苦楝皮化學(xué)成分及生物活性研究課件

1、苦楝皮化學(xué)成分及生物活性研究目錄致謝藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)研究化學(xué)成分研究研究進(jìn)展及立項(xiàng)依據(jù)苦楝皮簡介苦楝皮為楝科楝屬植物苦楝（Melia azedarach L.）的干燥根皮及樹皮，味苦，性寒，有毒 ，具有殺蟲、療癬等功效，常用于游風(fēng)熱毒、風(fēng)疹惡瘡等癥。苦楝在我國大部分地區(qū)均有分布。苦楝皮的研究進(jìn)展及立項(xiàng)依據(jù)研究進(jìn)展苦楝皮化學(xué)成分三萜（檸檬苦素類） 酚性化合物生物堿類 甾醇類苦楝皮藥理作用殺蟲抑菌抗腫瘤抗病毒鎮(zhèn)痛抗炎 立項(xiàng)依據(jù) 近年來，國內(nèi)外學(xué)者對苦楝的藥理活性做了大量的研究工作，而對其化學(xué)成分的研究并不完善，因此有必要對苦楝皮的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)的研究，為進(jìn)一步開發(fā)和利用提供幫助。 苦楝皮

2、中主要的活性成分為三萜類，尤以檸檬苦素類化合物生物活性最高。因此系統(tǒng)分離此類化合物并且初步研究此類化合物的藥理活性及其藥代動(dòng)力學(xué)規(guī)律。 目錄結(jié)論藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)研究化學(xué)成分研究研究進(jìn)展及立項(xiàng)依據(jù)苦楝皮化學(xué)成分研究提取分離提取分離流程圖化合物結(jié)構(gòu)一覽化合物結(jié)構(gòu)解析化合物XII結(jié)構(gòu)解析化合物II結(jié)構(gòu)解析提取分離流程圖Dried bark of Melia azedarach L.（40 kg）95%EtOH（2 h3 ）Whole ExtractSuspended in H2O, extracted fractionallyExtracted with petroleum ether Ex

3、tracted with CHCl3 Extracted with EtOAc Extracted with n-BuOHPetroleum ext.EtOAc ext.n-BuOH ext.CHCl3 ext.XIII XIV XV XVI 實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析，ODS柱層析，制備薄層和重結(jié)晶等技術(shù)，從苦楝皮中分離出16個(gè)化合物。 根據(jù)化合物的理化性質(zhì)，運(yùn)用IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR等波譜方法，并參考文獻(xiàn)報(bào)道的譜學(xué)數(shù)據(jù)，鑒定出16個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，其中1個(gè)化合物（紫色標(biāo)記）為屬內(nèi)首次分離，4個(gè)化合物(藍(lán)色標(biāo)記)首次從該植物中分離得到。小

4、結(jié)苦楝皮化學(xué)成分研究提取分離提取分離流程圖化合物結(jié)構(gòu)一覽化合物結(jié)構(gòu)解析化合物XII結(jié)構(gòu)解析化合物VII結(jié)構(gòu)解析 CH3(CH2)28COOH melissic acid fraxinellone kulactone methyl kulonate -sitosterol isosclerone dubione B kulinone azedarachol isotoosendanin succinic 5-(hydroxymethyl)-2-furaldehyde CH3(CH2)26CH2OH argyroside daucosterol kulonic acid 1-octacosanol

5、 苦楝皮化學(xué)成分研究提取分離提取分離流程圖化合物結(jié)構(gòu)一覽化合物結(jié)構(gòu)解析化合物IV結(jié)構(gòu)解析化合物II結(jié)構(gòu)解析白色粉末（石油醚-丙酮）mp: 104106ESI-MS(m/z)：485M+H+，507M+Na+（正離子檢測）；483M-H-（負(fù)離子檢測），分子量484。 化合物I結(jié)構(gòu)解析5.30 (1 H, dd, J = 3.21 Hz, 6.36 Hz)5.05 (1 H, m), 3.97 (1 H, dd, J = 5.87 Hz, J = 7.88 Hz) 2.75 (1 H )2.59 (1 H )放大 0.82 (3 H, s) 1.00 (3 H, s) 1.03 (3 H, s)

6、 1.11 (3 H, s) 1.26 (3 H, s) 1.57 (3 H, s) 1.67 (3 H, s) 1H-NMR譜1 3 7 16 17 20 24 25 2.75 (1 H, td, J = 5.53 Hz, 14.55 Hz, 14.54 Hz) 2.59 (1 H, td, J = 3.99 Hz, 10.42 Hz, 10.45 Hz) 1H-NMR譜 144.7, 132.4 , 123.4 , 118.5 177.6 216.5 13C-NMR譜8個(gè)CH2基團(tuán) 7個(gè)CH基團(tuán) DEPT譜 51.6 3.70 (s) 177.6 COOCH3 HSQC譜methyl ku

7、lonate 分子式：C31H48O4 白色針狀結(jié)晶（石油醚-丙酮）mp: 107110ESI-MS(m/z)：4872M+Na+，233M+H+（正離子檢測）；231M-H-（負(fù)離子檢測），分子量232。 化合物II結(jié)構(gòu)解析7.47(s) 7.44(s) 6.35 (d,J=0.7Hz) 2.13(s) 0.86(s) 兩個(gè)甲基4.88(s) 連氧的基團(tuán) 放大 1H-NMR譜8 9 11 12 20 21 22 23 14 15 1.45(1H,td,J=2.9Hz,11.9Hz) 2.28(1H,dd,J=19.8Hz,6.6Hz) 1.731.89 (m) 1H-NMR譜143.4, 1

8、39.8, 120.6, 108.6 148.6,127.4169.913C-NMR譜fraxinellone分子式：C14H16O3 目錄結(jié)論藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)研究化學(xué)成分研究研究進(jìn)展及立項(xiàng)依據(jù)六種樣品對體外腫瘤傳代細(xì)胞株細(xì)胞毒作用的試驗(yàn)觀察 觀察六種樣品對體外腫瘤傳代細(xì)胞株BEL7402（人肝癌）、 H460（人肺癌）、SGC-7901（人胃癌） 3種細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。組 別不同濃度樣品（g /ml）對細(xì)胞抑制率（%）IC50(g/ml）1001010.10.01苦楝皮萜酮57.153.244.921.716.18.57苦楝萜酸 甲酯45.744.144.16.7-2.822.41苦

9、楝萜酮 內(nèi)酯45.941.040.49.74.041.19 南嶺楝酮B46.746.146.020.714.022.58苦楝酸51.349.949.518.413.410.32異川楝素52.151.141.124.324.08.57CDDP73.772.871.964.941.00.037DMSO（0.8%）0-表1 6種樣品體外對BEL7402（人肝癌）的細(xì)胞毒作用(n=3)組 別不同濃度樣品（g /ml）對細(xì)胞抑制率（%）IC50(g /ml)1001010.10.01苦楝皮萜酮58.345.945.737.25.46.29苦楝萜酸甲酯51.241.938.433.710.727.98苦楝

10、萜酮內(nèi)酯47.147.040.037.913.319.12南嶺楝酮B36.133.532.226.63.6-苦楝酸61.039.136.418.511.721.4異川楝素59.952.548.337.9-8.44.1CDDP74.868.864.553.853.80.01DMSO(0.8%)0-表2 6種樣品體外對H460（人肺癌）的細(xì)胞毒作用(n=3)組 別不同濃度樣品（g /ml）對細(xì)胞抑制率（%）IC50(g /ml)1001010.10.01苦楝皮萜酮62.140.139.137.737.26.08苦楝萜酸甲酯46.441.940.132.87.429.8苦楝萜酮內(nèi)酯36.530.82

11、9.220.711.5-南嶺楝酮B40.835.829.927.227.1-苦楝酸50.639.819.09.89.6-異川楝素59.357.038.925.94.39.25CDDP80.666.965.157.721.60.28DMSO（0.8%）0-表3 6種樣品體外對SGC-7901（人胃癌）的細(xì)胞毒作用(n=3) 通過得到的抑制率及IC50，可以看出6種樣品中，苦楝皮萜酮和異川楝素分別對人胃癌SGC7901、人肺癌H460和人肝癌BEL7402細(xì)胞株均有一定細(xì)胞毒作用?？嚅扑峒柞ァ⒖嚅仆獌?nèi)酯、南嶺楝酮B、和苦楝酸對3種細(xì)胞有抑制生長作用。結(jié)論 目錄結(jié)論藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)研究化

12、學(xué)成分研究研究進(jìn)展及立項(xiàng)依據(jù) 中藥藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究對闡明和揭示中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制，設(shè)計(jì)及優(yōu)選中藥給藥方案，促進(jìn)中藥新藥研發(fā)、劑型改進(jìn)及質(zhì)量控制，均具有重要意義 。 基于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（LC/MS/MS）的特點(diǎn)和實(shí)際應(yīng)用的需要，擬進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)研究：分別建立測定大鼠血漿中的苦楝萜酸甲酯和異川楝素的的快速、靈敏的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，對兩種化合物在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了初步研究。 健康SD-雄性大鼠，6只 禁食12 h自由飲水灌胃給藥 眼球后隱靜脈叢取血LC/MSn測定血藥濃度離心，分離血漿不同時(shí)間點(diǎn)采血方法學(xué)確證專屬性標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍方法精密度與準(zhǔn)確度提取回收率樣品穩(wěn)定性注：以上LLOQ均表示濃度低于定量下限單劑量灌胃給藥苦楝