胸腺肽的認識與對比課件(PPT 67頁)

1、 幾種不同的胸腺肽藥物第1頁，共67頁。胸腺激素類免疫調節(jié)劑發(fā)展 -胸腺肽 胸腺肽最早是由雪蘭諾公司從小牛胸腺提取的一種胸腺因子,1980年在意大利上市,爾后在歐美注冊和臨床。生產廠家已超過百余家，國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）已核準下發(fā)了389個注射劑生產批文，有8家企業(yè)生產口服制劑。胸腺肽的主要劑型有：凍干粉針劑、注射液、腸溶片、腸溶膠囊和胸腺肽氯化鈉注射液5種。第2頁，共67頁。胸腺激素類免疫調節(jié)劑發(fā)展 -胸腺肽但由于胸腺肽有效成分不明確、含量低、含致敏大分子蛋白，不符合WHO對免疫調節(jié)劑的五項標準（1、化學成分明確；2、易于降解；3、刺激適中；4、不致癌，致畸變；5、無累積毒性，無

2、不良反應及后繼作用），因而療效低、安全性差，不良反應尤其是嚴重過敏反應頻繁發(fā)生，由此引發(fā)了國家藥品不良反應監(jiān)測中心對該類藥品進行通報。 第3頁，共67頁。胸腺激素類免疫調節(jié)劑發(fā)展 -胸腺五肽在對胸腺素類藥物的研制中，科學家通過化學合成的方法制造出了胸腺生成素，并在此基礎上進一步開發(fā)了胸腺五肽。1985年，胸腺五肽在意大利以商品名“Timunox”上市。1997年，我國研發(fā)合成胸腺五肽，隨后四川源基制藥、北京雙鷺藥業(yè)、丹東醫(yī)創(chuàng)藥業(yè)等企業(yè)的產品也獲準生產。截至2006年6月，SFDA已核準36家企業(yè)生產胸腺五肽原料藥及其注射劑。胸腺五肽的主要劑型有：凍干粉針劑、注射液第4頁，共67頁。胸腺激素類免

3、疫調節(jié)劑發(fā)展 -胸腺肽1(T1) 在上世紀末，意大利賽生公司的產品“胸腺肽1”已進入我國市場，而且在國外也已在30多個國家獲得批準上市。2002年底，SFDA批準成都地奧九泓、海南雙成藥業(yè)、海南中和藥業(yè)生產原料藥及注射劑。胸腺肽1(T1)的主要劑型有：粉針劑第5頁，共67頁。胸腺類制劑的發(fā)展 普通胸腺肽 安全性大大提高 胸腺五肽 安全性和療效都實現(xiàn)了質的飛躍 胸腺肽1被2010版藥典收載：安全，有效，質量可控第6頁，共67頁。胸腺肽1受到高度認可被2010版中國藥典收載胸腺肽、胸腺五肽未被收入進入國家基本醫(yī)療保險、工傷保險和生育保險藥品目錄（2009年版）胸腺肽、胸腺五肽、亮菌甲素、香菇多糖、

4、免疫核糖核酸等均未進入 進入中國國家處方集收錄于腫瘤項下第7頁，共67頁。 神經(jīng)-內分泌系統(tǒng)主要通過神經(jīng)纖維、神經(jīng)遞質和激素調節(jié)免疫系統(tǒng)功能；免疫系統(tǒng)則通過分泌多種細胞因子，反饋信息，調節(jié)神經(jīng)-內分泌系統(tǒng)。 第8頁，共67頁。胸腺肽類激素種類及功能第9頁，共67頁。（一）氨基酸的結構通式天然氨基酸在結構上的共同特點為：(1). 與羧基相鄰的-碳原子上都有一個氨基，因而稱為-氨基酸(2). 除甘氨酸外,其它所有氨基酸分子中的-碳原子都為不對稱碳原子,所以：A.氨基酸都具有旋光性。B.每一種氨基酸都具有D-型和L-型兩種立體異構體。目前已知的天然蛋白質中氨基酸都為L-型。第10頁，共67頁。氨基酸

5、的構型和存在形式構型（用D、L表示）：-氨基酸通式除甘氨酸，天然-氨基酸都是有旋光的，而且都是L型的。L型-氨基酸D型-氨基酸 L-甘油醛第11頁，共67頁。+-HOH甘氨酰甘氨酸肽鍵（二）肽： 肽鍵是由一個氨基酸的-羧基與另一個氨基酸的-氨基脫水縮合而形成的化學鍵。第12頁，共67頁。蛋白質的分子結構包括 一級結構(primary structure)二級結構(secondary structure)三級結構(tertiary structure)四級結構(quaternary structure)高級結構第13頁，共67頁。蛋白質的一級結構指多肽鏈中氨基酸的排列順序。一、蛋白質的一級結構(

6、Primary structure）主要的化學鍵肽鍵，有些蛋白質還包括二硫鍵。 第14頁，共67頁。15202528AlaAspAlaAlaValAspThrSerSerGluThrThrLysAspLeuLysLysGluValValGluGluAlaGluAsnIleLysGlu-OHAc-胸腺肽1化學合成的28個氨基酸組成的多肽, 純度 99.8% 正常人血清濃度為400-1000pg/ml105第15頁，共67頁。二、蛋白質的二級結構蛋白質分子中某一段肽鏈的局部空間結構，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側鏈的構象 。 主要的化學鍵： 氫鍵 第16頁，共67頁。

7、(二）主鏈構象的分子模型 -螺旋 ( -helix ) -折疊 ( -pleated sheet ) -轉角 ( -turn ) 無規(guī)卷曲 ( random coil ) 第17頁，共67頁。1. -螺旋左手和右手螺旋第18頁，共67頁。2. -折疊在-折疊中，-碳原子總是處于折疊的角上，氨基酸的R基團處于折疊的棱角上并與棱角垂直，兩個氨基酸之間的軸心距為0.35nm. -折疊結構的氫鍵主要是由兩條肽鏈之間形成的；也可以在同一肽鏈的不同部分之間形成。幾乎所有肽鍵都參與鏈內氫鍵的交聯(lián)，氫鍵與鏈的長軸接近垂直。-折疊有兩種類型。一種為平行式，即所有肽鏈的N-端都在同一邊。另一種為反平行式，即相鄰兩

8、條肽鏈的方向相反。第19頁，共67頁。3. -轉角-轉角在-轉角部分，由四個氨基酸殘基組成.四個形成轉角的殘基中，第三個一般均為甘氨酸殘基彎曲處的第一個氨基酸殘基的 -C=O 和第四個殘基的 N-H 之間形成氫鍵，形成一個不很穩(wěn)定的環(huán)狀結構。這類結構主要存在于球狀蛋白分子中。第20頁，共67頁。超二級結構 ； （三）超二級結構和結構域第21頁，共67頁。三、蛋白質的三級結構整條肽鏈中全部氨基酸殘基的三維空間的排布位置。四、蛋白質的四級結構蛋白質分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質的四級結構。第22頁，共67頁。一級結構二級結構三級結構亞基四級結構總結：蛋白質分子從一

9、級結構到高級結構第23頁，共67頁。第24頁，共67頁。胸腺肽1與普通胸腺肽的比較注：胸腺肽實際有效成分就是胸腺肽1，但含量極低（不到0.6%）第25頁，共67頁。從工藝上說，普通胸腺肽以動物胸腺為原料，經(jīng)過搗碎、提取、離心、過濾，分裝。普通胸腺肽所標示的20mg、50mg等，實際上是總蛋白含量。也就是含氮物質總量。在新的試行標準中，為提高質量，規(guī)定必須含有一定比例的胸腺肽1。這實際上從另一方面證明普通胸腺肽中實際真正起作用的是胸腺肽1，但可惜的是普通胸腺肽中胸腺肽1的含量只有0.6%左右。第26頁，共67頁。胸腺肽1與胸腺五肽的比較注：胸腺五肽給藥方式和劑量國內外相差極大，缺少循證醫(yī)學證據(jù)支

10、持第27頁，共67頁。胸腺肽1與胸腺五肽最大的不同在于胸腺肽1是人體內源性物質，與體內的胸腺肽1結構和活性都完全一致，都是28肽。而胸腺五肽卻不是人體內源性物質，只是胸腺生成素II的一個片段，胸腺生成素II是49肽，五肽卻是只有5個氨基酸的寡肽，連蛋白質的3級結構都不具有，很難說其具有胸腺生成素II的全部活性?？赡苷驗槿绱?，五肽僅在中國和意大利被批準上市。第28頁，共67頁。15202528AlaAspAlaAlaValAspThrSerSerGluThrThrLysAspLeuLysLysGluValValGluGluAlaGluAsnIleLysGlu-OHAc-ZADAXIN(胸腺肽1

11、)注射液化學合成的28個氨基酸組成的多肽, 純度 99.8% 正常人血清濃度為400-1000pg/ml105第29頁，共67頁。T1在活體外的免疫調節(jié)功能 細胞因子及受體方面 T細胞的增生及分化方面 白介素2（IL2）的濃度 干擾素（IFN ）的濃 度 高親和力IL2受體的表達 干擾素（IFN ）的濃 度CD3， CD4及CD8細胞的增生 由地塞大米松誘發(fā)的胸腺細胞凋亡激活NK細胞活性 CFU的前體細胞數(shù)目第30頁，共67頁。第31頁，共67頁。第32頁，共67頁。胸腺肽1增加Th1 亞型 Andreone et al (2001) Journal of Viral Hepatitis 8:

12、 194-201* p 0.05CD4Th1 細胞分泌 IL-2, INF gTh2 細胞分泌 IL-4, IL-1*HCV陽性病人的外周單核細胞經(jīng)胸腺肽1培育Th1在抗肝炎治療中是清除病毒所必需第33頁，共67頁。第34頁，共67頁。胸腺肽1增加NFkB轉錄因子表達第35頁，共67頁。胸腺肽1 (胸腺肽1)啟動人體免疫機制來抗病毒、抗癌增加靶細胞MHC-I類抗原的表達直接抑制病毒的復制直接抑制腫瘤細胞生長的作用增產 NK , CD4+,CD8+,Th1 增加IL-2,INF-,IL-2R胸腺肽1的雙重作用機制免疫調節(jié)機制直接抗病毒、腫瘤機制第36頁，共67頁。STEM CELLNK CELL

13、胸腺肽1作用機制靶細胞靶細胞CD4+ T-CELLCD8+ T-CELL IL-2, INF-Th1CTL間接作用促進T細胞的增生和分化促進細胞因子的表達(IL-2、INF、IL2R）直接作用增強MHC-I類抗原表達直接抑制病毒的復制增強谷胱苷肽的水平第37頁，共67頁。胸腺肽1的作用機制第38頁，共67頁。胸腺肽1的臨床應用1、在慢性病毒性肝炎治療中的應用2、在腫瘤治療中的應用3、在免疫功能低下人群中作為疫苗增強劑的 應用4、在其他領域中的應用 各種免疫功能缺陷和異?；颊咄殡S有免疫功能低下,因此胸腺素1在臨床上已開始被應用于治療重癥感染、慢性腎炎、紅斑狼瘡、風濕或類風濕性關節(jié)炎及艾滋病等

14、疾病的治療中,且均表現(xiàn)出不同程度的臨床療效.第39頁，共67頁。胸腺肽a1的合成工藝胸腺肽a1是一條由28個氨基酸構成的肽鏈，人工合成時，是將首個氨基酸固定于固體樹脂上，通過28步反應(含末端乙?；徊?，將其他27個氨基酸一個個分別按序列接上，然后將整條肽鏈自樹脂上“切割”下來，得到的粗品再進入純化階段，經(jīng)多級次色譜柱分離，最終得到純度極高的胸腺肽a1單體。以上是對采用固相多肽合成技術生產胸腺肽a1的最簡單描述。首先，任何化學反應均受化學平衡常數(shù)的制約，每一步反應收率均100；假設肽合成反應的每一步收率均達到90，則連續(xù)28步反應之后終產品收率僅5(09的28次方)；其次，在經(jīng)歷如此多步合成

15、反應之后，終產品中混雜的各步反應中間體種類近乎天文數(shù)字，為得到高純度胸腺肽a1單體，勢必進行多級多次純化，每次純化過程又都涉及產品收率問題，目標肽分子在純化過程中的損失在所難免。 第40頁，共67頁。磁共振成像（MRI） 證實一： 在氨基酸58間有樣折疊結構進口胸腺肽1具有獨特的二維空間結構第41頁，共67頁。磁共振成像（MRI） 證實二： 在氨基酸1724間形成的樣螺旋形結構進口胸腺肽1具有獨特的二維空間結構第42頁，共67頁。相互作用后可引發(fā)產生一連串的生物學效應：1.增強淋巴細胞分泌白介素（IL-2）、及干擾素；2.增強淋巴細胞表膜IL-2受體的表達作用；3.增強NK細胞的驀集及殺傷能力

16、；4.增強混合性淋巴細胞的反應。 二維空間結構是與淋巴細胞膜結合首要條件第43頁，共67頁。胸腺肽1中所有氨基酸均為左旋形式第44頁，共67頁。胸腺肽1與仿制品的區(qū)別第45頁，共67頁。胸腺肽1與胸腺五肽的區(qū)別第46頁，共67頁。HBV的治療選擇胸腺肽1核苷酸類似物THTS干擾素NKTC+-+-拉米夫定LamivudineRegev A, Schiff ER. Drug therapy for hepatitis B. Adv Intern Med 2001;46:107-35.第47頁，共67頁。 乙肝病毒本身并不引起明顯的肝細胞損傷。肝細胞的損傷主要是由免疫病理引起的，也就是機體的免疫反應

17、在清除HBV的過程中造成了肝細胞的損傷。第48頁，共67頁。胸腺肽1顯著誘導PBMC細胞2，5寡腺甘酸合成酶（2-5OAS）的增加；聯(lián)合二者更有相乘的作用（2-5OA是一種抗病毒蛋白）。(mmol/ml)p0.05*p0.05*p0.01*2-5 OAS胸腺肽1通過增加Th1,降低Th2免疫反應治療慢乙肝胸腺肽1顯著誘導2-5OAS的增加*A.Gramenzi et al. Hepatology,Vol 42,No.4,suppl.1,2005第49頁，共67頁。干擾素a誘導PBMC細胞分泌IL-4。胸腺肽1顯著降低IL-4水平，而干擾素誘導IL-4分泌增加。*與控制組比較*與干擾素組比較(p

18、g/ml)IL-4(10U/ml)(10ug/ml)p0.05*p0.01*A.Gramenzi et al. Hepatology,Vol 42,No.4,suppl.1,2005胸腺肽1通過增加Th1,降低Th2免疫反應治療慢乙肝胸腺肽1顯著降低IL-4的生成第50頁，共67頁。單用治療慢乙肝（薈萃分析）治療結束隨訪612月時評估 ; 完全反應：ALT復常 + DNA 陰轉或HbeAg + DNA第51頁，共67頁。慢乙肝的聯(lián)合治療第52頁，共67頁。胸腺肽1與拉米夫定聯(lián)合治療慢性乙型肝炎近期療效研究* p=0.3780 * p=0.3780# p=0.4000 # p=0.0012 p=

19、0.0344 p=0.0119中山醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院傳染科：林炳亮 黃桂梅 楊紹基等第53頁，共67頁。胸腺肽1與干擾素的持續(xù)反應率比較。本研究再次證實胸腺肽1停藥后的持續(xù)反應率增加。31484627胸腺肽1干擾素胸腺肽1治療e抗原陽性慢乙肝的中國報告停藥6個月后胸腺肽1持續(xù)應答率仍保持良好*You J. et al World J Gastroenterol.2006 Nov 7(41):6715-21第54頁，共67頁。小結內毒素炎性介質細菌感染肝細胞損傷T1微循環(huán)障礙第55頁，共67頁。胸腺肽1治療重癥肝炎的免疫調節(jié)研究 （黃自存等）N18 T1 1.6mg 隔天或 BIW1月2000

20、18001600140012001000 80030201000.1250.0268.911.28.823.818.721.781320041208治療前后有顯著差異，所有指標P0.01g/ml第56頁，共67頁。第57頁，共67頁。第58頁，共67頁。胸腺肽1聯(lián)合干擾素治療慢丙肝（薈萃分析）治療結束隨訪6月ALT復常RNA（-）ALT復常RNA( -）1.Rasi8/1511/155/156/152.Sherman13/3113/333.Moscarella12/175/174.Sherman*4/103/105.Rasi*4/64/63/63/66.徐道振*6/196/197/197/197.馬為民等6/106/108周大橋等14/2014/20匯總67/12857/11320/5716/40*對INF無應答或復發(fā)病人*不能耐受INF副作用者，單用T1，為期一年第59頁，共67頁。胸腺肽1適用于下列感染人群細菌引起的高熱持續(xù)不退病人免疫低下創(chuàng)口難愈病人有嚴重感染史者年老體弱的患者欲行重大手術者第60頁，共67頁。胸腺肽1增加巨噬細胞及中性粒細胞吞噬及殺菌能力取自無感染的小鼠支氣管肺泡巨噬細胞和外周中性細胞,預先用T1培養(yǎng),后暴露于孢子,測定吞噬能力和殺孢子能力*Thymosin and