小菜生產(chǎn)廠(chǎng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)(共21頁(yè))

1、目錄(ml)TOC o 1-3 h u HYPERLINK l _Toc15881 一、總體設(shè)計(jì) 一、總體設(shè)計(jì) 1、實(shí)驗(yàn)室性質(zhì)(xngzh)本實(shí)驗(yàn)室主要用于感官檢驗(yàn)、理化檢驗(yàn)和微生物檢驗(yàn)。其中，微生物實(shí)驗(yàn)室包括(boku)了微生物檢驗(yàn)室、無(wú)菌操作室、培養(yǎng)基制作室；另外，為了節(jié)約實(shí)驗(yàn)室的建造成本，理化分析室除了做理化分析之外還可以兼作為感官分析室。建設(shè)(jinsh)規(guī)模本實(shí)驗(yàn)室用于檢測(cè)小菜的各項(xiàng)微生物及理化指標(biāo)，為小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室。投資經(jīng)費(fèi)預(yù)計(jì)控制在12萬(wàn)元以?xún)?nèi)。3、面積實(shí)驗(yàn)室總面積為60 m2。其中：微生物檢驗(yàn)室：20m2 無(wú)菌室面積：13m2理化分析室：20m2辦公室：7m24、項(xiàng)目4.1感官評(píng)

2、定品種形狀；氣味、滋味；不完善粒、雜質(zhì)；畸形粒4.2理化實(shí)驗(yàn)4.2.1水分 按GB/T 5497規(guī)定執(zhí)行4.2.2酸價(jià) 按GB/T 5009.37規(guī)定執(zhí)行4.2.3過(guò)氧化值 按GB/T 5009.37規(guī)定執(zhí)行4.2.4羰基價(jià) 按GB/T 5009.37規(guī)定執(zhí)行4.2.5涕滅威、克百威 按GB/T 5009.104規(guī)定執(zhí)行4.2.6 敵敵畏、樂(lè)果、對(duì)硫磷 按GB/T 5009.20規(guī)定執(zhí)行4.2.7黃曲霉毒素B1 按GB/T 5009.22規(guī)定執(zhí)行4.3微生物實(shí)驗(yàn)(shyn)4.3.1菌落總數(shù) 按GB/T 4789.2規(guī)定(gudng)執(zhí)行4.3.2大腸菌群 按GB/T 4789.3規(guī)定(gud

3、ng)執(zhí)行4.3.3沙門(mén)氏菌按GB/T 4789.4規(guī)定執(zhí)行4.3.4志賀氏菌 按GB/T 4789.5規(guī)定執(zhí)行4.3.5金黃色葡萄球菌 按GB/T 4789.10規(guī)定執(zhí)行5、試驗(yàn)臺(tái)、櫥柜項(xiàng)目名稱(chēng)尺寸（長(zhǎng)*寬*高）/mm數(shù)量試驗(yàn)臺(tái)操作臺(tái)119008007801操作臺(tái)221508007801臺(tái)面1400600 7801辦公桌19008007801櫥柜文件柜9004006001藥品櫥900400160026、水龍頭和清洗池名稱(chēng)尺寸mm數(shù)量三聯(lián)化驗(yàn)水龍頭2602206503清洗池40030030037、電器和照明序號(hào)名稱(chēng)規(guī)格型號(hào)數(shù)量1照明燈11001005072電話(huà)中諾C16813網(wǎng)絡(luò)插口四通86雙

4、孔14插座二三級(jí)85開(kāi)關(guān)兩開(kāi)86紫外燈27通風(fēng)櫥120050075018超凈工作臺(tái)220075060018、空調(diào)(kn dio)、風(fēng)扇序號(hào)名稱(chēng)型號(hào)數(shù)量品牌價(jià)格1空調(diào)KFR-26GW2格力54002風(fēng)扇FC1054美的3689、電容量根據(jù)設(shè)計(jì)(shj)的實(shí)驗(yàn)室所用的所有設(shè)備的總功率估計(jì)實(shí)驗(yàn)室用電總?cè)萘繛?KW。10、實(shí)驗(yàn)室管理制度10.1實(shí)驗(yàn)室基本(jbn)要求10.1.1理化實(shí)驗(yàn)室工作一般要求實(shí)驗(yàn)室每一位檢驗(yàn)分析工作者都應(yīng)該有嚴(yán)肅認(rèn)真的工作態(tài)度，做到工作應(yīng)有計(jì)劃，作好必須的準(zhǔn)備，有條不紊地進(jìn)行。要養(yǎng)成精密細(xì)致的觀(guān)察、操作和整齊、清潔的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。工作前要打掃實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生。工作前、后洗手，以避免造成

5、沾污實(shí)驗(yàn)儀器和試劑、樣品，引進(jìn)實(shí)驗(yàn)誤差，防止有毒有害物質(zhì)沾染人體，感染或傳染疾患。實(shí)驗(yàn)儀器應(yīng)放置整齊，實(shí)驗(yàn)臺(tái)面及地面應(yīng)經(jīng)常保持干燥、清潔，不得向地上甩水，實(shí)驗(yàn)告一段落應(yīng)及時(shí)進(jìn)行整理。火柴頭、碎濾紙等物應(yīng)放在專(zhuān)設(shè)的廢物箱內(nèi)，不得隨地亂扔或倒入下水道，對(duì)可造成環(huán)境污染的廢品、廢液(包括有毒、有害、易燃)等物品應(yīng)專(zhuān)門(mén)的收集和處理。實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)記在專(zhuān)門(mén)的本子上，記錄要求：真實(shí)、及時(shí)、齊全、清楚、整潔、規(guī)格化。應(yīng)該用鋼筆或圓珠筆記錄，如有記錯(cuò)應(yīng)將原字劃掉，在旁邊重寫(xiě)清楚，不得涂改，刀刮、補(bǔ)貼。實(shí)驗(yàn)記錄及結(jié)果報(bào)告單應(yīng)根據(jù)本單位規(guī)定保留一定時(shí)間，以備查考。10.1.1微生物實(shí)驗(yàn)室工作一般要求 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)

6、和其他檢驗(yàn)不同，檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)對(duì)象大部分為致病性微生物，同時(shí)，用于微生物檢驗(yàn)的用品很多屬于易燃物，所以要求每個(gè)檢驗(yàn)員、實(shí)驗(yàn)室管理員應(yīng)在保證安全的前提下做好檢驗(yàn)工作，以下按照微生物實(shí)驗(yàn)室的特殊要求，一般要求如下：(1) 進(jìn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿工作服，離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室時(shí)脫去放在指定的處所，工作服應(yīng)經(jīng)常洗滌，保持潔凈。(2) 非檢驗(yàn)必要物品不要帶入實(shí)驗(yàn)室，必要的用品帶入后，必須遠(yuǎn)離試驗(yàn)臺(tái)。(3) 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持肅靜，不得高聲談笑，以利集中精力完成實(shí)驗(yàn)操作。不得在實(shí)驗(yàn)室吸煙、飲酒、飲食等。不要以身體任何部位直接接觸試樣，或在實(shí)驗(yàn)中以手撫摸頭面等部位，以免污染。(4) 如有傳染性物品污染桌面或地面，應(yīng)立即用3來(lái)蘇溶液或5石炭

7、酸溶液傾覆(qngf)其上，半小時(shí)后始可抹去：如有傳染物污染工作服，應(yīng)立即將工作服脫去，以高壓蒸汽法滅菌。(5) 如有傳染物污染手部，應(yīng)立即將手浸于3來(lái)蘇溶液(rngy)內(nèi)。經(jīng)5 min-10 min；再以肥皂及水刷洗干凈。如有傳染物被吸入口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，并以大量清水漱口；根據(jù)需要亦可服用有關(guān)藥物以預(yù)防發(fā)生傳染。10.2儀器(yq)的管理10.2.1精密儀器的管理（1）精密儀器應(yīng)按其性質(zhì)、靈敏度要求以及精密程度，固定房間及位置。精密儀器室與化學(xué)處理室隔開(kāi)，以防腐蝕性氣體及水汽對(duì)儀器的腐蝕；烘箱、高溫爐應(yīng)放置在不燃的水泥臺(tái)或堅(jiān)固的鐵架上；天平及其它精密儀器應(yīng)放在防震、防曬、防潮、防腐蝕的房間內(nèi)

8、，并罩上棉布制的儀器罩。小件儀器用完應(yīng)收藏在儀器柜中。（2）對(duì)精密儀器應(yīng)建立技術(shù)檔案。技術(shù)資料包括：說(shuō)明書(shū)、裝箱單、安裝調(diào)試驗(yàn)收記錄、檢修記錄等。精密儀器必須由專(zhuān)人操作，并上崗操作，每使用一次要進(jìn)行登記簽名。對(duì)某種儀器沒(méi)有使用過(guò)的人員，應(yīng)進(jìn)行培訓(xùn)后才能操作。（3） 精密儀器的購(gòu)置、拆箱、驗(yàn)收、安裝、調(diào)試都應(yīng)由專(zhuān)人負(fù)責(zé)，未經(jīng)批準(zhǔn)不得任意拆卸。10.2.2玻璃儀器的管理玻璃儀器應(yīng)建立領(lǐng)用、破損登記制度。所用的容量?jī)x器應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)。10.3化學(xué)藥品及危險(xiǎn)品管理10.3.1化學(xué)藥品的儲(chǔ)存及管理（1）較大量的化學(xué)藥品應(yīng)放在藥品儲(chǔ)藏室中。儲(chǔ)藏室應(yīng)是朝北的房間，以避免陽(yáng)光照射，室溫過(guò)高致使試劑變質(zhì)。內(nèi)應(yīng)干燥通

9、風(fēng)，嚴(yán)禁明火。試劑應(yīng)分類(lèi)存放，并分類(lèi)造冊(cè)以便查找。10.4安全管理保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員的安全和健康，防止環(huán)境污染，保證實(shí)驗(yàn)室工作安全而有效的進(jìn)行是實(shí)驗(yàn)室管理工作的重要內(nèi)容。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室工作的特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)室安全包括：基本安全操作、防火、防爆、防毒，安全用電，保證壓力容器和氣瓶的安全、防止環(huán)境污染等方面。10.4.1滅火一旦發(fā)生火災(zāi)，要臨危不懼，冷靜沉著，及時(shí)采取滅火措施。若局部起火，應(yīng)立即切斷電，并關(guān)閉燃?xì)忾y門(mén)，用濕抹布或石棉覆蓋熄火。若火勢(shì)較猛，應(yīng)根據(jù)具體情況，選用適當(dāng)?shù)臏缁鸱椒ㄟM(jìn)行滅火，并立即與有關(guān)部門(mén)聯(lián)系，請(qǐng)求救援。根據(jù)燃燒物的性質(zhì)，國(guó)際上統(tǒng)一將火災(zāi)分為A，B，C，D四類(lèi)。A類(lèi)火災(zāi)是指木材、紙張和棉花

10、等物質(zhì)的著火，最經(jīng)濟(jì)的滅火劑是水，另外可用酸堿式和泡沫式滅火劑。B類(lèi)火災(zāi)(huzi)是指可燃性液體著火，如石油化工產(chǎn)品，食用油脂等。撲滅此類(lèi)火災(zāi)可用泡沫式滅火機(jī)，二氧化碳滅火機(jī)，干粉滅火機(jī)和“1211”滅火機(jī)C類(lèi)火災(zāi)是指可燃性氣體著火(zho hu)，如城市煤氣，石油液化氣等。撲滅這類(lèi)火災(zāi)可用“121l”滅火機(jī)和干粉(gnfn)滅火機(jī)。D類(lèi)火災(zāi)是指可燃性金屬著火，如鉀、鈉、鈣、鎂等。撲滅D類(lèi)火災(zāi)最經(jīng)濟(jì)有效的方法是用于砂覆蓋。二、設(shè)備清單1、儀器設(shè)備清單序號(hào)名 稱(chēng)型號(hào)臺(tái)數(shù)廠(chǎng)家價(jià)格1電熱恒溫箱CK-7201東莞市宏展儀器有限公司6500.002分析天平(1mg)JF10041濟(jì)南市中天組培園藝用品

11、有限公司2380.003天平(0.1g)TG-328A1長(zhǎng)江科學(xué)儀器廠(chǎng)（上海）525.004電動(dòng)粉粹機(jī)J271141杭州良友儀器廠(chǎng)700.005谷物選篩1上海豐行篩網(wǎng)制造有限公司320.006干燥器DGF20022B1重慶銀河試驗(yàn)儀器公司5650.007分光光度計(jì)UN751-CD1上海分析儀器總廠(chǎng)17000.08電爐GH-121廈門(mén)高航電器有限公司800.009數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-41常州國(guó)華800.010冰箱（無(wú)氟）BCD-210/HC1廣東科龍2382.011恒溫振蕩機(jī)SHA-C1常州國(guó)華4980.012氣相色譜儀GC112A-21上海恒平2200013手提式高壓滅菌器1上海醫(yī)用儀器廠(chǎng)76

12、0.014電熱蒸餾水器上海醫(yī)療器械780.015精密pH酸度計(jì)PHS-3C1上海精科雷磁2398.016打印機(jī)HPPJ630C1中國(guó)惠普500.017掃描儀A6001清華紫光499.018宏基筆記本電腦TM-361-E1宏基電腦有限公司14500.019電腦微機(jī)云圖10001實(shí)達(dá)電腦4873.020顯微鏡XTZ-051上海天珠光學(xué)儀器廠(chǎng)2500總價(jià)格908472、玻璃儀器清單(qngdn)序號(hào)名稱(chēng)規(guī)格廠(chǎng)家價(jià)格個(gè)數(shù)總價(jià)1水銀溫度計(jì) 0-100其他3.0262自動(dòng)滴定管50ml其他18011803錐形瓶50 ml、100 ml、150 ml、200 ml北玻各3支39.64燒杯50ml、100 m

13、l、150 ml、250 ml、500ml、1000ml蜀玻各5個(gè)87.05刻度吸管0.1-0.5 ml、1-2 ml、5 ml、10 ml、15 ml20 ml北玻各2支69.26滴液漏斗60 ml、125 ml北玻各2個(gè)63.67容量瓶50ml、100ml、250 ml廣玻各10個(gè)209.08量筒5 ml-1000ml天玻各3支150.99容量瓶50ml、100ml、250 ml、500ml、1000ml廣玻各3個(gè)182.510試管10100、15100、15150、18180、20200、25200、30200北玻各8支49.911吸耳球大、中、小北京各5個(gè)3912膠頭滴管8*100mm

14、、8*150mm、8*200mm、8*250mm、8*300mm其他0.5各5個(gè)12.513玻璃棒其他1.610支1614具塞比色管25ml北玻5.25個(gè)2615試劑瓶廣口50ml-500ml、細(xì)口50ml-500ml廣口棕色50ml-500ml細(xì)口棕色50ml-500ml北玻6.55個(gè)182.016培養(yǎng)皿90mm、120mm其他5.3各20個(gè)212總價(jià)格487.5三、藥品(yopn)清單序號(hào)名稱(chēng)純度規(guī)格單價(jià)數(shù)量總價(jià)1無(wú)水乙醚分析純500mL122242乙醇（90%） 3分析純500mL9.6219.23氫氧化鉀 30.5 mol/L550mL12.01124碘化鉀分析純50ml18.0118

15、5三氯甲烷分析純10.01106冰乙酸分析純500mL10.01107硫代硫酸鈉分析純500mL6.516.58可溶性淀粉分析純500mL9.0199氫氧化鈉分析純500mL5.021010硫酸 分析純500mL25.525111硝酸 分析純1000ml5.021012過(guò)硫酸銨分析純500ml8.01813過(guò)氧化氫 30%50mL621214高氯酸分析純500mL8.01815鉛0.1mg/mL50mL35.013516石油醚分析純500mL10.011017無(wú)水硫酸鈉分析純500mL10.011018鹽酸分析純500ml30.013019胰蛋白胨分析純500g84.018420酵母浸膏分析純

16、500g45.014521葡萄糖分析純500g18.023622瓊脂粉BR250g50.0210023磷酸二氫鉀分析純500g15.023024氯化鈉分析純1000g4.52925月桂基硫酸鈉BR250g90.0218026煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯250g90.019027結(jié)晶紫BR250g80.01802810%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯250g70.0170297.5%氯化鈉肉湯250g50.015030血瓊脂平板10個(gè)/包40.014031Baird-Parker瓊脂平板10個(gè)/包100.0110032革蘭氏染色液試劑盒35.5135.533志賀氏菌增菌肉湯BR250g100.01100總

17、價(jià)格1342.2總體(zngt)平面布置圖1900mm試驗(yàn)臺(tái)正面示意圖柜櫥(guch)、實(shí)驗(yàn)臺(tái)正面、側(cè)面示意圖各一份800mm1900mm780mmmmmmmmm試驗(yàn)臺(tái)側(cè)面示意圖900mm400mm櫥柜側(cè)面示意圖1600mm櫥柜正面示意圖水管線(xiàn)路、水龍頭位置圖、照明燈、電話(huà)、網(wǎng)絡(luò)(wnglu)、電插座位置尺寸圖風(fēng)扇開(kāi)關(guān)七、說(shuō)明(shumng)水分(shufn)測(cè)定：105恒重法1.1 定溫：使烘箱中溫度計(jì)的水銀球距離烘網(wǎng)2.5cm左右(zuyu)，調(diào)節(jié)烘箱溫度定在1052。1.2 烘干鋁盒：取干凈的空鋁盒，放在烘箱內(nèi)溫度計(jì)水銀球下方烘網(wǎng)上，烘30min至1 h取出，置于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，取出

18、稱(chēng)重，再烘30min，烘至前后兩次重量差不超過(guò)0.005g，即為恒重。1.3 稱(chēng)取試樣：用烘至恒重的鋁盒(W0)稱(chēng)取試樣約3g(W1，準(zhǔn)確至0.001g)。1.4 烘干試樣：將鋁盒蓋套在盒底上，放入烘箱內(nèi)溫度計(jì)周?chē)暮婢W(wǎng)上，在105溫度下烘3h（油料烘90rnin）后取出鋁盒，加蓋，置于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，取出稱(chēng)重后，再按以上方法進(jìn)行復(fù)烘，每隔30 min取出冷卻稱(chēng)重一次，烘至前后兩次重量差不超過(guò)0.005g為止。如后一次重量高于前一次重量，以前一次重量計(jì)算(W2)。酸價(jià)稱(chēng)取3.00 g5. 00 g混勻的試樣，置于錐形瓶中，加入50 mL中性乙醚-乙醇混合液，振搖使油溶解，必要時(shí)可置熱水中，

19、溫?zé)岽倨淙芙?。冷至室溫，加入酚酞指示?滴3滴，以氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(0.050 mol/L)滴定，至初現(xiàn)微紅色，且0.5 min內(nèi)不褪色為終點(diǎn)。過(guò)氧化值：滴定法稱(chēng)取2. 00 g3. 00 g混勻（必要時(shí)過(guò)濾）的試樣，置于250 mL碘瓶中，加30 mL三氯甲烷-冰乙酸混合液，使試樣完全溶解。加入1.00mL飽和碘化鉀溶液，緊密塞好瓶蓋，并輕輕振搖0.5 min，然后在暗處放置3 min。取出加100 mL加1mL淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失為終點(diǎn)，取相同量三氯甲烷-冰乙酸溶液、碘化鉀溶液、水，按同一方法，做試劑空白試驗(yàn)。羰基價(jià)精密稱(chēng)取約0. 025 g0.5 g試樣，置于25 mL容量

20、瓶中，加苯溶解試樣并稀釋至刻度。吸取5.0 ml，置于25 mL具塞試管中，加3 mL三氯乙酸溶液及5 mL2,4-二硝基苯肼溶液，仔細(xì)振搖混勻，在60水浴中加熱30 min，冷卻后，沿試管壁慢慢加入10 mL氫氧化鉀-乙醇溶液，使成為二液層，塞好，劇烈振搖混勻，放置10 min。以l cm比色杯，用試劑空白凋節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)440 nm處測(cè)吸光度。涕滅威、克百威5.1 提取(tq)稱(chēng)取約40 g試樣，精確至0.001 g，置于250 ml.具塞錐形瓶中，加入20 g40 g無(wú)水硫酸鈉（視試樣的水分而定）、100 mL無(wú)水甲醇(ji chn)。塞緊，搖勻，于電動(dòng)振蕩器上振蕩30 min。然后經(jīng)快

21、速濾紙過(guò)濾于量筒中，收集50 mL濾液，轉(zhuǎn)入250 ml分液漏斗中，用50 mL 50 g/l氯化鈉溶液洗滌量筒，并人分液漏斗中。5.2凈化(jnghu)于盛有試樣提取液的250 mL分渡漏斗中加入50 mL石油醚，振蕩1 miri靜置分層后將下層（甲醇氯化鈉溶液）放人第二個(gè)250 mL分液漏斗中，加25 mL甲醇一氯化鈉溶液于石油醚層中，振搖30 s，靜置分層后，將下層并人甲醇一氯化鈉溶液中。5.3濃縮于盛有試樣凈化液的分液漏斗中，用二氯甲烷(50，25，25 mL)依次提取三次，每次振搖1 min，靜置分層后將二氯甲烷層經(jīng)鋪有無(wú)水硫酸鈉（玻璃棉支撐）的漏斗（用二氯甲烷預(yù)洗過(guò)）過(guò)濾于250

22、ml.蒸餾瓶中，用少量二氯甲烷洗滌漏斗，并人蒸餾瓶中。將蒸餾瓶接上減壓濃縮裝置，于50水浴上減壓濃縮至l mL左右，取下蒸餾瓶，將殘余物轉(zhuǎn)入10 mL刻度離心管中，用二氯甲烷反復(fù)洗滌蒸餾瓶并人離心管中。然后吹氮?dú)獬M二氯甲烷溶劑，用丙酮溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?.0ml，供氣相色譜分析用。氯菊酯、氰戊菊酯6.1提取糧食試樣：稱(chēng)取10 g糧食試樣，置于100 mL具塞三角瓶中，加入20 mL石油醚，于振蕩器上振搖0.5 h。6.2凈化6.2.1層析柱的制備：玻璃層析柱中先加入1 cm高無(wú)水硫酸鈉，再加入5g5%水脫活弗羅里硅土，最后加入1 cm高無(wú)水硫酸鈉，輕輕敲實(shí)，用20 mL石油醚淋洗凈化柱，棄去淋

23、洗液，柱面要留有少量液體。6.2.2凈化與濃縮：準(zhǔn)確吸取試樣提取液2 mL，加入已淋洗過(guò)的凈化柱中，用100 mL石油醚-乙酸乙酯(95+5)洗脫，收集洗脫液于蒸餾瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，用少量石油醚多次溶解殘?jiān)诳潭入x心管中，最終定容至1.0 mL，供氣相色譜分析。敵敵畏、樂(lè)果、對(duì)硫磷提取與凈化：脫殼、磨粉、過(guò)20目篩、混勻。稱(chēng)取10.00 g，置于具塞錐形瓶中，加入0.5 g中性氧化鋁及20 mL二氯甲烷，振搖0.5 h，過(guò)濾，濾液直接進(jìn)樣。如農(nóng)藥殘留量過(guò)低，則加30 mL二氯甲烷，振搖過(guò)濾，量取15 mL濾液濃縮并定容至2.0 mL進(jìn)樣。黃曲霉毒素(d s)B18.1提取(tq)8

24、.1.1 稱(chēng)取20. 00 g粉碎(fn su)過(guò)篩試樣（面粉、花生醬不需粉碎），置于250 mL具塞錐形瓶中，加30 mL正己烷或石油醚和100 mL甲醇水溶液，在瓶塞上涂上一層水，蓋嚴(yán)防漏。振蕩30 min，靜置片刻，以疊成折疊式的快速定性濾紙過(guò)濾于分液漏斗中，待下層甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一具塞錐形瓶?jī)?nèi)。取20.00 mL甲醇水溶液（相當(dāng)于4g試樣）置于另125 mL分液漏斗中，加20 mL三氯甲烷，振搖2 min，靜置分層，如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象可滴加甲醇促使分層。放出三氯甲烷層，經(jīng)盛有約10 g預(yù)先用三氯甲烷濕潤(rùn)的無(wú)水硫酸鈉的定量慢速濾紙過(guò)濾于50 mL蒸發(fā)皿中，再加5 mL三氯

25、甲烷于分液漏斗中，重復(fù)振搖提取，三氯甲烷層一并濾于蒸發(fā)皿中，最后用少量三氯甲烷洗過(guò)濾器，洗液并于蒸發(fā)皿中。將蒸發(fā)皿放在通風(fēng)柜于65水浴上通風(fēng)揮干，然后放在冰盒上冷卻2 min3 min后，準(zhǔn)確加入1 mL苯一乙腈混合液（或?qū)⑷燃淄橛脻饪s蒸餾器減壓吹氣蒸干后，準(zhǔn)確加入1 mL苯一乙腈混合液）。用帶橡皮頭的滴管的管尖將殘?jiān)浞只旌?，若有苯的結(jié)晶析出，將蒸發(fā)皿從冰盒上取出，繼續(xù)溶解、混合，晶體即消失，再用此滴管吸取上請(qǐng)液轉(zhuǎn)移于2 mL具塞試管中。8.2測(cè)定 單向展開(kāi)法8.2.1 薄層板的制備：稱(chēng)取約3g硅膠G，加相當(dāng)于硅膠量2倍3倍左右的水，用力研磨1 min2 min至成糊狀后立即倒于涂布器內(nèi)，

26、推成5 cm20 cm厚度約0.25 mm的薄層板三塊。在空氣中干燥約15 min后，在100活化2h，取出，放干燥器中保存。一般可保存2天3天，若放置時(shí)間較長(zhǎng)，可再活化后使用。8.2.2點(diǎn)樣：將薄層板邊緣附著的吸附劑刮凈，在距薄層板下端3 cm的基線(xiàn)上用微量注射器或血色素吸管滴加樣液。一塊板可滴加4個(gè)點(diǎn)，點(diǎn)距邊緣和點(diǎn)間距約為1 cm，點(diǎn)直徑約3 mm。在同一塊板上滴加點(diǎn)的大小應(yīng)一致，滴加時(shí)可用吹風(fēng)機(jī)用冷風(fēng)邊吹邊加。滴加樣式如下： 第一點(diǎn)：10 uL黃曲霉毒素(d s)B1標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)使用液(0.04 ug/mL)。 第二點(diǎn)；20 uL樣液。 第三點(diǎn)：20 uL樣液+10 uL0.04

27、ug/mL黃曲霉毒素(d s)B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。 第四點(diǎn)：20 uL樣液+10 uL 0.2ug/mL黃曲霉毒索B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。8.2.3展開(kāi)與觀(guān)察：在展開(kāi)槽內(nèi)加10 mL無(wú)水乙醚，預(yù)展12 cm取出揮干。再于另一展開(kāi)槽內(nèi)加10 mL丙酮-三氯甲烷(8+92)，展開(kāi)10 cm12 cm，取出。在紫外光下觀(guān)察結(jié)果，方法如下。8.2.3.1 由于樣液點(diǎn)上加滴黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液，可使黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)與樣液中的黃曲霉毒索B1熒光點(diǎn)重疊。如樣液為陰性，薄層板上的第三點(diǎn)中黃曲霉毒索B1為0.0004ug，可用作檢查在樣液內(nèi)黃曲霉毒素B1最低檢出量是否正常出現(xiàn)；如為陽(yáng)性，則起定性作用。薄層板上的第四

28、點(diǎn)中黃曲霉毒素B1為0.002ug，主要起定位作用。8.2.3.2若第二點(diǎn)在與黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的相應(yīng)位置上無(wú)藍(lán)紫色熒光點(diǎn)，表示試樣中黃曲霉毒素B1含量在5 ug/kg以下；如在相應(yīng)位置上有藍(lán)紫色熒光點(diǎn)，則需進(jìn)行確證試驗(yàn)。8.2.4確證試驗(yàn)：為了證實(shí)薄層板上樣液熒光系由黃曲霉毒素B1產(chǎn)生的，加滴三氟乙酸，產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的衍生物，展開(kāi)后此衍生物的比移值約在0.1左右。于薄層板左邊依次滴加兩個(gè)點(diǎn)。第一點(diǎn)：0. 04 ug/mL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液10 uL。 第二點(diǎn)：20 uL樣液。于以上兩點(diǎn)各加一小滴三氟乙酸蓋于其上，反應(yīng)5 min后，用吹風(fēng)機(jī)吹熱風(fēng)2 min后，使熱風(fēng)吠到薄層板上的溫

29、度不高于40，再于薄層板上滴加以下兩個(gè)點(diǎn)。 第三點(diǎn)：0. 04 ug/mL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液10 uL。 第四點(diǎn)：20 uL樣液。 再展開(kāi)(zhn ki)（同11.1.3），在紫外光燈觀(guān)察(gunch)樣液是否產(chǎn)生與黃曲霉毒素B1，標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)相同的衍生物。未加三氟乙酸的三、四兩點(diǎn)，可依次(yc)作為樣液與標(biāo)準(zhǔn)的衍生物空白對(duì)照。8.2.5稀釋定量：樣液中的黃曲霉毒素B1熒光點(diǎn)的熒光強(qiáng)度如與黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的最低檢出量(0.000 4ug)的熒光強(qiáng)度一致，則試樣中黃瞌霉毒素島含量即為5 ug/kg。如樣液中熒光強(qiáng)度比最低檢出量強(qiáng)，則根據(jù)其強(qiáng)度估計(jì)減少滴加微升數(shù)或?qū)右合♂尯笤俚渭硬煌⑸龜?shù)，

30、直至樣液點(diǎn)的熒光強(qiáng)度與最低檢出量的熒光強(qiáng)度一致為止。滴加式樣如下： 第一點(diǎn)：10 uL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.04 ug/mL)。 第二點(diǎn)：根據(jù)情況滴加10 uL樣液。 第三點(diǎn)：根據(jù)情況滴加15 uL樣液。第四點(diǎn)：根據(jù)情況滴加20 uL樣液。菌落總數(shù)9.1 樣品的稀釋9.1.1 稱(chēng)取25 g樣品置盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min-10000 r/min均質(zhì)1 min2 min，或放入盛有225 mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min，制成1：10的樣品勻液。9.1.2用1 mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1：10樣品勻液1

31、mL，沿管壁緩慢注于盛有9 mL稀釋液的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1：100的樣品勻液。9.1.3按4.1.2操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1 mL無(wú)菌吸管或吸頭。9.1.4根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2個(gè)3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1 mL樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1 mL空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。9.1.5及時(shí)將15 mL20 mL冷卻至46的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46土1。C恒溫水

32、浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。9.2培養(yǎng)9.2.1 待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36土1培養(yǎng)48 h士2 h。水產(chǎn)品30士1培養(yǎng)72 h土3 h。9.2.2如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4 mL），凝固后翻轉(zhuǎn)(fn zhun)平板，按6.2.1條件進(jìn)行培養(yǎng)。9.3茵落計(jì)數(shù)(j sh) 可用肉眼觀(guān)察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位(dnwi)( colony-forming units，CFU)表示。9.3.1 選取菌落數(shù)在30 CFU300 CFU之間、無(wú)蔓延菌落生

33、長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30 CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300 CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。9.3.2其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。9.3.3 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線(xiàn)的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。大腸菌群10.1 檢樣稀釋10.1.1 固體和半固體樣品：稱(chēng)取25 g樣品，放入盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/minl0000 r/

34、min均質(zhì)1 min2 min，或放入盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min，制成1：10的樣品勻液。10.1.2樣品勻液的pH值應(yīng)在6.57.5之間，必要時(shí)分別用1 mol/L NaOH或1 mol/L HC1調(diào)節(jié)。10.1.3用1 mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1：10樣品勻液1 mL，沿管壁緩緩注入9 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1 mL無(wú)菌吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成1：100的樣品勻液。10.1.4根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣

35、品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1 mL無(wú)菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過(guò)程不得超過(guò)15 min。10.2初發(fā)酵試驗(yàn) 每個(gè)樣品，選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個(gè)稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(LST)肉湯，每管接種ImL（如接種量超過(guò)1 mL，則用雙料LST肉湯），36土1培養(yǎng)24 土2 h，觀(guān)察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24 h土2 h產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48 h土2 h，產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。10.3復(fù)發(fā)酵(f jio)試驗(yàn) 用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種(y zhn)于煌綠

36、乳糖膽鹽肉湯(BGLB)管中，36土l培養(yǎng)(piyng)48 h土2 h，觀(guān)察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計(jì)為大腸菌群陽(yáng)性管。10.4大腸菌群最可能數(shù)(MPN)的報(bào)告按4.3確證的大腸菌群LST陽(yáng)性管數(shù)，檢索MPN表，報(bào)告每g(mL)樣品中大腸菌群的MPN值。金黃色葡萄球菌11.1 樣品的處理 稱(chēng)取25 g樣品至盛有225 mL 7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/minl0000 r/min均質(zhì)1 min2 min，或放入盛有225 mL 7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min。若樣品為液態(tài)，吸取25

37、 mL樣品至盛有225 mL 7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)可預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠中，振蕩混勻。11.2增菌和分離培養(yǎng) 11.2.1將上述樣品勻液于36士1培養(yǎng)18 h24 h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長(zhǎng)，污染嚴(yán)重時(shí)在10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯內(nèi)呈混濁生長(zhǎng)。11.2.2將上述培養(yǎng)物，分別劃線(xiàn)接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36 0C土l培養(yǎng)18 h24 h。Baird-Parker平板36土1培養(yǎng)18 h24 h或45 h-48 h。11.2.3金黃色葡萄球菌在B aird-Parker平板上，菌落直徑為2 mm，-3

38、 mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周?chē)鸀橐换鞚釒?，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落有似奶油至樹(shù)膠樣的硬度，偶然會(huì)遇到非脂肪溶解的類(lèi)似菌落；但無(wú)混濁帶及透明圈。長(zhǎng)期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀(guān)可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、金黃色（有時(shí)為白色），菌落周?chē)梢?jiàn)完全透明溶血圈。挑取上述菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗(yàn)。11.3鑒定4.3.1 染色鏡檢：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌，排列呈葡萄球狀，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，直徑約為0.5 ml m。4.3.2血漿凝固酶試驗(yàn)：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌

39、落1個(gè)或以上，分別接種到5 mL BHI和營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面，36土1 0C培養(yǎng)18 h24 h。 取新鮮配置兔血漿0.5 mL，放入小試管中，再加入BHI培養(yǎng)物0.2 mL0.3 mL，振蕩搖勻，置36土1溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時(shí)觀(guān)察一次，觀(guān)察6 h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，被判定為陽(yáng)性結(jié)果。同時(shí)以血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對(duì)照。也可用商品化的試劑，按說(shuō)明書(shū)操作，進(jìn)行血漿凝固酶試驗(yàn)。 結(jié)果(ji gu)如可疑，挑取營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5 mL BHI，36土1培養(yǎng)(piyng)18 h-48 h，重復(fù)(chngf)試驗(yàn)。

40、志賀氏菌12.1增茵 以無(wú)菌操作取檢樣25 g(mL)，加入裝有滅菌225 mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8 000 r/minl0 000 r/min均質(zhì)；或加入裝有225 mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均質(zhì)1 min-2 min，液體樣品振蕩混勻即可。于41.5土1，厭氧培養(yǎng)16 h20 h。12.2分離取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線(xiàn)接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上，于361培養(yǎng)20 h24 h，觀(guān)察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落形態(tài)。宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個(gè)菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀(guān)察，則繼續(xù)培養(yǎng)至48 h再進(jìn)行觀(guān)察。12.3初步生化試驗(yàn)12.3.1自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，分別接種TSI、半固體和營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面各一管，置36+l培養(yǎng)20 h24 h，分別觀(guān)察結(jié)果。12.3.2凡是三糖鐵瓊脂中斜面產(chǎn)堿、底層產(chǎn)酸（發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，蔗糖）、不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體）、不產(chǎn)硫化氫、半固體管中無(wú)動(dòng)力的菌株，挑取其5.3.1中己培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上生長(zhǎng)的菌苔，進(jìn)行生化試驗(yàn)和血清學(xué)分型。12.4生化試驗(yàn)及附加生化試驗(yàn)1