聯(lián)檢項(xiàng)目可行性報(bào)告

1、九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒（間接免疫熒光法）項(xiàng)目推薦書注冊證號：國食藥監(jiān)械（進(jìn)）字2010第3400365號生產(chǎn)廠家：西班牙VIRCELL公司中國獨(dú)家代理：鄭州安圖生物工程股份有限公司公司簡介代理公司：安圖生物專業(yè)從事體外診斷產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的高新技術(shù)企業(yè)體外診斷試劑GMP認(rèn)證（2001年，2003年，2008年）體外診斷試劑ISO13485認(rèn)證（2006年UL,2009年）SFDA認(rèn)證中心體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量體系考核（2008年）河南省二類體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量體系考核（2008年）醫(yī)療檢測儀器（酶標(biāo)儀/發(fā)光儀等）ISO13485/CE/IVDD認(rèn)證鄭州安圖生物成立于199

2、8年，是從事體外診斷產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的高新技術(shù)企業(yè)。安圖生物已經(jīng)通過國家藥品GM!認(rèn)證、ISO13485-2003國際質(zhì)量體系認(rèn)證、國家體外診斷試劑質(zhì)量體系考核。通過河南省50戶成長型高技術(shù)企業(yè)、河南省體外診斷試劑工程研究中心、河南省級企業(yè)技術(shù)中心、河南省免疫診斷試劑工程技術(shù)研究中心認(rèn)定。是河南省體外診斷行業(yè)的龍頭企業(yè)，綜合實(shí)力國內(nèi)同行業(yè)中名列前茅。公司主營業(yè)務(wù)涵蓋體外診斷試劑、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)儀器、軟件和臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)服務(wù)領(lǐng)域。產(chǎn)品品種包括：傳染病檢測系列、腫瘤檢測系列、內(nèi)分泌檢測系列、甲狀腺功能檢測系列、糖尿病檢測系列、細(xì)菌和耐藥檢測系列、兒童發(fā)育檢測等七大系列檢測試劑，以及酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、發(fā)

3、光儀、免疫自動化系統(tǒng)等四大系列檢測儀器。安圖生物定位于發(fā)展民族產(chǎn)業(yè)：高點(diǎn)起步，打造安圖品牌；定位于專業(yè)性公司：專注免疫和微生物診斷產(chǎn)品；定位于技術(shù)創(chuàng)新型企業(yè)：保證核心競爭力的可持續(xù)性；定位于市場先導(dǎo)型企業(yè)：保證企業(yè)健康、高速發(fā)展。西班牙VIRCEL公司簡介：VIRCELL成立于1991年，專業(yè)從事微生物診斷試劑的開發(fā)和生產(chǎn)。公司目前擁有近200個(gè)品種，涵蓋多種檢測方法：酶聯(lián)免疫分析免疫熒光分析細(xì)胞培養(yǎng)分子生物等，產(chǎn)品在全球范圍銷售，目前已銷往50多個(gè)國家。2008年銷售分布：VIRCELL公司相關(guān)質(zhì)量認(rèn)證：1999年通過ISO9002:1994質(zhì)量認(rèn)證；2009年更新ISO9001:2008質(zhì)

4、量認(rèn)證；2003年獲得CE認(rèn)證；2005年獲得ISO13485:2005認(rèn)證產(chǎn)品銷往全球50多個(gè)國家：目錄1、檢驗(yàn)項(xiàng)目現(xiàn)狀分析2、VIRCELL產(chǎn)品優(yōu)勢及性能分析3、收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)及效益分析4、產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)1、檢驗(yàn)項(xiàng)目現(xiàn)狀分析目前市面上所見同類項(xiàng)目產(chǎn)品存在著以下幾點(diǎn)缺陷：1、一般產(chǎn)品多為國產(chǎn)酶聯(lián)法，在產(chǎn)品靈敏度、特異性方面不是十分符合臨床診斷；2、沒有一個(gè)廠家產(chǎn)品能同時(shí)涵括此9個(gè)項(xiàng)目，而且方法學(xué)不統(tǒng)一，使用科室在使用的過程中因操作的繁瑣、復(fù)雜，難以做好有效的質(zhì)量控制；3、目前國內(nèi)此九個(gè)項(xiàng)目文號齊全的廠家只有我公司擁有，其中幾個(gè)項(xiàng)目（如肺炎衣原體、副流感病毒等）國內(nèi)除我公司外其他廠家均為無證產(chǎn)品，按照

5、我國目前現(xiàn)行法律，使用單位在使用時(shí)無法得到產(chǎn)品質(zhì)量的有效保證，這樣就使得使用單位使用后存在法律風(fēng)險(xiǎn)：如因產(chǎn)品質(zhì)量問題帶來的醫(yī)患糾紛時(shí)，使用單位無法得到法律的有效保護(hù)；而且面臨著藥監(jiān)部門罰款，這樣的話也使用單位不僅面臨法律的制裁及經(jīng)濟(jì)上的損失，而且其專業(yè)地位也會因此而受到影響。2、VIRCELL產(chǎn)品優(yōu)勢、臨床意義及性能分析產(chǎn)品優(yōu)勢：全國獨(dú)家九項(xiàng)全部擁有國家批準(zhǔn)文號且方法學(xué)經(jīng)典、統(tǒng)一，操作簡單，質(zhì)量可靠，既滿足臨床需要又規(guī)避法律風(fēng)險(xiǎn)；性能穩(wěn)定、無交叉反應(yīng)；產(chǎn)品經(jīng)ISO9002CE認(rèn)證，品質(zhì)保證；一卡九項(xiàng)，避免漏檢；有效期長達(dá)18個(gè)月。臨床意義：呼吸道感染性疾病的早期、快速、準(zhǔn)確診斷；對病原體的鑒別

6、診斷提供導(dǎo)向性依據(jù);指導(dǎo)臨床合理用藥。產(chǎn)品性能：九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒，采用間接免疫熒光法（IFA），同時(shí)檢測人血清中呼吸道感染主要病原體的IgM抗體，可檢的病原體包括：嗜肺軍團(tuán)菌血清1型、肺炎支原體、Q熱立克次體、肺炎衣原體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。用于呼吸道感染疾病的輔助診斷。1. 檢測原理間接免疫熒光法（IFA）（圖1）是基于待測樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生的反應(yīng)。樣本中存在的特異性抗體和抗原反應(yīng)，未與抗原結(jié)合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去。在下一步驟中，抗原-抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)，用免疫熒光

7、顯微鏡觀察結(jié)果。圖1:九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒檢測原理2. 試劑盒組成及用途組分成分和用途載玻片檢測的物理載體，覆有聚四氟乙烯并包被有針對檢測物的特異性抗原，包裝袋內(nèi)有一袋硅膠以防潮。質(zhì)控品用于證明試劑盒及試驗(yàn)的有效性，含有人血清及防腐劑。吸附劑羊抗人IgG用來吸附人IgG避免干擾IgM檢測，含有防腐劑。FITC結(jié)合物熒光素標(biāo)記的抗人免疫球蛋白結(jié)合物，含有染色液、防腐劑和蛋白穩(wěn)定齊購和抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)，并顯色。圭封閉介質(zhì)甘油緩沖液，便于觀察。磷酸鹽緩沖液（PBS）用于洗滌步驟，從反應(yīng)介質(zhì)中除去未結(jié)合的免疫球蛋白和結(jié)合物。3. 操作步驟實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備1）實(shí)驗(yàn)所需物品準(zhǔn)備：1000m

8、l量筒、1000ml燒杯、離心管、微量移液器、溫育濕盒、洗瓶、水平搖床、恒溫箱、蓋玻片、熒光顯微鏡。2）PBS洗液的準(zhǔn)備：將1瓶PBS粉末倒入燒杯中，加入1L蒸餾水中，搖勻直至完全溶解，配好后儲存在2-8oC備用。3）使用前，將所有試劑平衡至室溫，將恒溫箱調(diào)至37C。實(shí)驗(yàn)步驟1）樣本的稀釋：按1:1比例稀釋血清標(biāo)本，即25L血清加入25卩LPBS中。陰陽性對照不需要稀釋。2）用吸附劑處理稀釋后的血清：將30譏稀釋后的血清加入150譏吸附劑中，徹底混勻。陰陽性對照不需吸附劑處理。處理后的血清要離心（13000r,10min）除去沉淀，以防干擾檢測。3）在載玻片的每孔中加15譏吸附劑處理過的血清。

9、在一個(gè)載玻片的每孔中加入15卩1不稀釋的陽性對照，在另一個(gè)載玻片的每孔中加入15L不稀釋的陰性對照。4）將載玻片放入濕盒中，37C溫育90分鐘。5）用PBS洗液的緩慢水流沖洗載玻片（避免直接沖入孔內(nèi)）后，浸泡在PBS中并放置在水平搖床上輕輕搖動10分鐘。將載玻片用蒸餾水緩慢水流沖洗（避免直接沖入孔內(nèi)）。6）載玻片自然風(fēng)干。7）每孔加入15卩LFITC結(jié)合物溶液（不需稀釋）。8）將載玻片放入濕盒，37C溫育30分鐘。9）重復(fù)6和7的洗滌步驟。10）加幾小滴封閉介質(zhì)，小心蓋上蓋玻片。11）盡快用熒光顯微鏡在400倍放大率下觀察結(jié)果。如果不能立即觀察，可將其避光放置于2-8oC不超過24小時(shí)。簡明操

10、作程序:4結(jié)果判斷有效性判斷每一次試驗(yàn)都應(yīng)設(shè)立陽性和陰性對照，以確認(rèn)試驗(yàn)和試劑盒的有效性。觀察到的熒光模式應(yīng)為：陽性對照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對陽性質(zhì)控的1-15%細(xì)胞陰性對照：出現(xiàn)蘋果綠細(xì)胞核、胞漿或胞膜熒光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時(shí)觀察到著色的合胞）；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋果綠熒光；支原體對陽性質(zhì)控在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光。軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和立克次體無熒光，支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色。陽性結(jié)果熒光圖譜：陰性結(jié)的熒光圖譜：樣本結(jié)果判斷陽性結(jié)果：可以觀察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞

11、病毒或副流感病毒對陽性血清的1-15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時(shí)觀察到著色的合胞）；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋果綠色熒光；支原體對陽性血清在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光。陰性結(jié)果：可觀察到軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和立克次體無熒光，支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色1.性能指標(biāo).靈敏度和特異性采用方法學(xué)對比進(jìn)行陰陽性符合率分析，陽性符合率代表靈敏度，陰性符合率代表特異性，結(jié)果如下：病原體對比方法樣本數(shù)量陽性符合率陰性符合率嗜肺軍團(tuán)菌IFA82%肺炎支原體ELISA62%Q熱立克次體IFA74%肺

12、炎衣原體IFA61%腺病毒ELISA74%呼吸道合胞病毒ELISA97%甲型流感病毒ELISA46%乙型流感病毒ELISA40%副流感病毒ELISA36%5.2精密度分析內(nèi)精密度在相同實(shí)驗(yàn)條件下由同一個(gè)操作人員在同一次試驗(yàn)中對3份血清（2份陽性和1份陰性）經(jīng)驗(yàn)證，吸附劑也可以有效地避免IgG抗體過量造成的假陰性。分別進(jìn)行5組加樣檢測。結(jié)果：滴度變化不超過一個(gè)稀釋度。分析間精密度在5種不同條件下（不同操作人員或不同試驗(yàn)日期）對3份血清（2份陽性和1份陰性）進(jìn)行檢測。結(jié)果：滴度變化不超過一個(gè)稀釋度。交叉反應(yīng)和干擾病原體干擾物質(zhì)樣本例數(shù)結(jié)果病原體干擾物質(zhì)樣本例數(shù)結(jié)果嗜肺軍團(tuán)菌肺炎支原體、肺炎衣原體和

13、Q熱立克次體、革蘭氏陰性細(xì)菌（布魯氏菌，沙門氏菌）和抗核抗體嗜肺軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和Q熱立克20肺炎支原體次體12立克次體肺炎支原體、肺炎衣原體和嗜肺軍團(tuán)菌、同種屬的細(xì)菌（發(fā)疹傷寒等的病原體）和抗核抗體20肺炎衣原體嗜肺軍團(tuán)菌、Q熱立克次體和肺炎支原體，同種屬的細(xì)菌（發(fā)疹傷寒等的病原體）和抗核抗體20無交叉反應(yīng)或干擾腺病毒RSV甲型和乙型流感病毒和副流感病毒8呼吸道合胞病毒腺病毒、甲型和乙型流感病毒和副流感病毒或根據(jù)病毒分類（麻疹）10甲型流感病毒RSV乙型流感病毒、腺病毒和副流感病毒8乙型流感病毒RSV甲型流感病毒、腺病毒和副流感病毒8副流感病毒RSV甲型和乙型流感病毒和腺病毒8其它干擾研究

14、對25份類風(fēng)濕因子陽性血清進(jìn)行了2種病毒和2種細(xì)菌抗原IgG和IgM抗體的檢測。對另外兩份血清進(jìn)行了每種抗原IgG和IgM抗體的檢測。在IgM檢測中，用抗IgG抗體對血清進(jìn)行了吸附處理。結(jié)果顯示，吸附劑可以有效避免類風(fēng)濕因子的干擾。3、收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)及效益分析目前江西省九項(xiàng)收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)合計(jì)為425元/例，該項(xiàng)目無需過多的設(shè)備投資，主要設(shè)備為熒光顯微鏡，此項(xiàng)目不僅能給使用單位帶來可觀的經(jīng)濟(jì)效益，更重要的是，規(guī)避了使用單位使用無證產(chǎn)品帶來的法律風(fēng)險(xiǎn)、提高了使用單位的檢測水平也就相應(yīng)的提高了使用單位的專業(yè)地位，這樣的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益必將給使用單位帶來更美好的發(fā)展前景！贛發(fā)改收費(fèi)字2005175號項(xiàng)目項(xiàng)目編號三級醫(yī)院二級醫(yī)院一級醫(yī)院套用方法合胞病毒6呼吸道合胞病毒抗體測疋201512副流感8副流感