，首先用自來水較長時間沖洗，特別多年生木本材料更注意，有的可用肥皂、洗衣粉或吐溫等進(jìn)行洗滌。果實及種子可先用自來水沖洗1020分鐘再消毒。用于培養(yǎng)的花藥，實際上多未成熟，外

32、有花萼，花瓣或穎片保護(hù)，處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。根及地下部分器官的消毒，這類材料生長于土中，消毒較為困難，先用自來水洗滌，用軟毛刷刷洗、用刀切去損傷及污染嚴(yán)重部位。3.外植體的滅菌：在超凈工作臺上進(jìn)行4.外植體的接種將消毒滅菌后的外植體分離放在培養(yǎng)基上進(jìn)行接種。接種時的注意事項：第一，每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精溶液中消毒1次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種。注意，沾有酒精的鑷子要等到酒精揮發(fā)完后，再放到酒精燈火焰上灼燒。第二，外植體放入培養(yǎng)基時，必須放平。每瓶放置外植體的數(shù)量，應(yīng)該根據(jù)錐形瓶的大小來確定，一般放置胡蘿卜34塊。注意外植體

33、也不要放得太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。第三，接種用的酒精燈，火焰不要調(diào)得太高，接種時應(yīng)靠近酒精燈火焰操作，接種的速度要快。5.接種后進(jìn)行不斷觀察記錄。接種過的外植體置于培養(yǎng)室合適條件下培養(yǎng)，定時進(jìn)行觀察記錄現(xiàn)象。具體培養(yǎng)材料的滅菌與接種如下：（一）胡蘿卜組織培養(yǎng)1.先將胡蘿卜根沖洗干凈去皮，去兩頭留中段，并切成小段，橫切成大約10mm厚的切片。以下步驟全部在無菌條件下進(jìn)行。取兩個50ml的滅菌小燒杯或三角瓶,分別倒入25ml的70%的酒精和0.2%的升汞。2.然后將胡蘿卜根于70酒精中浸泡數(shù)秒鐘。 3.浸于0.1氯化汞（升汞）液中消毒滅菌10 min后,再用無菌水沖洗34次。4.將滅菌

34、材料放在滅菌的濾紙上,吸干水分。5.用解剖刀將胡蘿卜切去表皮和中柱，取皮層，切成0.5cm見方的小塊（或用打孔器），用鑷子切好的外植體,迅速接種于錐形瓶的培養(yǎng)基中（MS+2.0mg/L 2，4-D培養(yǎng)基內(nèi)）,于25，黑暗或漫射光下培養(yǎng),1421天后繼代一次。（二）酢漿草培養(yǎng)（二）紫葉酢漿草的組織培養(yǎng)1.從無病的紫葉酢漿草取葉片，用自來水沖洗干凈；2. 在超凈工作臺上，用95%乙醇浸泡數(shù)十秒，再放入氯化汞（升汞）液中消毒滅菌10 min后，用無菌水沖洗3-5次；3.在無菌條件下，把切成一個長約0.5cm*0.5的片段接種分放在化培養(yǎng)基MS+6-BA1.0 mg/L +0.2NAA mg/L培養(yǎng)基

35、上培養(yǎng)，放入培養(yǎng)室內(nèi)。4.培養(yǎng)的溫度控制在2225,光照強(qiáng)度為2000lx左右,光照時間為12h/d；五、注意事項1.外植體不能太小，否則會影響愈傷組織的形成。2.表面消毒滅菌注意時間3.操作時，注意：（1）若是試管，應(yīng)在酒精燈火焰上封口，接種迅速避免燒傷材料，若是培養(yǎng)瓶，擰開蓋子，迅速將材料放入。（2）每接一瓶，用具都應(yīng)用95%酒精棉球擦并在火焰上燒灼，避免交叉污染。（3）操作結(jié)束，整理，清潔干凈用具。六、實驗報告1外植體經(jīng)過培養(yǎng)后，觀察2周內(nèi)長出的愈傷組織，記錄愈傷組織顏色、形狀、疏松度、量多少等情況。日期第一天第三天第五天第七天第九天第十四天.胡蘿卜愈傷組織生長情況（顏色、形狀、疏松度、

36、量多少）染菌情況成活率2.植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)是什么？實驗五 外植體無菌培養(yǎng)和愈傷組織誘導(dǎo)、增殖一、實驗?zāi)康睦斫庥鷤M織的誘導(dǎo)與分化及培養(yǎng)基中各種成分的作用機(jī)理；掌握愈傷組織繼代、增殖方法；二、實驗原理愈傷組織的培養(yǎng)，一般來說，從接種外植體到出現(xiàn)愈傷組織，需要經(jīng)過2周時間。2周之內(nèi)就可以看到外植體上逐漸長出乳白色或黃白色的瘤狀愈傷組織。它們?nèi)粼谠囵B(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，由于培養(yǎng)基中營養(yǎng)不足或有毒代謝物的積累會導(dǎo)致愈傷組織塊停止生長，直至老化變黑死亡，因此，若是要求愈傷組織繼續(xù)生長增殖，必須定期地（如2-4周）將它們分成小塊或進(jìn)行分株、分割、剪截（剪成單芽莖段）并轉(zhuǎn)接于新鮮培養(yǎng)基上（培養(yǎng)基配方同原培

37、養(yǎng)基）繼代培養(yǎng)，愈傷組織仍可保持旺盛生長。 通過外植體進(jìn)行初代培養(yǎng)，能否不斷增殖并進(jìn)行繼代，既是植物組織培養(yǎng)能否成功實際應(yīng)用的關(guān)鍵，又是植物離體快速繁殖中第二個階段的目的，也是最為重要的一個問題。大多數(shù)繼代培養(yǎng)基與原誘導(dǎo)培養(yǎng)基相同（如：甘蔗、香蕉）但也有認(rèn)為改變培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件來保持繼代培養(yǎng)，有的加活性炭，有的從MS培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入降低氨態(tài)N和鈣，增加硝態(tài)N、Mg、P的培養(yǎng)基中，有的認(rèn)為在繼代培養(yǎng)基中用KT優(yōu)于2IP，認(rèn)為可使用較弱的細(xì)胞分裂素。三、器材1.盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(已滅菌)、超凈工作臺、培養(yǎng)室、橡皮筋、酒精燈、火柴、酒精、棉花球。接種器械（接種鑷子、剪刀、接種針、記號筆等）四、步驟接種在

38、培養(yǎng)基上一周后便逐漸形成愈傷組織，為保持愈傷組織的旺盛生長，一般約34周將愈傷組織分成小塊或進(jìn)行分株、分割、剪截（剪成單芽莖段）進(jìn)行繼代培養(yǎng)。1.先配制好繼代培養(yǎng)基并滅菌。2. 在無菌條件下，用無菌的鑷子（或接種針）從培養(yǎng)瓶中取出愈傷組織，將它們放在無菌的培養(yǎng)皿中。3. 用無菌解剖刀把每塊愈傷組織分割成若干小塊（一般不小于5mm5mm）并把已壞死的區(qū)域棄去。4. 用無菌鑷子將小塊愈傷組織放入新鮮的培養(yǎng)基上，每瓶（或管培養(yǎng)基可以放35塊，蓋上蓋子）（或塞上塞子）后置于培養(yǎng)室中繼代培養(yǎng)。五、注意事項1.注意培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的玻璃化、污染等現(xiàn)象，進(jìn)行及時處理。六、實驗報告1.記錄觀察培養(yǎng)中污染現(xiàn)象，分

39、化情況，無菌苗是否正常分化？實驗六 分化成苗、生根和馴化移栽一 實驗?zāi)康?.了解和掌握試管苗生根方法2. 熟悉組培苗馴化、移栽技術(shù)。二原理從外植體形成器官或細(xì)胞無性系的形態(tài)發(fā)生，有兩種方法，一種是不定芽方式，指細(xì)胞或愈傷組織培養(yǎng)物，通過形成不定芽再生成植株這是細(xì)胞和組織培養(yǎng)中常見的器官發(fā)生方式，有三個不同生長階段第一階段，細(xì)胞和離休外植體脫分化形成愈傷組織；第二階段，愈傷組織中形成一些分生細(xì)胞，繼而形成植株結(jié)構(gòu)；第三階段是器官原基的形成。器官原基是由一個或一小團(tuán)分生細(xì)胞分裂而形成的，這些分生組織塊只有在一定條件下，逐漸能見到構(gòu)成器官的縱軸上表現(xiàn)出單向極性，從而分化出芽和根，另一種是胚狀體方式，

40、指由培養(yǎng)細(xì)胞或組織誘導(dǎo)分化出具胚芽和胚根的胚狀體結(jié)構(gòu)（胚狀體）進(jìn)而發(fā)育成完整植株。三 器材器具用品：鑷子；水盆；蛭石和珍珠巖；育苗盤；噴霧器；竹簽等；四 步驟1.生根培養(yǎng)配制及滅菌先配制好生根培養(yǎng)基，一般1/2MS+IBA+活性炭0.5%+糖3%+瓊脂0.5-0.6%(PH5.8-6.0)。2、轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基：當(dāng)無菌苗芽增殖到預(yù)定數(shù)量后，在無菌條件下操作將叢生狀無根芽（苗）單個切開，移到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，溫度282，適當(dāng)加強(qiáng)光照和延長時間，每天光照16小時，強(qiáng)度：1000LX3.練苗：將生根的組培苗從培養(yǎng)室取出，放在自然條件下12天（在溫室內(nèi)進(jìn)行），然后打開瓶口，再放置12天。并準(zhǔn)備好移栽基

41、質(zhì)。4.試管苗脫瓶：用鑷子將甘蔗苗試管苗輕輕取出，放入清水盆中，小心洗去根部瓊脂，然后澇出，放入干凈的小盆中。5.移栽：用竹簽在基質(zhì)上打孔，將小苗栽入育苗穴盤中，輕輕覆蓋、壓實。待整個穴盤栽滿后用噴霧器噴水澆平。最后將育苗盤擺入到馴化室中，正常管理。五 注意事項六 實驗報告1.觀察記錄無菌苗生根和生長情況。2.記錄試管苗移栽馴化步驟，統(tǒng)計移栽成活率附 康乃馨的離體快繁儀器設(shè)備和試劑超凈工作臺、帶有吸水紙的成套的培養(yǎng)皿，無菌水培養(yǎng)基 N6+1 mg/L 6-BA剪刀、槍型鑷子量筒、酒精燈、濾紙、蒸餾水、小刷子95%乙醇、70%酒精、70%酒精棉球、0.2%升汞、甲醛、高錳酸鉀、來蘇爾紗布、棉塞、

42、牛皮紙、才培純、肥皂、酒精噴壺植物的嫩莖、側(cè)芽、莖尖、葉片、花、愈傷組織上的不定芽、胚狀體、試管苗等二、實驗材料 康乃馨枝條三、方法和步驟1 外植體滅菌 取從市場上購買的康乃馨枝條，去掉大的葉片，剪取帶腋芽的節(jié)結(jié)，用肥皂（洗潔精）清洗表面，再用自來水沖洗 30-60分鐘，然后在無菌室（超凈工作臺）內(nèi)用70%酒精浸沒20-40秒鐘（根據(jù)材料的木質(zhì)化程度掌握具體的浸沒時間。用0.2% 的升汞溶液浸泡10-15分鐘，再用無菌水沖洗3-4次，放入已滅菌的培養(yǎng)皿中的濾紙上待用。2 接種 先進(jìn)行無菌室內(nèi)消毒，用紫外燈照射30-45分鐘，地面用低濃度的來蘇爾溶液消毒，紫外燈關(guān)閉約20分鐘后方可進(jìn)去工作。超凈

43、工作臺消毒 開啟無菌風(fēng)開關(guān)，讓無菌風(fēng)吹上30-45分鐘后方可工作。并用70% 的酒精棉球擦凈工作臺。接種時先點燃酒精燈，鑷子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精燈上灼燒好冷卻后的鑷子、剪刀取出一個側(cè)芽或小段莖，迅速打開三角瓶口，將材料才插入瓶內(nèi)，注意材料上下端的極性，不能倒插。在酒精燈邊塞回錫箔紙，用記號筆在瓶體上寫明日期和材料。3 培養(yǎng)條件： 25光照13小時/天 光強(qiáng)1000 Lux4 繼代培養(yǎng)（見下一個實驗）5 誘導(dǎo)生根：用低濃度的吲哚乙酸或者萘乙酸或無激素的N6培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根6 試管苗移栽參見有關(guān)其它實驗 月季組織培養(yǎng) 一、實驗?zāi)康呐c意義掌握利用莖段作為外植體進(jìn)行無性繁殖的方法

44、月季屬薔薇科，在觀賞植物中占有重要地位。根據(jù)其栽培技術(shù)的要求，以往的傳統(tǒng)方法，多采用野薔薇種子播種，在2-3年生的實生苗上嫁接，此法不僅繁殖系數(shù)小，且成本較高，生長緩慢，而組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用，使得月季育苗發(fā)展迅速。二、實驗器材超凈工作臺、鑷子、酒精燈、棉球、三角瓶、培養(yǎng)皿、解剖刀。三、實驗藥品MS培養(yǎng)基各種母液，6-BA、NAA、IAA、蔗糖、瓊脂、酒精、升汞。四、實驗步驟1、培養(yǎng)基的配制增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA1.5+NAA0.1+蔗糖3%+瓊脂0.7%生根培養(yǎng)基：1/2MS+IBA0.5+蔗糖3%+瓊脂0.6%2、外植體的獲得選用嫩莖為材料，取帶芽的莖段，一般以頂端以下第3-10節(jié)上的芽

45、為好，采回枝條剪去葉柄，再剝?nèi)ジ皆谇o上的皮刺，先用自來水沖洗枝條表面的塵土，然后把枝條段截成2-3cm小段，每段帶1-2個側(cè)芽，用70%酒精滅菌20s，再用0.1%氯化汞溶液浸泡10min，再用無菌水沖洗4-5次。3、接種將滅好菌的材料在無菌培養(yǎng)皿中切成0.5cm的小段，接種到滅好菌的培養(yǎng)基上。4、培養(yǎng)培養(yǎng)溫度24-26，光照時間8-10h，光照強(qiáng)度12001x。5、分芽繼代將叢生芽分割繼代。6、生根培養(yǎng)選取苗長2cm以上的壯苗作為生根材料，接種到生根培養(yǎng)基上，一般在接種后一周開始觀察，約10d后發(fā)現(xiàn)有少量苗生根，20d后即可移栽。7、移栽 .將培養(yǎng)有試管苗的三角燒瓶打開，在溫室中煉苗2d，然

46、后取出洗去根部瓊脂，移至盛有珍珠巖與細(xì)沙(1: 1)的花缽中，每天澆營養(yǎng)液，移栽成活率可達(dá)80%以上。五、思考題查閱相關(guān)文獻(xiàn)，設(shè)計篩選月季芽增殖體系建立的最佳激素組合。第二部分 動、植物標(biāo)本制作技術(shù)植物分類學(xué)對近50萬種植物進(jìn)行分門別類，按照界、門、綱、目、科、屬、種逐級歸類，最后要確定到物種，而蠟葉標(biāo)本就是物種的具體佐證或模式。世界各國政府都十分重視植物標(biāo)本館的建設(shè)。我國在北京、南京、昆明、廣州和咸陽等地都建有大型植物標(biāo)本館，收藏標(biāo)本都在百萬份以上。各個高校一般都建設(shè)有中小型標(biāo)本室。這些大量的蠟葉標(biāo)本是科學(xué)研究和教學(xué)的寶貴資料，標(biāo)本的時間越久，越有研究價值。動物標(biāo)本制作實驗環(huán)節(jié)的教學(xué)有助于學(xué)

47、生理解基本理論、基本知識和基本概念。使學(xué)生更好地熟知動物各主要類群的特征，代表動物的形態(tài)、構(gòu)造和解剖方法等，并能通過親手制作動物標(biāo)本加深對課堂所學(xué)的各種動物的解剖學(xué)知識，掌握各代表動物的組織和器官等基本外部形態(tài)及內(nèi)部構(gòu)造，掌握動物標(biāo)本制作的基本技能。實驗六 動物剝制標(biāo)本的制作一、實驗?zāi)康?.使學(xué)生理解動植物制片技術(shù)的基本原理，通過實驗掌握制片技術(shù)的基本操作方法2.學(xué)會鴿的剝制標(biāo)本制作，掌握鴿的剝制標(biāo)本制作的基本原理和方法。二實驗原理三、器材1.器具 冰箱、電鉆、手鋸、各種動物解剖工具、標(biāo)本瓶、鐵籠等。2.藥品 三氧化二砷（As2O3）也稱砒霜、硫酸鋁鉀K2SO4Al2（SO4）324H2O也稱

48、明礬、樟腦、硼酸、苯酚；四、步驟1.剝制前的準(zhǔn)備在剝制前如果是活的，需處死；如果是死的需對軀體做如下檢查：羽毛是否完整，軀體是否腐敗。軀體是否腐敗的檢查是非常重要的。先用濕棉球或毛筆蘸水抹洗污物，撒些干石膏粉吸收水，待干燥后去掉石膏粉，整理好羽毛，便可進(jìn)行剝制。2.剝制（胸剝法）1）剝胸皮和剪頸部將鳥置于桌上，胸部向上，頭部向左。分開胸部的羽毛，露出裸毛區(qū)，由胸龍骨前部的凹陷處開口，沿皮膚直剖至胸龍骨中央。開口長度應(yīng)比鳥的胸寬稍大。初學(xué)者開口可適當(dāng)加大一些，但不宜過大，過大在后期縫合整形時不好處理。開口的前端應(yīng)露出頸部，然后用解剖刀沿鳥胸部的皮膚和肌肉之間剝離，直剝至胸部兩側(cè)的腋下。用手握住鳥

49、的頭部，使鳥的頸部向腹面彎曲，再用剪刀在靠近胸部處將鳥的頸部及食管、氣管一起剪斷。這時應(yīng)注意：要把頸部與皮膚完全分開后再剪，勿將頸部皮膚剪破。如有血污要及時撒上石膏粉，不要使血污污染皮膚。最好不要把嗉囊弄破，如不小心將嗉囊弄破時，就要及時將鳥體拿起，將嗉囊中的食物剝出，勿使食物污染羽毛。2）剝背皮和剪兩翅將鳥體翻轉(zhuǎn)，使背部向上，然后把頭部和頸部翻向背上，沿皮膚將鳥的背部剝離，露出兩肩。繼續(xù)剝離兩翅的肱骨處。將肱骨上的肌肉去掉，并在肩關(guān)節(jié)處將肱骨與鳥體分離。3）剝腹皮和剪兩腿繼續(xù)向背部剝離，直至腰部。在剝腰部時要背腹面同時進(jìn)行，當(dāng)兩腿顯露時，要將皮膚一直剝至跗蹠骨之間的關(guān)節(jié)處，去掉脛骨上的肌肉，

50、并在脛骨上端關(guān)節(jié)處剪開，使脛骨與鳥體分離。4）切生殖腔和剪尾椎向尾部剝離時，剝至泄殖孔時要用刀把直腸基部剪斷；剝至尾部時要將尾脂與皮膚完全分離，并用剪刀在尾綜骨末端剪斷。剪斷后內(nèi)側(cè)皮膚呈“V”字形，注意不要把尾羽的羽軸根剪斷，以防止尾羽脫落。這時軀體肌肉與皮膚已完全分離。5）剝翼皮隨后進(jìn)行翼部皮膚的剝離，先將肱骨拉出直剝至尺骨。在剝尺骨時，因翼部飛羽軸根牢固的生在尺骨上，要用手指緊貼羽軸根將翼部皮膚與尺骨完全分離，一直剝至腕骨，然后將尺骨橈骨上的肌肉全部清除干凈。6）翻頭部和去腦髓先拉頸部，使頸部的皮膚向頭部翻過，逐漸剝離露出枕骨。這時在枕骨兩側(cè)會出現(xiàn)呈灰褐色的耳道，用解剖刀緊靠耳道基部將其割

51、斷，或用尖頭鑷子沿耳道基部將其拉出。再向前剝?nèi)ィ瑑蓚?cè)會出現(xiàn)暗黑部分，這就是鳥的眼球，用解剖刀把眼瞼邊緣薄膜割開，用鑷子將眼球取出（注意不要割破眼球和眼瞼），同時觀察虹膜顏色以備安裝義眼時按此著色。在枕孔周圍，用剪刀將枕孔擴(kuò)大，并剪下頸部。同時沿下頜骨兩內(nèi)側(cè)剪開肌肉，拉出鳥舌，將頭部肌肉剔除干凈。用鑷子從擴(kuò)大的枕孔中伸進(jìn)顱腔；夾住腦膜把腦取出。這樣，整個剝離過程就完成了。3.涂防腐劑鳥類軀體經(jīng)剝皮后，其皮膚內(nèi)側(cè)必須馬上進(jìn)行防腐處理。在防腐處理過程中，逐漸將把有羽毛的一側(cè)翻回到體表，恢復(fù)原形。防腐及復(fù)原步驟如下：首先在眼窩、腦顱腔、下頜部分涂上三氧化二砷防腐膏（砒霜膏），用兩團(tuán)如同眼球一樣大小的棉

52、球填入眼眶，并在適當(dāng)?shù)奈恢蒙涎b好義眼，再在頸部皮膚內(nèi)側(cè)用毛筆刷上防腐膏，逐步把頭部翻轉(zhuǎn)過來（注意不要強(qiáng)拉，以免頸項部羽毛脫落）。其次，在兩腳脛骨上涂上防腐膏，并在脛骨上纏上棉花，上大下小。和原來小腿上的肌肉一樣；同時在小腿內(nèi)側(cè)、尾部、兩翅內(nèi)側(cè)等部位全部涂遍防腐膏后，即可將其皮膚完全翻回原樣。4.填裝1）支架制作及安裝 填充前，應(yīng)先在鳥體內(nèi)安裝支架以便支撐鳥體。支架用鉛絲制作，鉛絲的粗細(xì)視鳥體大小而定。取兩段鉛絲，一段為鳥喙到趾端長度的1.3倍（以鳥體仰臥伸直時為準(zhǔn)），另一段較前者長36厘米，按下圖順序絞合，彎制成支架（絞合處要絞緊）。絞合時1、3，要對齊，短者4到絞合處的長短以鳥喙到鳥原龍骨前

53、端長為準(zhǔn)。aa為鳥胸寬的1/2，ab和 ab為鳥胸高的 2/3。支架制成后將四個端點用鉗子鈄剪一下形成一個銳尖，并在04上纏上棉花，粗細(xì)比原頸部略小。將1、3兩端分別從兩腳脛骨與跗蹠骨關(guān)節(jié)間的后側(cè)，向腳跟方向插入，由腳掌部穿出，同時將2端插入尾部，由尾部腹面中央穿出，以支撐尾羽。盡量將1、2、3端鉛絲向后移，使4端穿入頸部，由腦顱腔插入鳥上喙尖部，并使4端向鳥腹部彎曲一點，這樣鳥頭部就不會搖動。最后調(diào)整鉛絲支架的位置，使鳥體符合原剝制前的長度，鉛絲絞合的中心點（即原來的0點）位于原鳥體龍骨前端位置。2）填充 將已安裝好支架的鳥皮仰放于桌上，首先在支架下面（支架與背部皮膚之間）填充填充物（棉花、

54、竹絲等），順次為尾、腰、背。在背部填充時一定要保持填充物的平整，填充厚度約為胸高（活體時）的1/3左右，這樣才能使制成的鳥體標(biāo)本不致背部凹凸不平和有鉛絲支架的痕跡。填充背部時還要注意靠近頸部的填充，填少會出現(xiàn)凹陷，填多會凸起，都會影響標(biāo)本的美觀。在頸部要用一長條棉花，用鑷子直送到鳥的下頜處，其一使鳥的頸項呈橢圓形，其二是用來補充下頜處舌和肌肉的空缺，頸的兩側(cè)也要適當(dāng)充填一些填充物，以代替氣管等。填好背部及頸項后，將鳥的肱骨拉出，放于支架上方（靠近鳥腹面），肱骨近似和支架中軸平行，放好后可將鳥體翻轉(zhuǎn)過來，觀察一下雙翅位置是否合適，及背部填充是否平坦等。然后將鳥體腹面向上放好，在肱骨上方壓上重物，

55、不使翅移動，并將鳥雙腿稍稍向上翹起，再根據(jù)鳥活體時情形繼續(xù)填充腹部與尾部。填充時要比原鳥活體時多填一些，以備鳥皮膚干燥后收縮。同時要注意在鳥小腿兩側(cè)要填一些填充物，以使鳥體兩側(cè)豐滿。填充的總體原則是要使標(biāo)本符合原來鳥的生態(tài)，所以在做鳥標(biāo)本前最好要多觀察，對鳥的各部分位置，如頸長、身長、翼長、翅尾之間長度等要先量好，并做記錄，以做參考。填充后要將鳥體的開口縫合，填充工作就完成了。5.整形五、實驗報告實驗七 動物骨骼標(biāo)本的制作一、實驗?zāi)康膶W(xué)會蛙的骨骼標(biāo)本制作，掌握蛙的骨骼標(biāo)本制作的基本原理和方法。 二、實驗原理骨骼是指支持動物和人的體形，保護(hù)內(nèi)部器官，供肌肉附著，作為肌肉運動杠桿的支架。骨骼標(biāo)本是

56、供研究骨骼系統(tǒng)用的。一般將骨骼經(jīng)過剔肉、脫脂、漂白，并按照動物的自然狀態(tài)、位置串連安裝成整體的骨骼標(biāo)本。三、器材1儀器 解剖刀、剪刀、鑷子、鋼絲鉗、鉆子、漂骨骼缸（小型動物的骨骼可用標(biāo)本瓶或廣口瓶替代）、尼龍線、骨骼玻璃盒。2.藥品氫氧化鈉、過氧化氫（雙氧水）或漂白粉、汽油、乳膠四、步驟制做骨骼標(biāo)本前，應(yīng)先熟悉此種動物的骨骼位置和形態(tài)，以免在制做時造成不必要的損失。此處，我們以家蛙為例介紹制做方法，制作過程主要有處死動物、剔除肌肉和內(nèi)臟、腐蝕、脫脂、漂白、整形等。1.處死選擇個體較大、發(fā)育成熟的青蛙，將其放在標(biāo)本瓶或廣口瓶，用乙醚或氯仿麻醉致死。2.剝皮剔肉將麻醉致死的青蛙或蟾蜍，將其腹面向上

57、置于解剖盤中，從腹部剪開皮，由后向前剪開，然后將皮膚向兩側(cè)剝離。剝完皮后，剪開腹腔，小心取出心臟。3.腐蝕將剔除肌肉的骨骼用青水沖洗干凈，浸入0.40.8的氫氧化鉀或氫氧化鈉溶液中，調(diào)換三次浸液，浸泡約1-3天，殘留肌肉在堿液的作用下，膨脹成半透明狀態(tài)。每次調(diào)換新液時必須倒掉殘液，并剔除附在骨骼上的透明碎肉。最后取出骨骼，用清水沖洗，并剔去還未除凈的細(xì)腐肉。倒掉殘液，用清水將盛器沖洗干凈。4.脫脂氫氧化鉀或氫氧化鈉溶液在腐蝕肌肉的同時，也具有一定的脫脂作用，但為了徹底清除脂肪，還要進(jìn)行脫脂。將經(jīng)過腐蝕處理的骨骼涼干，置于瓶中，慢慢加入汽油或二甲苯，蓋好瓶口，浸泡約3-5天，達(dá)到脫脂的目的。5.

58、漂白將脫脂的骨骼浸入4過氧化氫中漂2-4天。等骨骼潔白時就可取出，清水沖洗干凈。6.整形將處理過的骨骼放在一塊一塊塑料板或木板作為墊板，將桑皮紙剪成闊11.5厘米的長條，數(shù)量多少按所制骨骼而定，邊上涂漿糊，以螺紋形卷在16和18號鉛絲上（16號鉛絲穿入脊柱椎管骨內(nèi)，長度從頭骨鼻部開始一直到尾部上，18號鉛絲穿入前后肢內(nèi)），用搓板將鉛絲和桑皮紙壓在臺板上搓卷。等搓筋干后再在筋外涂一層白漆，就成為串裝骨骼用的搓筋。將串接好的各部分骨骼按次序置入底板上，用尼龍線和螺絲釘固定、連接，然后插入玻璃盒中。五、注意事項1.注意骨骼浸泡天數(shù)。六、實驗報告實驗八 植物蠟葉標(biāo)本的制作一、實驗?zāi)康?.掌握種子植物蠟

59、葉標(biāo)本制作的基本步驟；2.熟悉種子植物材料采集的一般方法。二、實驗原理蠟葉標(biāo)本是經(jīng)過采集、加工和消毒處理，能夠長期保存的植株片段或整體。標(biāo)本的制作要符合規(guī)范，記錄完全，成為合用標(biāo)本。它可以作為教學(xué)標(biāo)本展示給學(xué)生學(xué)習(xí)，也可以存放在某標(biāo)本館里，讓世界上其他的植物學(xué)家也能看到它，那作用就更大了。三、器材各種采集工具四、步驟（種子植物蠟葉標(biāo)本制作）（一）植物標(biāo)本的采集采集工具有枝剪、小鎬、望遠(yuǎn)鏡、高枝剪、采集袋(箱)、海拔儀、放大鏡、鋼卷尺、指南針、小紙袋、號牌、采集簽和鉛筆等。號牌是2cmX4cm的硬紙片，打孔穿線，系在標(biāo)本上，號牌上印有采集人、地點、日期和編號共4項內(nèi)容。（二）整理大型草本植物可以

60、分段采集，或折成“V”形、“N”形或“M”形；（三）壓制采集的標(biāo)本最好邊采邊壓，這樣得把標(biāo)本夾帶到野外。如果不能在野外壓制，把標(biāo)本帶回宿營地壓制，則不能過夜，必須當(dāng)天壓制。在壓制標(biāo)本時要用到標(biāo)本夾、吸水紙和瓦棱紙，瓦棱紙有利于透氣。壓制時，將標(biāo)本放在吸水紙中間，上下都用瓦棱紙隔開，最后將標(biāo)本夾捆緊。在有條件的地方，可用電吹風(fēng)對著瓦棱紙吹，加速脫水干燥。每天更換吸水紙2次，35天即可壓好。秋天的標(biāo)本水分少，比春天的標(biāo)本好壓。在壓制標(biāo)本時，要注意標(biāo)本的整體造形，同時將部分葉片扭折，使葉背向上。在第一次更換吸水紙，要注意整理標(biāo)本，使葉片平整，造形美觀，花果位置適當(dāng)。如果葉片太多，相互堆疊在一起，而又