免疫診斷ppt課件

1、第二十四章免 疫 診 斷.抗原抗體反響的原理和特點(diǎn)抗原抗體發(fā)生結(jié)合反響的物質(zhì)根底抗原決議基與抗體的抗原結(jié)合部位之間的構(gòu)造互補(bǔ)性?？乖贵w反響的特點(diǎn)1.高度特異 2.可逆性 3.可見性：適當(dāng)濃度和比例、鹽離子.Ag/Ab Reactions Source: Li, Y., Li, H., Smith-Gill, S. J., Mariuzza, R. A., Biochemistry 39, 6296, 2000 :85/chime2/lyso-abfr.htm.AbAgHigh AffinityAbAgLow Affinity親和力Affinity.Ab excessAg

2、excessEquivalence Lattice formation.凝集反響沉淀反響補(bǔ)體參與反響免疫標(biāo)志技術(shù) 第一節(jié) 抗原或抗體的檢測(cè).Agglutination顆粒性抗原如細(xì)菌、細(xì)胞與相應(yīng)抗體, 在適當(dāng)電解質(zhì)存在的條件下, 經(jīng)過一定時(shí)間后出現(xiàn)肉眼可見凝集塊稱為凝集反響 +定性實(shí)驗(yàn)Ag /Ab.間接凝集實(shí)驗(yàn)可溶性抗原或抗體吸附于與免疫無關(guān)的載體上,使之成為致敏載體顆粒,然后與相應(yīng)抗體或抗原作用,在電解質(zhì)參與下出現(xiàn)的凝集反響 +運(yùn)用檢測(cè)可溶性抗原或抗體.Coombs (Antiglobulin)Tests 檢測(cè)血清中抗-Rh抗體Patients SerumTargetRBCs+Step 1+

3、Coombs Reagent(Antiglobulin)Step 2.凝集抑制實(shí)驗(yàn)將可溶性抗原與相應(yīng)抗體預(yù)先作用,然后再參與致敏顆粒吸附一樣可溶性抗原的乳膠顆粒, 由于抗體已被可溶性抗原結(jié)合, 因此致敏顆粒不發(fā)生凝集景象。如免疫妊娠實(shí)驗(yàn) +Prior to Test+TestPatients sample.單向免疫分散Ag ConcentrationDiameter2AgAgAgAgAb in gel.雙向免疫分散.補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)知抗原參與血清檢測(cè)抗體參與規(guī)范量補(bǔ)體參與包被抗體的紅細(xì)胞檢測(cè)紅細(xì)胞溶解量AgPatientsserum AgNo AgAg.免疫酶技術(shù)免疫熒光法immunofluore

4、scence)免疫印跡法western blotting)放射免疫測(cè)定法(RIA).直接熒光法AgFluorochromeLabeled AbTissue Section.間接熒光法 AgFluorochromeLabeled Anti-IgTissue SectionUnlabeledAb.Flow CytometryFlowTipLaserFLDetectorLightScatterDetector.Flow Cytometry.Flow CytometryRed Fluorescence IntensityGreen Fluorescence IntensityTwo Parameter

5、 HistogramGreen Fluorescence IntensityNumber of CellsUnstained cellsFITC-labeled cellsOne Parameter Histogram.ELISA雙抗體夾心法雙抗原夾心法生物素親和素系統(tǒng)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)ELISPOT免疫組化技術(shù).ELISA.雙抗體夾心法HBsAg、HBeAg等表示圖固相載體抗體抗原酶抗體酶標(biāo)志抗體1.將抗體包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗原，那么結(jié)合為抗原抗體復(fù)合物。3.再參與酶標(biāo)志抗體，那么結(jié)合為抗體-抗原-酶標(biāo)志抗體復(fù)合物。4.酶催化底物并顯色。.雙抗原夾心法抗-HBs等表示圖1.將抗

6、原包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗體，那么結(jié)合為抗原抗體復(fù)合物。3.再參與酶標(biāo)志抗原，那么結(jié)合為抗原-抗體-酶標(biāo)志抗原復(fù)合物。4.酶催化底物并顯色。酶抗原酶標(biāo)志 抗原抗體抗原固相載體.中間藍(lán)色為癌巢，周圍棕褐色為轉(zhuǎn)基因的淋巴細(xì)胞.第二節(jié) 免疫細(xì)胞的測(cè)定一、淋巴細(xì)胞的分別與類型鑒定.T細(xì)胞總數(shù)及亞類 外周血T細(xì)胞總數(shù): CD3+T細(xì)胞 60%-80% CD4+T細(xì)胞55%-60% CD8+T細(xì)胞20%-30% CD4+/CD8+ 比值大約為2/1.免疫熒光法磁珠分別法淘選法流式細(xì)胞術(shù)抗原肽MHC分子四聚體tetramer.免疫磁性微球的分別原理直接法對(duì)細(xì)胞進(jìn)展分類抗CD3磁球磁球結(jié)合T細(xì)胞參與B和T細(xì)胞中負(fù)向選擇正向選擇磁架進(jìn)展分別間接法對(duì)T細(xì)胞進(jìn)展分別單克隆抗體CD3羊抗鼠修飾磁球BiomagT細(xì)胞T細(xì)胞.二、白細(xì)胞功能測(cè)定T細(xì)胞功能測(cè)定B細(xì)胞功能測(cè)定吞噬細(xì)胞功能測(cè)定.T細(xì)胞功能測(cè)定T細(xì)胞增殖實(shí)