肌酸磷酸激酶同功酶(CK-MB) DGKC速率法

1、項 目肌酸磷酸激酶同功酶（CK-MB）方 法DGKC速率法目 錄1. 檢測原理2. 標本采集與處理2.1 受檢者的準備2.2 靜脈采血2.3 抗凝劑2.4 標本處理3. 試劑3.1 試劑3.2 校準血清3.3 試劑、校準血清的穩(wěn)定性4. 儀器5. 操作6. 計算7. 操作性能7.1 精密度7.2 準確度7.3 靈敏度7.4 可報告范圍7.5 特異性7.6 干擾8. 參考值9. 臨床意義附錄A: 參數(shù)1. 檢測原理試劑中加入抑制CK-M的抗體，它能完全抑制CK-M亞基的活性而不影響CK-B亞基的活性，所得結(jié)果乘以2即得CK-MB的活性。 CK肌酸磷酸 + ADP - 肌酸 + ATPHKATP

2、+ 葡萄糖 - 葡萄糖-6-磷酸 + ADPG6PDH葡萄糖-6-磷酸 + NADP+- 6-磷酸葡萄糖酸 + H+ + NADPH2本采集與處理2.1 受檢者的準備：病人空腹12h，不飲酒24h后采集血樣。體檢對象抽血前應(yīng)有兩周的的正常狀況。孕婦應(yīng)在產(chǎn)后或終止哺乳3個月后檢驗。此外，有無服用影響的藥物以及采血的季節(jié)都應(yīng)做相關(guān)記錄。2.2 靜脈采血：除非是臥床的病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，會影響測試項目的濃度。在采血前至少應(yīng)靜坐5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過1分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3 抗凝劑：血漿使用肝素或EDTANa2（1mg/mL

3、）作為抗凝劑。2.4 標本處理：血標本室溫放置30min45min后離心分離血清或血漿，在兩小時內(nèi)檢測完畢；如兩小時內(nèi)不能檢測完畢，將離心分離血清或血漿置潔凈試管加蓋2-8保存。3試劑3.1 試劑：本科使用湖南永和陽光科技有限責任公司CK-MB試劑盒，為液體雙試劑，各組分如下： 組 成R1:R2=4:1混合后溶液的濃度咪唑緩沖液:100mmol/L PH=6.7醋酸鎂10mmoll/LN-乙烯半胱氨酸（NAC） 20mmol/LEDTA 2mmol/LNADP 2mmol/L葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G-6-PDH）1500U/L己糖激酶（HK） 2500U/L抑制CK-MM的人抗體 2000U

4、/L葡萄糖20mmol/L肌酸磷酸30mmol/L二腺苷-5-磷酸 10umol/LAMP 5mmol/LADP 2mmol/L 3.2：校準血清使用湖南永和陽光科技有限責任公司提供的CKMB校準血清。校準頻次：空白定標：每日需做試劑空白定標。全點定標：試劑換批號使用時或質(zhì)控結(jié)果超過規(guī)定的2SD范圍，需要全點定標。3.3 試劑、校準血清的穩(wěn)定性：原包裝試劑儲存在2-8至標簽所示失效日期。18-22穩(wěn)定28天，試劑應(yīng)避免污染。當試劑空白吸光度高于0.5時，試劑按照失效處理。CKMB校準血清在2-8儲存至標簽所示失效日期，復(fù)溶后-20保存，可穩(wěn)定一個月，只可凍融一次，避免反復(fù)凍融。參見校準血清說明

5、書。4儀器KONELAB 30型號儀器。性能：波長340nm，儀器測定吸光度的靈敏度應(yīng)達到0.001ABS以上。5操作樣品為血清或肝素/EDTA抗凝血漿。本法為速率法。參數(shù)見后附，附錄A。試劑參數(shù)設(shè)置、定標操作以及樣本檢測常規(guī)操作，見儀器操作規(guī)程。6計算A/minVt1000 CK-MB(U/L) = - = A/minFeVsd式中：A/min 每分鐘吸光度變化率； e 18.5 摩爾吸光系數(shù)；Vt 反應(yīng)液總體積（ml）； d 1 比色杯光徑（cm）；1000 變化因數(shù)； Vs 標本體積（ml）；7操作性能7.1 精密度：批內(nèi)CV0.55%，批間CV4.51%。7.2 準確度：檢測結(jié)果的相對

6、不準確度10%。7.3 靈敏度：肌酸磷酸激酶同功酶濃度為：500U/L時，吸光度變化率A340nm/min為0.0540.066。7.4 可報告范圍：血清與試劑用量之比為1:25時，測定上限為1000U/L。7.5 特異性：測量值在給定值的90%-110范圍內(nèi)。7.6 干擾：內(nèi)源性干擾物溶血為1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黃疸30mg/ml、抗壞血酸300mg/ml對測試結(jié)果無明顯影響。8參考值024U/L9臨床意義肌酸激酶同工酶在診斷急性心肌梗塞時有特異性，結(jié)合心肌酶圖譜，有助于心肌梗塞的診斷。在急性心肌梗塞胸痛發(fā)作后，血清CPKMB上升，24小時達高峰，至48小時消失，若CP

7、KMB再度上升，提示有心肌梗塞復(fù)發(fā)。 血清CK-MB測定的最重要意義在于診斷急性心肌梗塞。急性心肌梗塞胸痛發(fā)作后46小時，病人血清CK-MB先于總活性開始升高，1236小時達峰值；多在72小時內(nèi)恢復(fù)正常。其最高值達對照組4.922倍以上。如果梗塞后34天，CK-MB仍持續(xù)不降，表明心肌梗塞仍在繼續(xù)進行，如果已下降的CK-MB再次升高則提示原梗塞部位病變擴展或有新的梗塞病灶；如果胸痛患者在48小時內(nèi)尚未出現(xiàn)CK-MB升高，或小于總活性的2%，即可排除急性心肌梗塞的診斷。臨床上常以CK-MB超過CK總活性的3%（離子交換柱層析法）或10%（免疫抑制法）作為急性心肌梗塞的診斷依據(jù)。用CK-MB診斷急性心肌梗塞時必須注意無論是CK-MB的絕對活性或占總活性百分率