實(shí)驗(yàn)五色譜法

1、色色 譜譜 法法（Chromatography）色譜分析法（簡(jiǎn)稱色譜法或?qū)游龇ǎ?色譜分析法簡(jiǎn)稱色譜法色譜法或?qū)游龇▽游龇ā?906年，俄國(guó)植物學(xué)家Tsweet將CaCO3放在豎立的玻璃柱中，從頂端倒入植物色素的石油醚浸取液，并用石油醚沖洗。在柱的不同部位形成色帶，因而命名為色譜。管內(nèi)填充物稱為，沖洗劑稱為。現(xiàn)在的色譜法不僅可分離有色物質(zhì)，還可分離無(wú)色物質(zhì)，不局限于“色”的意義。 分離原理 色譜法色譜法就是利用混合物中各組分在固定相和移動(dòng)相中進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配作用，達(dá)到各組分分開(kāi)的目的。 分 類n按照被分離物質(zhì)在固定相中的作用原理不同，色譜法可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜等。n按照操

2、作方式不同，又可分為柱色譜、薄層色譜、紙色譜、氣相色譜、和高效液相色譜等。 本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、柱層析2、紙層析 一、柱色譜 將固定相裝于柱管內(nèi)構(gòu)成色譜柱，色譜過(guò)程在色譜柱內(nèi)進(jìn)行。按色譜柱的粗細(xì)差別，可分為填充柱色譜法、毛細(xì)管柱色譜法及微填充柱色譜法等。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握柱色譜的原理和基本操作。2. 利用柱色譜的方法分離和提純有機(jī)物。 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 柱色譜是利用混合物中各組分受吸附作用的不同以及各組分在溶劑中溶解度的差別，將各組分分離。可分為吸附柱層析和分配柱層析分配柱層析。 吸附柱層析吸附柱層析 預(yù)分離的混合物隨著流動(dòng)相通過(guò)色譜柱，在固定相上反復(fù)發(fā)生吸附洗脫再吸附吸附洗脫再吸附再洗

3、脫。再洗脫。由于各組分吸附能力不同，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，按對(duì)吸附劑親和力大小，形成不同色帶而分離。 影響因素n吸附劑吸附劑 柱色譜常用的吸附劑是氧化鋁和硅膠。吸附劑應(yīng)進(jìn)行純化和活化處理。n物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和吸附能力物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和吸附能力 吸附性與分子極性成正比。n洗脫劑洗脫劑 先用極性小的溶劑洗脫，后改用極性強(qiáng)的溶劑洗脫。使化合物按極性與小道大順序出柱。 儀器和藥品儀器和藥品n色譜柱、玻璃漏斗、滴液漏斗、100ml燒杯一個(gè)、150ml錐形瓶二個(gè)、滴定臺(tái)（或鐵架臺(tái)）、剪刀、玻棒n 0.05%甲基橙和0.25%亞甲基藍(lán)混合乙醇溶液1、 100200目中性色譜用氧化鋁、無(wú)水乙醇、0.1mol/L鹽酸溶液、蒸餾水、

4、脫脂棉、濾紙 1 稱取110mg甲基橙和550mg亞甲基藍(lán)于250ml 95%乙醇中溶解。 實(shí)驗(yàn)步驟 1、裝柱 取清潔干燥的色譜柱，管底墊少許棉花。傾入取清潔干燥的色譜柱，管底墊少許棉花。傾入無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇20ml，稱取，稱取8g柱用氧化鋁，經(jīng)漏斗緩慢柱用氧化鋁，經(jīng)漏斗緩慢倒入管中，同時(shí)輕輕拍打色譜柱，用無(wú)水乙醇清倒入管中，同時(shí)輕輕拍打色譜柱，用無(wú)水乙醇清洗沾在管內(nèi)壁上的氧化鋁。打開(kāi)活塞，氧化鋁隨洗沾在管內(nèi)壁上的氧化鋁。打開(kāi)活塞，氧化鋁隨著溶劑流動(dòng)繼續(xù)下沉，直至沉降停止。著溶劑流動(dòng)繼續(xù)下沉，直至沉降停止。 在氧化鋁表面平整緊貼地覆蓋一張略小于色譜在氧化鋁表面平整緊貼地覆蓋一張略小于色譜柱內(nèi)徑

5、的濾紙，打開(kāi)活塞使氧化鋁表面僅留一薄柱內(nèi)徑的濾紙，打開(kāi)活塞使氧化鋁表面僅留一薄層的溶劑層的溶劑(1-2mm)。 實(shí)驗(yàn)步驟 2、加樣加樣 在色譜柱表面小心加入樣品溶液0.5亳升（注意勿使樣品沾在色譜柱的內(nèi)壁上）。 實(shí)驗(yàn)步驟3、洗脫 打開(kāi)活塞，使樣品液全部進(jìn)入吸附劑（勿使流干）。加入無(wú)水乙醇0.5ml，打開(kāi)活塞使藍(lán)色譜帶完全進(jìn)入吸附劑，關(guān)閉活塞；重復(fù)二次，藍(lán)色譜帶逐漸下移。繼續(xù)加無(wú)水乙醇，使亞甲基藍(lán)完全洗脫，收集于第1個(gè)三角錐瓶。改用25g/LNaOH溶液作洗脫劑（操作步驟與以無(wú)水乙醇作洗脫劑相同），使甲基橙完全洗脫，收集于第2個(gè)三角錐瓶。 思考題思考題 1裝柱過(guò)程應(yīng)注意什么事項(xiàng)？ 2加樣、洗脫過(guò)

6、程應(yīng)注意什么事項(xiàng)？ 二、紙色譜 紙色譜紙色譜為分配色譜，色譜過(guò)程在固定相構(gòu)成的平面狀層下進(jìn)行。濾紙為載體，固定相為濾紙上的水，流動(dòng)相（展開(kāi)劑）為用水飽和過(guò)的有機(jī)溶劑。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握紙層析分離氨基酸的方法。 2、掌握紙層析基本原理。實(shí)驗(yàn)原理紙色譜屬于分配色譜分配色譜。 衡量物質(zhì)向上移動(dòng)的物理量是比移值（Rf）Rf原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)到溶劑前沿的距離例例:大黃中游離蒽醌的紙色譜圖大黃中游離蒽醌的紙色譜圖溶劑前沿大黃素甲醚蘆薈大黃素大黃素大黃酸點(diǎn)樣點(diǎn)Rf原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)到溶劑前沿的距離儀器和藥品 干燥大試管及配套軟木塞、噴霧器、電熱吹風(fēng)器、刻度尺（20cm）、濾紙條（長(zhǎng)

7、160mm，寬15mm）、鉛筆、木框（2240cm）、大頭針、毛細(xì)管長(zhǎng)67cm、棉線 氨基酸混合液、飽和苯酚水溶液、0.2%茚三酮乙醇溶液 實(shí)驗(yàn)步驟 1在濾紙條上端邊緣約1厘米的中央剪一小孔。 2將濾紙條平放于潔凈的紙上，在距離濾紙下端1cm處用鉛筆輕畫一橫線，并在橫線的中央畫一直徑為2mm的小圓圈。 3用毛細(xì)管吸取氨基酸混合液，在濾紙條下端的小圓圈內(nèi)點(diǎn)樣。實(shí)驗(yàn)步驟 4. 取干燥大試管，加入被水飽和的酚溶液10ml，注意勿使溶液沾到試管壁上，將試管垂直固定。 5. 在距濾紙條下端0.5cm處穿大頭針。從濾紙條上端小孔處穿棉線并左右分開(kāi)，調(diào)節(jié)線的高度使濾紙垂直懸于試管內(nèi)且下湍浸入溶液0.5cm，注意勿使點(diǎn)樣點(diǎn)浸入溶液中，亦勿使濾紙條接觸試管壁。實(shí)驗(yàn)步驟 6. 此時(shí)即可看到溶劑向上移動(dòng)，溶劑升到一定高度時(shí)，小心將紙條取出，以鉛筆標(biāo)出溶劑上升的前沿。 7. 將濾紙條兩端，用大頭針釘在小木框上，吹干后用噴霧器均勻地噴一層0.