實驗診斷實驗課課件

1、實驗一實驗一白細胞計數(shù)白細胞計數(shù) 一目的：熟悉白細胞計數(shù)方法，掌握白細胞計數(shù)參考值及臨床意義。二原理：用2%稀醋酸(冰乙酸)作白細胞計數(shù)稀釋液，可使紅細胞溶解，留下白細胞，用血細胞計數(shù)板計數(shù)一定體積中的白細胞數(shù)，計算出每升血液中白細胞的總數(shù)。三器材：白細胞稀釋液、顯微鏡、計數(shù)板、采血針、小玻棒、小試管、試管架、微量吸管、小紗布、75酒精棉球、消毒干棉球 四步驟：1.以2冰乙酸溶液為白細胞計數(shù)稀釋液，用吸管準確吸取稀釋液 0.38ml，置于清潔干燥的小試管中。 2.毛細血管采血法:用微量吸管采血至20微升處，擦去管尖外圍多余的血液，將管內血液迅速注入試管底部，并用上清液將管內殘存血液洗凈，立即混

2、勻。待液體呈褐色后，再振蕩均勻，用小玻棒取此液注入計數(shù)池內，靜置23分鐘。 3.用低倍鏡計數(shù)四角的四個大方格內的白細胞數(shù)(N)。 壓線細胞計數(shù)原則：數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。五 計算： 四個大方格內白細胞數(shù)（N）(N)/41020106白細胞數(shù)/升 式中：四個大方格內白細胞總數(shù)/4，算出 每個大方格（即0.1微升）內白細胞平均數(shù)。 10 把0.1微升換算為1微升。 20 為血液稀釋倍數(shù)。 106 將1微升換算為1L。六 參考值 ： 成人 （410）109/L 6個月至2歲嬰兒（1112）109/L 新生兒 （1520）109/L八注意事項：1稀釋倍數(shù)一定要準確（包括采血量和加稀釋液量）。2小試管

3、、計數(shù)板一定要清潔，以免雜質、微粒等被誤認為細胞。3.一定要待稀釋液轉化為棕褐色后方可進行計數(shù)，此時紅細胞已完全破壞，否則可因紅細胞殘留而干擾計數(shù)，使結果偏高。 九思考題： 白細胞總數(shù)增多的臨床意義？ 實驗二實驗二紅細胞計數(shù)紅細胞計數(shù) 一 實驗目的：掌握紅細胞計數(shù)原理和方法，熟悉紅細胞參考值及臨床意義。 二 實驗原理：用紅細胞稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，置于血細胞計數(shù)板內，于顯微鏡下計數(shù)一定體積內的紅細胞數(shù)，然后 再計算出每升血液內的紅細胞數(shù)。 三 實驗器材和試劑： 紅細胞稀釋液（0.85%NaCl）、顯微鏡、 小試管、 細胞計數(shù)板、蓋玻片、微量吸管、試管架、采血針、小 玻棒、75%酒精棉球、小

4、紗布、消毒干棉球、報告單。 四 實驗步驟：1.取試管1支，加紅細胞稀釋1.99ml。 2.消毒皮膚，用采血針刺破皮膚，使血液自動流出，拭去第一滴血，用一次性微量吸管準確取血10微升。 3.去管尖外部余血，輕輕注入紅細胞稀釋液底部，再吸取上層稀釋液清洗吸管2-3次，立即搖勻。 4.傾斜試管用小玻棒沾取紅細胞懸液，注入血細胞計池內，要求一次充好，不要產(chǎn)生氣泡。靜置2-3分鐘，使紅細胞完全沉降。 5.將計數(shù)板置于顯微鏡下用 高倍鏡計數(shù)中央大方格紅細胞計數(shù)區(qū)四個角和中間的一個中方格共5個中方格內 的紅細胞。凡壓在中方格邊緣上的紅細胞，以數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進行計數(shù)。 五 計算 R（五個中方格內

5、RBC數(shù)） R510106200= .1012個/升 式中： 5：5個中方格內紅細胞數(shù)換算為1個大方 格內紅細胞數(shù) 10：1個大方格容積（0.1微升）換算成1微升 106：1微升換算為1升 200：血液稀釋倍數(shù) 六 實驗報告方式：.1012/L 七 正常參考值： 成年男性：4.00-5.501012/L 成年女性：3.50-5.001012/L 新生兒：6.00-7.001012/L 八 注意事項：1.顯微鏡物鏡接近計數(shù)板時應注意，勿損壞計數(shù)板及鏡頭。2.計數(shù)時進入顯微鏡的光線要適中，否則不易找到方格。計數(shù)池內的細胞分布要均勻，各中方格的細胞相差不應超過10%，否則重新計數(shù)。3.試管、計數(shù)板須

6、清潔，以免雜質、微粒等被誤認為紅細胞。4.稀釋倍數(shù)要準確。5.計數(shù)完畢后，用清水將計數(shù)盤和蓋玻片沖洗干凈，待干后備用。 九 思考題：1.計數(shù)不準確的常見原因有哪些？2.紅細胞數(shù)增多減少的臨床意義？ 實驗三實驗三 白細胞分類計數(shù)白細胞分類計數(shù) 一 實驗目的：掌握白細胞分類計數(shù)原理和方法，熟悉白細胞分類計數(shù)的參考值及臨床意義。 二 實驗原理：白細胞的胞質、胞核和胞槳顆粒等含有不同的化學成分，其與各種染料的親和力不同。經(jīng)染色后能著上不同的顏色，根據(jù)顏色的差異，可將白細胞區(qū)別并進行分類計數(shù)。 三 實驗器材和試劑：顯微鏡 擦鏡紙 75 酒精 推玻片 吸水紙 消毒干棉球 載玻片 染色架 瑞氏染色液 采血針

7、 香柏油 緩沖液 吸球 二甲苯 四 實驗步驟：1.血涂片制備- 取末梢血一滴，置于載玻片一端，將推片的一端，放在血滴前面，逐漸后移接觸血滴，血滴好沿推片散開，然后使推片與載玻片間成3045夾角，平穩(wěn)向前推動至載玻片的另一端，玻片上便留下一均勻薄層血膜，自然干燥。2. 染色-將干燥后的血膜片置于染色架上。用瑞氏染液35滴，覆蓋整個血膜，固定細胞0.51min。滴加等量或稍多的緩沖液于血膜上，用吸球將其吹勻，染色510min。平放玻片，用流水從玻片的一側沖去染液，待血片自然干燥或用濾紙吸干，即可鏡檢。3.鏡檢-在低倍鏡下觀察細胞著色情況，然后選擇血涂片體尾交界部染色良好的區(qū)域滴加一滴香柏油，在油鏡

8、下按一定的方向順序對所見到的每一個白細胞進行分類，既不得重復亦不遺漏，共計數(shù)100個白細胞。求出各類白細胞所占的百分率各類白細胞所占的百分率。 瑞氏染色外周血五種白細胞形態(tài)特征： 細胞類型細胞類型大小大?。╩）外形外形細胞核細胞核細胞質細胞質核形核形染色質染色質著色著色顆粒顆粒中性桿狀核中性桿狀核粒細胞粒細胞101015圓形圓形彎曲呈臘腸樣，彎曲呈臘腸樣，兩端鈍圓兩端鈍圓深紫紅色深紫紅色粗糙粗糙淡橘紅色淡橘紅色量多，細小，均勻量多，細小，均勻布滿胞質，淺紫紅布滿胞質，淺紫紅色色中性分葉核中性分葉核粒細胞粒細胞101015圓形圓形分為分為25葉，葉，以以3葉為多葉為多深紫紅色深紫紅色粗糙粗糙淡橘

9、紅色淡橘紅色量多，細小，均勻量多，細小，均勻布滿胞質，淺紫紅布滿胞質，淺紫紅色色嗜酸性粒細嗜酸性粒細胞胞111116圓形圓形分為分為2葉，呈葉，呈眼鏡樣眼鏡樣深紫紅色深紫紅色粗糙粗糙淡橘紅色淡橘紅色量多粗大，圓而均量多粗大，圓而均勻，充滿胞質，鮮勻，充滿胞質，鮮橘紅色橘紅色嗜堿性粒細嗜堿性粒細胞胞101012圓形圓形核結構不清，核結構不清，分葉不明顯分葉不明顯粗而不勻粗而不勻淡橘紅色淡橘紅色量少，大小和分布量少，大小和分布不均，常覆蓋核上，不均，常覆蓋核上，藍黑色藍黑色淋巴細胞淋巴細胞6 615圓形或圓形或橢圓形橢圓形圓形或橢圓形，圓形或橢圓形，著邊著邊深紫紅色深紫紅色塊粗糙塊粗糙透明淡藍透明

10、淡藍色色小淋巴細胞一般無小淋巴細胞一般無顆粒，大淋巴細胞顆粒，大淋巴細胞可有少量粗大不均可有少量粗大不均勻，深紫紅色顆粒勻，深紫紅色顆粒單核細胞單核細胞101020圓形或圓形或不規(guī)則不規(guī)則形形不規(guī)則形，腎不規(guī)則形，腎形，馬蹄形，形，馬蹄形，或扭曲折疊或扭曲折疊淡紫紅色，淡紫紅色，細致疏松細致疏松呈網(wǎng)狀呈網(wǎng)狀淡灰藍色淡灰藍色量多細小，灰塵樣量多細小，灰塵樣紫紅色顆粒彌散分紫紅色顆粒彌散分布于胞質中布于胞質中中性桿狀核粒細胞 中性分葉核粒細胞淋巴細胞 單核細胞嗜堿性粒細胞嗜酸性粒細胞 外周血各類白細胞的百分率及絕對值血涂片的制備 五 注意事項：1.所制血膜片一定要均勻，厚薄適宜，頭、體、尾分明。2

11、.玻片需清潔，血膜干透后才可固定染色。3.染色時間的長短與染液的濃度、室溫高低及有核細胞多少有關。染液濃度愈小、室溫愈低、細胞愈多、所需時間愈長。必要時可增加染液量或延長時間。4.染液不宜過少，以免蒸發(fā)干燥，導致染料沾著于血膜上不易沖掉。5.沖洗時不可先倒掉染液，應讓流水從血膜一端緩緩將染液沖去，以免染料殘渣附在血膜上。六 思考題： 白細胞分類計數(shù)的臨床意義？實驗四網(wǎng)織紅細胞計數(shù)一 實驗目的： 熟悉網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的原理和測定方法，掌握網(wǎng)織紅細胞參考值及臨床意義。二 實驗原理： 網(wǎng)織紅細胞是尚未完全成熟的紅細胞，其胞質中含有核糖體、核糖核酸等嗜堿性物質，經(jīng)新亞甲藍活體染色后呈淺藍或深藍色的網(wǎng)狀結

12、構，可區(qū)別于完全成熟的紅細胞。三 實驗器材和試劑：顯微鏡、10g/l新亞甲藍染液，試管、載玻片、香柏油四 實驗步驟：1. 取小試管1支加10g/l新亞甲藍染液1滴。2. 加入血液1滴于上述試管中，混勻。3. 室溫下放置1015分鐘后，取1滴制成血膜片。 4. 在低倍鏡下選擇細胞分布均勻，著色清晰的部位，用油鏡計數(shù)1000個紅細胞內網(wǎng)織紅細胞數(shù)。五 計算：網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)網(wǎng)織紅細胞數(shù)/1000 六 參考值： 成人：0.005-0.015 (0.5%1.5%) 新生兒：0.03-0.06 (3% 6% ) 七 注意事項：1.網(wǎng)織紅細胞必須用新鮮血液活體染色才能顯示，染液與血液的比例1：1為宜2.

13、血膜制備技術很重要。紅細胞應均勻散開，如有重疊則影響結果的準確性。網(wǎng)織紅細胞體積較成熟紅細胞體積稍大，多分布于涂片的尾部及兩側，故進行計數(shù)時應巡視整個血涂片中網(wǎng)紅細胞分布情況再進行計數(shù)。3.染料配制前必須過濾，放置保存過程中應防止有任何沉淀出現(xiàn)以影響計數(shù)結果。4. 為便于計數(shù)，可使用米勒窺盤進行計數(shù)。5.血液與染液混合時間必須足夠長。八 思考題：網(wǎng)織紅細胞的臨床意義？Miller窺盤為一厚1 mm，直徑19mm的圓形玻片，玻片上的微細刻線劃分成大小兩個正方形。B為小正方形，A為大正方形。B位于A之內， 如附圖所示。其中B的邊長為A的邊長的13，故其面積為A的19。將Miller窺盤置于接目鏡內

14、檢測網(wǎng)織紅細胞涂片。用小正方形（B）計數(shù)紅細胞,大正方形（A）計數(shù)網(wǎng)織紅細胞數(shù),再接下式計算:網(wǎng)織紅細胞 %= A格內網(wǎng)織紅細胞/ （B格內紅細胞數(shù)9 ）100% 實驗五實驗五凝血酶原時間（凝血酶原時間（PTPT）測定）測定凝血酶時間（凝血酶時間（TTTT）測定）測定一 實驗目的：掌握PT,TT實驗的原理、操作方法和臨床意義。二 實驗原理： PT原理：在受檢血漿中加入足量的凝血活酶和鈣離子，測定血漿凝固所需的時間，即為血漿凝血酶原時間。本試驗是外源性凝血系統(tǒng)常用的篩檢試驗，此外，常利用本試驗對口服抗凝劑治療進行監(jiān)控。 TT原理：受檢血漿中加入標準化的凝血酶溶液后，測定血漿凝固所需要的時間，即為

15、血漿凝血酶時間，TT主要用于檢測血漿纖維蛋白原的減少或抗凝物質的增多。三 實驗試劑和器材：待測血漿、37度水浴箱、硅化試管、秒表、加樣槍、氯化鈣凝血活酶試劑、凝血酶溶液。四 實驗步驟：PT: 取待測血漿0.1ml，37 孵育3分鐘，加入37 預溫PT試劑0.2ml,記錄凝固時間，即為PT值。TT：取37 預溫待測血漿0.2mL,加入TT試劑0.2ml，記錄凝固時間，即為TT值。注意：TT試劑不需37 預溫，15-25 室溫直接使用。五 參考值：PT 10-14秒 TT 10-16秒六注意事項：1.采血必須使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，貯血必須使用塑料試管或硅化玻璃管。2血漿分離后應盡快

16、測定。3血漿預溫不宜超過10分鐘。4凝血活酶預溫不可超過30分鐘。5待測血漿應使用 0.109mo 1L枸櫞酸鈉抗凝。6手工操作時，凝血酶原和凝血酶時間的終點計算以出現(xiàn)混濁的 初期凝固為準。 7. 測定溫度365385，過低或過高溫度均使PT、TT延長。 七 臨床意義：1.PT延長 ： 見于先天性凝血因子異常，如因子、缺乏癥；后天性凝血因子異常，如彌漫性血管內凝血、原發(fā)性纖溶、維生素K缺乏癥、嚴重肝??；血循環(huán)中有抗凝物質，如口服抗凝劑、肝素和FDP等。 2PT縮短 :見于高凝狀態(tài)和血栓性疾病、先天性因子增多癥、口服避孕藥等。3.TT延長：以DIC時纖維蛋白原消耗為多見，也有部分屬于先天性低（無

17、）纖維蛋白原血癥、原發(fā)性纖溶及肝臟病變。也可見于肝素增多或類肝素抗凝物質增多。 4.TT縮短：極為罕見，主要見于某些異常蛋白血癥或巨球蛋白血癥時，此外較多是技術原因，如標本在4度環(huán)境中放置過久，組織液混入血漿等。實驗六實驗六尿常規(guī)檢查尿常規(guī)檢查 尿液的常規(guī)檢查包括：尿液的常規(guī)檢查包括：物理學檢查：尿量、氣味、顏色、透明度物理學檢查：尿量、氣味、顏色、透明度化學檢查：蛋白、糖、化學檢查：蛋白、糖、PHPH、酮體、尿膽紅素、尿膽原、尿、酮體、尿膽紅素、尿膽原、尿亞硝酸鹽、尿隱血、白細胞、比密、維生素亞硝酸鹽、尿隱血、白細胞、比密、維生素C C尿沉渣（顯微鏡）檢測：尿液細胞、管型、結晶、上皮尿液細胞

18、、管型、結晶、上皮等 一般性狀檢查： 1、尿量： 正常尿量 1000-2000ml/24hr平均1500ml 少尿：400ml/24hr或持續(xù)17ml/hr 無尿：2500ml/24hr 2.尿液外觀： 正常尿的顏色：多為澄清透明至淡黃色或琥珀色， 顏色常受食物、藥物、尿色素（尿膽原、尿膽素、尿卟啉）的影響。 病理性尿液外觀1.血尿：尿中含有一定量紅細胞，可呈淡紅色云霧狀、水洗肉樣（量少時）、紅色血凝塊（量多時）。2.肉眼血尿：每升尿中含血量超過1ml，即可出現(xiàn)淡紅色。3. 顯微鏡血尿：尿外觀無明顯變化，離心沉淀后鏡檢，平均3RBC/Hp4.血紅蛋白尿 ：可使尿液呈濃茶色、紅葡萄酒色或醬油色。

19、隱血試驗為陽性（正常尿液試驗隱血為陰性）血紅蛋白尿：見于嚴重的血管內溶血：陣發(fā)性血紅蛋尿、蠶豆病、血型不合的輸血反應。5.膽紅素尿：尿就中含有大量結合膽紅素，呈豆油樣改變，振蕩后出現(xiàn)黃色的泡沫且不易消失。 常見：阻塞性黃膽和肝細胞性黃疸。6.膿尿和菌尿：新鮮排出的尿液呈白色混濁（膿尿）或云霧狀（菌尿）加熱加酸不溶解，內含膿細胞、炎性滲出物或細菌。 常見：泌尿道感染：腎盂腎炎、膀胱炎尿中紅細胞尿中白細胞膿細胞7.乳糜尿和脂肪尿：乳糜尿：乳糜液逆流進尿中所致外觀呈不同程度乳白色，當含有較多血液時呈乳糜血尿。常見：腫瘤、結核、絲蟲病及周圍淋巴管梗阻。 脂肪尿：尿中出現(xiàn)脂肪小滴。常見：脂肪擠壓損傷、骨

20、折、腎病綜合征，可通過乙醚等有機溶劑提取乳糜顆粒、脂肪小粒使尿液變清，可與其他混濁尿鑒別。氣味：來自尿中的揮發(fā)性酸和酚類，新鮮的尿特殊微弱芳香氣味氨臭味：久置尿、但尿液新鮮時可為慢性膀胱炎、慢性尿潴溜蘋果樣氣味：糖尿病、酮癥酸中毒蒜臭味：有機磷中毒進食蔥、韭菜、蒜和某些藥物可呈相應氣味。干化學檢查干化學檢查 試劑帶原理試劑帶原理 絨制層：包括碘酸鹽層和試劑層： 碘酸鹽層：可以破壞維生素C等干擾物質， 試劑層：含有試劑成分，主要與尿液中測定物質發(fā)生化學反應，產(chǎn)生顏色變化； 吸水層：可使尿液均勻快速的浸入，并能抑制尿液流到相鄰的反應區(qū)； 塑料底層：作支持體。各項目測定原理各項目測定原理項目 縮寫符號 反應原理 PH PH PH指示劑（甲基紅和溴麝香草酚蘭） 蛋白質 PRO PH指示劑的蛋白質誤差法 葡萄糖 GLU 葡萄糖氧化酶法 隱血 BLD Hb類過氧化