實(shí)驗(yàn)一光學(xué)顯微鏡的使用與微生物觀察()

1、實(shí)驗(yàn)一 光學(xué)顯微鏡的使用與微生物觀察第一節(jié) 普通光學(xué)顯微鏡的使用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解普通光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造和工作原理。2、學(xué)習(xí)并掌握普通光學(xué)顯微鏡，重點(diǎn)是油鏡的使用技術(shù)和維護(hù)知識(shí)。3、在油鏡下觀察微生物的幾種基本形態(tài)。二、基本原理（一）普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造 普通光學(xué)顯微鏡由機(jī)械系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)兩部分組成（圖1-1）。1、機(jī)械系統(tǒng)機(jī)械系統(tǒng)包括鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)、調(diào)節(jié)器等。（1）鏡座：它是顯微鏡的基座，可使顯微鏡平穩(wěn)地放置在平臺(tái)上。（2）鏡臂：用以支持鏡筒，也是移動(dòng)顯微鏡時(shí)手握的部位。（3）鏡筒：它是連接接目鏡（簡(jiǎn)稱目鏡）和接物鏡（簡(jiǎn)稱物鏡）的金屬圓筒。鏡筒上端插入目鏡，下端與物

2、鏡轉(zhuǎn)換器相接。鏡筒長度一般固定，通常是160mm。有些顯微鏡的鏡筒長度可以調(diào)節(jié)。（4）物鏡轉(zhuǎn)換器：它是一個(gè)用于安裝物鏡的圓盤，位于鏡筒下端，其上裝有35個(gè)不同放大倍數(shù)的物鏡。為了使用方便，物鏡一般按由低倍到高倍的順 序安裝。轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器可以選用合適的物鏡。 轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)，必須用手旋轉(zhuǎn)圓盤， 切勿用手推動(dòng)物鏡，以免松脫物鏡而招致?lián)p壞。（5）載物臺(tái)：載物臺(tái)又稱鏡臺(tái)，是放置標(biāo)本的地方，呈方形或圓形。載物 臺(tái)上裝有壓片夾，可以固定被檢標(biāo)本；有標(biāo)本移動(dòng)器，轉(zhuǎn)動(dòng)螺旋可以使標(biāo)本前后 和左右移動(dòng)。有些標(biāo)本移動(dòng)器上刻有標(biāo)尺，可指示標(biāo)本的位置，便于重復(fù)觀察。（6）調(diào)節(jié)器：調(diào)節(jié)器又稱調(diào)焦裝置，由粗調(diào)螺旋和細(xì)調(diào)螺旋組

3、成，用于調(diào) 節(jié)物鏡與標(biāo)本間的距離，使物像更清晰。粗調(diào)螺旋轉(zhuǎn)動(dòng)一圈可使鏡筒升降約10m m,細(xì)調(diào)螺旋轉(zhuǎn)動(dòng)一圈可使鏡筒升降約0.1mm圖1-1普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造1.鏡座2.鏡臂3.鏡筒4.轉(zhuǎn)換器5.載物臺(tái)6.壓片夾7.標(biāo)本移動(dòng) 器8.粗調(diào)螺旋9.細(xì)調(diào)螺旋10.目鏡11.物鏡12.虹彩光闌（光圈）13.聚光器14.反光鏡2、光學(xué)系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)包括目鏡、物鏡、聚光器、反光鏡等。（1）目鏡：它的功能是把物鏡放大的物像再次放大。目鏡一般由兩塊透鏡組成。上面一塊稱接目透鏡，下面一塊稱場(chǎng)鏡。在兩塊透鏡之間或在場(chǎng)鏡下方有 一光闌。由于光闌的大小決定著視野的大小， 故它又稱為視野光闌。標(biāo)本成像于 光闌限定的范圍之

4、內(nèi)，在光闌上粘一小段細(xì)發(fā)可用作指針，指示視野中標(biāo)本的位 置。在進(jìn)行顯微測(cè)量時(shí)，目鏡測(cè)微尺被安裝在視野光闌上。目鏡上刻有5X、10X、15X、20X等放大倍數(shù)?？砂葱柽x用。（2）物鏡：它的功能是把標(biāo)本放大，產(chǎn)生物像。物鏡可分為低倍鏡（4或10X）、中倍鏡（20X）高倍鏡（4060X）和油鏡（100。一般油鏡上刻有“01（oil immersion） 或HI（homogeneous immersio）子樣，有時(shí)刻有一圈紅線或黑線，以示區(qū)別。物鏡上通常標(biāo)有放大倍數(shù)、數(shù)值孔徑（n umerical aperture簡(jiǎn)寫為NA）工作距離（物鏡下端至蓋玻片間的距離，mm）及蓋玻片厚度等參數(shù)（圖1-2）。以

5、油鏡為例，100/1.25分別表示放大倍數(shù)為100倍，NA為1.25;160/0.17分別表示鏡筒長度160mm,蓋玻片厚度等于或小于0.17mm=圖1-2 XSP-16型顯微鏡物鏡的主要參數(shù)（3）聚光器：聚光器又稱聚光鏡，它的功能是把平行的光線聚焦于標(biāo)本上， 增強(qiáng)照明度。聚光器安裝在鏡臺(tái)下，可上下移動(dòng)。使用低倍物鏡（簡(jiǎn)稱低倍鏡） 時(shí)應(yīng)降低聚光器，使用油鏡時(shí)則應(yīng)升高聚光器。聚光器上附有虹彩光闌（俗稱光 圈），通過調(diào)整光闌孔徑的大小，可以調(diào)節(jié)進(jìn)入物鏡光線的強(qiáng)弱（物鏡焦距、工作 距離與光圈孔徑之間的關(guān)系見圖1-3）。在觀察透明標(biāo)本時(shí)，光圈宜調(diào)得相對(duì)小- 些，這樣雖會(huì)降低分辨力，但可增強(qiáng)反差，便于看

6、清標(biāo)本。圖1-3物鏡焦距、工作距離與光圈孔徑之間的關(guān)系iNiWWiiHiu/Q- 17isa/n. i f100/1 2S紅嫌亢Ad（4）反光鏡：它是普通光學(xué)顯微鏡的取光設(shè)備，其功能是采集光線，并將光線射向聚光器。反光鏡安裝在聚光器下方的鏡座上， 可以在水平與垂直兩個(gè)方 向上任意旋轉(zhuǎn)。反光鏡的一面是凹面鏡，另一面是平面鏡。一般情況下選用平面 鏡，光量不足時(shí)可換用凹面鏡。（二）普通光學(xué)顯微鏡的性能1、數(shù)值孔徑數(shù)值孔徑（NA）又稱開口率，是指介質(zhì)折射率與鏡口角1/2正弦的乘積，可用式1-1表示。0（NA二nsin2（1-1）式中，n為物鏡與標(biāo)本之間介質(zhì)的折射率，為鏡口角（通過標(biāo)本的光線延伸到物鏡邊

7、緣所形成的夾角（圖1-4）。物鏡的性能與物鏡的數(shù)值孔徑密切相關(guān)，數(shù)值孔徑越大，物鏡的性能越好。ja因?yàn)殓R口角 總是小于180?所以sin2的最大值不可能超過1。又因?yàn)榭諝獾恼?射率為1,所以以空氣為介質(zhì)的數(shù)值孔徑不可能大于1, 一般為0.05-0.95o根據(jù) 式1-1,要提高數(shù)值孔徑，一個(gè)有效途徑就是提高物鏡與標(biāo)本之間介質(zhì)的折射率（圖1-5）。使用香柏油（折射率為1.515浸沒物鏡（即油鏡）理論上可將數(shù)值 孔徑提高至1.5左右；實(shí)際數(shù)值孔徑值也可達(dá)1.21.4。2、分辨率最小距離（D）來表征（式1-2）。D值愈小，分辨率愈高。D =2n si n 冬（1-2）2式中，入為光波波長。比較式1-1

8、和式1-2可知，D可表示為：n =-D 2NA（1-3）根據(jù)式1-3,在物鏡數(shù)值孔徑不變的條件下，D值的大小與光波波長成正比。 要提高物鏡的分辨率，可通過兩條途徑：采用短波光源。普通光學(xué)顯微鏡所用的照明光源為可見光，其波長范圍為400700nm?？s短照明光源的波長可以降低D值，提高物鏡分辨率。加大物鏡數(shù)值孔徑。提高鏡口角或提高介質(zhì)折射率n，都能提高物鏡分辨率。若用可見光作為光源（平均波長為550 nm）,并用數(shù)值孔徑為1.25的油鏡來觀察標(biāo)本，能分辨出的兩點(diǎn)距離約為0.22卩m 3、放大率圖1-4物鏡的鏡口角的影響圖1-5介質(zhì)折射率對(duì)光線通路分辨率是指分辨物像細(xì)微結(jié)構(gòu)的能力分辨率常用可分辨出的

9、物像兩點(diǎn)間的普通光學(xué)顯微鏡利用物鏡和目鏡兩組透鏡來放大成像，故又被稱為復(fù)式顯微鏡。 采用普通光學(xué)顯微鏡觀察標(biāo)本時(shí)，標(biāo)本先被物鏡第一次放大， 再被目鏡第二 次放大 （圖1-6） 。所謂放大率是指放大物像與原物體的大小之比。 因此， 顯微鏡 的放大率 （V） 是物鏡放大倍數(shù) （Vi）和目鏡放大倍數(shù)（V2）的乘積，即：7=7/ V2（1-4）如果物鏡放大40倍，目鏡放大10倍，則顯微鏡的放大率是400倍。常見物 鏡（油鏡）的最高放大倍數(shù)為100倍， 目鏡的最高放大倍數(shù)為15倍， 因此一般 顯微鏡的最高放大率是1500倍。樣晶物鏡口鏡肉眼見列_的物像圖1-6普通光學(xué)顯微鏡的成像原理4、焦深一般將焦點(diǎn)所

10、處的像面稱為焦平面。在顯微鏡下觀察標(biāo)本時(shí)，焦平面上的物像比較清晰，但除了能看見焦平面上的物像外，還能看見焦平面上面和下面的物 像，這兩個(gè)面之間的距離稱為焦深。物鏡的焦深與數(shù)值孔徑和放大率成反比，數(shù) 值孔徑和放大率越大，焦深聚光器越小。因此，在使用油鏡時(shí)需要細(xì)心調(diào)節(jié)，否則物像極易從視野中滑過而不能找到三、實(shí)驗(yàn)器材1、儀器顯微鏡；2、材料？標(biāo)本片，香柏油，二甲苯，擦鏡紙。四、實(shí)驗(yàn)程序（一）顯微鏡（油鏡）操作1、領(lǐng)取并檢查顯微鏡：按學(xué)號(hào)向?qū)嶒?yàn)指導(dǎo)老師領(lǐng)取顯微鏡，所有實(shí)驗(yàn)課均 對(duì)號(hào)使用。從顯微鏡箱中取出顯微鏡時(shí)，用右手緊握鏡臂，左手托住鏡座，直立 平移（圖1-7），輕輕放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上（圖1-8），檢查

11、各部件是否齊全，鏡頭是 否清潔，有問題及時(shí)報(bào)告老師。圖1-8顯微鏡的放置光源：良好的照明是保證顯微鏡使用效果的重要條件。將低倍鏡旋轉(zhuǎn)到工作圖1-7顯微鏡的搬動(dòng)位置，用粗調(diào)螺旋提升鏡筒，使鏡頭距離載物臺(tái)10mm左右，降低聚光鏡的位置,完全打開虹彩光闌，一邊看目鏡，一邊調(diào)節(jié)反光鏡鏡面的角度（在正常情況下， 一般用平面反光鏡；若自然光線較弱，則可用凹面反光鏡）。然后，調(diào)節(jié)聚光器的位置（酌予升降），直至視野內(nèi)得到均勻適宜的亮度。3、低倍鏡觀察：使用低倍鏡觀察，視野較廣，焦深較大，便于搜尋目標(biāo)，因此宜從低倍鏡開始觀察。將載玻片標(biāo)本（涂面朝上）置于載物臺(tái)中央（圖1-9）， 用壓片夾固定（圖1-10），并將

12、標(biāo)本部位移到正中，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)螺旋（圖1-11）， 使鏡頭與標(biāo)本的距離降到10mm左右。然后，一邊看目鏡內(nèi)的視野，一邊調(diào)節(jié)粗 調(diào)螺旋緩慢升高鏡頭，至視野內(nèi)出現(xiàn)物像時(shí)，改用細(xì)調(diào)螺旋（圖1-12），繼續(xù)調(diào) 節(jié)焦距和照明，以獲得清晰的物像，并將所需部位移到視野中央，再換中、高倍 鏡觀察（圖1-13）。圖 1-9 將載玻片標(biāo)本置于載物臺(tái)中央圖 1-10 用壓片夾固定載玻片標(biāo)本圖 1-11 轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)螺旋 圖 1-12 轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)螺旋 圖 1-13 轉(zhuǎn)換物 鏡4、中、高倍鏡觀察：依次用中、高倍鏡觀察低倍鏡下鎖定的部位，并隨著 物鏡放大倍數(shù)的增加， 逐步提升聚光器增強(qiáng)光線亮度。 找出所需目標(biāo)， 將其移至 視野中央

13、。5、油鏡觀察：將聚光器提升至最高點(diǎn)，轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，移開高倍鏡，使高倍 鏡和油鏡成 “八”字形，在標(biāo)本中央滴一小滴香柏油， 把油鏡鏡頭浸入香柏油中， 微微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)螺旋， 直至看清物像。 如果油鏡上升至離開油面還未看清物像， 則 需重新調(diào)節(jié)?？蓮膫?cè)面注視， 小心地轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器將油鏡重新浸在香柏油中， 但 不能讓油鏡壓在標(biāo)本上，更不能用力過猛，擊碎玻片，損壞鏡頭。6、調(diào)換標(biāo)本：觀察新標(biāo)本片時(shí)，必須重新從第3步開始操作。7、用后復(fù)原：觀察完畢，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)螺旋提升鏡筒，取下載玻片，先用擦鏡紙擦 去鏡頭上的香柏油，然后用擦鏡紙蘸取少許二甲苯 （香柏油可溶于二甲苯） 擦去 鏡頭上的殘留油跡， 再用干凈的擦鏡紙

14、擦去殘留的二甲苯， 最后用細(xì)軟的綢布擦 去機(jī)械部件上的灰塵和冷凝水。 降低鏡筒， 將物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形置于載物臺(tái)上。 降低聚光器，避免聚光器與物鏡相碰。使反光鏡垂直于鏡座，以防受損。將顯微 鏡放回顯微鏡箱中鎖好，并放入指定的顯微鏡柜內(nèi)。第二節(jié) 微生物形態(tài)觀察一、儀器和材料1、 顯微鏡、擦鏡紙、香柏油或液體石蠟、二甲苯。2、 示范片： 大腸桿菌（桿狀）、小球菌（球狀）、硫酸鹽還原菌（弧形） 、枯草 芽孢桿菌、放線菌、顫藻、魚腥藻或念珠藻等 。二、試驗(yàn)內(nèi)容和操作方法1、嚴(yán)格按照光學(xué)顯微鏡操作方法， 依低倍、高倍和油鏡的次序觀察桿狀、 球狀、 弧狀和絲狀的細(xì)菌示范片，用鉛筆分別繪出各種細(xì)菌的形態(tài)圖。

15、2、同法逐個(gè)觀察放線菌的示范片，分別繪出其形態(tài)圖。3、同法逐個(gè)觀察顫藻、魚腥藻或念珠藻的示范片，分別繪出其形態(tài)圖。問題與思考1、使用顯微鏡的油鏡時(shí)，為什么必須使用鏡頭油？2、鏡檢標(biāo)本時(shí)，為什么先用低倍鏡觀察，而不直接用高倍鏡或油鏡觀察？實(shí)驗(yàn)二 培 養(yǎng)基 的配制、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)制備培養(yǎng)基的基本技術(shù)。2.制備牛肉膏蛋白瓊脂培養(yǎng)基。、實(shí)驗(yàn)基本原理培養(yǎng)基是將微 生物生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成 的各種營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基為微生物的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)和生存空間。 它具有微生 物正常生活所需的各種養(yǎng)料和適宜的環(huán)境條件； （1）適當(dāng)組分和比例的營養(yǎng)物質(zhì)； （2）適宜的pH值；（3）合適的滲透

16、壓；（4）保持無菌狀態(tài)。所以培養(yǎng)基是培 養(yǎng)微生物所必需的最主要材料。 培養(yǎng)基的配制是微生物學(xué)工作者的主要技術(shù)操作 之一。培養(yǎng)基的種類： 根據(jù)培養(yǎng)基的組成成分，可將培養(yǎng)基分為三類： 合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。 半合成培養(yǎng)基：由一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。 天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成的。從培 養(yǎng)基 的物理狀態(tài)來分：液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液態(tài)狀培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2左右的凝固劑的固體狀培養(yǎng)基或固體 狀農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。半固體培養(yǎng)基： 在液體培養(yǎng)基中加入0.2-0.5凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng) 基。微生物最常用的凝固劑為瓊脂（其次為明

17、膠） ，又叫洋菜、凍粉。它不是一 種營養(yǎng)物質(zhì)，只能被極少數(shù)種類的細(xì)菌分解利用。 瓊脂是從海藻中 （主要是石花 菜）提取而制成的。是一種多糖類化合物，主要成分是復(fù)雜的多糖硫酸酯鈣鹽， 瓊脂是一種可逆性膠體， 在常規(guī)濃度下加熱到96C以上即成溶膠狀態(tài)， 融化的瓊 脂，當(dāng)溫度下降到42C以下，又凝固為固體。牛肉膏蛋白培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌培養(yǎng)基， 這種培養(yǎng)基中 含有一般細(xì)菌生長繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質(zhì)， 可供作繁殖之用， 制作固體 培養(yǎng)基時(shí)須加2%瓊脂， 培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)， 應(yīng)用稀酸或稀堿將PH調(diào)至中性或微堿性。 牛肉膏蛋白培養(yǎng)基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%,NaCI0.5%,pH

18、7.47.6。三、材料與儀器1.試劑 牛肉膏，蛋白胨、NaCI、瓊脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCI。2.其它： 試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，漏斗，乳膠管，彈簧夾，紗布，棉花，牛皮紙，線繩，pH試紙，電爐，臺(tái)秤。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.稱量 根據(jù)用量按比例依次稱取成分， 牛肉膏常用玻棒挑取， 放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯，蛋白胨易吸濕，稱量時(shí)要迅速。2.溶解 在燒杯中加入少于所需要的水量， 加熱，逐一加入各成分， 使其溶解， 瓊脂在溶液煮沸后加入， 融化過程需不斷攪拌。 加熱時(shí)應(yīng)注意火力， 勿使培養(yǎng)基 燒焦或溢出。溶好后，補(bǔ)足所需水分。3.調(diào)PH用1moI/L NaOH

19、或1moI/L HCI把PH調(diào)至所需范圍。4.過濾 趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利于某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察，如無特殊要求時(shí)可省去此步驟。5.分裝 按實(shí)驗(yàn)要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三解瓶?jī)?nèi)分裝時(shí)注 意，勿使培養(yǎng)基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。1）液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜，分裝三角瓶的量則根據(jù)需要而定，一般以不超過三角瓶容積的1/2為宜。2） 固體分裝分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面，斜面長度不超過管長的1/2（圖1）。分裝三解瓶，以不超過容積的1/2為宜。3） 半固體分裝裝置以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。圖 1 滅菌的試管培養(yǎng)基趁熱擺成

20、斜面6.加棉塞 分裝完畢后，在試管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及試管 帽等，以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基而造成污染，并保證有良好的通氣性能。7.包扎 棉塞頭上包一層牛皮紙，扎緊，即可進(jìn)行滅菌。8.保存滅菌后的培養(yǎng)基放入37C養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，以檢驗(yàn)滅菌的效果,無污染方可使用。問題與思考：1培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)注意什么問題？為什么？2分裝培養(yǎng)基時(shí)為什么要使用彈簧夾？3培養(yǎng)基配好后，為什么要立即滅菌？實(shí)驗(yàn)三消毒和滅菌、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私飧蔁釡缇案邏赫羝麥缇牟僮鞣椒ā６?、?shí)驗(yàn)原理滅菌是用物理或化學(xué)的方法來殺死或除去物品上或環(huán)境中的所有微生物。 消 毒是用物理或化學(xué)的方法殺死物體上絕大部分微生物（主要是

21、病原微生物和有害 微生物）。消毒實(shí)際上是部分滅菌。在微生物實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)和科研工作中，需要進(jìn) 行純培養(yǎng) 不能有任何雜菌，因此，對(duì)所用器材、培養(yǎng)基要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌，對(duì)工 作場(chǎng)所進(jìn)行消毒，以保證工作順利進(jìn)行。滅菌的方法，通常可以分為四大類：（1）加熱滅菌：包括直接灼燒滅菌、 干熱滅菌、加壓蒸汽滅菌、間歇滅菌和煮沸消毒；（2）過濾去菌；（3）射線滅 菌和消毒；（4）化學(xué)藥劑滅菌和消毒。在本實(shí)驗(yàn)中，介紹與培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌有關(guān)的部份滅菌方法。干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白凝固變性而達(dá)到滅菌的目的， 細(xì) 胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)， 在菌體受熱時(shí)， 當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含 水量越大，則蛋白凝固

22、越快，反之含水量越小凝固越慢。因此與濕熱滅菌相比， 干熱滅菌所需溫度高（160170C），時(shí)間長（12h）。高壓蒸汽滅菌是將待 滅菌的物品放入一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)， 通過加熱， 使滅菌鍋內(nèi)水沸騰產(chǎn)生蒸 汽，水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡， 然后關(guān)閉排氣閥， 繼續(xù)加熱， 此時(shí)由于水蒸汽不能溢出而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力， 從而使沸點(diǎn)升高， 得到高于100C的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。般培養(yǎng)基用O.IMPa、121.1C.1530min可達(dá)到徹底滅菌，滅菌的溫度及維持的時(shí)間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體情況而有所改變.三、材料與儀器吸管、培養(yǎng)皿、試管、電熱干燥箱，手提試高

23、壓蒸汽滅鍋，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、蒸餾水。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）干熱滅菌法 適用于空的、干燥的玻璃器皿的滅菌。培養(yǎng)基不適用。1將包好的待滅菌物品（培養(yǎng)皿、試管、吸管等）放入電熱干燥箱（注意留有一定的間隙），關(guān)好箱門。2接通電源，打開排氣孔，使箱內(nèi)濕空氣能逸出，旋動(dòng)恒溫調(diào)節(jié)器，保持加熱升溫狀態(tài)，至箱內(nèi)達(dá)到100C時(shí)關(guān)閉排氣孔。3當(dāng)溫度升到160170C時(shí)，借恒溫調(diào)節(jié)器的自動(dòng)控制，保持此溫度2h。4切斷電源，冷卻至70C時(shí)，打開箱門，取出滅菌物品（未降至70度以前，切勿打開箱門，否則溫度驟降導(dǎo)致玻璃器皿炸裂）。（二）高壓蒸汽滅菌1首先將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角架相平 為宜。2放

24、回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌物品（內(nèi)裝培養(yǎng)基或小的三角瓶），不要裝 得太擠，以免妨礙汽流通影響滅菌效果， 三角瓶口不要與桶壁接觸， 以免冷凝水 淋溫包口的紙而透入棉塞。加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)，再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)棉栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。3用電爐或其他方法加熱，并同時(shí)打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣，待冷空氣排盡后，關(guān)上排氣閥讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升，當(dāng)鍋內(nèi)達(dá)到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。4停止加熱，待壓力表的壓力降至零位時(shí)，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。注意：當(dāng)壓力不為零時(shí)， 不能開蓋取物否則由于壓力突然下

25、降， 容器內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染而發(fā)生污染，甚至灼傷操作者。5高壓滅菌鍋上的安全閥，是保障安全使用的重要機(jī)構(gòu)，不得隨意調(diào)節(jié)。問題與思考1干熱滅菌操作過程中應(yīng)注意哪些問題，為什么？2為什么干熱滅菌所需溫度要比濕熱滅菌高？3高壓蒸汽滅菌時(shí)，為什么要排盡鍋內(nèi)的空氣？實(shí)驗(yàn)四、微生物接種技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握微生物各種接種方法。2.掌握無菌操作的基本環(huán)節(jié)。二、實(shí)驗(yàn)原理在自然界中， 各種微生物是在互為依賴的關(guān)系下共同生活的。 因此，為了取 出特定的微生物進(jìn)行純培養(yǎng)， 必須把它們分離出來。 將一種微生物移到另一種滅 菌的培養(yǎng)基上稱為接種。在接種、培養(yǎng)過程中，均需嚴(yán)格的無菌操作，防

26、止雜菌侵入，所用的器具必須經(jīng)過滅菌， 接種工具無論使用前后都要經(jīng)過火焰滅菌， 且 在無菌室或無菌箱中進(jìn)行。三、材料與儀器（一）菌種大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌、青霉菌（二）緩沖葡萄糖肉湯培養(yǎng)基試管垂直； 緩沖葡萄糖肉湯半固體培養(yǎng)基試管 垂直；緩沖葡萄糖肉湯固體培養(yǎng)基試管斜面；緩沖葡萄糖肉湯固體培養(yǎng)基平板； 察氏培養(yǎng)基試管斜面；察氏培養(yǎng)基平板。（三）接種環(huán)、接種針、接種鉤。鑷子、酒精燈、火柴、酒精棉、試管架、 漿糊、標(biāo)簽紙、恒溫培養(yǎng)箱等。四、實(shí)驗(yàn)步驟1接種前的準(zhǔn)備工作（1）檢查接種工具。（2）在欲接種的培養(yǎng)基試管或平板上貼好標(biāo)簽， 標(biāo)上接咱的菌名、 操作者、 接種日期等。（3）將培

27、養(yǎng)基、接種工具和其他用品全部放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上擺好，進(jìn)行環(huán)境消毒。2接種方法（1）試管接種方法1將菌種試管與待接種的試管培養(yǎng)基依次排列，挾于左手的拇指與食指之間，用右手的中指與食指或食指與小指拔出棉塞并挾出。2置試管口于酒精火焰附近；3將接種工具垂直插入酒精火焰中燒紅， 再橫過火焰三次， 然后再放入有菌 試管壁內(nèi)，于無菌的培養(yǎng)基表面待其冷卻。4用接種工具取少許菌種置于另一支試管中， 按一定的接種方式把菌種接種 到新的培養(yǎng)基上。5取出接種工具，試管口和棉塞進(jìn)行火焰滅菌。6重新塞上棉塞。7燒死接種工具上殘留余菌，把試管和接種工具放回原處。（2）試管菌種接到平板培養(yǎng)基的方法1左手持平板和試管菌種，右手松動(dòng)

28、試管試管棉塞，燒接種工具。2右手小指與四指取下棉塞，取菌，打開平皿。3將菌種接種到平皿上，立即蓋上平皿。4酒精燈火焰上燒接種工具滅菌5棉塞過火，重新塞上試管。3.培養(yǎng)1）將接種的細(xì)菌培養(yǎng)基放在3237C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察。2）將接種分離后的酵母菌和霉菌放在2528C的恒溫箱內(nèi)，酵母菌培 養(yǎng)48h，霉菌培養(yǎng)72h后觀察。3）平板培 養(yǎng)基 置于恒溫箱內(nèi)倒置培養(yǎng)。問題與思考1為什么從事微生物實(shí)驗(yàn)工作的最基本要求是無菌操作？2大腸桿菌接種于葡萄糖肉湯培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)后，會(huì)出現(xiàn)什么情況？實(shí)驗(yàn)五、細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色和革蘭氏染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私飧锾m氏染色的原理，學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色的方法。I、細(xì)菌簡(jiǎn)單

29、染色法一、 實(shí)驗(yàn)原理細(xì)菌的涂片和染色是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的一項(xiàng)基本技術(shù)。細(xì)菌的細(xì)胞小而透 明，在普通光學(xué)顯微鏡下不易識(shí)別，必須對(duì)它們進(jìn)行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。所謂簡(jiǎn)單染色法是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法。此法操作簡(jiǎn)便，可用以觀察微生物的形狀、大小及細(xì)胞排列狀態(tài)，是微生物技術(shù)中應(yīng)用廣泛， 操作簡(jiǎn)便的染色法。用于生物染色的染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類。堿性染 料的離子帶正電荷，能和帶負(fù)電荷的物質(zhì)結(jié)合。因細(xì)菌蛋白質(zhì)等電點(diǎn)較低，當(dāng)它 生長于中性、堿性或弱酸性的溶液中時(shí)常帶負(fù)電荷，所以通常采用堿性染料使其 著色。例如，美藍(lán)(亞甲

30、藍(lán))實(shí)際上是氯化亞甲藍(lán)鹽(methylene blue chloride， 縮寫為M B C);它可被電離成正、負(fù)離子：M B C methylene bluechloride-帶正電荷的染料離子可使細(xì)菌細(xì)胞染成藍(lán)色。常用的堿性染料除美藍(lán)外，還有結(jié)晶紫(crystal violet)、堿性復(fù)紅(basic fuchsin)、番紅(又稱沙黃，safranine)等。酸性染料的離子帶負(fù)電荷，能與帶正電荷的物質(zhì)結(jié)合。當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸 使培養(yǎng)基pH下降時(shí)，細(xì)菌所帶正電荷增加，因此易被伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅 等酸性染料著色。中性染料是前兩者的結(jié)合物又稱復(fù)合染料，如伊紅美藍(lán)、伊紅 大冃等。染色前必須先固

31、定細(xì)菌，其目的有二：一是殺死細(xì)菌，使細(xì)胞質(zhì)凝固，菌體 粘附于玻片上；二是增加其對(duì)染料的親和力。常用的有加熱和化學(xué)固定兩種方法。 固定時(shí)應(yīng)盡量維持細(xì)胞原有形態(tài)，防止細(xì)胞膨脹或收縮。二、 實(shí)驗(yàn)器材1、菌種巨大芽抱桿菌(Bacillus megaterium)或蠟狀芽抱桿菌(Bacilluscereus)；2、儀器顯微鏡;3、材料 接種環(huán)，酒精燈，火柴，載玻片，洗瓶，廢液缸，擦鏡紙，吸水 紙；4、染料 草酸銨結(jié)晶紫或石碳酸復(fù)紅。三、操作步驟1、涂片 在潔凈無油膩的玻片中央放一小滴蒸餾水，用灼燒滅菌冷卻后的 接種環(huán)挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜。2、干燥 將涂片于空氣中自然晾干，或?qū)⑼科?/p>

32、于火焰高處微熱烘干，但 不能直接在火焰上烘烤，以免菌體變形。3、固定 手執(zhí)玻片一端， 有菌膜的一面朝上， 通過迅速通過火焰2-3次（用 手指觸涂片反面，以不燙手為宜）。待玻片冷卻后，再加染料；4、染色 玻片置于玻片擱架上， 加適量（以蓋滿菌膜為度）結(jié)晶紫染色液（或 石炭酸復(fù)紅液）于菌膜部位，染l-2min。5、水洗 傾去染色液，用洗瓶中的自來水自玻片一端輕輕沖洗，至流下的 水中無染色液的顏色時(shí)為止。6、干燥 自然干燥或用吸水紙 蓋在涂片部位以吸去水分（注意勿擦去菌 體）。7、鏡檢 用油鏡觀察并繪出細(xì)菌形態(tài)圖。8、清理 實(shí)驗(yàn)完畢，擦凈顯微鏡。有菌的玻片置消毒缸中，清洗、晾干后 備用。四、注意事項(xiàng)

33、1、玻片要潔凈無油，否則菌液涂不開。2、挑菌量宜少，涂片宜薄，過厚則不易觀察。H、革蘭氏染色法一、實(shí)驗(yàn)原理革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家C. Gram所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法 可將所有的細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G）和革蘭氏陰性菌（G）兩大類，是細(xì)菌學(xué) 上最常用的鑒別性染色法。革蘭氏染色法的主要步驟是先用結(jié)晶紫進(jìn)行初染；再加媒染劑-碘液，以增加染料與細(xì)胞間的親和力，使結(jié)晶紫和碘在細(xì)胞膜上形成分子量較大的復(fù)合 物；然后用脫色劑（乙醇或丙酮）脫色；最后用蕃紅復(fù)染。凡細(xì)菌不被脫色而保留 初染劑的顏色（紫色）者為革蘭氏陽性菌，如被脫色后又染上復(fù)染劑的顏色（紅色）者為革蘭氏陰性菌。該染色法所以能將細(xì)

34、菌分為G菌和G菌，是由這兩類菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和成分 的不同所決定的。G菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖 層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透 性，使結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)蕃紅復(fù)染后就成 紅色。G菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反 而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時(shí)的顏色。、實(shí)驗(yàn)器材1、菌種 牛肉膏瓊脂斜面28C培養(yǎng)24h的大腸桿菌（Escherichia coli）斜面菌種，牛肉膏瓊脂斜面28 C培養(yǎng)16h的枯草桿菌（Bacillussubtilis）斜面菌種；2、

35、儀器顯微鏡；3、材料 載玻片，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，吸水紙，染色缸等。4、染料 草酸銨結(jié)晶紫染色液，路哥氏（Lugol）碘液，95聽醇，0.5%番紅染色液；三、操作步驟1、 涂片 在一張載玻片上加兩滴蒸餾水后，分別涂布枯草芽抱桿菌和大腸桿菌（注意涂片切不可過于濃厚）。2、固定 將制成的涂片干燥固定，固定時(shí)通過火焰1-2次即可，不可過 熱，以載玻片不燙手為宜。3、染色初染 將玻片置于玻片擱架上，加草酸銨結(jié)晶紫染色液（加量以蓋滿菌膜為度），染色1-2min。傾去染色液，用自來水小心地沖洗。媒染 滴加（Lugol）碘液，染1-2min，水洗。脫色 滴加95聽醇，脫色20-25S立即水洗，以終止脫色

36、。復(fù)染 滴加蕃紅，染色2-3min，水洗。最后用吸水紙輕輕吸干。4、鏡檢 干燥后，置油鏡觀察。被染成紫色者即為革蘭氏陽性菌（G）；被染成紅色者是革蘭氏陰性菌（G）。四、注意事項(xiàng)1、 革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是脫色時(shí)間。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而被誤認(rèn)為是革蘭氏陰性菌； 如脫色時(shí)間過短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被認(rèn)為是 革蘭氏陽性菌。脫色時(shí)間的長短還受涂片厚薄、脫色時(shí)玻片晃動(dòng)的快慢及乙醇用 量多少等因素的影響，難以嚴(yán)格規(guī)定。一般可用已知革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性 菌作練習(xí)，以掌握脫色時(shí)間。當(dāng)要確證一個(gè)未知菌的革蘭氏反應(yīng)時(shí)，應(yīng)同時(shí)做一張已知革蘭氏陽性菌和陰性菌的混合涂片，以資對(duì)照。2、 染色過程中勿使

37、染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水，以免 染色液被稀釋而影響染色效果。3、 選用培養(yǎng)16-24h菌齡的細(xì)菌為宜。若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常 使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng)。問題與思考（1）作革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵一步是什么？（2） 當(dāng)你對(duì)一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)， 怎樣能確證你的染色技術(shù)操作正確， 結(jié)果可靠？實(shí)驗(yàn)六、藻類的培養(yǎng)、觀察、計(jì)數(shù)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、 通過實(shí)驗(yàn)了解藻類生長的基本條件和方法，掌握淡水微藻的基本培養(yǎng)方法;2、 顯微鏡下觀察并識(shí)別幾種常見淡水微藻；3、 了解血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理，掌握血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)方法。二、 實(shí)驗(yàn)材料：斜生柵藻、小球藻

38、、銅綠微囊藻；三、 主要實(shí)驗(yàn)儀器和器皿1 顯微鏡，血球計(jì)數(shù)板，計(jì)數(shù)器2 培養(yǎng)瓶（三角瓶），量筒；四、 試劑1 .培養(yǎng)液：BG11 培養(yǎng)液 2 .碘固定液五、 培養(yǎng)條件：光照強(qiáng)度：1200LUX、溫度：20-25C、光照時(shí)間：24h 連續(xù)光照六、 方法和步驟1 前期準(zhǔn)備：各種器皿的消毒、培養(yǎng)液的配制、準(zhǔn)備并培養(yǎng)3 種不同的淡水微藻：斜生柵藻、小球藻、銅綠微囊藻；2、 接種：將不同的實(shí)驗(yàn)藻種分別接種到盛有培養(yǎng)液的不同三角瓶（100ml）中，接種的藻容量和新培養(yǎng)液之間的比例為1: 21: 3。培養(yǎng)量與總?cè)萘康谋刃∮?/3 ;3、 培養(yǎng)：按上述培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)的過程中，每天搖瓶3 次，使藻類充

39、分見接 觸氧氣和光照；4、換代：5-7 天換代 1 次，換代濃度同上；5、 固定：將藻液搖勻，用小三角瓶分別倒取一定量（20-30ml）的上述 3 種藻液加入幾滴碘液， 搖勻殺死細(xì)胞；6、取樣：搖勻后，用吸管吸取上述不同的藻液分別滴到蓋有蓋玻片的血球計(jì)數(shù)板的邊緣，使藻液慢慢進(jìn)入蓋有蓋玻片的區(qū)域，避免蓋玻片浮起，用吸水紙輕輕吸走多余的藻液，每種 藻液取樣 2 次;7、觀察計(jì)數(shù)：顯微鏡下觀察不同的藻種并分別計(jì)數(shù)。1）血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)原理 血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片， 板的中部一 “ H ”型的凹槽， 橫 槽兩邊的平臺(tái)上各有一個(gè)有九個(gè)大方格的方格網(wǎng)。每個(gè)大格：邊長 為 1mm,深為 0.1mm,容積

40、為 0.1mm3（10-4ml）。中間大方格為計(jì)數(shù) 室以計(jì)數(shù)室為中心，對(duì)角線兩端各有一個(gè)有16個(gè)中格組成的大格。| 1：丁l;ll 11114=r：囂三J ； ： .討;VuilH iin1丨Liiu.m. 甜&TAB.劃炒那井玻丈 .Utt攝井d羹凰片jh b優(yōu)髙。崔匕曲 u.鬥恂2）計(jì)算藻細(xì)胞密度 數(shù)出對(duì)角線上的 4 個(gè)大方格中的總藻數(shù) A,若藻液的稀釋倍數(shù)為 B, 則計(jì)算公式如下：細(xì)胞密度= A 十 4X B x 104（個(gè)/ ml）（單位：個(gè)/ ml）七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果按下表記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。次數(shù)各大格中的藻數(shù)112342八、問題與思考 用此法計(jì)數(shù)的結(jié)果是活藻體還是死、活菌體的總和?實(shí)驗(yàn)

41、七 土壤細(xì)菌、放線菌、霉菌及纖維素降解菌的分離及提純、目的要求通過平板涂布法學(xué)習(xí)土壤中一般異養(yǎng)性細(xì)菌、放線菌、霉菌及纖維素降解菌的分 離以及純化方法二、基本原理 微生物分離培養(yǎng)的基本原理是：選用不同成分和酸堿度的培養(yǎng)基，在不同的濕度 和不同的通氣條件下進(jìn)行培養(yǎng)， 使只有適合該條件的微生物得以生長。 微生物在固體培 養(yǎng)基上生長形成的單個(gè)菌落可以是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。 因此可通過挑取單菌 落而獲得一種純培養(yǎng)。 由于土壤中菌數(shù)高， 常需進(jìn)行一定量稀釋， 使微生物能在培養(yǎng)基 上長成單個(gè)菌落， 以達(dá)到分離的目的。 本實(shí)驗(yàn)將采用四種不同的培養(yǎng)基從土壤中分離不 用的微生物三、器材1、培養(yǎng)基：牛肉蛋白

42、胨瓊脂培養(yǎng)基、高氏一號(hào)培養(yǎng)基、馬丁培養(yǎng)基、赫奇遜培養(yǎng)基2、土壤懸液、無菌玻璃棒、無菌吸管、盛有9ml 無菌水的試管、無菌試管四、操作步驟1 選定采土地點(diǎn)后，鏟去表涂層23cm,取 310cm 深層土壤 10g。稱取土樣 1g,加入盛有 99ml 無菌水的錐形瓶中，振蕩10min，使土壤中菌體、芽孢或孢子均勻分散，制成 102稀釋度的土壤稀釋液。 然后按 1 0 倍稀釋法進(jìn)行稀釋分離,以制備 1 07稀釋度為例，具體操作過程如下：取4.5ml 無菌水試管 6 支，按 10一310-7 順序編號(hào)，放置在試管架上。取移液管一支，準(zhǔn)確吸取0.5ml102土壤稀釋液，此為 10- 3 稀釋度的土壤稀釋液

43、,依次操作,制成10-4、 10-5、 10-6、 1 0-7的土壤稀釋液。2、 用無菌吸管分別吸取適宜濃度的土壤稀釋液0.1ml,接種于相應(yīng)的培養(yǎng)基平板上。 每一稀釋度至少有兩個(gè)平板重復(fù)。 接種時(shí)每一稀釋度用一支無菌吸管, 菌液注入平板后, 應(yīng)立即用無菌涂棒將該菌液均勻地涂布于平板表面,注意勿刮破瓊脂。通常,細(xì)菌采用 10-4、 10-5、 10-6三種稀釋液接種于牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,37C 培養(yǎng)；放線菌采用 10-3、10-4、10-5三種稀釋液接種于高氏一號(hào)培養(yǎng)基。28 C 培養(yǎng)；霉菌則采用 1O2、10-3、10-4三種稀釋度接種于馬丁培養(yǎng)基，28。C 培養(yǎng)；纖維素降解菌采用 10

44、-2、 10-3、 10-4三種稀釋度接種于赫奇遜培養(yǎng)基,28 C。3、當(dāng)單菌落長出時(shí), 用接種環(huán)挑菌落接到相應(yīng)的斜面培養(yǎng)基上, 在相應(yīng)的溫度下培養(yǎng)五、問題與思考1、你所涂布的平板是否較好的得到了單菌落？2、在四種不同的平板上你得到了哪些類群的微生物？簡(jiǎn)述它們的菌落特征？實(shí)驗(yàn)八、微生物實(shí)驗(yàn)常用玻璃器皿清洗一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?.熟悉實(shí)驗(yàn)所需各種常用玻璃器皿的名稱和規(guī)格三、2.掌握玻璃器皿等器材的清洗、包扎技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理為確保實(shí)驗(yàn)順利地進(jìn)行, 要求把實(shí)驗(yàn)所用的玻璃器皿清洗干凈。 為保持滅菌后和無菌狀 態(tài),需要對(duì)培養(yǎng)皿、 吸管 等進(jìn)行包扎,對(duì) 試管 和三角瓶等加塞棉塞。這些工作看起來很普通 簡(jiǎn)單,但如操作不當(dāng)或不安操作規(guī)定去做,則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,甚至?xí)?dǎo)致試驗(yàn)的失敗。三、 試劑和儀器1. 高壓蒸汽滅菌鍋、 試管 、三角瓶、培養(yǎng)皿和 吸管 、棉線、紗布、棉花、牛皮紙、報(bào)紙等2. 洗滌工具、去污粉和相應(yīng)洗滌液四、 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一） 玻璃器皿的清洗：