薄層層析分離方法（課堂PPT）

1、.1 薄層層析分離技術(shù)薄層層析分離技術(shù) Thin-layer chromatography .2 Thin-layer chromatography and column chromatography and are different types of liquid chromatography. The mobile (moving) phase is a liquid. The stationary phase is usually silica or alumina. This phase is very polar. The principle of operation is the

2、 same!.3Thin Layer ChromatographyThe surface of the plate consists of a very thin layer of silica on a plastic or aluminum backing. The silica is very polar. This is the stationary phase. Spot the material at the origin (bottom) of the TLC plate. Place the plate into a glass jar with a small amount

3、of a solvent in the glass jar. This solvent acts as the moving phase.Remove the plate from the bottle when the solvent is close to the top of the plate.Visualize the spots. Non-polar compounds will be less strongly attracted to the plate and will spend more time in the moving phase. This compound wi

4、ll move faster and will appear closer to the top of the plate. Polar compounds will be more strongly attracted to the plate and will spend less time in the moving phase and appear lower on the plate.4OHSiOOHSiOOOOHSiOOOHSiOOOHSiOOOSiOOSiOOSiOOSiOOOSiOOSiOOSiOOOStationary Phase: Silica (SiO2).5Statio

5、nary Phase: AluminaOAlOOAlOOHAlOOHAlOOHAlOHOAcidic: -Al-OHNeutral: -Al-OH + -Al-O-Basic: -Al-O-.6H2CH2CH2CCH2CH2CH2CH2CONHCH2NHCOH2CH2CH2CCH2CH2COCOH2CNHH2COOH固 定 相流 動(dòng) 相聚 酰 胺 吸 附 作 用 原 理 .7Thin-Layer Chromatography: A Two-Component MixtureMore polar!Less polar!solvent frontoriginmixturesolvent front

6、component Bcomponent Aoriginsolvent frontcomponent Bcomponent AoriginIncreasing Development Time.8Be sure to remove the TLC plate when it appears that the solvent front isnt moving!Reason: the solvent is evaporating as it moves up the plate. Results: If you dont remove the plate all of the spots wil

7、l appear near the top of the plate! This isnt a pretty sight and makes it difficult to get good Rf values!Important hint!.9Visualization Method The previous slide shows colored spots. Most of the time, the spots wont show unless they are visualized! Vizualization is a method that is used to render t

8、he TLC spots visible. A visualization method can be: Ultraviolet light Iodine vapors to stain spots Colored reagents to stain spots Reagents that selectively stain spots while leaving others unaffected.10Thin-Layer Chromatography: Determination of Rf Valuessolvent frontcomponent Bcomponent AorigindS

9、dBdARf of component A = dA dSRf of component B = dB dSThe Rf value is a decimal fraction, generally only reported to two decimal places.11Thin-Layer Chromatography: Qualitative AnalysisA B unknown.121、 薄層色譜：薄層色譜法，是薄層色譜：薄層色譜法，是將適宜的固定相涂布于玻璃板上，將適宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均勻薄層。等點(diǎn)樣、展開(kāi)后，成一均勻薄層。等點(diǎn)樣、展開(kāi)后，與適宜的對(duì)照物按同法所得的色

10、與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖作對(duì)比，用以進(jìn)行藥品的鑒譜圖作對(duì)比，用以進(jìn)行藥品的鑒別，雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。別，雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。.132 儀器與材料：儀器與材料：2.1 玻板：除另有規(guī)定外，用玻板：除另有規(guī)定外，用5cm20cm，10cm20cm或或20cm20cm的規(guī)格，要求光滑的規(guī)格，要求光滑，平整、洗凈后的不附水珠，晾，平整、洗凈后的不附水珠，晾干。干。.142.2 固定相或載體：最常用的有硅膠固定相或載體：最常用的有硅膠G、硅膠、硅膠GF、硅膠、硅膠H、硅膠、硅膠HF254，其次有硅藻土、，其次有硅藻土、硅藻土硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶

11、纖維素、微晶纖維素微晶纖維素F254等。其顆粒大小，一般要求等。其顆粒大小，一般要求直徑為直徑為1040m。薄層涂布，一般可分無(wú)。薄層涂布，一般可分無(wú)粘合劑和含粘合劑兩種；前者系將固定相直粘合劑和含粘合劑兩種；前者系將固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合劑，一般常用一定量的粘合劑，一般常用1015%煅石膏煅石膏（CaSO42H2O在在140烘烘4小時(shí)），混勻后小時(shí)），混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液（0.50.7%）適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于）適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。也有含一定

12、展開(kāi)液或緩沖液的薄玻璃板上。也有含一定展開(kāi)液或緩沖液的薄層。層。.152.3 涂布器：應(yīng)能使固定相或載體在玻涂布器：應(yīng)能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。層。2.4 點(diǎn)樣器：常用具支架的微量注射器點(diǎn)樣器：常用具支架的微量注射器或定時(shí)毛細(xì)管，應(yīng)能使點(diǎn)樣位置正確集或定時(shí)毛細(xì)管，應(yīng)能使點(diǎn)樣位置正確集中。中。2.5 展開(kāi)室：應(yīng)使用適合薄層板大小的展開(kāi)室：應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開(kāi)缸，并有嚴(yán)密蓋子玻璃制薄層色譜展開(kāi)缸，并有嚴(yán)密蓋子，除另有規(guī)定外，底部應(yīng)平整光滑，應(yīng)，除另有規(guī)定外，底部應(yīng)平整光滑，應(yīng)便于觀察。便于觀察。.16各種特制薄層

13、各種特制薄層混合薄層混合薄層酸堿薄層和酸堿薄層和pH緩沖薄層緩沖薄層絡(luò)合薄層絡(luò)合薄層 : 用用AgNO3。等無(wú)機(jī)試劑的水溶液。等無(wú)機(jī)試劑的水溶液代替水調(diào)硅膠糊來(lái)鋪制絡(luò)合薄層代替水調(diào)硅膠糊來(lái)鋪制絡(luò)合薄層 涂布固定液的薄層涂布固定液的薄層 高效薄層高效薄層: :它是由粒度十分均勻，直徑最小為它是由粒度十分均勻，直徑最小為5m5m，般為般為10m10m左右的硅膠吸附劑，加上高度惰性的粘合劑，鋪成質(zhì)地十分致密、左右的硅膠吸附劑，加上高度惰性的粘合劑，鋪成質(zhì)地十分致密、平滑的高效高層預(yù)制板。這種預(yù)制板性能極穩(wěn)定，層析展開(kāi)后所得平滑的高效高層預(yù)制板。這種預(yù)制板性能極穩(wěn)定，層析展開(kāi)后所得斑點(diǎn)仍保持圓形不拖尾

14、，分離清晰，分離效果極好。理論塔板高度斑點(diǎn)仍保持圓形不拖尾，分離清晰，分離效果極好。理論塔板高度最小可達(dá)最小可達(dá)12m12m，一般在，一般在202030m30m。展開(kāi)。展開(kāi)37cm37cm，理論塔板數(shù)可達(dá)數(shù)，理論塔板數(shù)可達(dá)數(shù)千，為一般薄層的十倍。千，為一般薄層的十倍。 .17.183 操作方法：操作方法：3.1 薄層板制備：除另有規(guī)定外，將薄層板制備：除另有規(guī)定外，將1份份固定相和固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布在玻璃板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為（厚度為0

15、.20.3mm），取下涂好薄層），取下涂好薄層的玻璃板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，的玻璃板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在后在110烘烘30分鐘。即置有干燥劑的分鐘。即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過(guò)透射光和反射光檢視）?？赏ㄟ^(guò)透射光和反射光檢視）。.193.2 點(diǎn)樣：除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于點(diǎn)樣：除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊2.0cm，點(diǎn)樣直徑為，點(diǎn)樣直徑為24mm，點(diǎn)間距離約，點(diǎn)間距離約為為1.52.0cm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響

16、檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。薄層表面。.203.3 展開(kāi)：展開(kāi)室如需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和，展開(kāi)：展開(kāi)室如需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和，可在室中加入足夠量的展開(kāi)劑，并在壁上貼可在室中加入足夠量的展開(kāi)劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開(kāi)劑中，密封室頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡或按正開(kāi)劑中，密封室頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)文規(guī)定操作。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)室的展開(kāi)劑中，浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層室的展開(kāi)劑中，浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板底邊板底邊0.51.0cm（切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑

17、（切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中），密封室蓋，等展開(kāi)至規(guī)定距離（一般中），密封室蓋，等展開(kāi)至規(guī)定距離（一般為為1015cm），取出薄層板，晾干，按各），取出薄層板，晾干，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)，如需用薄層掃描儀對(duì)品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)，如需用薄層掃描儀對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描檢出，或直接在薄層上對(duì)色色譜斑點(diǎn)作掃描檢出，或直接在薄層上對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描定量，則可用薄層掃描法。譜斑點(diǎn)作掃描定量，則可用薄層掃描法。.21 直線(xiàn)式展開(kāi)直線(xiàn)式展開(kāi) 直線(xiàn)式展開(kāi)技術(shù)可以分為直線(xiàn)式展開(kāi)技術(shù)可以分為近水平展開(kāi)、上行展開(kāi)、下行近水平展開(kāi)、上行展開(kāi)、下行展開(kāi)、雙向展開(kāi)和水平展開(kāi)五展開(kāi)、雙向展開(kāi)和水平展開(kāi)五種形式，薄層色譜分寓一般樣種形式

18、，薄層色譜分寓一般樣品多采用上行展開(kāi)方法。品多采用上行展開(kāi)方法。 .22 1近水平展開(kāi)近水平展開(kāi) 將適量展開(kāi)劑傾人長(zhǎng)方形玻將適量展開(kāi)劑傾人長(zhǎng)方形玻璃展開(kāi)槽中，點(diǎn)樣后的薄層板璃展開(kāi)槽中，點(diǎn)樣后的薄層板浸入溶劑浸入溶劑0.5cm，薄層上端墊，薄層上端墊高使薄層與水平成高使薄層與水平成510角，展角，展開(kāi)劑由下而上進(jìn)行展開(kāi)，這種開(kāi)劑由下而上進(jìn)行展開(kāi)，這種方法常用于不含粘合劑的軟板方法常用于不含粘合劑的軟板展開(kāi)展開(kāi) .232上行展開(kāi)上行展開(kāi) 流動(dòng)相沿薄層固定相向上運(yùn)動(dòng)流動(dòng)相沿薄層固定相向上運(yùn)動(dòng)的展開(kāi)方式。此時(shí)薄層板放置的的展開(kāi)方式。此時(shí)薄層板放置的角度對(duì)流動(dòng)相移動(dòng)速率和角度對(duì)流動(dòng)相移動(dòng)速率和斑點(diǎn)形狀有

19、一定影響。薄層板水斑點(diǎn)形狀有一定影響。薄層板水平角度為平角度為75時(shí)，對(duì)展開(kāi)最為有利。時(shí)，對(duì)展開(kāi)最為有利。這種展開(kāi)方式適合于含有粘合劑這種展開(kāi)方式適合于含有粘合劑的硬板展開(kāi)。的硬板展開(kāi)。 .243下行展開(kāi)下行展開(kāi) 在展開(kāi)槽內(nèi)薄層板上端放置一個(gè)盛在展開(kāi)槽內(nèi)薄層板上端放置一個(gè)盛展開(kāi)劑的溶劑槽，用厚濾紙將溶劑引到展開(kāi)劑的溶劑槽，用厚濾紙將溶劑引到薄層板的上端，使展開(kāi)劑自上而下流動(dòng)。薄層板的上端，使展開(kāi)劑自上而下流動(dòng)。下行法中展開(kāi)劑受重力和毛細(xì)管作用雙下行法中展開(kāi)劑受重力和毛細(xì)管作用雙重影響，因此展開(kāi)速度較快。由于這種重影響，因此展開(kāi)速度較快。由于這種展開(kāi)方式采用的裝置比較復(fù)雜，目前只展開(kāi)方式采用的裝

20、置比較復(fù)雜，目前只有在葡聚糖凝膠板上展開(kāi)時(shí)或紙色譜中有在葡聚糖凝膠板上展開(kāi)時(shí)或紙色譜中采用采用 .254二維展開(kāi)二維展開(kāi) 在正方形薄層板上，在兩個(gè)垂直的方向在正方形薄層板上，在兩個(gè)垂直的方向進(jìn)行基于相同或不同機(jī)理的展開(kāi)將樣品點(diǎn)進(jìn)行基于相同或不同機(jī)理的展開(kāi)將樣品點(diǎn)在薄層板的一個(gè)角上，第一方向展開(kāi)適當(dāng)距在薄層板的一個(gè)角上，第一方向展開(kāi)適當(dāng)距離后，取出薄層板，并使溶劑完全蒸發(fā)，再離后，取出薄層板，并使溶劑完全蒸發(fā)，再以與原點(diǎn)成以與原點(diǎn)成90方向展開(kāi)。第二方向展開(kāi)可采方向展開(kāi)。第二方向展開(kāi)可采用不同溶劑，也可將薄層板進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)后，用不同溶劑，也可將薄層板進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)后，再行第二方向展開(kāi)，通稱(chēng)雙向展開(kāi)

21、再行第二方向展開(kāi)，通稱(chēng)雙向展開(kāi). 二維展開(kāi)常用于復(fù)雜較多組分樣品的展二維展開(kāi)常用于復(fù)雜較多組分樣品的展開(kāi)，通過(guò)調(diào)節(jié)展開(kāi)劑極性，增加展開(kāi)距離，開(kāi)，通過(guò)調(diào)節(jié)展開(kāi)劑極性，增加展開(kāi)距離，進(jìn)一步提高分離能力這種方法多用于定性，進(jìn)一步提高分離能力這種方法多用于定性，很少用于定量。很少用于定量。 .265水平展開(kāi)水平展開(kāi) 圓形離心式展開(kāi)圓形離心式展開(kāi) 圓形向心式展開(kāi)圓形向心式展開(kāi) 特殊展開(kāi)技術(shù)特殊展開(kāi)技術(shù) :多次展開(kāi)多次展開(kāi) 、分步、分步展開(kāi)展開(kāi) 、離心展開(kāi)、離心展開(kāi) 、梯度洗脫展、梯度洗脫展開(kāi)開(kāi) 、梯度薄層、梯度薄層 、多維技術(shù)、多維技術(shù) 、加、加壓展開(kāi)壓展開(kāi) 、控溫展開(kāi)、控溫展開(kāi) 、楔形技術(shù)、楔形技術(shù)

22、.27 薄層掃描的方法，除另有規(guī)定外，可根薄層掃描的方法，除另有規(guī)定外，可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說(shuō)明，據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說(shuō)明，結(jié)合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙結(jié)合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多，故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在一的因素很多，故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在一定濃度范圍內(nèi)呈線(xiàn)性的情況下，將供試品與定濃度范圍內(nèi)呈線(xiàn)性的情況下，將供試品與對(duì)照品在同一塊薄層上展開(kāi)后掃描，進(jìn)行比對(duì)照品在同一塊薄層上展開(kāi)后掃描，進(jìn)行比較并計(jì)算定量，以減少誤差。各種供試品，較并計(jì)算定量，以減少誤差。各種

23、供試品，只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜，才只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜，才能獲得滿(mǎn)意的結(jié)果。能獲得滿(mǎn)意的結(jié)果。.284 注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：4.1 所用玻璃板應(yīng)洗凈不掛水珠所用玻璃板應(yīng)洗凈不掛水珠，光滑平整。，光滑平整。4.2 鋪板要均勻，厚度適宜，并鋪板要均勻，厚度適宜，并于室溫下晾干后在于室溫下晾干后在110活化活化30分鐘，置于有干燥劑的干燥箱或分鐘，置于有干燥劑的干燥箱或干燥器中備用。干燥器中備用。4.3 點(diǎn)樣點(diǎn)一般為圓點(diǎn)，不能太點(diǎn)樣點(diǎn)一般為圓點(diǎn)，不能太大。大。 .29鋪板鋪板 鋪板用的勻漿不宜過(guò)稠或過(guò)?。哼^(guò)稠，板容易鋪板用的勻漿不宜過(guò)稠或過(guò)?。哼^(guò)稠，板容易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成

24、的層紋；過(guò)稀，水蒸發(fā)后，出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過(guò)稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水水=1：23，硅膠，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿。研磨勻漿的時(shí)間，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)定，與空氣濕度有關(guān)，一般的時(shí)間，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過(guò)拿起研棒時(shí)勻漿下滴的情況來(lái)判斷，越稠越通過(guò)拿起研棒時(shí)勻漿下滴的情況來(lái)判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄，點(diǎn)板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄，點(diǎn)樣易過(guò)載；涂層厚，顯色不那么明顯

25、。通常，板樣易過(guò)載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對(duì)薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的的質(zhì)量對(duì)薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開(kāi)劑的配制和展開(kāi)系統(tǒng)的飽和。是展開(kāi)劑的配制和展開(kāi)系統(tǒng)的飽和。.30.31.32點(diǎn)樣點(diǎn)樣 盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性，最好只用性，最好只用1微升的點(diǎn)樣管。這樣，點(diǎn)微升的點(diǎn)樣管。這樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開(kāi)的色譜圖分離度好，的斑點(diǎn)較小，展開(kāi)的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無(wú)水乙醇、甲

26、。樣品溶液的溶劑一般是無(wú)水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板醇、氯仿、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。干。.33展開(kāi)劑配制展開(kāi)劑配制 選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開(kāi)劑。絕果分層，取用體積大的一層作為展開(kāi)劑。絕對(duì)不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開(kāi)缸，振搖展對(duì)不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開(kāi)缸，振搖展開(kāi)缸來(lái)配制展開(kāi)劑?；旌喜痪鶆蚝蜎](méi)有分液開(kāi)缸來(lái)配制展開(kāi)劑?；旌喜痪鶆蚝蜎](méi)有分液的展開(kāi)劑，會(huì)造成層

27、析的完全失敗。各組成的展開(kāi)劑，會(huì)造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對(duì)不同的分析任務(wù)有不同溶劑的比例準(zhǔn)確度對(duì)不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的最高精確度的要求，盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的最高精確度，比如：取，比如：取1ml的溶劑，應(yīng)使用的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移的單標(biāo)移液管，移液管應(yīng)符合計(jì)量認(rèn)證要求，盡管多液管，移液管應(yīng)符合計(jì)量認(rèn)證要求，盡管多數(shù)時(shí)候這不是必須的。數(shù)時(shí)候這不是必須的。.34.35展開(kāi)系統(tǒng)的飽和展開(kāi)系統(tǒng)的飽和 一般使用的是雙槽的展開(kāi)缸，一槽用來(lái)放一般使用的是雙槽的展開(kāi)缸，一槽用來(lái)放展開(kāi)劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展展開(kāi)劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開(kāi)的板放

28、入兩槽間的平臺(tái)，斜架著，蓋上展開(kāi)的板放入兩槽間的平臺(tái)，斜架著，蓋上展開(kāi)缸的蓋子。讓展開(kāi)劑的蒸氣充滿(mǎn)展開(kāi)缸，開(kāi)缸的蓋子。讓展開(kāi)劑的蒸氣充滿(mǎn)展開(kāi)缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開(kāi)時(shí)難免應(yīng)，飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開(kāi)時(shí)難免要打開(kāi)蓋子把薄層板放入展開(kāi)劑中，不過(guò)對(duì)要打開(kāi)蓋子把薄層板放入展開(kāi)劑中，不過(guò)對(duì)薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動(dòng)薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動(dòng)作應(yīng)該盡量輕、快。作應(yīng)該盡量輕、快。 .36 (a)點(diǎn)狀點(diǎn)樣 (b)條狀點(diǎn)樣 (c)頸部點(diǎn)樣 (d)溝槽點(diǎn)樣 .37.381氨基丙酸；2-氨基丙酸; 3

29、氨基丁酸；4精氨酸；5絲氨酸；6天門(mén)冬氨酸；7羥基脯氨酸；8脯氨酸；9蛋氨酸；10酪氨酸；11谷氨酸；12蘇氨酸；13甘氨酸; 14組氨酸; 15羧基賴(lài)氨酸；16亮氨酸；17異亮氨酸；18賴(lài)氨酸；19纈氨酸；20蛋氨酸砜;21色氨酸; 22苯丙氨酸；23磺基丙氨酸 23種氨基酸的雙向?qū)游鰣D譜 .39溫濕度的控制溫濕度的控制 溫濕度對(duì)薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提溫濕度對(duì)薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計(jì)主要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致，估計(jì)主要是

30、影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過(guò)在另一展開(kāi)槽放置相應(yīng)濃度濕度控制是通過(guò)在另一展開(kāi)槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。的硫酸。.40顯色方法顯色方法 物理顯色物理顯色 化學(xué)顯色化學(xué)顯色.41物理顯色物理顯色 含有共軛雙鍵的有機(jī)物質(zhì)能吸收紫外光，含有共軛雙鍵的有機(jī)物質(zhì)能吸收紫外光，將分離后的薄層板置于紫外燈下，組分薄將分離后的薄層板置于紫外燈下，組分薄層呈現(xiàn)暗色斑；如果采用硅腔層呈現(xiàn)暗色斑；如果采用硅腔GF(或其它或其它含有熒光指示劑的吸附劑含有熒光指示

31、劑的吸附劑)鋪成的薄層，在鋪成的薄層，在紫外光照射下，整個(gè)薄層呈顯黃綠色熒光，紫外光照射下，整個(gè)薄層呈顯黃綠色熒光，斑點(diǎn)部分呈現(xiàn)暗色，更為明顯。斑點(diǎn)部分呈現(xiàn)暗色，更為明顯。 .42利用蒸氣熏顯色蒸氣熏顯色時(shí)，常用的試劑有固體碘、濃氨水、液體溴。進(jìn)行顯色時(shí)，把這些易揮發(fā)的試劑放置在密閉容器內(nèi)（例如標(biāo)本瓶、標(biāo)本缸、干燥器等），使它們的蒸氣充滿(mǎn)整個(gè)容器，將已展開(kāi)并已揮發(fā)去溶劑的薄層板放入其中，使之顯色。 .43化學(xué)顯色化學(xué)顯色的方式通常有直接噴霧的方式通常有直接噴霧法和浸漬法兩種。法和浸漬法兩種。 化學(xué)顯色常用的顯色劑劑大致可以分為兩類(lèi)，化學(xué)顯色常用的顯色劑劑大致可以分為兩類(lèi)，即通用顯色劑和專(zhuān)屬性顯

32、色劑。即通用顯色劑和專(zhuān)屬性顯色劑。通用顯色劑：對(duì)未知化合物的檢測(cè)，可以考通用顯色劑：對(duì)未知化合物的檢測(cè)，可以考慮先用通用顯色劑。這種顯色劑是利用它與慮先用通用顯色劑。這種顯色劑是利用它與被測(cè)組分的氧化還原反應(yīng)、脫水反應(yīng)及酸堿被測(cè)組分的氧化還原反應(yīng)、脫水反應(yīng)及酸堿反應(yīng)等而顯色的，常用的有反應(yīng)等而顯色的，常用的有50的硫酸溶液、的硫酸溶液、酸堿指示劑溶液、酸堿指示劑溶液、5磷鉬酸乙醇溶液、熒光磷鉬酸乙醇溶液、熒光顯色劑等。顯色劑等。 .44顯色顯色:噴顯色噴顯色劑顯色劑顯色最重要最重要是有好是有好的霧化的霧化器。器。.45專(zhuān)屬性顯色劑：專(zhuān)屬性顯色劑： 對(duì)含有特征官能團(tuán)的組分常采用專(zhuān)屬性對(duì)含有特征官

33、能團(tuán)的組分常采用專(zhuān)屬性顯色劑。顯色劑。 薄層板噴以薄層板噴以0.42,4-二硝基苯肼的鹽酸二硝基苯肼的鹽酸溶液或鹽酸乙醇溶液后，再?lài)娙芤夯螓}酸乙醇溶液后，再?lài)?.2%的鐵氰化的鐵氰化鉀的稀鹽酸溶液，飽和醛、酮類(lèi)有機(jī)物分別鉀的稀鹽酸溶液，飽和醛、酮類(lèi)有機(jī)物分別顯橄欖綠色和藍(lán)色，而不飽和羰基化合物顏顯橄欖綠色和藍(lán)色，而不飽和羰基化合物顏色較淺或不變色。色較淺或不變色。 芳香族含氮化合物如生物堿等施以碘化芳香族含氮化合物如生物堿等施以碘化鉍鉀試劑后會(huì)呈現(xiàn)橘紅色斑點(diǎn)。鉍鉀試劑后會(huì)呈現(xiàn)橘紅色斑點(diǎn)。 .46斑點(diǎn)組分定性、定量方法斑點(diǎn)組分定性、定量方法 比移值定性 光譜定性 各種聯(lián)用檢測(cè)儀器定性 目視比較半

34、定量法 測(cè)量斑點(diǎn)面積以進(jìn)行定量測(cè)定 從薄層上將被測(cè)組分洗脫下來(lái)進(jìn)行定量測(cè)定 .47.48藥物薄層色譜法介紹薄層色譜法，系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開(kāi)后，與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖作對(duì)比，用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。 .491.儀器與材料儀器與材料(1) 玻板玻板 除另有規(guī)定外，用除另有規(guī)定外，用5cm20cm，10cm20cm或或20cm20cm的規(guī)格的規(guī)格,要求光滑、平整要求光滑、平整1.儀器與材料儀器與材料，洗凈后不附水珠，晾干。，洗凈后不附水珠，晾干。 (2) 固定相或載體固定相或載體 最常用的有硅膠最常用的有硅膠G、硅、

35、硅膠膠GF 、硅膠、硅膠H、 硅膠硅膠HF,其次有硅藻土、硅藻土其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素、 微晶微晶纖維素纖維素F等。等。 其顆粒大小其顆粒大小,一般一般要求直徑為要求直徑為1040m。.50 薄層涂布薄層涂布,一般可分無(wú)粘合劑和含粘一般可分無(wú)粘合劑和含粘合劑兩種合劑兩種;前者系將固定相直接涂布于玻前者系將固定相直接涂布于玻璃板上璃板上, 后者系在固定相中加入一定量的后者系在固定相中加入一定量的粘合劑，一般常用粘合劑，一般常用1015煅石膏煅石膏(CaSO4.2H2O在在140烘烘4小時(shí)小時(shí))，混勻，混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉后

36、加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液水溶液(0.50.7)適量調(diào)成糊狀，均勻適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。緩沖液的薄層。 .51(3) 涂布器涂布器 應(yīng)能使固定相或載體應(yīng)能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。求的均勻薄層。 (4) 點(diǎn)樣器點(diǎn)樣器 同紙色譜法項(xiàng)下。同紙色譜法項(xiàng)下。 (5) 展開(kāi)室展開(kāi)室 應(yīng)使用適合薄層板大應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開(kāi)缸，并小的玻璃制薄層色譜展開(kāi)缸，并有嚴(yán)密的蓋子，除另有規(guī)定外，有嚴(yán)密的蓋子，除另有規(guī)定外，底部應(yīng)平整光滑，應(yīng)便于觀察。底

37、部應(yīng)平整光滑，應(yīng)便于觀察。 .522.操作方法操作方法 (1) 薄層板制備薄層板制備 除另有規(guī)定外除另有規(guī)定外,將將1份固定相份固定相和和3份水在研缽中向一方向研磨混合份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表去除表面的氣泡后，倒入涂布器中面的氣泡后，倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.20.3mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫，取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在下晾干，后在110烘烘30分鐘，即置有干燥分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過(guò)透射光和反射光檢視）?？赏ㄟ^(guò)透射光和反射光檢視）。 .53(2) 點(diǎn)樣點(diǎn)樣 除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊2