窖泥檢測(cè)原理和方法

1、窖泥檢測(cè)原理和方法窖泥取樣窖泥是濃香型大曲酒生產(chǎn)過(guò)程中的重要條件之一，它對(duì)酒中微量香味成分的形成及其量比關(guān)系起著重要的作用。窖泥質(zhì)量的好壞直接影響濃香型大曲酒產(chǎn)品的質(zhì)量。取回的泥樣（包括人工培窖的黃泥、發(fā)酵泥、復(fù)壯泥）因水分大，不宜長(zhǎng)期貯存，應(yīng)立即平攤在瓷盤(pán)、木板，或光潔地面上，層厚約2cm，風(fēng)干35晝夜，間隔翻拌，使之均勻風(fēng)干。在半干時(shí)，將大塊土搗碎，以免完全干后成硬塊，不易粉碎。泥樣風(fēng)干后，用四分法分取約250g，研磨成粉，并通過(guò)60目篩，保存在磨口瓶中。氨態(tài)氮在風(fēng)干過(guò)程中易變化，需用新鮮的泥樣測(cè)定，同時(shí)測(cè)定水分，以換算為絕干樣的含量。一、水分含量的測(cè)定（常壓干燥法）1原理窖泥中水分一般可

2、分為三類(lèi)，即化合結(jié)合水，吸濕水，和自由水。本法在105-110烘干法，在此溫度下自由水和吸濕水都能烘干，實(shí)際上在此溫度下所失去的是揮發(fā)性物質(zhì)的總量。2儀器電熱鼓風(fēng)干燥箱（烘箱）；稱量皿（可用濾紙包代替）；電子天平。3方法（1）風(fēng)干土樣水分測(cè)定：取風(fēng)干土樣45g，平鋪于已烘干至恒重的稱量皿中。在105110烘箱內(nèi)烘6h后，取出、加蓋，在干燥器中冷卻30min后稱重，再于100105烘1h，冷卻、稱重，直至恒重（兩次質(zhì)量差小于0.002g）。（2）新鮮土樣水分測(cè)定 稱取土樣1015g。測(cè)定方法同（1）。4計(jì)算 w一水分和揮發(fā)物含量，；m烘干前空皿與試樣質(zhì)量之和, g.ml烘干后空皿與試樣質(zhì)量之和,

3、 g.二、pH的測(cè)定1原理因釀酒微生物生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中的生化變化和代謝產(chǎn)物受害泥pH的影響較大，故在人工培容過(guò)程中，必須測(cè)定土壤的pH。 窖泥經(jīng)水提取后，用pH計(jì)測(cè)定。2儀器和試劑 （1）酸度計(jì)：測(cè)定范圍pH 014，最小分度為0.02pH （2）pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液。3測(cè)定步驟 按儀器說(shuō)明書(shū)校正PH計(jì)，并注意校正和測(cè)量時(shí)溫度一致。 將電極和小燒杯用蒸餾水沖洗干凈，再塌樣品沖洗68次，將電極插入盛有樣品的小燒杯中，測(cè)量樣品的PH。稱取風(fēng)干、粉碎后的土樣5.0g，于100mL燒杯中加水50mL，間歇攪拌30min，放置30min，用pH計(jì)測(cè)定試樣pH。三、氨態(tài)氮的測(cè)定1原理奈氏試劑與氨反映生成淺黃色至

4、紅棕色的絡(luò)合物。氨態(tài)氮濃度低時(shí)，溶液成黃色，可在400-425nm測(cè)定吸光度。氨態(tài)氮濃度高時(shí)，溶液成紅色，可在450-500nm測(cè)定吸光度。測(cè)得的吸光度與標(biāo)準(zhǔn)比較即可求得氨態(tài)氮的濃度。當(dāng)氨態(tài)氮高于1mg/L時(shí)，產(chǎn)生紅褐色沉淀，則不能比色。本法測(cè)得的氨態(tài)氮是游離氨和銨離子含氮的總量，因?yàn)殇@鹽在堿性溶液中將轉(zhuǎn)變?yōu)槟芘c奈氏試劑反應(yīng)的氨。溶液中氨越多，則生成黃色越深。溶液中某些雜質(zhì)（Ca、Mg等離子）的存在，能與奈氏試劑形成沉淀，使溶液渾濁干擾氨的測(cè)定。為避免此有害作用，故在待測(cè)液中加入酒石酸鉀鈉，可與Ca、Mg作用生成不解離的化合物，就可避免與奈氏試劑的相互作用。2試劑 （1）奈氏試劑：稱取10g碘

5、化汞、7g碘化鉀，溶解后加到50mL360gLNaoH溶液中，搖勻，稀釋至100mL，搖勻，靜置，取上層清液使用。貯存于棕色具膠塞瓶中，可保存1年。（2）酒石酸鈉鉀溶液：50g酒石酸鈉鉀溶于100mL水中，為驅(qū)除酒石酸鈉鉀中可能存在的銨鹽，煮沸蒸發(fā)約13體積，冷卻后再稀釋至100mL。（3）氯化銨標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取0.3819gNH4Cl，溶于水并定容至100mL。其濃度以N計(jì)為1mg/mL（4）氯化銨標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取氯化銨標(biāo)準(zhǔn)液10mL用水稀釋定容至1L。濃度以N計(jì)為10ugmL，以NH3計(jì)為12.2ugmL。其余： 100g/L的氯化鈉溶液 ； 比色管； 納氏試劑；分光光度計(jì)。3測(cè)定步驟（1

6、）試樣制備 稱取新鮮泥樣15g(準(zhǔn)確至0.01g)，加入100gL的 氯化鈉溶液，使體積為25mL，攪勻，浸出10min(必要時(shí)把硬塊搗碎)，用于濾紙過(guò)濾后備用。吸取1mL濾液(必要時(shí)用水稀釋后再吸取)于50mL比色管中，用水稀釋至刻度。加人12滴酒石酸鈉鉀溶液和1mL納氏試劑，充分混勻。放置10min后以標(biāo)準(zhǔn)系列中“0”管為空白，于波長(zhǎng)425nm處測(cè)吸光度。（2）標(biāo)準(zhǔn)系列配制 吸取標(biāo)準(zhǔn)使用液(10ugmL的氮) 0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL分別置入50mL比色管中，用水稀釋至刻度后，按試樣相同顯色、測(cè)吸光度。以吸光度對(duì)氨態(tài)氮（N

7、）微克數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；蛴媚繙y(cè)法進(jìn)行比較。4計(jì)算氨態(tài)氮(絕干計(jì)，mg100g)c*25*n*(1/m)*(1/1000)*100*1/(1-w)式中 c 試樣溶液中氨態(tài)氮質(zhì)量，ug； 25泥樣稀釋體積，mL； n試樣再稀釋倍數(shù)，若不再稀釋，則n=1； m新鮮泥樣質(zhì)量，g 1000把ug換算成mg的系數(shù)， w新鮮泥樣水分，。四、有效磷測(cè)定1原理測(cè)定窖泥中有效磷時(shí)，采用酸性氟化銨浸提，提出的磷酸或磷酸鹽，在酸性溶液中加入酸性鉬酸銨，生成黃色磷鉬酸鹽，再和還原劑氯化亞錫作用生成藍(lán)色的絡(luò)合物，比色測(cè)定。2試劑 （1）氟化銨鹽酸溶液：稱取0.56g氟化銨溶于400mL水中，加人12.5mL 1mol/L

8、 HCl溶液，用水稀釋至500mL，貯于塑料瓶中。（2）酸性鉬酸銨溶液：稱取5g鉬酸銨溶于42mL水中；在另一燒杯中注人8mL水和82mL濃鹽酸。然后在攪拌下把鑰酸銨溶液倒入燒杯中，貯于棕色瓶中。（3）氯化亞錫溶液：稱取1g氯化亞錫(SnCl22H20)溶于40mL 1molL HCl溶液中，貯于棕色瓶中。（4）無(wú)磷濾紙：將直徑為9cm的定性濾紙浸于02mol/LHcl溶液中45h，使磷、砷等化合物溶出，取出后用水沖洗數(shù)次，再用0.2mol/L HCl淋洗數(shù)次。最后用水洗至無(wú)酸件，在60烘箱中干燥。（5）磷標(biāo)誰(shuí)液：準(zhǔn)確稱取于110干燥2h后冷卻的磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0.2195g，溶于

9、水，并定容至1L。此溶液含磷為50ug/mL。 （6）磷標(biāo)準(zhǔn)使用液：準(zhǔn)確吸取磷標(biāo)準(zhǔn)溶液25mL于250mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，其濃度為5ug/mL。3測(cè)定步驟 （1）試樣處理 稱取2.00g風(fēng)干土樣于50mL燒杯中，加入氯化銨-鹽酸溶液至20mL浸泡30min，每隔5min攪拌1次。然后用烘干的無(wú)磷濾紙過(guò)濾，加入約0.1g硼酸，搖勻，使之溶解后備用。（2）磷的測(cè)定 吸取1mL試樣浸出液，注入25mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。吸取此稀釋液125mL(視磷含量多少而異，一般黃泥含磷少，可直接取浸出濾液測(cè)定。窖皮泥磷含量較高，吸取稀釋液25mL測(cè)定。老窖泥含磷量多，吸取1mL稀釋液即可)，于2

10、5mL比色管中，加入2mL酸性銅酸鉸溶液和3滴氯化亞錫溶液，用水稀釋至刻度。放置15min后，用2cm比色皿在680nm波長(zhǎng)處，以標(biāo)準(zhǔn)系列中“0”管為空白測(cè)定吸光度。（3）標(biāo)準(zhǔn)系列制備 吸取磷標(biāo)準(zhǔn)使用液0mL 0.5mL、1.0mL 2.0mL、3.0mL、5.0mL，分別注入25mL比色管中。加入2mL酸性相酸鉸溶液和3滴氯化亞錫溶液顯色，用水稀釋至刻度。同上條件測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液的磷微克數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)難曲線。4計(jì)算 有效磷含量(mg100mg)m1*(1/v)*25*20*(1/m)*(1/1000)*100*1/(1-w)式中 m1一試樣溶液中有效磷質(zhì)量，ug v吸

11、取稀釋試樣的體積，mL 25稀釋試樣總體積，mL 20試樣浸取液體積，mL m一風(fēng)干泥試樣質(zhì)量，g w一風(fēng)干試樣水分，。五、有效鉀1原理測(cè)定有效鉀時(shí)用碳酸銨將試樣中的鈣鎂沉淀，然后用灼燒法除去銨鹽。再在微酸性溶液中用亞硝酸鈷鈉沉淀鉀。生成的亞硝酸鈷鉀鈉的黃色沉淀在酸性溶液中，用過(guò)量的高錳酸鉀分解，剩余的高錳酸鉀加過(guò)量草酸鈉除去。多余的草酸鈉在用高錳酸鉀回滴。由高錳酸鉀與亞硝酸鈷鉀鈉反應(yīng)的實(shí)際消耗量計(jì)算試樣中的鉀含量。2試劑 碳酸銨溶液：稱取28.5g碳酸銨溶于水，稀釋至1L。 0.01molL硝酸溶液：取6.7mL濃硝酸用水稀釋至1L。再稀釋10倍為0.01mol/L。 200gL亞硝酸鈷鈉溶

12、液：稱取10g亞硝酸鈷鈉，溶于50mL水中，臨用時(shí)配制。 0.01molL硼酸溶液：稱取0.6g硼酸溶于水，稀釋至1L。3測(cè)定步驟 試樣處理：準(zhǔn)確稱取2500g風(fēng)干土樣于250mL具塞三角瓶中，加入100mL碳酸銨溶液，浸出1h，其間每15min搖動(dòng)1次。然后用1號(hào)燒結(jié)玻璃濾器上鋪濾紙片抽氣過(guò)濾，用100mL鉬酸銨溶液分34次洗滌。過(guò)濾速度不宜太快，以使土壤膠體吸附的鉀全部置換出來(lái)，將浸出液定量移人蒸發(fā)皿內(nèi)，在水浴上蒸于。殘?jiān)?5mL硝酸再蒸干，并反復(fù)操作3次，至有機(jī)物去凈。蒸干后，在低于500的條件下灼燒去除氨，冷卻至室溫。 鉀的沉淀：在灼燒去除氨的試樣蒸發(fā)皿中，準(zhǔn)確加入25mL 0.1m

13、ol/L硝酸溶液，用帶橡皮頭的玻璃棒洗皿壁，使殘留物溶解并混合均勻。迅速用干濾紙過(guò)濾于50mL三角瓶中，吸取10mL濾液于200mL燒杯中，邊攪拌邊徐徐加入10mL亞硝酸鉆鈉溶液，蓋好表面皿，在20放置過(guò)夜，使沉淀完全。 用2號(hào)燒結(jié)玻璃濾器上鋪定量濾紙片(事先烘干至恒重)，抽氣過(guò)濾，將0.01molL硼酸將杯中沉淀全部移人濾器。再用0.01mol/L硝酸洗沉淀10次每次1mL。接著用95的乙醇洗5次，每次2mL。擦干濾器外避，在110烘1h，置干燥器中冷卻后稱重。4計(jì)算沉淀組成為K2NaCo(Na3)6H2O，其中K2O17.216X=m1*0.17216*(1/10)*25*(1/m)*10

14、00*100*1/(1-w)式中 x 絕干試樣中有效鉀含量(以K20 計(jì)），mg/100g; ml一亞硝酸鈷鈉鉀沉淀質(zhì)量，g; m一風(fēng)干試樣質(zhì)量，g;10一一測(cè)定時(shí)吸取浸出液體積25一浸出液總體積，mL；1000一換算成mg的系數(shù)； w試樣水分，。六、鈣的測(cè)定1原理樣品經(jīng)灰化后，在酸性溶液中，鈣與草酸生成草酸鈣，經(jīng)硫酸溶解后，用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，從而計(jì)算出鈣的含量。反應(yīng)如下：2試劑（1）1：1鹽酸溶液；（2）0.1%甲基紅指示劑；（3）1：4乙酸溶液；（4）1：4氫氧化銨溶液；（5）2N硫酸溶液；（6）4%草酸銨溶液；（7）1N高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液。3測(cè)定方法（1）樣品處理：準(zhǔn)確稱取均勻樣品2

15、.004.00g，置于坩堝中，在電爐上小火炭化無(wú)煙，移入550600。C高溫爐中灰化，直至灰分呈白色為止（必要時(shí)，可在加入濃硝酸潤(rùn)濕后再灰化，有促進(jìn)樣品灰化至白色的作用）。取出出，待冷卻后加入6N鹽酸溶液20ml，加熱溶解灰分，然后用水稱入100ml容量瓶中，輥入至刻度，搖勻。（2）樣品分析：準(zhǔn)確吸取樣品溶液5ml，移入15ml離心管中，加入甲基紅指示劑1滴、4%草酸銨溶液2ml、1：4乙酸溶液0.5ml，振蕩均勻。用1：4氫氧化銨溶液將溶液調(diào)至微黃色，再用1：4乙酸溶液調(diào)至微紅色，放置1小時(shí)，使沉淀完全析出。離心15分鐘，小心傾去上層清液，在沉淀中加入2ml 2N硫酸搖勻，置于7080。C熱

16、水浴中，用1 N高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定至淡紅色不褪色為止。4計(jì)算 式中 N高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度； V滴定所消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的量； 201N高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml相當(dāng)于鈣的量；說(shuō)明用高錳酸鉀滴定時(shí)要不斷振蕩使溶液均勻。這方法比較精確，但需要離心沉淀。七、腐殖質(zhì)的測(cè)定1原理在硫酸存在下，用已知過(guò)量的重鉻酸鉀溶液與窖泥共熱，使其中的活性有機(jī)質(zhì)的碳被氧化。而剩余的重鉻酸鉀，以鄰菲羅林亞鐵為指示劑，用硫酸亞鐵銨溶液滴定，從所消耗的重鉻酸鉀量來(lái)計(jì)算有機(jī)碳的含量。2儀器與試劑（1）油?。杭訜嵊糜蜑楣腆w石蠟或植物油。（2）插試管用的鐵絲籠。（3）0.2mol/L硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液（即莫氏鹽溶液）：

17、稱取80g(NH 4)2So4FeSO46H 20，溶于水中，加入30mL 6mol/L的硫酸，用水稀釋至1000mL。 標(biāo)定：吸取硫酸亞鐵銨溶液10 mL，于250mL三角瓶中，加50mL水和10mL6mol/L硫酸。用0.1molL高錳酸鉀（1/5 KMn04 ）標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至粉紅色。c 硫酸亞鐵銨標(biāo)堆溶液濃度，mol/L；c1 高錳酸鉀(1/5 KMno4)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,mol/L;v1 消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL。 （4）重鉻酸鉀-硫酸溶液：取200g研細(xì)的重鉻酸鉀，溶于250mL水中，必要時(shí)加熱使完全溶解。冷后稀釋至500mL，全部移人1L燒杯中。緩緩加入濃硫酸500ML，冷后加

18、水稀釋至1000mL。（5）5g/L鄰菲咯啉指示劑：稱取0.5g硫酸亞鐵(FeSO47H2O)溶于100mL水中，加2滴濃硫酸和0.5g鄰菲咯啉，搖勻，該溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。3測(cè)定步驟 稱取風(fēng)干土樣0.10.3g（準(zhǔn)確至0.001g），放入18mm160mm硬質(zhì)試管中，準(zhǔn)確加入重鉻酸鉀硫酸溶液10mL，將試管插人預(yù)先加熱至185190的油浴中(用鐵絲籠固定試管)。此時(shí)溫度下降到170180，調(diào)節(jié)熱源，保持此溫度。當(dāng)試管內(nèi)容物被面開(kāi)始滾動(dòng)或有較大氣泡發(fā)生時(shí)，開(kāi)始計(jì)時(shí)，沸騰5min。取出冷卻后把試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)移人250mL三角瓶，用水洗凈試管，洗液并入三角瓶?jī)?nèi)，總體積為50一60mL。摘入23滴鄰菲咯

19、啉指示劑，用0.2mol/L硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，顏色由橙紅變綠，最后呈從紫色為終點(diǎn)。同時(shí)做空白試驗(yàn)。4計(jì)算x 干土中腐殖質(zhì)含量，；V0 空白試驗(yàn)消耗硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液體積,mL; v 測(cè)定試樣消耗硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液體積,mL;c 硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L;0.003 一 消耗1mL1mol/L硫酸亞鐵鐵標(biāo);準(zhǔn)溶液相當(dāng)于碳的克數(shù)；1.1 氧化校正系數(shù)；1.724 土壤中有機(jī)質(zhì)含;碳58，將有機(jī)碳換算成有機(jī)質(zhì)的系數(shù) (100/581724);m一風(fēng)干土試樣質(zhì)量;w一風(fēng)干土水分，。八、細(xì)菌總數(shù)測(cè)定儀器 顯微鏡血球計(jì)數(shù)板。震蕩器。其它稀釋取量?jī)x器和盛裝儀器方法和步驟1總菌計(jì)數(shù)法 (1)計(jì)

20、數(shù)樣品：稱窖泥1g于盛有99mL無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水并裝有玻璃珠的三角瓶中。 (2)搖勻；振蕩1020min，使土樣中的菌體、芽孢或孢子均勻分散。 (3)稀釋：將待測(cè)茵液作一定比例的稀釋。（通常為1：100或1：1000嚴(yán)格按無(wú)菌操作） (4)檢查計(jì)數(shù)板：在正式計(jì)數(shù)前先用顯微鏡檢查計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室，看其是否沾有雜質(zhì)或干涸著的曲體，若有污物則需作以下幾步清洗： 1)擦洗：用藥棉蘸取95%酒精輕輕擦洗計(jì)數(shù)扳的計(jì)數(shù)室。 2)沖洗：用蒸餾水沖洗計(jì)數(shù)板，并用毛邊紙吸干其上的水分(注意：切勿用火焰來(lái)烤干)；最后用擦鏡紙揩干凈。 3)鏡檢：鏡檢清洗后的計(jì)數(shù)板，直至計(jì)數(shù)室無(wú)污物時(shí)才可用于樣品的計(jì)數(shù)。 (5)加樣：先將蓋玻片安放在計(jì)數(shù)室上面，然后用接種環(huán)取一環(huán)均勻的菌體懸液，使它沿著蓋玻片和計(jì)數(shù)板間的縫隙滲入計(jì)數(shù)室。連續(xù)二至三次，直至充滿計(jì)數(shù)室平臺(tái)為止： (6)計(jì)數(shù)：持加好樣品的計(jì)數(shù)板只于顯微鏡，然后按下列步驟尋找計(jì)數(shù)室并計(jì)數(shù)之 1)找計(jì)數(shù)室：先在低倍鏡下尋找計(jì)數(shù)極上的大方格然后順大方格移動(dòng)計(jì)數(shù)板，使計(jì)數(shù)室位于視野中間。 2)轉(zhuǎn)換高倍鏡：轉(zhuǎn)高倍鏡后，適當(dāng)調(diào)令光殼度，使菌休和計(jì)數(shù)室線條均清晰為止，然后將計(jì)數(shù)室一角的中格移至視野中。 3)計(jì)數(shù)通常以計(jì)五個(gè)中格(做5個(gè)板求平均減少誤差）的數(shù)值來(lái)代表計(jì)數(shù)室中的含菌量。將凡要計(jì)數(shù)的中格中的菌休逐一計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)為了避重復(fù)或遺漏常將