【標(biāo)準(zhǔn)】糞便無害化衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB

1、糞便無害化衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB7959-1987為貫徹“預(yù)防為主”的衛(wèi)生工作方針，切實(shí)搞好糞便衛(wèi)生管理和無害化處理，加強(qiáng)除害滅病的技術(shù)指導(dǎo)，改善城鄉(xiāng)環(huán)境衛(wèi)生面貌，保障人民身體健康，特制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于全國城鄉(xiāng)垃圾、糞便無害化處理效果的衛(wèi)生評價和為建設(shè)垃圾、糞便處理構(gòu)筑物提供衛(wèi)生設(shè)計(jì)參數(shù)。1定義11糞便是指人體排泄物。12堆肥是指以垃圾、糞便為原料的好氧性高溫堆肥（包括不加糞便的純垃圾堆肥和農(nóng)村的糞便、秸桿堆肥）。13沼氣發(fā)酵是指以糞便為原料，在密閉、厭氧條件下的厭氧性消化（包括常溫、中溫和高溫消化）。2標(biāo)準(zhǔn)值經(jīng)無害化處理后的堆肥和糞便應(yīng)符合表1、表2的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。表1高溫堆肥的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)衛(wèi)生赫椎堆i

2、Q加7大85-砒S川；r-蚪.加誡麗劃化的嚨醪表2沼氣發(fā)酵的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)廠廠巫目衛(wèi)生林殖130犬際上!J天張臨血囲沉民審曲Xia上4血吸蟲卵和論出斛在tt用號嵌羋不總鞄出活的山凰曲耶和購或胖前溫魁氣業(yè)關(guān)體氣蠱薛山1I?16齢、聶!1打效地?cái)堉剖沼[張哲昴施申無外起的馬訊無送的枇，埔或旺鞏比的成如耶氣扯播扭儒境片為比業(yè)與啟方可用*軸肥注，tLtbJ用f二議忙撿池和惴閉卉法吐理剋f蝕黑的衛(wèi)生窖圧非血吸SR躬洞冏曲購能護(hù)區(qū)T血吸出那和側(cè)也卯稱杯可口不悼*3監(jiān)測檢驗(yàn)方法堆肥、糞稀中糞便大腸菌群和寄生蟲卵的檢驗(yàn)，采用本標(biāo)準(zhǔn)附錄的方法，見附錄A、B、C、D、E（補(bǔ)充件）。4監(jiān)督與執(zhí)行41本標(biāo)準(zhǔn)由城鄉(xiāng)建設(shè)和設(shè)計(jì)等

3、單位負(fù)責(zé)執(zhí)行。42各級衛(wèi)生防疫機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)監(jiān)督本標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行。附錄A堆肥、糞稀中糞大腸菌群檢驗(yàn)法（補(bǔ)充件）糞大腸菌群是一群需氧及兼性厭氧，在44.5C24h內(nèi)能分解乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。評價無害化效果采用糞大腸菌群菌值表示。菌值：是含有一個糞大腸菌的克數(shù)或毫升數(shù)。A1樣品采集及混懸液制備樣品的采集和混懸液制備，是堆肥、糞稀微生物檢驗(yàn)的重要步驟。要求樣品應(yīng)具有代表性，并認(rèn)真進(jìn)行樣品處理和正確的制備混懸液，才能保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。A11樣品采集：堆肥樣品的采集一般是在堆肥前用無菌小鏟采集混拌均勻的堆料，以35個單個樣品混合后制成一個約500g的平均樣品，置無菌廣口瓶內(nèi)供檢驗(yàn)。對已堆制好

4、的堆肥，則根據(jù)需要，從堆肥的表層（30cm以內(nèi)）和中層（深50cm以上）各采集三點(diǎn)，制成一個約500g的表層和中層的平均混合樣品供給。關(guān)于糞稀樣品的采集，應(yīng)考慮到不同的糞稀處理方法。對于一般的貯糞池采樣，因稠度大可用滅菌采樣器采集池內(nèi)不同的35點(diǎn)的約25cm深處的糞稀，而三格化糞池樣品應(yīng)在出料口采集，樣品量約300mL,置無菌廣口瓶內(nèi)供檢驗(yàn)，同時應(yīng)采集新鮮糞稀樣品作為對照。A12混懸液制備：將堆肥樣品置于滅菌瓷盤內(nèi)，去其磚瓦石塊等，并剪碎尚未腐爛的有機(jī)物，充分混勻稱取log樣品，放于無菌的250mL帶玻璃珠的三角瓶內(nèi)，加無菌水，使成100mL，即為1：10的混懸液。對于糞稀樣品則用內(nèi)徑約06c

5、m帶刻度及橡皮頭吸管，吸取混搖均勻的糞稀液10mL,加入到250mL帶玻璃珠的三角瓶內(nèi)，加滅菌水使成100mL,即為1：10稀釋液，混搖35min,使附在有機(jī)物及雜質(zhì)上的細(xì)菌充分分離，靜置12min,進(jìn)行接種。A2接種根據(jù)樣品污染的程度，決定其稀釋度，為了避免所接種的不同稀釋度樣品的發(fā)酵均呈陽性或陰性反應(yīng)，要考慮到所接種的試管有效稀釋度。A21樣品稀釋用1mL滅菌吸管吸取1：10混懸液1mL，注入9mL滅菌水管內(nèi)，制成1：100稀釋液，按同法依次稀釋，制成1：1000、1：10000稀釋液（每種稀釋液各換一支滅菌吸管）A22初發(fā)酵試驗(yàn)：以無菌手續(xù)，用1mL滅菌吸管吸取1：10（相當(dāng)0lg樣品）

6、、1：100（相當(dāng)001g樣品）、1：1000（相當(dāng)000lg樣品）、1：10000（相當(dāng)00001g樣品）稀釋液各1mL,分別接種于1管單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，每個稀釋液各用1支吸管。置445C培養(yǎng)242h。A23將產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸的發(fā)酵管接種于堿性品紅亞硫酸鈉瓊脂培養(yǎng)基上，然后放入37C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24h，挑選典型菌落（帶金屬光澤菌落）和非典型菌落的一半，進(jìn)行革蘭氏染色，如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，再將平皿中其余的另一半菌落接種乳糖發(fā)酵管，置44.5C培養(yǎng)24h，如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，即證實(shí)有糞大腸菌群存在。A.2.4根據(jù)發(fā)酵管的陽性管數(shù)查表，即為糞大腸菌群菌值。表A1糞大腸菌群菌值計(jì)數(shù)表表A2糞

7、大腸菌群菌值計(jì)數(shù)表表A6糞大腸菌群菌值計(jì)數(shù)表表A6糞大腸菌群菌值計(jì)數(shù)表表A4糞大腸菌群菌值計(jì)數(shù)表表A3糞大腸菌群菌值計(jì)數(shù)表攙種山0M+-4o.m+.+*十卜fl.WJfi*u.on*+jjiira4+*+-0.0M*+-4O.dDLD.D-UU+44O.OOIKI煨刖屯，iimEr仏川O.OUID.ODOOI-4風(fēng)11-tm_I+0.0111-I4Q”口附*40-005t斗.二;帚泗-9-DrD0-164.-!氛創(chuàng)鴉4+cim恥0.00114-#O.OQ1D*40師肚+t0.0404”十O,ut(J(LMOTfii0.OOVOJU.MOOOJ0,(KQ04iJ*frW43LO.4M1OIIEC

8、tjGl05L&OOO託MOfl-530.0060460-CW0036Q.OODOILCLIHMMIOQ.OOODWO.OTOOMO.MMMOiO.tMJOWNMu,onau附錄B堆肥蛔蟲卵檢查法補(bǔ)充件）B1樣品處理從現(xiàn)場采回的許多堆肥樣品，其中糞便和垃圾量的配比，各有不同，夏季因瓜果皮核爛菜等較多，有機(jī)物含量大，濕度也較高；冬季含爐灰渣等較多，無機(jī)物含量高，濕度較低；有的已經(jīng)腐爛，顏色較黑，有的尚未發(fā)酵，質(zhì)地較粗，無論如何，樣品到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，都須先加處理。其步驟為：B11各層樣品經(jīng)混勻后，分別倒于搪瓷盤內(nèi)，用鑷子挑去其中的夾雜物如爐渣、碎磚塊、廢銅、爛鐵和布條等。B.1.2經(jīng)攪勻后，稱出50

9、0g,作為供檢驗(yàn)用的樣品。B13為能查到具有代表性的堆肥蛔蟲卵樣品，應(yīng)將此500g樣品中較大的土顆粒予以壓碎，用孔徑2mm的銅篩過篩，收集下面篩出的較細(xì)樣品，不少于100g，為避免因濕度大，篩出物少，不及100g,可預(yù)先將孔徑3mm的銅篩疊在2mm的上面，用力振搖，這樣，必要時可取留在孔徑2mm篩上樣品的一部分，湊成100g。注：有時從現(xiàn)場采得的堆肥樣品，多屬未腐爛的蔬菜幫子、瓜果皮核和草梗等，難以篩出土粒狀物。在此情況下，可把一定量的混合均勻樣品，用剪子稍事剪小后，清水浸泡，繼將洗液靜置沉淀，而后收集沉淀物備檢。B.1.4將經(jīng)過處理的樣品裝于適當(dāng)大小的廣口瓶中，貼上標(biāo)簽。注：經(jīng)上述混合均勻而

10、又有代表性的許多份堆肥樣品，如一時未能全部檢驗(yàn)完畢，則需滴加一些防腐劑如3福爾馬林溶液，或3鹽酸溶液，加蓋后，放置冰箱中，目的在于防止原生動物和霉菌的繁殖，影響觀察，和避免活的蛔蟲卵進(jìn)一步發(fā)育，難以了解采樣當(dāng)時的發(fā)育情況。B.2堆肥樣品顯微鏡檢查檢驗(yàn)堆肥蛔蟲卵的原理，是先用堿性溶液和已經(jīng)處理過的堆肥樣品充分混合，分離蛔蟲卵，繼用比重較蛔蟲卵比重大的溶液為漂浮液，使蛔蟲卵漂浮在溶液的表面，從而收集檢驗(yàn)之，或加入清水，因蛔蟲卵的比重大于水的比重，使蛔蟲卵沉在水底，從中吸取蛔蟲卵檢驗(yàn)之。B21漂浮法：所用的為飽和硝酸鈉溶液離心漂浮法，操作步驟類似土壤蛔蟲卵檢查法：B.2.1.1分離：稱取510g經(jīng)過

11、處理的堆肥樣品于容量50mL清潔銅離心管或塑料離心管中。注入5%氫氧化鈉溶液2530mL,另加玻璃珠約10粒，用適當(dāng)大小的橡皮塞子緊塞管口，置電動振蕩機(jī)上，振蕩1015min,每分鐘200300次,靜置1530min后，再行振蕩，如此重復(fù)34次，使堆肥樣品為堿性溶液所浸透，加上玻璃珠的撞擊和摩擦，則混合液中的蛔蟲卵，不再被粘著在一起。B.2.1.2漂?。簭恼袷帣C(jī)上取下離心管，揭去橡皮塞子，用滴管吸取清水，將附著在皮塞上和管口內(nèi)壁的泥狀物，沖入管中，以免一小部分蟲卵的漏檢。而后再在離心機(jī)上離心35min,每分鐘20002500轉(zhuǎn)。倒去多余的氫氧化鈉溶液，水洗一次，即加清水將沉淀物攪渾后，離心，倒

12、去上面的臟水。隨后加入少量飽和硝酸鈉溶液（比重1.381.40），用玻璃棒攪成糊狀后，徐徐添加飽和硝酸鈉溶液，隨加隨攪，直加到離管口約1cm為止，此時將附在玻棒上的混合液也用一兩滴飽和硝酸鈉溶液，沖入管中，離心35min,每分鐘20002500轉(zhuǎn)，由于蛔蟲卵的比重小于飽和硝酸鈉溶液的比重，因此經(jīng)離心后，管中的蛔蟲卵，就會漂浮在硝酸鈉溶液的表面。B213移置液膜：用直徑略小于1cm的金屬絲圈（狀如細(xì)菌學(xué)上所用的接種環(huán)）不斷將表層液膜移于盛有半杯清水的小燒杯中，約30次后，再次攪拌和離心，適當(dāng)增加一些飽和硝酸鈉溶液，如此反復(fù)操作34次，直到液膜涂片未查見蟲卵為止。B214抽濾：將燒杯中含卵混懸液，

13、通過高爾特曼氏漏斗，抽濾于直徑35mm，無裂紋和孔眼的微孔火棉膠濾膜上（孔徑0.650.80pm），混合懸液中的蛔蟲卵，全部阻留在微孔濾膜上。有時由于樣品中蛔蟲卵數(shù)量過多，渾濁度大，不易為一張濾膜所濾過時，則可另添一或二張濾膜。B.2.1.5鏡檢：抽濾完畢，立即用眼科彎頭小鑷子，將濾膜從漏斗的濾臺上小心取下，平鋪于4x7.5cm的大型載物玻璃片上，趁濕在低倍顯微鏡下直接檢查，最好滴加兩三滴50甘油溶液，這樣，蛔蟲卵在比較透明而無氣泡的視野中，便于觀察和計(jì)數(shù)。B.2.2沉淀法：水洗離心沉淀法，操作步驟如下：B.2.2.1水洗：稱取100g經(jīng)過處理的堆肥樣品或一定量經(jīng)過剪小的蔬菜幫子等有機(jī)堆肥的浸

14、出沉淀物，放在500mL三角燒瓶中，加入5氫氧化鈉溶液100150mL和三、四十粒玻璃珠，塞以橡皮塞。浸泡半小時后，振搖34min,將上面的液體，倒入大燒杯中，再加等量清水于三角燒瓶中，浸洗三、四次，直到洗出液透明為止。B222過濾并水洗沉淀：將前后收集的洗液,用12層紗布過濾于1000mL錐形量杯中，靜置半小時至一小時后，倒去上層液體,如此,約半小時換水一次,直至上層水澄清為止。B223測定體積：用虹吸管慢慢吸去沉淀上面的液體，將沉淀物倒入刻度量筒中，測量沉淀物的容積。B.2.2.4鏡檢：將沉淀物攪渾，攪勻，迅速用1mL玻璃吸管吸取0.05和0.1mL于載玻片，蓋以蓋玻片（依蓋玻片的大小，分

15、別對2或3、4片不等）在低倍鏡下檢查并計(jì)數(shù)。B.3堆肥蛔蟲卵數(shù)量測定法堆肥中含有的蛔蟲卵數(shù)，往往較多，用飽和硝酸鈉溶液離心漂浮法時，510g樣品中的蛔蟲卵，高度集中在濾膜上，在顯微鏡下計(jì)數(shù)時容易混亂，因此，最好能在顯微鏡的目鏡筒內(nèi)，裝上一枚目鏡計(jì)數(shù)網(wǎng)，利用移動尺有規(guī)律的移動，逐漸數(shù)完整個濾膜上的全部蛔蟲卵數(shù)。例如500g有代表性的原始堆肥樣品，經(jīng)挑去夾雜物并過篩后，得184g，其中的10g用飽和硝酸鈉溶液離心漂浮后，在濾膜上數(shù)得蛔蟲卵數(shù)為350個，則350/10 x184=6440個。實(shí)際上，184g的含有數(shù)，亦即代表500g原始堆肥所含有的蛔蟲卵數(shù)。在用水洗沉淀法時，需要準(zhǔn)確測定沉淀物的容積

16、，在用玻璃吸管吸取沉淀以供鏡檢時，必須攪拌均勻而后取樣，而且需要連續(xù)觀察若干次，而后取其平均數(shù)，從而計(jì)算1mL沉淀物的蟲卵數(shù)，最后乘以沉淀總?cè)莘e數(shù)，便是100g原始堆肥樣品的蟲卵數(shù)。B4堆肥蛔蟲卵生活力測定法目前測定堆肥蛔蟲卵生活力所用的方法，除了采用簡單易行的直接鏡檢法外，普遍采用培養(yǎng)法，而染色法則因操作較為復(fù)雜，不如直接鏡檢法簡便，效果不如培養(yǎng)法的可靠，因?yàn)槲雌毡椴捎谩41直接鏡檢法：是根據(jù)蛔蟲卵在發(fā)育過程中所出現(xiàn)的各種形態(tài)，以鑒別其死活。首先是鑒別受精卵和未受精卵，其次是鑒別有生活力和失去生活力（變性卵）的受精卵和含有幼蟲卵的形態(tài)。采用直接鏡檢法時，有關(guān)形態(tài)鑒別要點(diǎn)如下：B411未受精

17、蛔蟲卵的形態(tài)：多為長橢圓形，有時呈三菱形或不規(guī)則形，大小平均為8098x4060pm,般為黃褐色，有時蛋白質(zhì)殼發(fā)育不全，有時完全失去蛋白質(zhì)殼，卵內(nèi)經(jīng)常充滿大大小小油滴狀的卵黃細(xì)胞。B412受精蛔蟲卵的形態(tài)：活的受精蛔蟲卵的形態(tài)：蛋白質(zhì)殼為黃褐色，脫去蛋白質(zhì)殼的為無色透明；平均大小為5070 x4050pm；外層卵殼厚，內(nèi)層殼薄，有屈光性，最外層的蛋白質(zhì)殼也很厚，呈乳狀或花紋狀突起；卵內(nèi)有一個球形的卵細(xì)胞，卵殼兩端和卵細(xì)胞之間，有半月形的空隙，卵內(nèi)的卵黃顆粒清晰而致密。死受精蛔蟲卵（變性卵）的形態(tài)：卵細(xì)胞移向一端，致使卵殼兩端呈現(xiàn)有大小不等的半月形空隙。卵內(nèi)脂肪變性，形成空泡，很像未受精卵，高溫

18、堆肥樣品中卵內(nèi)的空泡尤為顯著。卵細(xì)胞顆粒減少或消失。卵細(xì)胞質(zhì)渾濁，呈黑色或棕黑色。卵細(xì)胞向不定部位呈球狀收縮。卵殼的一側(cè)或兩側(cè)，一端或兩端向內(nèi)凹陷或破裂。只有蛋白質(zhì)殼，而缺內(nèi)容物。B413含有活幼蟲卵的形態(tài)：蟲體的前后部沒有顆粒，中部顆粒清晰而有金屬光澤，有立體感，鏡檢時，注視或輕壓，可見有輕微蠕動，強(qiáng)壓后，有時可擠出幼蟲。B414含有死幼蟲卵的形態(tài)：幼蟲體內(nèi)幾乎充滿顆粒，且模糊不清，無金屬光澤，缺乏立體感，鏡檢時注視之，久久不見蠕動，稍稍加熱或輕壓，不會蠕動；強(qiáng)壓時，雖能擠出幼蟲，但也不改變其原來的卷曲狀態(tài)。以上所列是死活蛔蟲卵的一般形態(tài)，在鏡檢中有時會遇到外形發(fā)生變化的畸形活卵和各種形態(tài)的

19、未受精卵，以及容易誤認(rèn)為寄生蟲卵的異物。B42濾膜培養(yǎng)法：把上述通過飽和硝酸鈉溶液離心漂浮后收集在濾膜上的蛔蟲卵，經(jīng)過計(jì)數(shù)后，直接用來培養(yǎng)，稱為濾膜培養(yǎng)法。濾膜培養(yǎng)法測定蛔蟲卵生活力的操作步驟如下：B.4.2.1在直徑1012Cm的玻璃平皿的底部平鋪一層厚約1cm的脫脂棉（或微孔塑料），脫脂棉上鋪一張直徑與平皿等大的普通濾紙。B.4.2.2為防止霉菌和原生動物的繁殖，可加入23甲醛溶液或甲醛生理鹽水，以濕透濾紙和脫脂棉。B.4.2.3把含卵濾膜平鋪在皿中濾紙上，加蓋，并在皿蓋上編號。一個平皿可同時放上幾張濾膜，互不接觸。B.4.2.4把平皿放在2426C的恒溫箱中培養(yǎng)一個月，培養(yǎng)過程中經(jīng)常滴加

20、清水或23的甲醛溶液，使濾膜保持潮濕狀態(tài)。注：堆肥樣品中的蛔蟲卵，因受溫度的影響，死卵的形態(tài)變化比較顯著，往往培養(yǎng)不到一個月，即能明確判定為死卵，無需繼續(xù)培養(yǎng)。B425培養(yǎng)一個月后自皿中取出濾膜置于載玻片上，滴加50甘油溶液，使其透明后，在低倍鏡下查找蛔蟲卵，然后在高倍鏡下，根據(jù)形態(tài)，鑒定卵的死活，并加以計(jì)數(shù)。鏡檢時有時會感到視野的亮度和濾膜的透明度不夠理想，則可在一張載物片上，滴一滴清水，另用一張蓋玻片從濾膜上刮下少許含卵濾渣，與水混合攪勻，蓋上同一蓋玻片進(jìn)彳丁鏡檢，或是在載玻片上滴12小滴30%安替福尼液代替清水，蛔蟲卵外面的蛋白質(zhì)殼很快被溶解掉，內(nèi)部構(gòu)造便于觀察。凡含有幼蟲的，都認(rèn)為是活

21、卵，其他階段的或單細(xì)胞的，都判為是死卵。附錄C糞稀蛔蟲卵檢查法（補(bǔ)充件）C1樣品處理自密閉化糞池或沼氣發(fā)酵池等不同類型的糞池中采集的糞稀樣品，因?yàn)槭欠謩e采自進(jìn)出料口以及上下不同的層次，所以樣品有稀有稠，稀者狀如水樣，稠者形若污泥和新鮮糞便。樣品送到實(shí)驗(yàn)室后，不論稀稠，均應(yīng)盡快倒于適當(dāng)大小的玻璃容器內(nèi)，加以攪拌均勻，而且在攪拌的同時，用鑷子挑去浮在上面的或混在其中肉眼所能看到的夾雜物。C2糞稀樣品顯微鏡檢查糞稀樣品經(jīng)過如上的處理后，進(jìn)一步進(jìn)行蛔蟲卵的檢驗(yàn)工作，包括定量檢驗(yàn)蛔蟲卵的數(shù)量測定和定性檢驗(yàn)（蛔蟲卵生活力的測定）。C21糞稀蛔蟲卵數(shù)量測定法沼氣池等進(jìn)料口的樣品，因?yàn)槌矶容^大，適于采用稀釋法

22、。而出料口的樣品，由于較稀，則以采用濃縮法為佳。C211稀釋法：采用的有兩種方法，即濾膜法和司徒氏法。C2111濾膜抽濾稀釋計(jì)數(shù)法操作步驟如下：C.2.1.1.1.1取混勻的進(jìn)料口糞稀100mL,加水稀釋至300500mL。C.2.1.1.1.2用60孔的金屬篩子過濾于500mL錐形量杯中,靜置30min。C.2.1.1.1.3倒去沉淀上部的液體，將沉渣移入50mL離心管中，離心3min,每分鐘2000轉(zhuǎn)。C.2.1.1.1.4倒去上清液，加入20mL5%氫氧化鈉溶液或30安替福尼溶液。C21115每隔10min用玻璃棒攪拌均勻，以促進(jìn)蛔蟲卵和雜質(zhì)的分離。C.2.1.1.1.61h后，加水近滿

23、，經(jīng)攪拌后，離心3min后，棄去上部堿性溶液。C.2.1.1.1.7加入飽和硝酸鈉溶液或飽和食鹽水，攪拌后，離心35min,每分鐘20002500轉(zhuǎn)。C.2.1.1.1.8用玻璃吸管吸取漂浮液，放置于盛有清水的小燒杯中。C.2.1.1.1.9將此含卵混懸液抽濾于1張濾膜上（濾膜規(guī)格同堆肥蛔蟲卵檢查法）。C.2.1.1.1.10在顯微鏡下計(jì)算全濾膜上的蛔蟲卵數(shù)，該數(shù)即代表原100mL進(jìn)料口糞稀中的蛔蟲卵數(shù)。C.2.1.1.2司徒（Stoll）氏蟲卵稀釋計(jì)數(shù)法：其原理系將定量（重量或容積均可）的稠糞樣品，稀釋為定量的稀釋液，經(jīng)混合均勻后，從中再吸出一定量的稀釋液，在顯微鏡下，計(jì)數(shù)其中含有的蛔蟲卵。

24、然后按稀釋的倍數(shù)，計(jì)算出該稀釋液中的卵數(shù)，最后換算成單位重量或容積原樣品中含有的蛔蟲卵數(shù)。具體操作為：C.2.1.1.2.1用一支100mL硬質(zhì)玻璃試管，在容水45mL處作一標(biāo)志或刻度。C21122稱取3g攪勻的糞稀樣品，裝入試管中，注入110當(dāng)量的氫氧化鈉溶液至45mL標(biāo)志或刻度處，另加十?dāng)?shù)粒玻璃珠。C21123用橡皮塞子緊塞管口后，極力振搖，使成均勻的混合液為止。如樣品中含有糞塊，最好放置過夜，使有足夠的消化時間。C21124翌晨在計(jì)數(shù)前再把它搖勻。搖后速用1mL刻度吸管，吸取混合液o.15mL于大型載物片（3775mm）上，蓋以22x40mm的蓋玻片（如缺大載物片，則將吸出的0.15mL

25、混合液分滴于23張一般大小的載物片上，蓋以1o18mm的蓋玻片亦可）。2.1.1.2.5然后在低倍顯微鏡下數(shù)完0.15mL混懸液中所有的蛔蟲卵數(shù)，將所數(shù)得的卵數(shù)乘以100，即為每克糞稀中所含有的蛔蟲卵數(shù)。如樣品稍稀，不用玻璃試管，改用100mL三角燒瓶亦可，在容積60mL處，刻一刻度，取混勻的糞稀樣品4mL于此刻度燒瓶中，注入110當(dāng)量的氫氧化鈉溶液，至60mL刻度處，再放入十粒玻璃珠，用橡皮塞緊塞瓶口，極力振搖，直至混合液呈均勻狀態(tài)為止。然后吸取0.15mL混合液于載玻片上，蓋以蓋玻片，并在低倍鏡下進(jìn)行蛔蟲卵計(jì)數(shù)，將所得的卵數(shù)乘100，即是每毫升糞稀中所含有的蛔蟲卵數(shù)。C212濃縮法：由于蛔

26、蟲卵的比重大于水的比重，在水中容易下沉。沼氣池出料口糞稀含水多，糞便較少（水與糞便之比，約為20：1）,因此，含蛔蟲卵量相應(yīng)也少，上層糞稀含卵量當(dāng)更少。檢查時，可采用自然沉淀法和濾膜抽濾法兩種方法。分別如下：C2121自然沉淀法：C.2.1.2.1.1取出料口上層糞稀30004000mL,下層糞稀10002000mL,分別用60目銅篩過濾于12個2000mL錐形量杯中，讓其自然沉淀。2.1.2.1.2經(jīng)1h后，倒去沉渣上層的液體，另換清水，攪渾后，靜置，讓其自然沉淀。2.1.2.1.3反復(fù)水洗沉淀，至沉渣上面的水接近無色和澄清后，棄去上清液。C.2.1.2.1.4將沉渣倒人100mL量筒中，測

27、量沉渣的容積。2.1.2.1.5經(jīng)充分?jǐn)嚢韬?，?mL玻璃吸管，迅速吸取沉渣0.1mL于載玻片上，蓋以蓋玻片。C21216在低倍顯微鏡下，作蛔蟲卵計(jì)數(shù)。C21217反復(fù)檢查幾次后，取其平均數(shù)，從而推算原100mL糞稀所含有的蛔蟲卵數(shù)。C2122濾膜抽濾法：C21221將出料口不同層次采得的定量糞稀樣品，用60目銅篩過濾。C21222除比較混濁需要反復(fù)水洗沉淀外，可直接抽濾于濾膜上。C21223將濾膜平鋪在大型載玻片上，加透明劑后在顯微鏡下，作蛔蟲卵計(jì)數(shù)，從而計(jì)算出每100mL糞稀中蛔蟲卵含有數(shù)。C22糞稀蛔蟲卵生活力測定法C221濾膜培養(yǎng)法：將上面進(jìn)行蛔蟲卵計(jì)數(shù)所用過的濾膜，放在培養(yǎng)皿中，于2

28、426C下培養(yǎng)一個月，然后從濾膜上刮下沉渣,鏡檢100200個蛔蟲卵，其中發(fā)育到幼蟲期者，認(rèn)為是活卵，其他各期均視之為死卵。C222清水培養(yǎng)法操作如下：C2221將通過水洗沉淀所得的含卵沉渣，倒入10mL離心管內(nèi)。C.2.2.2.2離心3min,每分鐘2000轉(zhuǎn)。C2223倒去上清液，注入飽和食鹽水，攪拌后，離心漂浮3min,轉(zhuǎn)速同前。C.2.2.2.4用毛細(xì)吸管吸取液面漂浮物于另一離心管內(nèi),加清水，經(jīng)攪拌后，以如上的轉(zhuǎn)速，離心12min。C.2.2.2.5吸去上清液，再加清水24mL攪渾管底的沉淀，加5福爾馬林溶液12滴。C.2.2.2.6置2426U溫箱中培養(yǎng)一個月，在培養(yǎng)過程中每日換水。

29、C.2.2.2.7培養(yǎng)完畢，用玻璃吸管吸取沉淀物，做成涂片在顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)100200個蛔蟲卵，將發(fā)育為幼蟲期的，認(rèn)為是正常的活卵，其他形態(tài)者，都認(rèn)為是不發(fā)育卵或死卵。附錄D糞稀鉤蟲卵檢查法補(bǔ)充件）D.2.1.1.4半小時后，再棄去上清液，反復(fù)進(jìn)行到上面的D.2.1.1.4半小時后，再棄去上清液，反復(fù)進(jìn)行到上面的在糞稀中檢查鉤蟲卵，可以直接從糞稀樣品中檢查蟲卵，或通過培養(yǎng)，間接檢獲鉤蟲幼蟲。其步驟可分為：D1樣品處理：參照糞稀蛔蟲卵檢查法。D2糞稀樣品顯微鏡檢查：步驟大致同糞稀蛔蟲卵檢查法。稠的樣品用稀釋法，稀的用濃縮法。D21鉤蟲蟲卵的檢查D211稀釋法：除可采用濾膜法和司徒氏法（參見糞

30、稀蛔蟲卵檢查法）外，也可采用水洗沉淀法。是因?yàn)殂^蟲卵的比重（106）大于水的比重，在水中會逐漸下沉。操作如下：2.1.1.1依糞稀樣品稀稠度的不同，稱取樣品35g,放在燒杯中，先加少量清水，充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后陸續(xù)加水，使成混懸液。D.2.1.1.2用12層紗布過濾于500mL錐形量杯中，加水到近杯口。2.1.1.3經(jīng)1h后，倒去上液，另換清水，攪渾后，靜置之，使其自然沉淀。水接近無色和澄清。D.2.2.1.4用吸管吸取糞稀或其沉淀物，涂抹于紙條的中D.2.2.1.4用吸管吸取糞稀或其沉淀物，涂抹于紙條的中D2115棄去上清液，將沉渣倒入量筒中，測定沉渣的容積。2.1.1.6充分?jǐn)嚢韬螅杆儆?

31、mL玻璃吸管吸取沉渣0.1mL,放在載玻片上，加蓋玻片（必要時可分成2片）。2.1.1.7在低倍鏡下檢查，并作蟲卵計(jì)數(shù)。D.2.1.1.8反復(fù)檢查10片后，算出每0.1mL沉渣中蟲卵平均數(shù)。最后再計(jì)算單位容積糞稀中的鉤蟲卵數(shù)。D.2.1.2濃縮法：亦可采用自然沉淀法和濾膜抽濾法。詳見糞稀蛔蟲卵檢查法。D.2.2鉤蟲幼蟲的檢查D.2.2.1小試管培養(yǎng)法，操作如下：D.2.2.1.1用剪刀把濾紙裁成9x1.5cm、邊緣光滑的長紙條。D.2.2.1.2于10 x1cm的小試管中加入清水12mL。D.2.2.1.3沿紙條長徑，將濾紙左右對折，再攤平。上段（面積約為4x1.3cm）。D.2.2.1.13

32、在顯微鏡下作鉤蚴計(jì)數(shù)。D.2.2.1.13在顯微鏡下作鉤蚴計(jì)數(shù)。D2215濾紙下面墊以吸水性強(qiáng)的粗草紙，以便吸去多余的水分。D2216將涂有糞稀的紙條插入小試管中，下端浸入水里，而水又不接觸糞稀。D2217管口外面貼上樣品號，并用紙包嚴(yán)，以防污染。D.2.2.1.8把試管放置2530C恒溫箱中培養(yǎng)。D2219每天加水，防止干燥。D.2.2.1.10培養(yǎng)5天后取出，在光線下用肉眼或放大鏡，觀察管底水中有否乳白色，呈蛇形狀活動的鉤蚴。或?qū)⒐軆?nèi)水倒入平皿中。D.2.2.1.11將4548C溫水倒?jié)M試管中，靜置20min,鉗棄紙條，再靜置沉淀半小時，倒去上層液體，把沉淀物倒入另一平皿內(nèi)。D.2.2.1

33、.12用碘液殺死兩個平皿中的鉤蚴并使之染色。也可加入10鹽水，稍事沉淀，以殺死糞池中自由生活線蟲。D.2.2.2雙重平皿濾紙培養(yǎng)法，操作如下：D.2.2.2.1取大小兩個平皿，小的直徑約6cm，大的直徑約10cm,將小平皿的底及周圍用濾紙包裹后，皿底朝上，口朝下，安放在大平皿的中央。D.2.2.2.2稱取糞稀約30g，經(jīng)過水洗沉淀后，把含卵糞渣放在小平皿底的濾紙上，放在28U恒溫箱中培養(yǎng)。D.2.2.2.3每日加水，防止濾紙干燥。D.2.2.2.4三日后，在大平皿內(nèi)加水。以后每天檢查并加水，保持水深34mm。D.2.2.2.557天后取出，于大平皿中滴加碘液，在解剖鏡下，作鉤蚴檢查并計(jì)數(shù)。鉤蟲、糞類圓線蟲、東方毛圓線蟲絲狀蚴鑒別要點(diǎn)駅方毛國級也0.75mm占威i越占ittU”也t嗎彈后罰曜劃令2馳|ft書禹球找糊附錄E糞稀中血吸蟲卵檢查法補(bǔ)充件）糞稀血吸蟲卵的檢驗(yàn)，可以用沉淀法在顯微鏡下找蟲卵，用孵化法找毛幼。E1沉淀法操作方法如下：1.1取糞稀樣品約30g,放于燒杯或搪瓷杯中，加水調(diào)成糊狀。E.1.2通過4060目銅絲篩，濾入500mL錐形量杯中，加水近滿。E.1.3靜置2030min后，待沉渣沉淀，倒去上層糞水，保留沉渣約30mL,換加清水至原刻度處。以后每隔2030min,換水一次。直到上浮液澄清為止。因?yàn)檠x卵必須入水才能孵化。而且在清水中較易孵化，所以