常規(guī)的石蠟包埋過程包括五個基本步驟

1、常規(guī)的石蠟包埋過程包括五個基本步驟，即固定，脫水，透明，浸蠟和包埋制作石蠟切片，切片前須將石蠟滲透組織包埋于石蠟中，而水與石蠟又是不相混合的， 所以在浸蠟，包埋前必須將組織內(nèi)所含的水分脫去。而大多數(shù)的組織固定劑是水溶液，隨后的水沖洗也使其含有大量水分，因此必須先行脫水， 一般是浸入逐級增加濃度的酒精來完成。由于酒精和石蠟不能混合，須再用一種石蠟的溶劑來置換酒精，因大多數(shù)石蠟溶劑有使組織的折光率增高并表現(xiàn)為透明或半透明狀，所以此步驟又稱透明。最后用石蠟浸漬組織并鑄制成堅實的蠟塊。常規(guī)的石蠟包埋過程包括五個基本步驟，即固定，脫水，透明，浸蠟和包埋，前一章中已述 過固定。第一節(jié)脫水脫水就是用脫水劑完

2、全除去組織內(nèi)的水分，為下一步透明及浸蠟創(chuàng)造條件。此外，脫水還可以使組織再次發(fā)生一定的硬化，脫水劑必須是與水在任何比例下均能混合的液體。一.常用的脫水劑1.酒精：是制片最常用的 試劑，可與水在任何比例下相混合，酒精的脫水能力比較強，又 能硬化組織。但是酒精的船頭速度很快，對于組織會有明顯的收縮作用。因此在以酒精作為脫水劑時，應該先從濃度較低的酒精開始，然后遞增其濃度，這樣可以避免組織過度收縮。第一瓶酒精濃度隨固定劑，脫水組織的大小和種類而異，經(jīng)水溶性固定劑固定的細柔組織需 要慢慢脫水，從50 %酒精開始。如眼球，組胚組織等大多數(shù)組織標本則是從70 %酒精開始，再經(jīng)80%, 95 %以至無水酒精。

3、但是有時為了某種特殊要求，例如要做糖元的切片標本或 是要做尿酸結(jié)晶染色切片標本，為了防止糖元和尿酸結(jié)晶在水中消失卻要直接投入無水酒精 中固定，而不需要經(jīng)過水洗和低濃度酒精的脫水過程。經(jīng)無水酒精固定后的組織只需要再經(jīng)過換一次無水酒精脫水即可。用AAF固定液固定的組織可直接置于95%酒精開始脫水。用醇性固定劑（如Carnoy）則可置于高濃度無水酒精內(nèi)，但應多次換液以除酸。一般情況下，組織經(jīng)過 70%, 80%, 90%, 95%,以至無水酒精的脫水程序，即可達到脫 水的要求。但是為了能使大量的組織塊同時進行脫水， 則要求保持液體的濃度以保證脫水的 作用，最好是以兩次 95%酒精，兩次100 %酒精

4、重復進行脫水，以保證組織的水分脫凈。脫水時間應視組織種類， 組織塊大小，厚薄和固定劑的不同而異。如脫鈣的骨組織，實質(zhì)性臟器等的脫水過程宜短， 而疏松結(jié)締組織，脂肪組織等，脫水過程則宜適當延長。 水分必須脫干凈，脂肪必須溶去。 含有銘酸的固定劑固定的組織，脫水時間不宜過長，而鍍銀組織更應注意，脫水時間應比為鍍銀的同類組織要短。脫水的基本原則：從低濃度酒精開始逐漸升到高濃度酒精，以保持組織中的水分完全脫凈。一般1cmX1cmX0.2cm 大小的組織，脫水全過程僅需要數(shù)小時即可達到完全脫水。在各級濃度酒精內(nèi)處理的最短時間分別減少到24小時也能獲得滿意的結(jié)果。如果組織脫水不盡，隨后的透明，浸蠟都會受到

5、影響，致使切片很難以完成。較差質(zhì)量的切片，很容易造成在染色時 脫片，這樣的組織蠟塊，因其含有一定的水分，一經(jīng)與空氣接觸即干燥而凹陷。脫水不盡的組織是不能切出很好的切片的。外檢標本的制作，目前都采用快速脫水的方法。 科研標本，教學標本的脫水時間比較長，其目的 在于更充分脫水，并適當加強了組織的硬度。酒精脫水劑使用不宜太久，應適時更換新液。當酒精混濁 ，變黃或酒精滴于水中出現(xiàn)乳白色混 濁時，說明酒精中溶解了過量的脂類，這種情況一出現(xiàn)，將會影響脫水，則應及時更換。各種濃度酒精的配制：切片室內(nèi)應常備有 70%,80%,85%等各種濃度的酒精。配制時應以95%酒精作為基液加水稀釋,不要用無水酒精去配制，

6、因無水酒精的價格較高，極不經(jīng)濟。配制方法如下：1 .先將高濃度酒精注入量杯，其量同將要稀釋酒精濃度數(shù)字相等。2 .加入蒸儲水，致總量達到原酒精濃度的數(shù)字量。例如：（一）用95%酒精配制成70%酒精時：取95%酒精70毫升；（2）加蒸儲水使達到95毫升；稀釋后的酒精既為 70%的酒精。（二）用80%酒精配制成60%酒精時：取80%酒精60毫升；（2）加蒸儲水使達到80毫升；稀釋后的酒精既為濃度為 60%的酒精.其余類推，其他的試劑的稀釋也均可以參照此方法進 行配制。2 .丙酮（Acetone）：可用作固定液，也是一種比較好的脫水劑。脫水能力強、速度快，可配制不同濃度進行脫水。但一般情況下，多用在

7、無水酒精的補充脫水。丙酮脫水時間比酒精強，但容易使組織過度硬化，所以應適當掌握脫水時間。3 .正丁醇（-Buty alcohol）:正丁醇脫水能力較酒精弱 ，可與水、酒精相混合，而且也能溶解石 蠟,因此正丁醇不僅可以替代酒精使組織脫水，還可以代替二甲苯使組織透明。平常在稀釋時都與酒精按照一定比例配制使用，或?qū)⒔M織脫水至90%酒精后移入正丁醇，正丁醇再脫水后 可直接投入石蠟。用正丁醇脫水，組織比較少引起收縮和硬化等不良結(jié)果。4 .二氧乙環(huán)（Dioxan）:二氧乙環(huán)是一種有毒物質(zhì) ，易揮發(fā)（使用場所必'須通風，能同水、酒精、 二甲苯相混合并能溶解石蠟 ，是一種既可以脫水，也具有透明效果的液

8、體。 脫水一般可以70% 開始，再經(jīng)過90%至純二氧乙環(huán)，然后浸入石蠟。二氧乙環(huán)脫水對組織無收縮和硬化等不良現(xiàn) 象,對較硬的組織或易收縮的組織可使用二氧乙環(huán)。二.組織的搖震為加快脫水進程可將標本放入各級酒精內(nèi)借助機器或手工震搖，還可以加溫促進脫水。 即將標本裝在塞緊的玻璃瓶置于包埋箱或溫箱內(nèi)，因液體受熱產(chǎn)生的正壓可增加溶液的對流。 但熱酒精會使組織過硬，并有爆裂危險，除急診外，最好不用此方法。第二節(jié)透明組織脫水后，還要經(jīng)過一個浸蠟的媒劑透明過程。目的是使石蠟滲透到組織中去，達到包埋的支持作用。=常用的脫水劑如酒精等，=不能溶解石蠟與之相混合，因此必須使用一種既可以= 同酒精又能同石蠟相混合的媒

9、劑，當組織脫水后，浸蠟之前將組織投入這種媒劑中。由于兩劑能相混合，另一方面也由于這種媒劑比酒精比重大，組織中的酒精就被該媒劑取代，待酒精完全被該媒劑完全取代后，組織即成透明狀態(tài)，因此我們長稱這種媒劑為透明劑，在制片中的這一過程就稱為透明過程。實質(zhì)上透明僅是一種過程而非目的，其所以出現(xiàn)透明現(xiàn)象使因其折光系數(shù)改變的緣故。從組織的狀態(tài)上看，由于組織經(jīng)過媒劑的作用之后，其折射系數(shù)近于組織蛋白的折射系數(shù)，從而顯示出透明狀態(tài)。 組織一旦呈現(xiàn)透明狀態(tài)， 也說明脫水劑已被媒劑所取代。透明后就可以將組織浸入溶解的石蠟進行浸蠟。透明劑透明劑很多，一般常用的有二甲苯，苯，甲苯，氯仿，香柏油等。1 .二甲苯：是最為常

10、用的一種透明劑，它能與酒精，丙酮相混合，又是石蠟的溶劑。在透 明過程中，組織繼續(xù)發(fā)生硬化，由于二甲苯對組織的收縮性強，作用迅速，因此，組織在二 甲苯中時間不宜過長， 否則組織容易變脆變硬， 一般是達到組織的透明為度，小塊組織在半至一小時內(nèi)透明。為了不使組織過度硬化，苯則。是更好的一種透明劑，它較甲苯和二甲苯的作用稍緩，對組織收縮較少，不易變脆。但苯較二甲苯毒性大，揮發(fā)快，故應注意安全使 用。2 .氯仿：也是一種很好的媒劑，它的作用緩和。組織在此液內(nèi)過夜也不至于過硬變脆，這 一點較苯，二甲苯和甲苯優(yōu)良。但氯仿比重較大，折光率較小，不能改變組織的折光率，組 織在氯仿中不易呈現(xiàn)二甲苯那樣的透明現(xiàn)象，

11、所以組織要比實際需要浸漬更長一些時間保證完全滲透和置換出酒精。3 .香柏油：是研究處理細柔組織的最佳透明劑，因它的硬化作用極小，組織在此液體內(nèi)較長時間甚至幾個月也可無妨。過硬的組織脫水后，（如皮膚和致密纖維組織）用香柏油透明， 經(jīng)此處理后的組織容易切片。不過香柏油的濃度大，滲透力弱，同石蠟混合不及其他透明劑 效果好，故常規(guī)石蠟切片一般不用。透明時間的長短因組織的大小而異。例如腦組織和有血塊的組織，就應該縮短在二甲苯內(nèi)留置時間，而一些肌肉組織和胃腸組織則應該稍延長在二甲苯內(nèi)留置時間，最好先投入酒精和透明劑等量混合液半小時，再入透明劑，并更換一次透明劑，待組織完全透明后進行浸蠟， 一般需要半小時至

12、 2- 3小時。脂肪組織由于其結(jié)構(gòu)不同透明最快，但是這并不能說明組織中脫水劑已完全被透明劑取代， 因脂肪組織本身折光率與透明劑（二甲苯）相近，所以應在透明劑中多浸一段時間使脂肪組織盡可能為透明劑所溶解，才有利于石蠟的侵入。透明過久是否會導致組織過度硬化變脆，這取決于脫水的徹底與否， 如果組織脫水完全徹底，則不會導致過度硬化和變脆，個別含膠樣物質(zhì)過多的組織例外。第三節(jié)浸蠟組織經(jīng)媒劑的透明作用之后， 移入熔化的石蠟內(nèi)浸漬，石蠟逐漸浸入組織間隙，取代透明劑， 這一程序就叫浸蠟。根據(jù)所用石蠟的熔點，浸蠟需要能夠保持于54-60.C溫箱內(nèi)進行。石蠟的質(zhì)量和熔度與切片質(zhì)量密切相關(guān)，因此對石蠟的選擇應以注意

13、。用作浸蠟的石蠟不應含有塵粒，雜質(zhì)及其他異物，不含水分，質(zhì)地均勻成半透明狀，觸之感覺滑而不膩，結(jié)晶及顆粒少。石蠟中如有水分會結(jié)晶而變?yōu)榘装呖捎眉訜釘嚢璧姆椒ǔ?。所有的蠟在使用前按常?guī)必須用標準濾紙在漏斗內(nèi)過濾到搪瓷杯里儲存于浸蠟箱中。最好將石蠟于小鍋中加熱煮至近沸，冷卻再煮反復數(shù)次后空氣可以排除，揮發(fā)性油脂類在煮的過程中揮發(fā)。處置后的石蠟置于 恒溫箱中保持液體狀態(tài)備用。所用的石蠟有一定的熔點和硬度,熔點高，硬度大。一般要求在52-56 C之間，這既可以支持硬組織也可使切片成條。使用時應根據(jù)組織類型以及制片時的溫度和氣候而異。夏季采用高熔點的石蠟，冬季則采用低熔點的石蠟。石蠟的熔點越低，其質(zhì)地

14、相應的較為疏松。硬蠟（熔點60 C）用于硬纖維組織。軟蠟用于胎兒和乳腺組織，這些盡為研究工作的需要。 為了增加石蠟的韌性， 可在石蠟中加入一些混 合劑，常用蜂蠟，硬脂酸，松香等。1 .蜂蠟：又叫黃蠟，是蜜蜂用來造巢的淡黃色蠟，熔點在54 c左右，質(zhì)地柔軟，滑潤有韌性。為了使低熔點的石蠟硬一些，可加入1020%的蜂蠟。它能增加蠟的熔點而不必使組織浸在高溫內(nèi)，便于切片。也要根據(jù)組織的種類而異，一般常規(guī)用量不超過5 %為度。2 .硬脂酸：為有光澤的白色片狀結(jié)晶體， 不溶于水，而溶于乙醇，醍和氯仿。熔點64 71%, 在浸蠟中加入少量的硬脂酸可增加石蠟的滲透性。有人用硬脂酸和石蠟混合液置于溫箱中代替二

15、甲苯透明。3 .松香：為棕黃色半透明的固體。質(zhì)硬而脆，遇熱熔解，呈膠體狀，同石蠟混合時，可增加 石蠟的硬度，由于松香質(zhì)脆，混合后可增加硬度但韌性不足。組織浸蠟時間也應視組織種類大小和結(jié)構(gòu)不同而異。在整個浸蠟過程中，標本大小對完成浸蠟所需的時間有很大影響。 較厚的組織需要較長時間才能使蠟浸入中心，而且厚的組織常帶入的透明劑比較多，故需要多次浸蠟才能將透明劑除去。即使少量透明劑也會沾污石蠟而產(chǎn)生結(jié)晶，致使切片時切片易碎裂。也要考慮組織的種類，骨，皮膚和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等致密組織要比軟組織如肝腎等需要加倍時間。含血多的組織，肌肉和纖維束在蠟內(nèi)易過硬而發(fā)脆， 故浸蠟時間應縮短。 疏松組織，脂肪，消化道組織

16、等浸蠟時間可以適當延長一些。為了盡可能排除透明劑，浸蠟可以分兩級或三級進行。以熔點較低的軟石蠟作為第一步，然后再換為熔點較高的石蠟作為第二步，第三步。浸蠟時間1-4小時，或更長，并使之過夜則較易切割，如此浸漬的組織切片在干燥箱內(nèi)干燥也不易卷曲和龜裂。第四節(jié)包埋包埋，就是將已經(jīng)經(jīng)過固定，脫水，透明，浸蠟的組織塊從最后的蠟浴取出置入充滿熔融石蠟的包埋框內(nèi)，包埋成塊，使組織和包埋劑相熔一體并迅速冷卻，這個程序稱為包埋。包埋劑凝固后，進一步加強了組織的硬度和韌度而便于進行切片。一.石蠟包埋法石蠟包埋法是制作光學顯微鏡切片的常規(guī)方法，它有許多優(yōu)點，操作簡易便于掌握， 可進行連續(xù)切片，包埋后的組織可以長期

17、保存。 二|包埋的方法有自動包埋機包埋和手工包埋兩種。手工包埋的步驟如下：1 .組織浸入石蠟后，包埋前將組織移入包埋用石蠟杯內(nèi)。從恒溫箱取出置于三角架上，其下點燃酒精燈，以保持石蠟的溶解狀態(tài)?！? .準備好包埋框，將包埋用的鐐子在酒精燈上加溫（防止鐐子粘蠟）后，左手持蠟杯，右手把加溫的鐐子放在蠟口（直立狀）倒蠟時讓石蠟沿鐐子注入包埋框內(nèi)。3 .迅速鐐?cè)〗M織塊放入包埋框石蠟內(nèi)，切面朝下放正置入框底并輕輕壓平，以保證不再有氣 泡。4 .待石蠟表面凝固前將標簽貼于其上，需注意勿使標簽與標本混淆，當蠟塊冷至蠟面有一層透明蠟膜時，浸入冷水中迅速使其冷卻，否則蠟內(nèi)常形成結(jié)晶。5 .蠟塊完全硬固后除去銅框，

18、以保證蠟徹底凝固，立即修切，準備制成切片或儲藏備用。二.石蠟包埋的注意事項1 .作為包埋組織使用的石蠟不僅由于氣候的不同需要加以選擇，而且與組織的硬度也有密切關(guān)系，過硬的組織最好用硬度較高的石蠟包埋，反之，軟組織則應以硬度較低的石蠟包埋。其熔點一般要求再 60。C左右。2 .包埋用石蠟加溫不可過高，以保持其不凝固為度，溫度過高容易將組織燙壞，使得組織變 硬，變脆，并發(fā)生卷曲，收縮變形而不利于切片，甚至影響診斷。另外注意埋蠟的溫度和組 織本身的溫度，兩者是否合適，溫度不一致?？稍斐山M織與周圍石蠟脫裂的現(xiàn)象，而達不到包埋的作用。3 .包埋用石蠟應掌握用量，以組織全部包埋完畢，石蠟也恰好用完為宜。4

19、 .包埋應注意組織病變面放在下面，并盡可能使組織放平， 在不損傷組織的情況下可用鐐子輕壓。5 .囊壁和消化道等組織包埋時更應注意組織方位，應將組織塊直立拉平，不要卷曲。6 .相同組織如包埋于一個蠟塊時，除包平外，還要注意方向的一致，以利切片。7 .多塊組織和碎組織包埋于一個蠟塊內(nèi)時，組織的排列一定要密擠靠攏，以求成直線或方塊行，這樣有利于切片。8 .石蠟包埋后，不宜冷凝過慢，特別是室溫較高時，石蠟凝固后應立即投入冷水中加速冷卻 可增加石蠟密度，韌性和硬度。但冷凝過速也會因為內(nèi)外溫差過大造成蠟塊裂損。三.石蠟包埋程序多少而減少或延長，如要在酒精中過夜最好是在低濃度酒精中浸泡，透明過程一定適當掌握,不要時間過長。更換脫水酒精，如從節(jié)約的角度考慮