第九章特殊染色

1、第九章第九章 特特 殊殊 染染 色色 一、特殊染色的概念及意義一、特殊染色的概念及意義 特殊染色為常規(guī)染色（即蘇木素、伊特殊染色為常規(guī)染色（即蘇木素、伊紅）的必要補(bǔ)充，又稱選擇性染色，只有相紅）的必要補(bǔ)充，又稱選擇性染色，只有相對(duì)的特異性，如對(duì)的特異性，如PAS陰性反應(yīng)它有糖元。陰性反應(yīng)它有糖元。意義：意義：（1）特染能顯示在常規(guī)染色切片中不明顯的部）特染能顯示在常規(guī)染色切片中不明顯的部分，如革蘭氏染色、細(xì)菌染色。分，如革蘭氏染色、細(xì)菌染色。（2）區(qū)別）區(qū)別HE染色中不能鑒別的組織病變，如染色中不能鑒別的組織病變，如VG染色區(qū)別膠元纖維和平滑肌。染色區(qū)別膠元纖維和平滑肌。（3）顯示某些常規(guī)染色

2、中不能著色的物質(zhì)，如）顯示某些常規(guī)染色中不能著色的物質(zhì)，如網(wǎng)染才能顯示網(wǎng)狀纖維，常規(guī)網(wǎng)染才能顯示網(wǎng)狀纖維，常規(guī)HE染色是染不出染色是染不出來的。來的。因此，特殊染色也是制片染色中不可缺少的組因此，特殊染色也是制片染色中不可缺少的組成部分，它在病理診斷常著輔助作用，也為科成部分，它在病理診斷常著輔助作用，也為科研提供依據(jù)。研提供依據(jù)。二、學(xué)習(xí)特染技術(shù)應(yīng)掌握的重點(diǎn)二、學(xué)習(xí)特染技術(shù)應(yīng)掌握的重點(diǎn) （注意事項(xiàng)）（注意事項(xiàng)）（1）染色方法的成敗，應(yīng)該在溫度、濃度、時(shí)）染色方法的成敗，應(yīng)該在溫度、濃度、時(shí)間和間和PH值等方面找原因。值等方面找原因。（2）注意特染的應(yīng)用范圍，如某種病變應(yīng)用什）注意特染的應(yīng)用范

3、圍，如某種病變應(yīng)用什么方法染色才能達(dá)到目的，一般先在么方法染色才能達(dá)到目的，一般先在HE切片所切片所見的要求去選擇適當(dāng)?shù)奶厝痉椒?，一種或多種見的要求去選擇適當(dāng)?shù)奶厝痉椒?，一種或多種。（3）必須掌握各種特殊染色的結(jié)果，避免）必須掌握各種特殊染色的結(jié)果，避免導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論或嚴(yán)重的誤診，如在網(wǎng)染時(shí)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論或嚴(yán)重的誤診，如在網(wǎng)染時(shí)把膠元纖維誤以為網(wǎng)狀纖維。把膠元纖維誤以為網(wǎng)狀纖維。（4）盡量要陽性切片作對(duì)照，便于選擇特）盡量要陽性切片作對(duì)照，便于選擇特染方法，并與染方法，并與HE切片作對(duì)照。切片作對(duì)照。（5）特染的組織，在其固定、脫水根據(jù)要）特染的組織，在其固定、脫水根據(jù)要求選擇。所用的器皿都必

4、須化學(xué)清洗。求選擇。所用的器皿都必須化學(xué)清洗。三、玻璃器皿的清潔三、玻璃器皿的清潔 在病理實(shí)驗(yàn)室可用的玻璃器皿，在病理實(shí)驗(yàn)室可用的玻璃器皿，都必須經(jīng)過清洗干凈才能使用，清洗都必須經(jīng)過清洗干凈才能使用，清洗的方法依玻璃器皿的新舊而不同。的方法依玻璃器皿的新舊而不同。1、新購(gòu)玻璃器皿的處理、新購(gòu)玻璃器皿的處理 對(duì)于新購(gòu)買的玻璃器皿應(yīng)先用洗衣對(duì)于新購(gòu)買的玻璃器皿應(yīng)先用洗衣粉浸泡洗刷，自來水沖洗后再用粉浸泡洗刷，自來水沖洗后再用12%鹽酸水溶液浸泡數(shù)小時(shí)后，用自來水沖鹽酸水溶液浸泡數(shù)小時(shí)后，用自來水沖洗干凈，必要時(shí)可用少量蒸餾水洗洗干凈，必要時(shí)可用少量蒸餾水洗2次次2、使用后玻璃器皿的處理、使用后玻璃

5、器皿的處理 每次使用后的玻璃器皿都必須及時(shí)徹底每次使用后的玻璃器皿都必須及時(shí)徹底清洗干凈，以供下次實(shí)驗(yàn)之用，如輕視這一清洗干凈，以供下次實(shí)驗(yàn)之用，如輕視這一步驟，可用的玻璃器皿不夠干凈，則會(huì)影響步驟，可用的玻璃器皿不夠干凈，則會(huì)影響染色效果，甚至導(dǎo)致染色失敗，特別在酶組染色效果，甚至導(dǎo)致染色失敗，特別在酶組化和銀離子反應(yīng)操作過程中更有嚴(yán)格的要求化和銀離子反應(yīng)操作過程中更有嚴(yán)格的要求，使用后的玻璃器皿在一般清洗后，還要求，使用后的玻璃器皿在一般清洗后，還要求用硫酸清洗液浸泡。用硫酸清洗液浸泡。硫酸清洗液配制硫酸清洗液配制重鉻酸鉀重鉻酸鉀 80g自來水自來水 1000ml濃硫酸（工業(yè)用）濃硫酸（工

6、業(yè)用） 120m新配制的清潔液為紅褐色，反復(fù)使用一新配制的清潔液為紅褐色，反復(fù)使用一段時(shí)間后，慢慢變成綠色，說明清潔液段時(shí)間后，慢慢變成綠色，說明清潔液已失敗，不能繼續(xù)使用應(yīng)重新配制。已失敗，不能繼續(xù)使用應(yīng)重新配制。3、玻璃器皿的清洗方法、玻璃器皿的清洗方法 任何玻璃器皿都必須用自來水沖洗，然后把任何玻璃器皿都必須用自來水沖洗，然后把殘余藥液或染液洗去。殘余藥液或染液洗去。 用毛刷沾洗衣粉擦干凈。用毛刷沾洗衣粉擦干凈。 自來水沖洗，蒸餾水洗自來水沖洗，蒸餾水洗2次。次。 把晾干的器皿輕輕置入清潔液浸泡數(shù)日。把晾干的器皿輕輕置入清潔液浸泡數(shù)日。 取出器皿，用自來水把器皿內(nèi)外徹底沖洗干取出器皿，用

7、自來水把器皿內(nèi)外徹底沖洗干凈，最后用蒸餾水洗凈，最后用蒸餾水洗2次。次。 把玻璃器皿倒置于有孔架上自然晾干或溫箱把玻璃器皿倒置于有孔架上自然晾干或溫箱中烤干，最后存放櫥內(nèi)備用。中烤干，最后存放櫥內(nèi)備用。 常用的特染常用的特染第一節(jié)第一節(jié) 結(jié)締組織染色結(jié)締組織染色一、膠元纖維染色（一、膠元纖維染色（VG 染色）染色） 膠元纖維的分部組成成分膠元纖維的分部組成成分 膠原纖維是結(jié)締組織中的三種纖維之膠原纖維是結(jié)締組織中的三種纖維之一，分布最為廣泛，含量最多。主要分布一，分布最為廣泛，含量最多。主要分布于真皮、腱、韌帶、骨、透明軟骨、動(dòng)脈于真皮、腱、韌帶、骨、透明軟骨、動(dòng)脈、腸壁、腸壁 、子宮和基底膜

8、等。膠原纖維具有、子宮和基底膜等。膠原纖維具有韌性大，抗拉力強(qiáng)的特點(diǎn)。膠原纖維單位韌性大，抗拉力強(qiáng)的特點(diǎn)。膠原纖維單位主要由纖維母細(xì)胞合成。主要由纖維母細(xì)胞合成。 苦味酸苦味酸酸性品紅法酸性品紅法1 VG 染液試劑配制染液試劑配制1%酸性品紅酸性品紅 10ml苦味酸飽和液苦味酸飽和液 90ml此液常分別配制臨用時(shí)加以混合，不此液常分別配制臨用時(shí)加以混合，不能久用。能久用?！救旧襟E】【染色步驟】（1）組織固定于）組織固定于10%早醛液中，常規(guī)脫水包埋早醛液中，常規(guī)脫水包埋（2）組織切片脫臘至水。）組織切片脫臘至水。（3）V-G染液染液2-5（酸性品紅（酸性品紅1：苦味酸飽和液：苦味酸飽和液9）

9、（4）傾去染液，無水酒精急速脫水，用濾紙吸干）傾去染液，無水酒精急速脫水，用濾紙吸干（5）二甲苯透明，中性樹膠封片。）二甲苯透明，中性樹膠封片。【結(jié)果】【結(jié)果】 膠元纖維呈紅色，肌纖維、胞質(zhì)及膠元纖維呈紅色，肌纖維、胞質(zhì)及 紅細(xì)胞黃色。紅細(xì)胞黃色。 膠元纖維染色應(yīng)用膠元纖維染色應(yīng)用 膠原纖維染色在病理診斷上主要用于鑒定梭膠原纖維染色在病理診斷上主要用于鑒定梭形、纖維形細(xì)胞腫瘤的組織來源；形、纖維形細(xì)胞腫瘤的組織來源； 常常要在纖維、平滑肌和神經(jīng)三者之中作出常常要在纖維、平滑肌和神經(jīng)三者之中作出選擇。選擇。 觀察動(dòng)脈硬化的心臟，在觀察動(dòng)脈硬化的心臟，在H切片中，心肌切片中，心肌內(nèi)散在的小疤痕灶和

10、心肌均被染作紅色，而作膠內(nèi)散在的小疤痕灶和心肌均被染作紅色，而作膠原纖維染色可將膠原組織和肌肉上明顯地區(qū)分開原纖維染色可將膠原組織和肌肉上明顯地區(qū)分開來。來。 早期肝硬化用膠原纖維染色，也可使小葉之早期肝硬化用膠原纖維染色，也可使小葉之間少量增生的膠原纖維突出地顯示出來。間少量增生的膠原纖維突出地顯示出來。二、二、 網(wǎng)狀纖維染色網(wǎng)狀纖維染色網(wǎng)狀纖維染色的形態(tài)特點(diǎn)和染色原網(wǎng)狀纖維染色的形態(tài)特點(diǎn)和染色原理理 網(wǎng)狀纖維是網(wǎng)狀結(jié)締組織內(nèi)的一種網(wǎng)狀纖維是網(wǎng)狀結(jié)締組織內(nèi)的一種纖維。它由網(wǎng)狀細(xì)胞產(chǎn)生，網(wǎng)狀纖維細(xì)而纖維。它由網(wǎng)狀細(xì)胞產(chǎn)生，網(wǎng)狀纖維細(xì)而有分支，穿行于細(xì)胞體和突之間，共同構(gòu)有分支，穿行于細(xì)胞體和突

11、之間，共同構(gòu)成網(wǎng)狀支架。這種纖維用成網(wǎng)狀支架。這種纖維用HE染色一般不染色一般不易辨認(rèn)。若用銀氨溶液浸染能使纖維變成易辨認(rèn)。若用銀氨溶液浸染能使纖維變成黑色，故又稱嗜銀纖維。黑色，故又稱嗜銀纖維。（二）網(wǎng)狀纖維染色的原理（二）網(wǎng)狀纖維染色的原理 網(wǎng)狀纖維的染色方法很多，但是染色原理網(wǎng)狀纖維的染色方法很多，但是染色原理基本相同，有以下方面。基本相同，有以下方面。（1）氧化）氧化 使網(wǎng)狀纖維具有選擇性，不經(jīng)氧使網(wǎng)狀纖維具有選擇性，不經(jīng)氧化的切片，常用的氧化劑是高錳酸鉀。化的切片，常用的氧化劑是高錳酸鉀。（2）漂白）漂白 一般采用一般采用2%草酸，漂白后無色草酸，漂白后無色（3）媒染）媒染 多用多用

12、2%硫酸鐵氨（俗稱鐵明礬）。硫酸鐵氨（俗稱鐵明礬）。這些試劑可增加網(wǎng)狀纖維對(duì)銀氨液的選擇性。這些試劑可增加網(wǎng)狀纖維對(duì)銀氨液的選擇性。（4）浸銀）浸銀 也稱鍍銀，使銀氨配位化合物與網(wǎng)也稱鍍銀，使銀氨配位化合物與網(wǎng)狀纖維結(jié)合，帶正電荷的二氨合銀狀纖維結(jié)合，帶正電荷的二氨合銀Ag（NH3）+2被具有嗜銀性物質(zhì)的網(wǎng)狀纖維吸附。被具有嗜銀性物質(zhì)的網(wǎng)狀纖維吸附。（5）還原）還原 甲醛液是還原劑，能把與網(wǎng)狀纖維甲醛液是還原劑，能把與網(wǎng)狀纖維結(jié)合的銀氨配位化合物還原成棕黑色的金屬銀。結(jié)合的銀氨配位化合物還原成棕黑色的金屬銀。 （三）網(wǎng)狀纖維纖維染色應(yīng)用（三）網(wǎng)狀纖維纖維染色應(yīng)用 判定病變組織支架的破壞情況，組

13、織、判定病變組織支架的破壞情況，組織、臟器網(wǎng)狀支架的存在與塌陷、完整與破壞臟器網(wǎng)狀支架的存在與塌陷、完整與破壞、網(wǎng)狀纖維的分布及走行，有多少、粗細(xì)、網(wǎng)狀纖維的分布及走行，有多少、粗細(xì)、疏密或有無斷裂形態(tài)變化。、疏密或有無斷裂形態(tài)變化。 用于顯示和鑒別腫瘤的性質(zhì)和來源用于顯示和鑒別腫瘤的性質(zhì)和來源顯示和區(qū)分癌與肉瘤顯示和區(qū)分癌與肉瘤 來源于上皮組織的惡來源于上皮組織的惡性腫瘤（癌）僅癌巢周圍有網(wǎng)狀纖維包繞，巢內(nèi)癌性腫瘤（癌）僅癌巢周圍有網(wǎng)狀纖維包繞，巢內(nèi)癌細(xì)胞之間則沒有網(wǎng)狀纖維分部。來源于間葉組織的細(xì)胞之間則沒有網(wǎng)狀纖維分部。來源于間葉組織的惡性腫瘤（肉瘤），瘤細(xì)胞之間往往可見較多的網(wǎng)惡性腫瘤（

14、肉瘤），瘤細(xì)胞之間往往可見較多的網(wǎng)狀纖存在。狀纖存在。 用于某些腫瘤的診斷用于某些腫瘤的診斷 根據(jù)染色所顯示的網(wǎng)狀纖維多少、分布根據(jù)染色所顯示的網(wǎng)狀纖維多少、分布及行走特點(diǎn)，可用于診斷下列腫瘤。及行走特點(diǎn)，可用于診斷下列腫瘤。1）平滑肌肉）平滑肌肉 細(xì)胞之間見有大量平行分細(xì)胞之間見有大量平行分布的網(wǎng)狀纖維。布的網(wǎng)狀纖維。2）纖維肉瘤）纖維肉瘤 可見大量網(wǎng)狀纖維存在，可見大量網(wǎng)狀纖維存在，并且密集包繞細(xì)胞。并且密集包繞細(xì)胞。3）滑膜肉瘤）滑膜肉瘤 其梭形細(xì)胞也產(chǎn)生網(wǎng)狀纖其梭形細(xì)胞也產(chǎn)生網(wǎng)狀纖維，但不如纖維肉瘤多。維，但不如纖維肉瘤多。 用于觀察和研究癌組織的發(fā)生、發(fā)用于觀察和研究癌組織的發(fā)生、發(fā)

15、展及其惡性程度展及其惡性程度 癌組織發(fā)生，發(fā)展過程以及癌組織生長(zhǎng)速度，癌組織發(fā)生，發(fā)展過程以及癌組織生長(zhǎng)速度，可通過網(wǎng)染進(jìn)行觀察和研究，如癌巢周圍的網(wǎng)狀纖可通過網(wǎng)染進(jìn)行觀察和研究，如癌巢周圍的網(wǎng)狀纖維包囊完整，說明癌組織生長(zhǎng)較慢，惡性程度低；維包囊完整，說明癌組織生長(zhǎng)較慢，惡性程度低；再如子宮頸鱗狀細(xì)胞癌巢周圍網(wǎng)狀纖維分解，說明再如子宮頸鱗狀細(xì)胞癌巢周圍網(wǎng)狀纖維分解，說明癌組織正在擴(kuò)散，其惡性程度較高。癌組織正在擴(kuò)散，其惡性程度較高。(5) (5) 用于顯示和研究肝組織病變用于顯示和研究肝組織病變 用網(wǎng)狀纖維的染色法，觀察肝臟病變處用網(wǎng)狀纖維的染色法，觀察肝臟病變處的網(wǎng)狀支架形態(tài)、分布特點(diǎn)及其

16、破壞情況，的網(wǎng)狀支架形態(tài)、分布特點(diǎn)及其破壞情況，可以判定和研究其病變性質(zhì)、程度及其發(fā)展可以判定和研究其病變性質(zhì)、程度及其發(fā)展與轉(zhuǎn)規(guī)。與轉(zhuǎn)規(guī)。（四）（四） 網(wǎng)狀纖維染色的注意事項(xiàng)網(wǎng)狀纖維染色的注意事項(xiàng)（1）用新蒸餾水配制最好用雙蒸水配制。）用新蒸餾水配制最好用雙蒸水配制。（2）所用玻璃器材及載玻片均要達(dá)到化學(xué)）所用玻璃器材及載玻片均要達(dá)到化學(xué)潔凈程度潔凈程度.（3）對(duì)已配制好的硝酸銀液和氨銀溶液，）對(duì)已配制好的硝酸銀液和氨銀溶液，要貯存冰箱中保存待用。要貯存冰箱中保存待用。（4）在染色過程中，用染氨銀染液或硝酸銀液）在染色過程中，用染氨銀染液或硝酸銀液的前后應(yīng)用蒸餾水洗浸。的前后應(yīng)用蒸餾水洗浸。

17、（5）氯化金調(diào)色和硫代硫酸鈉固定的時(shí)間不應(yīng)）氯化金調(diào)色和硫代硫酸鈉固定的時(shí)間不應(yīng)太長(zhǎng)，否則會(huì)引起網(wǎng)狀纖維染色變淡。太長(zhǎng)，否則會(huì)引起網(wǎng)狀纖維染色變淡。（6）切片脫水后及時(shí)封片，不宜在空氣中停留）切片脫水后及時(shí)封片，不宜在空氣中停留時(shí)間過長(zhǎng)，以免產(chǎn)生色素顆粒。時(shí)間過長(zhǎng)，以免產(chǎn)生色素顆粒。 【 氨銀液的配制】氨銀液的配制】 1.取取10%10%硝酸銀水溶液硝酸銀水溶液5ml5ml于三角燒瓶?jī)?nèi)，一滴一滴地滴加于三角燒瓶?jī)?nèi)，一滴一滴地滴加氨水（氫氧化銨），并同時(shí)搖動(dòng)容器氨水（氫氧化銨），并同時(shí)搖動(dòng)容器 2.2.硝酸銀遇到氨水立即產(chǎn)生沉淀，當(dāng)其沉淀物被溶解時(shí)（硝酸銀遇到氨水立即產(chǎn)生沉淀，當(dāng)其沉淀物被溶解時(shí)

18、（不能完全溶解也可）不能完全溶解也可） 3.3.再加入再加入3%3%氫氧化鈉水溶液氫氧化鈉水溶液5ml5ml。溶液重新產(chǎn)生沉淀。溶液重新產(chǎn)生沉淀 4.4.此時(shí)再滴加氨水。至其沉淀被溶解后，（為避免氨水加此時(shí)再滴加氨水。至其沉淀被溶解后，（為避免氨水加入過量最好能有少許沉淀物為妥，以免脫片）最后加蒸餾水入過量最好能有少許沉淀物為妥，以免脫片）最后加蒸餾水稀釋至稀釋至50ml50ml。 5.5.濾過，貯存于棕色瓶中存放入冰箱備用。臨用前取出恢濾過，貯存于棕色瓶中存放入冰箱備用。臨用前取出恢復(fù)室溫再用。復(fù)室溫再用?！救旧襟E】【染色步驟】（1 1） 切片脫蠟至水洗。切片脫蠟至水洗。（2） 0.25%

19、高錳酸鉀液氧化高錳酸鉀液氧化5。（3） 自來水洗自來水洗2次。次。（4） 2.5%草酸液漂白草酸液漂白1-2，水洗，水洗2。（5） 2%硫酸鐵銨媒染（鐵明礬）硫酸鐵銨媒染（鐵明礬）10。（6） 水洗，蒸餾水洗水洗，蒸餾水洗2次。次。（7） 滴染氨銀液滴染氨銀液1左右。左右。（8） 蒸餾水洗蒸餾水洗2次。次。（9） 10%中性早醛還原中性早醛還原3。（10） 蒸餾水洗蒸餾水洗12次。次。（11） 0.2% 的氯化金調(diào)色的氯化金調(diào)色55 水洗。水洗。（1212） 5%5%硫代硫酸鈉固定硫代硫酸鈉固定55。（1313） 自來水沖洗，自來水沖洗，蒸餾水洗。蒸餾水洗。（1414） 復(fù)染（對(duì)比染色）伊紅、

20、中性紅、。復(fù)染（對(duì)比染色）伊紅、中性紅、。（1515） 脫水、透明、封片。脫水、透明、封片?！窘Y(jié)果】【結(jié)果】 膠元纖維呈黃色，網(wǎng)狀纖維成黑色。膠元纖維呈黃色，網(wǎng)狀纖維成黑色?！救旧Y(jié)果】【染色結(jié)果】 網(wǎng)狀纖維染網(wǎng)狀纖維染灰黑色，膠元纖維紅色，基質(zhì)灰黑色，膠元纖維紅色，基質(zhì) 黃色。黃色。三、彈力纖維染色法三、彈力纖維染色法 彈力纖維較細(xì)，直徑彈力纖維較細(xì)，直徑0.2-10.2-1微米，且堅(jiān)微米，且堅(jiān)固，彈性大，容易伸展，纖維分枝連接成固，彈性大，容易伸展，纖維分枝連接成網(wǎng)，網(wǎng)，HEHE染色與膠原纖維著色相似，若用彈染色與膠原纖維著色相似，若用彈力纖維染色法，則可分辨的很清楚。力纖維染色法，則可分

21、辨的很清楚。 Weigert氏彈力纖維染色法：氏彈力纖維染色法：u標(biāo)本用標(biāo)本用Zenker氏液，酒精或氏液，酒精或10%甲醛固定均可。甲醛固定均可。u石蠟或冰凍切片。石蠟或冰凍切片。u脫蠟至水。脫蠟至水。u水洗后，加入水洗后，加入Weigert氏染色液氏染色液2-6小時(shí)或更長(zhǎng)的小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間，一般依染色液的新舊而定時(shí)間，一般依染色液的新舊而定 。u取出后，直接浸入取出后，直接浸入1%鹽酸酒精或酒精中進(jìn)行分鹽酸酒精或酒精中進(jìn)行分化?；如需復(fù)染細(xì)胞核，可染于明礬蘇木素溶液中如需復(fù)染細(xì)胞核，可染于明礬蘇木素溶液中10分分鐘。鐘。u沖洗后，可再以沖洗后，可再以V G氏染液作對(duì)比染色氏染液作對(duì)比染

22、色1-2分鐘。分鐘。u95%酒精分化、脫水、透明、封固。酒精分化、脫水、透明、封固。試劑配制：試劑配制：u鹽基性復(fù)紅（堿性品紅）鹽基性復(fù)紅（堿性品紅） 2gu間苯二酚（雷鎖辛）間苯二酚（雷鎖辛） 4gu蒸餾水蒸餾水 200mlu30%三氯化鐵水溶液三氯化鐵水溶液 25ml u95%酒精酒精 200mlu濃鹽酸濃鹽酸 4mlu先將鹽基性復(fù)紅（堿性品紅）溶于先將鹽基性復(fù)紅（堿性品紅）溶于200ml200ml的蒸餾水中，的蒸餾水中，u加入加入4-5g4-5g間苯二酚，加溫煮沸（不停攪拌），間苯二酚，加溫煮沸（不停攪拌），u然后加入然后加入25ml25ml的的30%30%三氯化鐵水溶液，繼續(xù)攪拌煮沸三

23、氯化鐵水溶液，繼續(xù)攪拌煮沸2-52-5分鐘，冷卻后過濾傾去濾液，將濾紙及沉淀物置于溫箱分鐘，冷卻后過濾傾去濾液，將濾紙及沉淀物置于溫箱中烘干。中烘干。u而后將濾紙和干燥的沉淀物一并投入燒杯，加而后將濾紙和干燥的沉淀物一并投入燒杯，加200ml 95%200ml 95%酒精，小心隔水加熱，徐徐攪拌使沉淀溶解，然后棄去酒精，小心隔水加熱，徐徐攪拌使沉淀溶解，然后棄去濾紙冷卻后，補(bǔ)足因加熱蒸發(fā)的酒精。濾紙冷卻后，補(bǔ)足因加熱蒸發(fā)的酒精。u最后加入最后加入4ml4ml的鹽酸即可應(yīng)用。（對(duì)苯二酚可代的鹽酸即可應(yīng)用。（對(duì)苯二酚可代替間苯二替間苯二酚）。酚）?！咀⒁馐马?xiàng)注意事項(xiàng)】 WeigertWeigert

24、氏彈力纖維染色的配制已有許多改變，鹽氏彈力纖維染色的配制已有許多改變，鹽基性復(fù)紅（堿性品紅）可由其它鹽基性染料取代，基性復(fù)紅（堿性品紅）可由其它鹽基性染料取代， 配制時(shí)如將結(jié)晶紫配制時(shí)如將結(jié)晶紫1 1克加鹽基性復(fù)紅克加鹽基性復(fù)紅1 1克，則彈力纖克，則彈力纖維染成蘭綠色；全用甲紫或結(jié)晶紫，彈力纖維則呈暗維染成蘭綠色；全用甲紫或結(jié)晶紫，彈力纖維則呈暗綠色。綠色?！救旧Y(jié)果】【染色結(jié)果】 彈力纖維藍(lán)黑色，膠原纖維染成紅色，肌纖維彈力纖維藍(lán)黑色，膠原纖維染成紅色，肌纖維染成黃色。染成黃色。小動(dòng)脈光鏡圖小動(dòng)脈光鏡圖 ( (彈性染色彈性染色) )VerhoeffVerhoeff氏彈力纖維染色法：氏彈力纖

25、維染色法：操作方法：操作方法：u切片常規(guī)脫蠟。切片常規(guī)脫蠟。uVerhoeff染液染液15-60分鐘。分鐘。u以以2%三氯化鐵分化（鏡下控制）。三氯化鐵分化（鏡下控制）。u水洗再以水洗再以95%酒精洗去碘。酒精洗去碘。u流水洗。流水洗。u以以HE或或VG氏染液復(fù)染。氏染液復(fù)染。u脫水、透明、封固。脫水、透明、封固?！救旧Y(jié)果】【染色結(jié)果】 彈力纖維藍(lán)黑色，其它組織視復(fù)染而定。彈力纖維藍(lán)黑色，其它組織視復(fù)染而定。u注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 這種染色法染液配制簡(jiǎn)單，但對(duì)微細(xì)彈這種染色法染液配制簡(jiǎn)單，但對(duì)微細(xì)彈力纖維不如力纖維不如Weigert氏效果好。氏效果好。試劑配制：試劑配制：u將將1 1克蘇木素

26、加熱溶于克蘇木素加熱溶于20ml20ml的無水酒精，的無水酒精，u冷卻后，加冷卻后，加1%1%三氯化鐵水溶液三氯化鐵水溶液8ml8ml攪拌；攪拌；u再加入再加入 8ml8ml的的LugoiLugoi碘液（碘碘液（碘1 1克，碘化鉀克，碘化鉀2 2克，蒸餾水克，蒸餾水100ml100ml）攪拌混合而成。）攪拌混合而成。u染液僅可存放染液僅可存放2-32-3周。周。應(yīng)用：應(yīng)用：u1.顯示皮膚組織中彈力纖維的變化顯示皮膚組織中彈力纖維的變化u2.顯示鑒別心血管疾病顯示鑒別心血管疾病u3.顯示呼吸系統(tǒng)和腎臟疾病時(shí)彈力纖維的變化顯示呼吸系統(tǒng)和腎臟疾病時(shí)彈力纖維的變化u4.對(duì)彈力纖維瘤的診斷有決定作用對(duì)彈

27、力纖維瘤的診斷有決定作用四、四、Masson三色染色法三色染色法 MassonMasson三色染色法是由三色染色法是由MalloryMallory氏苯胺藍(lán)氏苯胺藍(lán)菊黃菊黃G G發(fā)展改良而來，但對(duì)于固定液有一定的發(fā)展改良而來，但對(duì)于固定液有一定的選擇性，雖然任何固定液固定后的組織可進(jìn)行選擇性，雖然任何固定液固定后的組織可進(jìn)行染色，但最好是用染色，但最好是用ZenkerZenker氏固定液或氏固定液或BouinBouin氏氏固定液固定組織。福爾馬林固定的標(biāo)本切片在固定液固定組織。福爾馬林固定的標(biāo)本切片在染色前以染色前以3%3%升汞作第二次固定一小時(shí)以上，則升汞作第二次固定一小時(shí)以上，則可增強(qiáng)著色效

28、果。可增強(qiáng)著色效果。操作方法：操作方法：u(1)切片常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水洗；切片常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水洗；u(2)Weigent氏蘇木素液染核氏蘇木素液染核5分鐘；分鐘；u(3)自來水洗；自來水洗； u(4)1%鹽酸分化鹽酸分化u(5)自來水洗；自來水洗；u(6)麗春紅麗春紅-酸性品紅溶液染酸性品紅溶液染5-8分鐘；分鐘；u(7)1%(7)1%醋酸水溶液洗；醋酸水溶液洗；u(8)1%(8)1%磷鉬酸分化（磷鉬酸分化（1-31-3分鐘）直到各種成分被分鐘）直到各種成分被染清晰（膠原纖維呈淡紅色，肌纖維、纖維素染清晰（膠原纖維呈淡紅色，肌纖維、纖維素呈鮮紅色）呈鮮紅色）u(9)2%(9)2%亮綠液染

29、亮綠液染2-52-5分鐘（或用分鐘（或用2%2%苯胺藍(lán)水溶液苯胺藍(lán)水溶液替代）替代）u(10)(10)水洗（快速）水洗（快速）u(11)(11)常規(guī)脫水、透明、封片。常規(guī)脫水、透明、封片?！救旧Y(jié)果】【染色結(jié)果】 膠原纖維膠原纖維綠色綠色(亮綠亮綠)（或（或苯胺藍(lán)苯胺藍(lán),藍(lán)色藍(lán)色）肌肉、纖維素紅色，紅細(xì)胞橘黃色，核藍(lán)肌肉、纖維素紅色，紅細(xì)胞橘黃色，核藍(lán)黑色。黑色。試劑配制：試劑配制：1麗春紅麗春紅-品紅溶液品紅溶液u麗春紅麗春紅 0.7gu酸性品紅酸性品紅 0.30.5g u冰醋酸冰醋酸 1ml u蒸餾水蒸餾水 99ml 21%冰醋酸水溶液冰醋酸水溶液u冰醋酸冰醋酸 1mlu蒸餾水蒸餾水 99

30、ml 3亮綠亮綠u亮綠亮綠 2.0gu冰醋酸冰醋酸 2mlu蒸餾水蒸餾水 98ml第二節(jié)第二節(jié) 脂類染色法脂類染色法u脂肪和類脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）統(tǒng)稱為脂類。它是構(gòu)成人體組織的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶劑中。在化學(xué)組成上，脂類屬于脂肪酸的酯或與這些酯有關(guān)的物質(zhì)。脂類的主要功能是氧化供能。脂肪主要存積于脂肪組織中，并以油滴狀的微粒存在脂肪細(xì)胞漿內(nèi)。u在病理檢驗(yàn)中，脂類染色法最常用以證明脂肪變性，脂肪栓子以及腫瘤的鑒別。脂類染色使用最廣泛的染料是蘇丹染料，最常用的有蘇丹，蘇丹，蘇丹黑及油紅O等。脂肪被染色，實(shí)際上是蘇丹染料被脂肪溶解吸附而呈現(xiàn)染料的顏色。經(jīng)研究認(rèn)為組織中

31、脂質(zhì)在液態(tài)或半液態(tài)時(shí)，對(duì)蘇丹染料著色效果最好。根據(jù)這一原理，適當(dāng)提高溫度（37-60）對(duì)組織切片染色效果是有好處的。一、油紅染色法：一、油紅染色法：試劑配制：u油紅O 0.5gu異丙醇（含量98%） 100ml此為油紅飽和液，可長(zhǎng)期保存?zhèn)溆谩Ｈ旧襟E：染色步驟：u冰凍切片冰凍切片u蒸餾水充分洗滌。蒸餾水充分洗滌。u油紅稀釋液染油紅稀釋液染10-1510-15分鐘，避光、密封。分鐘，避光、密封。 油紅稀釋液的配制：油紅稀釋液的配制： 取油紅飽和液取油紅飽和液6 6毫升，加蒸餾水毫升，加蒸餾水4 4毫升，靜置毫升，靜置5-105-10分鐘分鐘 后過濾后使用。后過濾后使用。u60%60%乙醇鏡下分化

32、至間質(zhì)清晰。乙醇鏡下分化至間質(zhì)清晰。u水洗。水洗。uMarryMarry氏蘇木素復(fù)染核。氏蘇木素復(fù)染核。u水洗。水洗。u甘油或甘油明膠封片。甘油或甘油明膠封片。【結(jié)果】【結(jié)果】 脂肪呈鮮紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色，間質(zhì)無色注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：u油紅染色時(shí)應(yīng)避免試劑揮發(fā)過多，否則易形成背景沉淀。u60%乙醇分化，應(yīng)于鏡下控制至脂肪組織呈鮮紅色，間質(zhì)無色時(shí)為度。二、蘇丹二、蘇丹(Sudan )染色法染色法操作方法：操作方法：u固定于10%甲醛的組織。u水洗后采用冰凍或石蠟切片。u經(jīng)蒸餾水后，浸染于Harris蘇木素或明礬蘇木素中淡染1-2分鐘。u自來水沖洗。u水洗后，移入70%酒精5秒鐘。u投入蘇丹染液中

33、約30分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，置于56溫箱中。u在70%酒精中洗滌5-10秒鐘。u洗于蒸餾水中，將切片周圍的水分小心擦掉。u甘油明膠封固。試劑配制：試劑配制：u1. 蘇丹染液配法：將0.15克蘇丹溶解于100ml70%酒精或純丙酮和70%酒精混合液中（各50ml），臨用時(shí)過濾，所得濾液即為飽和濃度。 注：浸染時(shí)，容器必須蓋好，否則酒精或丙酮揮發(fā)，染料沉淀。注：浸染時(shí)，容器必須蓋好，否則酒精或丙酮揮發(fā)，染料沉淀。u2.甘油明膠配制： 明膠 40g 蒸餾水 210ml 甘油 250ml 石碳酸結(jié)晶 5mlu先將明膠浸入蒸餾水中先將明膠浸入蒸餾水中2小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，然后加甘油和石碳酸，小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，然后加

34、甘油和石碳酸，加熱加熱15分鐘，搖攪直至混合液均勻?yàn)橹?。分鐘，搖攪直至混合液均勻?yàn)橹?。【結(jié)果】 脂肪呈橙紅色，膽脂素呈淡紅色，脂肪酸不著色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。蘇丹蘇丹蘇丹蘇丹(Sudan )染色法：染色法：u蘇丹又名猩紅，是蘇丹的衍生物，作為脂肪染劑，經(jīng)各地實(shí)驗(yàn)證明，其結(jié)果優(yōu)于蘇丹。u其染色步驟與蘇丹染法完全相同，從略。應(yīng)用：應(yīng)用：u（1）心、腦、腎等組織器官的脂肪栓塞，脂肪染色即可判定栓子是否為脂肪滴。u（2）心臟、肝臟等脂肪變性：脂肪染色可顯示變性細(xì)胞內(nèi)的脂滴。u（3）脂肪肉瘤與其它間葉組織的惡性腫瘤的鑒別：脂肪染色即可顯示脂肪肉瘤瘤細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的脂滴。脂肪栓塞（脂肪栓塞（Fat embolis

35、m）第三節(jié)第三節(jié) 糖原和粘液染色糖原和粘液染色 糖原的概念糖原的概念 糖原（糖原（glycogen）系由糖衍化而來，是單純的多）系由糖衍化而來，是單純的多糖，正常情況下，糖原存在胞漿內(nèi)，在肝臟、心肌糖，正常情況下，糖原存在胞漿內(nèi)，在肝臟、心肌、骨骼、肌肉含量最多。通常根據(jù)機(jī)體能量代謝將、骨骼、肌肉含量最多。通常根據(jù)機(jī)體能量代謝將組成內(nèi)的糖原分為不穩(wěn)定性和穩(wěn)定性兩類：組成內(nèi)的糖原分為不穩(wěn)定性和穩(wěn)定性兩類： 不穩(wěn)定性糖原正常情況下儲(chǔ)積于肝臟和肌肉，這不穩(wěn)定性糖原正常情況下儲(chǔ)積于肝臟和肌肉，這種糖原當(dāng)身體需要能量時(shí)很容易轉(zhuǎn)化為葡萄糖。種糖原當(dāng)身體需要能量時(shí)很容易轉(zhuǎn)化為葡萄糖。 穩(wěn)定性糖原僅以微量存積

36、于身體的各種組織和細(xì)穩(wěn)定性糖原僅以微量存積于身體的各種組織和細(xì)胞中，如神經(jīng)、上皮、軟骨細(xì)胞，以及白細(xì)胞等。胞中，如神經(jīng)、上皮、軟骨細(xì)胞，以及白細(xì)胞等。 糖原易溶于水，在酶的作用下很容易分解糖原易溶于水，在酶的作用下很容易分解葡萄糖更易溶于水，機(jī)體死后葡萄糖更易溶于水，機(jī)體死后1小時(shí)葡萄糖可轉(zhuǎn)小時(shí)葡萄糖可轉(zhuǎn)化為蔗糖，因此組織必須起新鮮時(shí)固定或冰凍化為蔗糖，因此組織必須起新鮮時(shí)固定或冰凍起來，固定之前決不能用水或生理鹽水浸洗。起來，固定之前決不能用水或生理鹽水浸洗。作為作為糖原染色的切片，必需經(jīng)特殊固定液固定糖原染色的切片，必需經(jīng)特殊固定液固定后而進(jìn)行石蠟切片，才能把后而進(jìn)行石蠟切片，才能把糖元保

37、存下來。糖元保存下來。 組織組織固定固定 1）為了不使糖原損失，一般用含酒精的溶）為了不使糖原損失，一般用含酒精的溶液，如液，如AAF液液2）采用低溫固定，肝組織放入冰箱，使酶）采用低溫固定，肝組織放入冰箱，使酶分解糖原慢。進(jìn)行冰凍切片，可以顯示糖分解糖原慢。進(jìn)行冰凍切片，可以顯示糖原在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的糖元分布原在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的糖元分布 組織組織固定中的注意事項(xiàng)固定中的注意事項(xiàng)1 1盡可能選取小塊新鮮組織及時(shí)固定。盡可能選取小塊新鮮組織及時(shí)固定。2 2多次更換乙醇固定液，在多次更換乙醇固定液，在44左右溫度左右溫度內(nèi)固定與保存。內(nèi)固定與保存。3 3乙醇能沉淀和糖原，但仍可溶于水。乙醇能沉淀和糖原，但仍可

38、溶于水。所以最好以乙醇為溶劑的混合固定液固定所以最好以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳。為佳。（四）糖原染色方法（四）糖原染色方法PAS法法對(duì)碘酸雪夫化反應(yīng)。對(duì)碘酸雪夫化反應(yīng)。 它的應(yīng)用較廣泛，除用于糖元的鑒定它的應(yīng)用較廣泛，除用于糖元的鑒定和粘液的顯示外，還可以觀察腎小球基底和粘液的顯示外，還可以觀察腎小球基底膜，阿米巴滋養(yǎng)體的著色。膜，阿米巴滋養(yǎng)體的著色。 【雪夫氏試劑的配制】【雪夫氏試劑的配制】 堿性品紅堿性品紅 1g 1 N鹽酸鹽酸 20ml 偏重亞硫酸鈉偏重亞硫酸鈉 1g 活性炭活性炭 2g 蒸餾水蒸餾水 200ml【配法】【配法】1. 蒸餾水蒸餾水200ml200ml煮沸后，加入堿性

39、品紅煮沸后，加入堿性品紅1g1g，并不斷搖動(dòng)，并不斷搖動(dòng)，使堿性品紅徹底溶解（溶解液為深紅色）。使堿性品紅徹底溶解（溶解液為深紅色）。2.2.冷卻到冷卻到5050時(shí)，加入時(shí)，加入1N1N鹽酸鹽酸20ml20ml。3.3.再待冷卻至再待冷卻至3535時(shí)加入時(shí)加入2g2g偏重亞硫酸鈉，蓋緊膠木塞，偏重亞硫酸鈉，蓋緊膠木塞，輕輕搖動(dòng)使其溶解，輕輕搖動(dòng)使其溶解，4.4.堿性品紅明顯變化，然后放入冰箱內(nèi)堿性品紅明顯變化，然后放入冰箱內(nèi)24h24h，溶液為淡黃，溶液為淡黃或淡紅色，或淡紅色，5.5.用活性炭過濾使溶液呈無色用活性炭過濾使溶液呈無色無色品紅，又稱無色品紅，又稱schiffschiff氏液。貯

40、存于棕色瓶中放入冰箱備用。氏液。貯存于棕色瓶中放入冰箱備用?！救旧椒ā俊救旧椒ā浚? 1）組織切片，脫臘至水洗。）組織切片，脫臘至水洗。（2 2）蒸餾水洗。）蒸餾水洗。（3 3）1%1%過碘酸氧化過碘酸氧化5-105-10。（4 4）充分蒸餾水洗。）充分蒸餾水洗。（5 5）schiffschiff氏液染色氏液染色2020（放入暗處）。（放入暗處）。（6 6）自來水洗）自來水洗1010。（7 7）蘇木素染核）蘇木素染核（8 8）脫水、透明、封片）脫水、透明、封片【結(jié)果】【結(jié)果】u糖原和PAS反應(yīng)陽性物質(zhì)成紅色，細(xì)胞核藍(lán)色。 （五）（五） 糖原染色的應(yīng)用糖原染色的應(yīng)用1證明與鑒別細(xì)胞內(nèi)空泡狀變性證明與鑒別細(xì)胞內(nèi)空泡狀變性 用染色中，如胞槳內(nèi)出現(xiàn)大小不等的空泡，用染色中，如胞槳內(nèi)出現(xiàn)大小不等的空泡，可能是脂肪變性，經(jīng)脂溶性溶劑的可能是脂肪變性，經(jīng)脂溶性溶劑的脫水透明過程脫水透明過程所溶解而形成的所溶解而形成的空泡；也可能是糖元在經(jīng)水溶液空泡；也可能是糖元在經(jīng)水溶液固定過程中的脫失所致；也可能是單純的水泡變固定過程中的脫失所致；也可能是單純的水泡變性，甚至多種空泡變同時(shí)存在而不易區(qū)別。為了性，甚至多種空泡變同時(shí)存