食品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)PPt（PPT56頁)

1、 農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)1學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握速測(cè)卡法和分光光度法快速檢測(cè)食品中有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥的基本原理及基本技能；熟悉有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥的免疫分析檢測(cè)方法；了解熏蒸劑的檢測(cè)意義及方法。2農(nóng)藥概況：農(nóng)藥是指用于農(nóng)業(yè)、林業(yè)中各種藥劑的統(tǒng)稱。特點(diǎn)：高效、快速和使用簡(jiǎn)便 危害：本身的毒性危害 農(nóng)藥殘留所引起的食品安全問題 農(nóng)藥殘留所引起的抗藥性問題 農(nóng)藥殘留所引起的環(huán)境污染 按化學(xué)結(jié)構(gòu)分類：有機(jī)氯類 有機(jī)磷類 氨基甲酸酯類 擬除蟲菊酯類3農(nóng)藥檢測(cè)現(xiàn)狀：隨著食品中農(nóng)藥殘留最高限量標(biāo)準(zhǔn)不斷降低，檢測(cè)難度越來越大，對(duì)檢測(cè)技術(shù)的要求也越來越高。這就需要有相應(yīng)的檢測(cè)技術(shù)與之相匹配，尤其是快速檢測(cè)技術(shù)。與

2、日本嚴(yán)格的農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)相比，中國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)較少。農(nóng)殘檢查超標(biāo)前5名農(nóng)藥，中國(guó)都未作農(nóng)殘限量規(guī)定；與歐、美等都相差甚遠(yuǎn)，歐盟農(nóng)殘限量指標(biāo)28689個(gè)，美國(guó)農(nóng)殘限量指標(biāo)7400個(gè)。因此，必須適應(yīng)國(guó)際新形勢(shì)，制定合理的殘留新標(biāo)準(zhǔn)。4常用農(nóng)藥的分類及性質(zhì)有機(jī)磷農(nóng)藥特點(diǎn)：藥效高、毒性大、易降解、廣譜，成為目前農(nóng)藥生產(chǎn)中噸位最大，也是世界上生產(chǎn)和使用最多的農(nóng)藥品種。 圖3-1 有機(jī)磷農(nóng)藥結(jié)構(gòu)通式有機(jī)磷農(nóng)藥是典型的酶毒劑，可以通過消化道、皮膚、粘膜、呼吸道吸收。毒理：對(duì)神經(jīng)突觸后膜上的乙酰膽堿酯酶活性的抑制，使酶不能催化乙酰膽堿水解，導(dǎo)致組織中乙酰膽堿過量蓄積。乙酰膽堿傳導(dǎo)介質(zhì)代謝紊亂，可導(dǎo)致遲發(fā)性神經(jīng)毒性

3、，引起運(yùn)動(dòng)失調(diào)、昏迷、呼吸中樞麻痹、癱瘓甚至死亡。5常用農(nóng)藥的分類及性質(zhì)氨基甲酸酯類農(nóng)藥(NMCs)是繼有機(jī)磷之后出現(xiàn)的一類農(nóng)藥。NMCs的結(jié)構(gòu)特性是含有一個(gè)N-甲基基團(tuán)，為白色晶體，難溶于水，易溶于丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙腈等，堿性和高溫條件下很易被水解。具有殺蟲效力強(qiáng)、作用迅速等特點(diǎn)。它的最大優(yōu)點(diǎn)是在植物中只短暫停留，施用后很短的時(shí)間內(nèi)就可被降解成相應(yīng)的代謝產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物通常具有與母體化合物相同或更強(qiáng)的活性。20世紀(jì)70年代以來，由于有機(jī)氯農(nóng)藥受到禁用或限用，以及抗有機(jī)磷殺蟲劑的昆蟲品種日益增多，因而NMCs的用量逐年增加，這就使得NMCs的殘留情況倍受關(guān)注。6食品安全快速檢測(cè) 超臨界

4、萃?。⊿CFE）常用農(nóng)殘快檢方法1、酶抑制法 2、免疫分析法 3、生物傳感器法 要求：快速、靈敏、便捷意義：作為實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的輔助方法，對(duì)大量樣品加以定性篩選，以減少送實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)的壓力。7農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法：1、酶抑制法：利用農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶的抑制作用，加入特定的顯色劑，通過顏色深淺的變化確定是否有農(nóng)藥殘留或農(nóng)藥殘留相對(duì)量的快速檢測(cè)方法。特點(diǎn)：造價(jià)不高，試劑生產(chǎn)已成規(guī)模，穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)便、速度快，特別適宜現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)或?qū)Υ笈繕悠返暮Y查，目前普遍使用。關(guān)鍵：如何選擇酶源酶源： 來自動(dòng)物的膽堿酯酶 從植物中提取的植物酯酶8動(dòng)物酶原：超臨界萃取（SCFE）膽堿酯酶廣泛存在于動(dòng)物的組織中。目前主要集

5、中在動(dòng)物肝臟和血液，如豬肝，雞血等也有利用蚯蚓以及海洋魚類，甲殼類動(dòng)物的神經(jīng)組織、腦組織分離乙酰膽堿酯酶。1953年stedman等首先從馬血清中分離出乙酰膽堿酯酶9動(dòng)物酶原：從昆蟲提取，如：家蠅、麥二叉蚜、黃猩猩果蠅、煙草天蛾、光葉庫蚊、黃粉甲、美洲淤夜蛾、豆莢草盲蝽、馬鈴薯葉甲、騷擾角蠅及棉鈴蟲等。 超臨界萃取（SCFE）以從敏感家蠅中提取的乙酰膽堿酯酶效果最佳，研究表明，家蠅羽化后2-3天時(shí)其頭部的乙酰膽堿酯酶敏感性最高。 不足：保持期短，需冷凍低溫保存。10動(dòng)物酶原：超臨界萃取（SCFE）原理： 乙酰膽堿酯酶 乙酰膽堿 乙酸 + 膽堿 5，5-二硫代-雙-2-硝基苯甲酸 5，5-二硫代

6、-雙-2-硝基苯甲酸（黃色）在410 nm處有最大吸收，測(cè)定其在單位時(shí)間內(nèi)的生成量，即可測(cè)得乙酰膽堿酯酶的活性。通過測(cè)定乙酰膽堿酯酶(AChE)受抑制的程度來檢測(cè)有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥。11植物酶原：超臨界萃取（SCFE）植物酯酶特點(diǎn)：酶源豐富，提取和保存較為方便，只需以一定比例的水或緩沖液混合離心獲得的上清液即可作為粗酶液，并在-4保存即可。測(cè)量準(zhǔn)確度和精密度均不遜色 。原理： 植物酯酶乙酸萘酯 乙酸 + 萘酚 顯色劑固藍(lán)B 偶氮化合物（紫紅色）12酶抑制法 肉眼觀察法目視比色法速測(cè)卡法酸堿指示劑法酶片法試劑盒法檢測(cè)箱法pH計(jì)測(cè)量法分光光度法13農(nóng)藥殘留快檢方法：2、免疫分析法 ：高等動(dòng)物

7、都有免疫功能，當(dāng)細(xì)菌、病毒和有害物等病原入侵時(shí)，能產(chǎn)生抵御外來物的抗體，這就是動(dòng)物的免疫反應(yīng)。致病的外來物被稱為抗原。免疫是機(jī)體識(shí)別和排除進(jìn)入體內(nèi)的抗原性異物的保護(hù)性反應(yīng)。免疫反應(yīng)，即抗原抗體反應(yīng)，不僅發(fā)生在生物體內(nèi)，在體外亦能進(jìn)行，而且反應(yīng)是高度特異(即對(duì)特定結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥具選擇性)，高度靈敏(可達(dá)pg/kg-mg/kg水平)。 14超臨界萃?。⊿CFE）農(nóng)藥免疫分析始于1968年，Centeno E.R等人制備了抗滴滴涕和馬拉硫磷抗體，應(yīng)用放射免疫法測(cè)定。隨后Sernberger. L.等人先后開發(fā)出狄氏劑、艾氏劑、苯菌靈、百草枯等農(nóng)藥的免疫分析法。1981年，Ercegovich.R.等研制

8、出對(duì)硫磷及2,4滴和2,4,5涕的放射免疫分析法(RIA)分析方法，檢測(cè)限可達(dá)0.1g/kg。方法溯源：15超臨界萃取（SCFE）局限性：大部分農(nóng)藥的殘留量都可以使用氣相色譜法等測(cè)定，該法并未比氣相法更優(yōu)越人工合成抗原以及制備抗體的困難免疫分析技術(shù)未被普遍重視。方法溯源：免疫分析中的酶免疫分析法以其高度特異性和靈敏度，特別適合農(nóng)藥殘留分析，故在80年代得到了快速發(fā)展。16超臨界萃?。⊿CFE）酶聯(lián)免疫具有專一性強(qiáng)、靈敏度高、快速、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，試劑盒可廣泛用于現(xiàn)場(chǎng)樣品和大量樣品的快速檢測(cè)，可準(zhǔn)確定性、定量。方法溯源：但由于受到農(nóng)藥種類多，抗體制備難度大、在不能肯定樣本中的農(nóng)藥殘留種類時(shí)檢測(cè)有

9、一定的盲目性以及抗體依賴國(guó)外進(jìn)口等影響，酶聯(lián)免疫法的應(yīng)用范圍受到較大的限制 。17超臨界萃?。⊿CFE）目前國(guó)外已研制出幾十種農(nóng)藥的酶聯(lián)免疫試劑盒，對(duì)于免疫分析技術(shù)在農(nóng)藥快速檢測(cè)中的應(yīng)用研究十分活躍，包括有機(jī)磷類、擬除蟲菊酯類、有機(jī)氯類、三嗪類、氨基甲酸酯類等。某些有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)限可達(dá)到ng甚至pg級(jí)，一些試劑盒已經(jīng)商品化，廣泛用于現(xiàn)場(chǎng)樣品和大量樣品的快速監(jiān)測(cè)。農(nóng)藥的酶聯(lián)免疫試劑盒介紹：目前用于現(xiàn)場(chǎng)快速篩選的有酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA試劑盒) 和有機(jī)磷農(nóng)藥免疫膠體金快速檢測(cè)試劑板。 183 生物傳感器法原理：對(duì)特定種類化學(xué)物質(zhì)或生物活性物質(zhì)具有選擇性和可反應(yīng)的分析裝置。 傳感器中 復(fù)雜

10、樣品中 + 識(shí)別反應(yīng) 如：酶與底物、 如：光熱、 抗體與抗原、 聲音、 （如：光敏管壓電裝置） 外源凝集素與糖、 顏色、 光極光敏電阻、 核酸與互補(bǔ)片段、 電化學(xué) 離子選擇性電極 顯示或記錄特定的目標(biāo)分析物 物理化學(xué)信號(hào)生物敏感層 轉(zhuǎn)化器轉(zhuǎn)換成第二信號(hào)(通常為電信號(hào))放大19生物傳感器分類：優(yōu)點(diǎn)：測(cè)定方法多樣化、提高測(cè)量靈敏度、縮短反應(yīng)時(shí)間、提高儀器自動(dòng)化程度和適應(yīng)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè) 超臨界萃?。⊿CFE） 生物傳感器（根據(jù)信號(hào)轉(zhuǎn)換器不同）分為：光學(xué)傳感器電化學(xué)傳感器測(cè)熱型傳感器半導(dǎo)體傳感器20電化學(xué)生物傳感器以電化學(xué)電極為信號(hào)轉(zhuǎn)換器，和酶、微生物、動(dòng)植物組織等其他生物識(shí)別元件結(jié)合組成。 傳感器中 復(fù)雜

11、樣品中 + 酶促反應(yīng) 顯示或記錄特定的目標(biāo)分析物 電活性物質(zhì)（化學(xué)信號(hào)）酶電極 電極電信號(hào)放大21光學(xué)生物傳感器主要由光纖和生物敏感膜組成。 傳感器中 復(fù)雜樣品中 + 分子識(shí)別 顯示或記錄待測(cè)組分 生物量（生物學(xué)信號(hào)）敏感膜中生物活性成分 換能反應(yīng)光信號(hào)（熒光、磷光等）放大22其他生物傳感器超臨界萃?。⊿CFE）農(nóng)藥殘留檢測(cè)的還有電晶體、半導(dǎo)體生物傳感器等。 壓電石英晶體傳感器利用石英晶體對(duì)質(zhì)量變化的敏感性，結(jié)合生物識(shí)別系統(tǒng)(抗原抗體特異性結(jié)合)而形成一種自動(dòng)化分析檢測(cè)系統(tǒng)。具有靈敏度高、特異性好、響應(yīng)快、小型簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，可對(duì)多種抗原或抗體進(jìn)行實(shí)時(shí)快速、在線連續(xù)的定量測(cè)定及反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究，克服

12、了ELISA、RIA、熒光免疫分析法(FIA)等免疫檢測(cè)方法費(fèi)時(shí)、昂貴、標(biāo)記及操作繁瑣的缺點(diǎn)，具有極廣泛的發(fā)展前景 石英晶體微量天平(QCM)半導(dǎo)體生物傳感器，檢測(cè)到低于1mg/L的西維因和敵敵畏。23實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)方法色譜法熒光光譜法氣相色譜法（GC)紫外-可見分光光度法紅外光譜法毛細(xì)管電泳（CE）光譜法實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)高效液相色譜法（HPLC)薄層色譜法（TLC）色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法24農(nóng)藥快速檢測(cè)技術(shù)的現(xiàn)狀：超臨界萃?。⊿CFE）各種不同儀器技術(shù)的應(yīng)用，大大提高了農(nóng)藥殘留檢測(cè)能力和檢測(cè)的靈敏度、檢測(cè)限和檢測(cè)覆蓋范圍 采用現(xiàn)場(chǎng)快速初篩檢測(cè)和實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證性檢測(cè)結(jié)合，對(duì)結(jié)果陽性的樣品用準(zhǔn)確、可靠的方法

13、進(jìn)行驗(yàn)證，可大大減少分析工作量，提高分析效率，有利于加強(qiáng)農(nóng)藥殘留監(jiān)控的力度。 25農(nóng)藥快速檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀：快速檢測(cè)方法在應(yīng)用過程中仍存在不少問題：如：1、酶抑制法容易出現(xiàn)假陽性、假陰性，2、植物內(nèi)含物對(duì)酶反應(yīng)干擾嚴(yán)重，3、不同批次酶的質(zhì)量、反應(yīng)溫度、處理時(shí)間等對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較大，導(dǎo)致檢測(cè)的專一性、可比性等下降；4、酶聯(lián)免疫法在分析過程中出現(xiàn)交叉反應(yīng)，導(dǎo)致檢測(cè)的可靠性和靈敏度降低，方法難以標(biāo)準(zhǔn)化；5、生物傳感測(cè)定存在選擇性不高 超臨界萃?。⊿CFE）263-1-1、酶抑制法1、速測(cè)卡法可單獨(dú)使用也可與便攜式農(nóng)藥殘留速測(cè)儀配套使用。原理：利用速測(cè)卡中的膽堿酯酶(白色藥片)可催化靛酚乙酸酯（紅色藥片）

14、水解為乙酸和靛酚(藍(lán)色），由于有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶的活性有強(qiáng)烈的抑制作用，因此，根據(jù)顯色的不同，即可判斷樣品中含有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留情況。樣品處理分為整體測(cè)定法（浸提法）和表面測(cè)定法（粗篩法） 超臨界萃取（SCFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢27便攜式農(nóng)藥殘留速測(cè)儀目的要求 對(duì)照儀器操作說明書，能夠熟練操作， 并能舉一反三應(yīng)用類似的快速檢測(cè)儀。檢測(cè)原理 便攜式農(nóng)藥殘留速測(cè)儀是根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T5009.199-2003速測(cè)卡法（紙片法）而專門設(shè)計(jì)的儀器。農(nóng)藥速測(cè)儀是利用速測(cè)卡中的膽堿酯酶（白色藥片）催化靛酚乙酸酯（紅色藥片）水解為乙酸和靛酚（藍(lán)色），

15、由于有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶的活性有強(qiáng)烈的抑制作用，因此，根據(jù)顯色的不同，即可判斷樣品中含有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留情況。器材： 便攜式農(nóng)藥殘留速測(cè)儀、配套農(nóng)藥殘留速測(cè)卡28操作步驟（P22-23)1、開機(jī) 2、裝片 3、取樣 4、測(cè)試29結(jié)果判定與空白對(duì)照卡比較陽性結(jié)果：白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色不變藍(lán)為強(qiáng)陽性結(jié)果農(nóng)藥殘留量較高淺藍(lán)色為弱陽性結(jié)果農(nóng)藥殘留量相對(duì)較低陰性結(jié)果：白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對(duì)照卡相同303-1-1、酶抑制法2、分光光度法原理：在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有抑制作用，抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正比。本法利用酶催化乙酰膽堿水解，水解產(chǎn)物與顯色

16、劑反應(yīng)生生黃色物質(zhì)，該物質(zhì)在412nm處有吸收，測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過抑制率可以判斷蔬菜中含有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的情況。 超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢313-1-2、分光光度法儀器：農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)儀， 電子天平， 移液槍及配套管嘴， 超聲波提取儀， 冰箱， 恒溫水浴。超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢323-1-2、分光光度法試劑：pH8.0緩沖溶液(提取液)：分別稱取11.9g無水磷酸氫二鉀和3.2g磷酸二氫鉀，溶解于1000mL 蒸餾水中。顯色劑：分別稱取160mg 二硫代二硝基苯甲酸(DTNB

17、)和15.6mg 碳酸氫鈉，溶解于20mL緩沖溶液中，4冰箱中保存。底物：稱取125mg 碘化硫代丁酰膽堿，溶解于15mL緩沖液中，搖勻后置4冰箱中保存?zhèn)溆?。保存期不超過兩周。丁(或乙)酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖液溶解，3min內(nèi)的吸光度變化控制在0.4-0.8。搖勻后置4冰箱中保存?zhèn)溆谩?超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢33步驟：樣品處理樣品擦去表面泥土剪成1cm見方碎片取樣品1g，(非葉菜類取2g) 加入10mL緩沖溶液手搖振蕩1-2min（或超聲波振蕩30s）靜置3-5min，待用。對(duì)照溶液測(cè)試試管中加入100L酶液100L顯色劑加入2.5mL緩沖

18、溶液搖勻于37放置10min加入100L底物搖勻（反應(yīng)并顯色）要立即放入比色池記錄反應(yīng)3min時(shí)的吸光值A(chǔ)0。超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢34樣品溶液測(cè)試試管中加入100L酶液和100L顯色劑，再加入2.5mL樣品提取液，其它操作與對(duì)照溶液測(cè)試相同，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值A(chǔ)t。結(jié)果計(jì)算及判定結(jié)果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。抑制率(%)= (A0-At)/ A0100 當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上確定結(jié)果。同時(shí)可在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。超臨界萃?。⊿CFE）模

19、塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢35注意事項(xiàng)：1、靈敏度高于速測(cè)卡法?，F(xiàn)在市場(chǎng)上使用的該類儀器品種各式各樣，有4通道、5通道、8通道、12通道的，大多是由分光光度計(jì)在結(jié)果計(jì)算功能上進(jìn)行改進(jìn)的專用農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)儀。該類儀器使用簡(jiǎn)單方便，直接顯現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果，配有數(shù)據(jù)管理軟件，檢測(cè)數(shù)據(jù)可上傳，是目前省市一級(jí)對(duì)農(nóng)藥殘留監(jiān)督和縣區(qū)一級(jí)日常檢測(cè)的主要儀器。2、一個(gè)合格的試劑來說，它應(yīng)適合于任意一款的檢測(cè)儀器超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢363、試劑質(zhì)量判別法：取玻璃試管，按試劑的加入順序和加入量，加入底物，立刻觀察溶液顏色變化情況。超臨界萃取（SCFE）模塊3-1 有

20、機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢 現(xiàn)象 判別結(jié)果立刻變黃，無漸變過程底物已分解，不能再用一直都沒變化酶已失效逐漸變黃試劑基本正常37注意事項(xiàng)：具體是否能用，需待使用儀器測(cè)其空白樣的活性才能確定。一般空白樣3 min的變化值為0.4-0.8較為合適。如果空白差值小于0.2，最好不用?？瞻撞钪翟?.20.4，說明酶的活性較低，應(yīng)當(dāng)適當(dāng)加大酶的用量，加大到200L，將空白差值調(diào)到0.40.6之間。同時(shí)有條件的可使用酶標(biāo)儀來測(cè)定酶的活性，結(jié)果更準(zhǔn)確。超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢38注意事項(xiàng)：試劑的配制和保存：酶和底物的粉劑必須存放在冰箱的冷凍室(約-18)溶解后的酶溶液如暫

21、時(shí)不用，要放在冷凍室內(nèi)保存，用后的酶液放在冷藏室(05內(nèi))，7d內(nèi)用完酶液做好不要反復(fù)冷凍，最多不超過2次，否則會(huì)影響酶的活性顯色劑和底物液均保存在冷藏室(05)內(nèi)提取液在常溫下保存。超臨界萃取（SCFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢39注意事項(xiàng)：葉菜類去爛葉、枯葉，并切成寬度為1cm左右的試樣。塊太大可能導(dǎo)致提取不完全，太小某些有顏色汁液會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果；豆類、塊莖類取果皮至果肉1cm左右處的表皮試樣；蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇及番茄汁液中含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，處理這類樣品時(shí)，可采取整株(體)浸提，避免次生物質(zhì)干擾；含葉綠素較高的蔬菜也可采取整株蔬菜浸提的方法以減

22、少色素的干擾。檢測(cè)前的樣品在稱量前不能水洗，若沾有泥土或水，可用干凈的毛巾擦干凈。超臨界萃取（SCFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢40注意事項(xiàng)：測(cè)試用的樣品浸泡液盡量澄清。 措施：靜置幾分鐘再吸取 用中速(或低速)的濾紙過濾酶抑制的溫度和時(shí)間對(duì)酶的活性影響較大。乙酰膽堿脂酶抑制溫度2535，時(shí)間20min，丁酰膽堿脂酶抑制溫度3738，時(shí)間30min。在氣溫高時(shí)可縮短培養(yǎng)時(shí)間、降低培養(yǎng)溫度、快速檢測(cè)儀預(yù)熱的時(shí)間不要太長(zhǎng)等方式來增加檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢41注意事項(xiàng)：本實(shí)驗(yàn)用水均為蒸餾水或去離子水。每批樣品的控制時(shí)間、溫度條

23、件必須與對(duì)照溶液的條件完全一致。如果吸光度趨于無窮大時(shí)，說明測(cè)定液渾濁有干擾。超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢42注意事項(xiàng)：假陽性和假陰性。假陽性是由于酶活性降低或失活，導(dǎo)致其在底物中不起作用，底物不能被水解，無法與顯色劑結(jié)合顯色，造成提取液中的農(nóng)藥抑制了酶的活性的假象；假陰性是因?yàn)槟撤N農(nóng)藥對(duì)某種酶抑制作用很小或無作用而產(chǎn)生的，表現(xiàn)出無農(nóng)藥的假象。除此，在反應(yīng)過程中化學(xué)干擾都有可能導(dǎo)致假陽性、假陰性現(xiàn)象的發(fā)生。檢測(cè)中只能通過選擇有較好活性、較強(qiáng)敏感性的酶來盡量減少此類問題的出現(xiàn)。超臨界萃取（SCFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢43注意事項(xiàng)：抑制率出現(xiàn)

24、低于-10%的結(jié)果，主要是操作中存在系統(tǒng)誤差、操作不熟練、加入底物后沒有搖勻、水純度不夠等因素造成。同樣，當(dāng)檢測(cè)結(jié)果與空白值接近時(shí)，只能說明樣品中有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留低于方法檢測(cè)限，不能判定為不含有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥；也不能判定該樣品中其它種類農(nóng)藥殘留不超標(biāo)。超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢44超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢免疫膠體金檢測(cè)法45結(jié)果判定陰性：T線比C線深或一樣深，表示樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥濃度低于試劑板檢出限或不含農(nóng)藥殘留。陽性：T線比C線淺，或T線無顯色，表示樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥濃度高于試劑板檢出限；T線相比C線

25、越淺，表示有機(jī)磷農(nóng)藥濃度越高。無效：未出現(xiàn)C線，表明不正確的操作過程或試劑板已變質(zhì)失效。判定為無效。在此情況下，應(yīng)用新的試劑板重新測(cè)試。 超臨界萃取（SCFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢46注意事項(xiàng)：盡量不要觸摸試劑板中央的白色膜面。請(qǐng)勿使用過期的試劑板。原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于430，陰涼避光干燥處，切勿冷凍。超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-1 有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥快檢47溴甲烷的測(cè)定 適用范圍：糧谷類中溴甲烷熏蒸劑殘留量的測(cè)定。檢測(cè)原理： 溴甲烷隨水蒸氣整出后被氫氧化鉀-醇溶液吸收，經(jīng)酸化后與過量硝酸銀作用，剩余硝酸銀與硫氰酸銨作用，生成紅色混合物，顏色的深淺與樣品中溴甲烷成比例，從

26、而可以求出溴甲烷的含量。 超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-2 熏蒸劑的快速檢測(cè)48主要儀器 水蒸汽蒸餾裝置、比色管。試劑6moL/L硝酸5% 氫氧化鉀-乙醇溶液0.010moL/L硝酸銀溶液0.010moL/L硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液硫酸鐵銨指示劑：稱取8g 硫酸鐵銨溶于100mL水中溴甲烷標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取溴化鈉0.1084g，溶于100mL水中。此溶液每毫升相當(dāng)于1mg溴甲烷。超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-2 熏蒸劑的快速檢測(cè)49操作步驟樣品預(yù)處理稱取樣品100g，置于圓底燒瓶中，接水蒸氣蒸餾裝置進(jìn)行水蒸氣蒸餾；餾出液用盛裝20mL 5%氫氧化鉀-乙醇溶液的100mL容量瓶接收，餾出液體積達(dá)到90mL時(shí)停止蒸餾；加入6mol/L 硝酸5mL使溶液呈酸性，加水至刻度，搖勻。超臨界萃?。⊿CFE）模塊3-2 熏蒸劑的快速檢測(cè)5051標(biāo)準(zhǔn)曲線制作準(zhǔn)確吸取溴甲烷標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0