GB∕T 38488-2021 微生物快速測(cè)定方法

?犐犆犛０７．０８０犆犆犛犃２１

中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)

犌犅／犜３８４８—２０２１

微生物快速測(cè)定方法

犚犪狆犻犱犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犻犮狉狅狉犵犪狀犻狊犿狊

２０２１１２３１發(fā)布 ２０２０７０１實(shí)施

發(fā)布

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

犌犅／犜３８４８—２０２１

前 言

本文件按照ＧＢ／Ｔ１．１—２０２０《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第１部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口。

本文件起草單位：北京出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心、中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院、天津海關(guān)工業(yè)產(chǎn)品安全技術(shù)中心、江漢大學(xué)、北京工商大學(xué)、武漢旭東食品有限公司、北京薩姆伯科技有限公司、華測(cè)檢測(cè)認(rèn)證集團(tuán)北京有限公司、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)。

本文件主要起草人：張捷、馬愛(ài)進(jìn)、柳明、趙琢、彭海、暢曉暉、張園、賈英民、高欣、楊向瑩、張惠媛、何旭東、郝帥、李小林、董立雅、張昊、王華、陳廣全、彭彥昆。

Ⅰ

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微生物快速測(cè)定方法

１范圍

本文件規(guī)定了用分子馬達(dá)法、近紅外免疫層析法和目標(biāo)區(qū)域測(cè)序法快速測(cè)定微生物的方法。

本文件中第一法——分子馬達(dá)法適用于食品和生活飲用水中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌（犔．犿狅狀狅犮狔狋狅犵犲狀犲狊）、副溶血性弧菌（犞犻犫狉犻狅狆犪狉犪犺犲犿狅犾狔狋犻犮狌狊）、霍亂弧菌（犞犻犫狉犻狅犮犺狅犾犲狉犪犲）、沙門氏菌（犛犪犾犿狅狀犲犾犾犪）、阪崎克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）（犆狉狅狀狅犫犪犮狋犲狉狊犪犽犪狕犪犽犻）、志賀氏菌（犛犺犻犵犲犾犪）、甲型肝炎病毒

（犎犲狆犪狋犻狋犻狊犃狏犻狉狌狊，犎犃犞）的快速測(cè)定；第二法——近紅外免疫層析法適用于食品和生活飲用水中單

核細(xì)胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌、霍亂弧菌、沙門氏菌、輪狀病毒（犚狅狋犪狏犻狉狌狊）、諾如病毒（犖狅狉狅狏犻狉狌狊）、甲型肝炎病毒的快速測(cè)定；第三法——目標(biāo)區(qū)域測(cè)序法適用于食品和生活飲用水中沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌（犛狋犪狆犺狔犾狅犮狅犮狌狊犪狌狉犲狌狊）、副溶血性弧菌、小腸結(jié)腸炎耶耳森氏菌（犢犲狉狊犻狀犻犪犲狀狋犲狉狅犮狅犾犻狋犻犮犪）、空腸彎曲菌（犆犪犿狆狔犾狅犫犪犮狋犲狉犼?duì)鍫隊(duì)鯛顮椋魏思?xì)胞增生李斯特氏菌、腸出血性大腸桿菌Ｏ１５７：Ｈ７（犈狀狋犲狉狅犺犲犿狅狉犺犪犵犻犮犈．犮狅犾犻Ｏ１５７）、霍亂弧菌、阪崎克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）、創(chuàng)傷弧菌

（犞犻犫狉犻狅狏狌犾狀犻犳犻犮狌狊）和溶藻弧菌（犞犻犫狉犻狅犪犾犵犻狀狅犾狔狋犻犮狌狊）的快速測(cè)定。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

ＧＢ／Ｔ６８２分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

３術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

４分子馬達(dá)法

４．１原理

ＡＴＰ合成酶屬于一種旋轉(zhuǎn)型分子馬達(dá)，由跨膜質(zhì)子（Ｈ＋）梯差驅(qū)動(dòng)，其上的ε亞基為轉(zhuǎn)子，轉(zhuǎn)子負(fù)載越大，分子馬達(dá)轉(zhuǎn)速越低、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的質(zhì)子（Ｈ＋）數(shù)量越少。在ＡＴＰ合成酶的ε亞基上連接ε亞基抗體鏈霉親和素生物素核酸探針（見(jiàn)附錄Ａ表Ａ．２），當(dāng)探測(cè)到目標(biāo)病原微生物特異性基因序列并與其結(jié)合時(shí)，分子馬達(dá)的轉(zhuǎn)速變化可以間接地通過(guò)載色體（ｃｈｒｏｍａｔｏｐｈｏｒｅ）膜外標(biāo)記的對(duì)ｐＨ敏感的熒光探針１，２雙十六烷基３甘油磷酸乙醇胺（ＤＨＰＥ）來(lái)檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)病原微生物的定性測(cè)定。

４．２試劑和材料

除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?。４．２．１水：ＧＢ／Ｔ６８２中一?jí)水。４．２．２ＤＮＡ提取試劑盒。

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４．２．３ＲＮＡ提取試劑盒。

４．２．４分子馬達(dá)檢測(cè)試劑盒：見(jiàn)表Ａ．１。

４．２．５熒光素酶溶液：將熒光素酶／熒光素重組緩沖液加入裝有熒光素酶／熒光素的棕色玻璃瓶中，蓋上瓶塞反復(fù)顛倒混勻，不可振蕩。

４．２．６異硫氰酸胍溶液：６ｍｏｌ／Ｌ。

４．２．７陽(yáng)性對(duì)照：以標(biāo)準(zhǔn)菌株或病毒提取ＤＮＡ，作為陽(yáng)性對(duì)照。

４．２．８陰性對(duì)照：以不含目標(biāo)微生物的樣品，提?。模危?，作為陰性對(duì)照。

４．３儀器設(shè)備

４．３．１恒溫水浴鍋：０℃～１０℃。

４．３．２渦旋振蕩器。

４．３．３離心機(jī)：１５００犵。

４．３．４移液器：?jiǎn)蔚溃玻唉蹋?，５０μＬ，１０μＬ，１００μＬ；多道５０μＬ～２５０μＬ?/p>

４．３．５電子天平，感量０．０１ｇ。

４．３．６熒光光譜儀：配備９６孔板及相應(yīng)裝置。

４．３．７離心管：１．５ｍＬ。

４．４病原菌

４．４．１操作步驟

４．４．１．１樣品制備、增菌培養(yǎng)和分離

見(jiàn)附錄Ｂ。

４．４．１．２犇犖犃提取

挑取可疑菌落，用ＤＮＡ提取試劑盒進(jìn)行提取，所得菌體ＤＮＡ提取液作為樣品待測(cè)液。

制備好的ＤＮＡ樣品應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)。若暫時(shí)不能進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)置于冰箱中－２０℃保存，使用時(shí)置于室溫自然解凍，渦旋振蕩混勻。

４．４．１．３犇犖犃變性

?。矗矗保仓械臉悠反郎y(cè)液１０μＬ分別加入６個(gè)１．５ｍＬ離心管，置于恒溫水浴鍋中，沸水浴中加熱

３ｍｉｎ，立刻轉(zhuǎn)移到冰浴中，靜置冷卻。

４．４．１．４配制反應(yīng)體系

４．４．１．４．１分別取病原菌分子馬達(dá)探針溶液（見(jiàn)表Ａ．１）２μＬ，用合成緩沖液（見(jiàn)表Ａ．１）稀釋到一定的倍數(shù)。取稀釋后的分子馬達(dá)探針溶液１０μＬ分別加入４．４．１．３的各離心管中。

４．４．１．４．２向４．４．１．４．１的各離心管中加入３０μＬ啟動(dòng)緩沖液（二磷酸腺苷ＡＤＰ和合成緩沖液按體積比

１∶３混合配制），渦旋振蕩混勻，立即離心去除管蓋內(nèi)壁上的水珠，放入３７℃恒溫?fù)u床中溫育３０ｍｉｎ。

取出離心管后分別加入４５０μＬ１×ＰＢＳ緩沖液（見(jiàn)表Ａ．１），渦旋振蕩混勻，形成最終反應(yīng)體系。

４．４．１．５加樣與測(cè)定

用無(wú)菌水代替樣品待測(cè)液，其他步驟不變制備空白對(duì)照。用無(wú)菌水代替樣品待測(cè)液，不加入分子馬達(dá)探針，其他步驟不變制備本底對(duì)照。將４．４．１．４．２處理后的最終反應(yīng)體系、空白對(duì)照及本底對(duì)照分別加入潔凈的９６孔板中，每個(gè)反應(yīng)體系加３個(gè)孔，空白對(duì)照和本底對(duì)照各加３個(gè)孔，每孔５０μＬ。每孔分２

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別加入３０μＬ熒光素酶溶液（１μｍｏｌ／Ｌ），用移液器混勻各孔溶液。熒光光譜儀設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)為４９６ｎｍ，發(fā)射波長(zhǎng)為５１９ｎｍ，測(cè)定各孔熒光度值（ＯＤ值），用最終反應(yīng)體系熒光度值減去本底熒光度值和空白對(duì)照熒光度值即為樣品的實(shí)際熒光度值。

４．４．２結(jié)果及判定

４．４．２．１結(jié)果計(jì)算

熒光差值按式（１）計(jì)算：

犉犅－犅０－犅Ｈ２Ｏ×１０％ （１）

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Δ＝

式中：

Δ犉——熒光差值；

犅 ——樣品熒光度值；

犅０ ——空白對(duì)照熒光度值；

犅Ｈ２Ｏ——本底對(duì)照熒光度值。

４．４．２．２結(jié)果分析

犅－犅０

將樣品熒光度值絕對(duì)值與Ｈ２Ｏ的空白對(duì)照熒光度值絕對(duì)值進(jìn)行單因素方差分析，若差異顯著

（狆＜０．０５）則表示檢出該基因。

４．４．２．３結(jié)果判定

兩次樣品熒光差值平均值大于１０％，則結(jié)果判定為陽(yáng)性；兩次樣品熒光差值平均值小于或等于１０％，則結(jié)果判定為陰性。本方法判定為陽(yáng)性結(jié)果的樣品，宜參照附錄Ｂ中的方法或相關(guān)國(guó)際權(quán)威微生物經(jīng)典檢驗(yàn)方法進(jìn)行陽(yáng)性結(jié)果確證。

４．５病毒４．５．１操作步驟４．５．１．１提取

見(jiàn)附錄Ｂ。

４．５．１．２犚犖犃提取

向４．５．１．１的沉淀中加入６ｍｏｌ／Ｌ的異硫氰酸胍溶液１ｍＬ，渦旋振蕩使沉淀充分溶解，使用試劑盒進(jìn)行ＲＮＡ提取，所得病毒ＲＮＡ提取液作為樣品待測(cè)液。制備好的ＲＮＡ應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)。若暫時(shí)不能進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)置于－８０℃保存?zhèn)溆谩?/p>

４．５．１．３犚犖犃變性

移至

?。矗担保仓械臉悠反郎y(cè)液１０μＬ加入１．５ｍＬ離心管，置于恒溫水浴鍋中９５℃水?。担恚椋?，立即轉(zhuǎn)

５０℃水浴靜置１ｍｉｎ。

４．５．１．４配制反應(yīng)體系

取病毒分子馬達(dá)探針溶液（見(jiàn)表Ａ．１）２μＬ，其他操作步驟同４．４．１．４。

４．５．１．５加樣與測(cè)定

用無(wú)菌水代替樣品待測(cè)液，其他步驟不變制備空白對(duì)照。用無(wú)菌水代替樣品待測(cè)液，不加入分子馬

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達(dá)探針，其他步驟不變制備本底對(duì)照。將４．５．１．４處理后的最終反應(yīng)體系、空白對(duì)照及本底對(duì)照按照

４．４．１．５步驟進(jìn)行加樣與測(cè)定。

４．５．２結(jié)果及判定

４．５．２．１結(jié)果計(jì)算

檢測(cè)結(jié)果按式（１）計(jì)算。

４．５．２．２結(jié)果判定

兩次樣品熒光差值平均值大于１０％，則結(jié)果判定為陽(yáng)性；兩次樣品熒光差值平均值小于或等于１０％，則結(jié)果判定為陰性。本方法判定為陽(yáng)性結(jié)果的樣品，宜參照附錄Ｂ中的方法或相關(guān)國(guó)際權(quán)威微生物經(jīng)典檢驗(yàn)方法進(jìn)行陽(yáng)性結(jié)果確證。

５近紅外免疫層析法

５．１原理

利用近紅外熒光染料標(biāo)記抗體，雙抗體夾心免疫層析原理制備試紙條。在抗體墊上固定有近紅外熒光標(biāo)記的抗致病菌或病毒單克隆抗體和作為質(zhì)控物的近紅外熒光標(biāo)記的雞ＩｇＹ多克隆抗體。當(dāng)含有致病菌或病毒的樣品滴加到試紙條樣品墊上后，靶標(biāo)致病菌或靶標(biāo)病毒與抗體墊上的標(biāo)記抗體結(jié)合，形成熒光標(biāo)記物標(biāo)記抗體靶標(biāo)分子復(fù)合物。復(fù)合物隨溶液向試紙條前端遷移，當(dāng)復(fù)合物遷移至檢測(cè)線時(shí)，被固定于檢測(cè)線上的抗致病菌或病毒抗原的另一株單克隆抗體所捕獲。熒光標(biāo)記的雞ＩｇＹ多克隆抗體隨溶液繼續(xù)遷移，到達(dá)質(zhì)控線時(shí)被固定于質(zhì)控線上的山羊抗ＩｇＹ多克隆抗體所捕獲。利用便攜式低噪聲激發(fā)式熒光掃描儀分別掃描質(zhì)控線和檢測(cè)線，以檢測(cè)線與質(zhì)控線熒光強(qiáng)度比值與閾值進(jìn)行比較，大于或等于閾值判斷為陽(yáng)性，小于閾值判斷為陰性。

５．２試劑和材料

５．２．１磷酸緩沖鹽溶液（ＰＢＳ緩沖液）：ｐＨ７．４，含５％ＢＳＡ、０．１％Ｔｗｅｎ２０。

５．２．２近紅外免疫層析法檢測(cè)試紙條，參數(shù)見(jiàn)附錄Ｃ。

５．３儀器設(shè)備

５．３．１電子天平，感量０．０１ｇ。

５．３．２便攜式近紅外熒光掃描儀。

５．４測(cè)定步驟

５．４．１樣品制備、增菌培養(yǎng)和分離

見(jiàn)附錄Ｂ。

５．４．２測(cè)定

吸取５０μＬ樣品待測(cè)液滴加到試紙條加樣區(qū)，待吸收干后再滴加５０μＬＰＢＳ緩沖液，室溫放置１５ｍｉｎ后，用便攜式近紅外熒光掃描儀分別測(cè)定所述檢測(cè)線和質(zhì)控線的熒光強(qiáng)度，激發(fā)波長(zhǎng)７５ｎｍ±５ｎｍ，發(fā)射波長(zhǎng)為７９５ｎｍ±５ｎｍ，分析結(jié)果。

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５．５結(jié)果及判定

若試紙條質(zhì)控線區(qū)域出現(xiàn)熒光發(fā)射峰，則表明該試紙條有效，反之則無(wú)效；若檢測(cè)線熒光掃描峰面積與質(zhì)控線熒光掃描峰面積比超過(guò)閾值（陰性對(duì)照值＋３ＳＤ）則為陽(yáng)性結(jié)果，反之則為陰性。本方法判定為陽(yáng)性結(jié)果的樣品，宜參照附錄Ｂ中的方法或相關(guān)國(guó)際權(quán)威微生物經(jīng)典檢驗(yàn)方法進(jìn)行陽(yáng)性結(jié)果確證。

６目標(biāo)區(qū)域測(cè)序法

６．１原理

樣品制備、增菌培養(yǎng)和分離后，提取樣品基因組ＤＮＡ，經(jīng)過(guò)連接接頭序列、ＰＣＲ擴(kuò)增連接產(chǎn)物、探針捕獲擴(kuò)增產(chǎn)物、獲得測(cè)序文庫(kù)、高通量測(cè)序、分析測(cè)序數(shù)據(jù)等過(guò)程，得出檢測(cè)結(jié)論。

６．２試劑和材料

除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?/p>

６．２．１文庫(kù)構(gòu)建試劑盒。６．２．２高通量測(cè)序試劑盒。６．２．３探針：符合附錄Ｄ。６．２．４人工ＤＮＡ：符合附錄Ｅ。

６．３儀器設(shè)備

６．３．１高通量測(cè)序儀。

６．３．２分光光度計(jì)。

６．４檢測(cè)步驟

６．４．１樣品制備、增菌培養(yǎng)和分離

見(jiàn)附錄Ｂ。

６．４．２提取基因組犇犖犃

取培養(yǎng)的相應(yīng)致病菌增菌液（需二次培養(yǎng)的則取二次增菌液）提取并純化基因組ＤＮＡ。提取與純化的ＤＮＡ溶液在２６０ｎｍ與２３０ｎｍ處的吸光度值的比值大于２．０；在２６０ｎｍ與２８０ｎｍ處的吸光度值的比值介于１．７與１．９之間；ＤＮＡ電泳主帶明顯，無(wú)明顯降解和ＲＮＡ殘留。

６．４．３文庫(kù)構(gòu)建

６．４．３．１利用文庫(kù)構(gòu)建試劑盒及其操作說(shuō)明進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建。

６．４．３．２利用酶切消化或機(jī)械破碎的方法，將待測(cè)樣品和質(zhì)控樣品基因組ＤＮＡ片段化至

１０ｂｐ～１００ｂｐ。

６．４．３．３對(duì)６．４．３．２中獲得的產(chǎn)物進(jìn)行末端修復(fù)并連接接頭序列。接頭序列應(yīng)包括三個(gè)部分：約２０個(gè)

堿基的通用序列、８?jìng)€(gè)堿基組成的隨機(jī)條形碼序列和１２個(gè)堿基的樣品條形碼序列。其中，不同的待測(cè)樣品或質(zhì)控樣品使用不同的樣品條形碼序列，且在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室中相同的樣品條形碼序列在３０ｄ內(nèi)只使用一次。按試劑盒純化連接產(chǎn)物。

６．４．３．４利用６．４．３．３中接頭上的通用序列設(shè)計(jì)引物對(duì)６．４．３．３中獲得的產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增循環(huán)數(shù)

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≤１５個(gè)。其中，所設(shè)計(jì)的引物序列包含高通量測(cè)序儀的測(cè)序引物序列。純化擴(kuò)增產(chǎn)物。將具有不同樣品條形碼的待測(cè)樣品或質(zhì)控樣品等質(zhì)量混合后成為混合樣品，每個(gè)混合樣品中待測(cè)樣品或質(zhì)控樣品的數(shù)目不宜超過(guò)４個(gè)。

６．４．３．５將附錄Ｄ中的探針等摩爾質(zhì)量混合，形成混合探針，利用混合探針對(duì)６．４．３．４中獲得的產(chǎn)物進(jìn)行雜交捕獲。按試劑盒純化捕獲產(chǎn)物。

６．４．３．６利用高通量測(cè)序儀的測(cè)序引物序列對(duì)６．４．３．５中的產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增循環(huán)數(shù)≤２０個(gè)，獲得測(cè)序文庫(kù)。按試劑盒純化捕獲產(chǎn)物。

６．４．４高通量測(cè)序

利用高通量測(cè)序試劑盒及其操作說(shuō)明對(duì)測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行高通量測(cè)序，每個(gè)待測(cè)樣品的測(cè)序堿基數(shù)據(jù)量設(shè)置為大于或等于０．５×１０９。

６．５質(zhì)量控制

適宜的條件下，保留一份增菌液以備結(jié)果陽(yáng)性時(shí)，采用其他方法進(jìn)行驗(yàn)證。

利用軟件將質(zhì)控樣品與待測(cè)樣品的測(cè)序數(shù)據(jù)比對(duì)到參考基因組的標(biāo)記位點(diǎn)上，獲得質(zhì)控樣品與待測(cè)樣品的成功比對(duì)的測(cè)序堿基數(shù)據(jù)量犆１和犆２。

當(dāng)犆１≥３０×１０３時(shí)，判定待測(cè)樣品被污染，從６．４．２或之前的步驟開(kāi)始重新實(shí)驗(yàn)。

當(dāng)犆２＜０．３×１０９時(shí)，判定待測(cè)樣品的測(cè)序數(shù)據(jù)量不足，從６．４．３或之前的步驟開(kāi)始重新實(shí)驗(yàn)。當(dāng)犆１＜３０×１０３且犆２≥０．３×１０９時(shí)，判定測(cè)序數(shù)據(jù)合格，可以進(jìn)行結(jié)果分析。

６．６結(jié)果及判定

利用微生物鑒定軟件統(tǒng)計(jì)微生物的檢出標(biāo)記（見(jiàn)附錄Ａ）的數(shù)目犖，并輸出判定結(jié)論。

若犖＝０，判定結(jié)論為“待測(cè)樣品中不存在××微生物”；

若１≤犖＜５，判定結(jié)論為“待測(cè)樣品中可能存在××微生物”；若犖≥５，判定結(jié)論為“待測(cè)樣品中存在××微生物”。

對(duì)于結(jié)論為“待測(cè)樣品中可能存在××微生物”的待測(cè)樣品，宜參照附錄Ｂ中的方法或相關(guān)的國(guó)際

權(quán)威微生物經(jīng)典檢驗(yàn)方法做進(jìn)一步的生化鑒定和報(bào)告。

６

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犌犅／犜３８４８—２０２１

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犃．１分子馬達(dá)檢測(cè)試劑盒

附 錄犃

（資料性）

分子馬達(dá)檢測(cè)試劑盒參數(shù)

分子馬達(dá)檢測(cè)試劑盒組成參考表Ａ．１。

表犃．１分子馬達(dá)檢測(cè)試劑盒組成

編號(hào)

組分名稱

數(shù)量

儲(chǔ)存條件

１

分子馬達(dá)探針溶液：致病菌Ｃｈｒｏ犻狀狏犃、Ｃｈｒｏ狋狅狓犚、Ｃｈｒｏ狆狉犳犃、Ｃｈｒｏ

狅犿狆犠、Ｃｈｒｏ犐狆犪犎、Ｃｈｒｏ犐犜犛；病毒Ｃｈｒｏ犎犃犞

各２０μＬ

－２０℃

２

合成緩沖液：０．１ｍｍｏｌ／Ｌ三（羥甲基）甲基甘氨酸（Ｔｒｉｃｉｎｅ），１０％甘油，

５ｍｍｏｌ／ＬＮａＨ２ＰＯ４，５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２，ｐＨ９．０

１０ｍＬ

室溫

３

二磷酸腺苷（ＡＤＰ）：１．６ｍｏｌ／Ｌ

１ｍＬ

－２０℃

４

１×ＰＢＳ緩沖液：１３７ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，２．７ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ，１０ｍｍｏｌ／Ｌ

Ｎａ２ＨＰＯ４，２ｍｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４，ｐＨ７．０

２５ｍＬ

室溫

５

熒光素酶／熒光素（１μｍｏｌ／Ｌ）

１０Ｕ

－２０℃

６

熒光素酶／熒光素重組緩沖液

１２ｍＬ

－２０℃

７

無(wú)菌水

５ｍＬ

室溫

犃．２目標(biāo)微生物特異性基因及核酸探針序列

各目標(biāo)微生物（含病原菌和病毒）的特異性基因及核酸探針序列見(jiàn)表Ａ．２。

表犃．２目標(biāo)微生物特異性基因及核酸探針序列

目標(biāo)微生物

特異性基因

核酸探針序列（５′３′）

沙門氏菌

犻狀狏犃

ＧＴＧＡＡＡＴＴＡＴＣＧＣＣＡＣＧＴＴＣＧＧＧＣＡＡ

副溶血性弧菌

狋狅狓犚

ＧＴＣＴＴＣＴＧＡＣＧＣＡＡＴＣＧＴＴＧ

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌

狆狉犳犃

ＧＡＴＡＣＡＧＡＡＡＣＡＴＣＧＧＴＴＧＧＣ

霍亂弧菌

狅犿狆犠

ＣＡＣＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＡＣＴＴＴＡＴＴＧＴＧ

宋內(nèi)氏志賀氏菌

犐狆犪犎

ＡＴＴＣＣＧＴＧＡＡＣＡＧＧＴＣＧＣＴＧＣＡＴＧＧＣＴＣ

阪崎克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）

犐犜犛

ＡＣＴＣＴＧＡＣＡＣＡＣＣＧＣＧＣＡＴＴＣＣＴＧ

甲肝病毒

犎犃犞

ＡＧＣＧＧＣＧＧＡＴＡＴＴＧＧＴＧＡＧＴＴＧＴＴＡＡＧＡＣ

注：生物素標(biāo)記探針５′端。

７

犌犅／犜３８４８—２０２１

附 錄犅

（資料性）

微生物樣品制備及處理

犅．１病原菌檢測(cè)樣品制備、增菌培養(yǎng)和分離

病原菌檢測(cè)樣品制備、增菌培養(yǎng)和分離方法見(jiàn)表Ｂ．１。

表犅．１病原菌檢測(cè)樣品制備、增菌培養(yǎng)和分離方法

序號(hào)

病原菌名稱

樣品制備、增菌培養(yǎng)和分離方法

１

沙門氏菌

ＧＢ４７８９．４

２

志賀氏菌

ＧＢ４７８９．５

３

副溶血性弧菌

ＧＢ４７８９．７

４

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌

ＧＢ４７８９．８

５

空腸彎曲菌

ＧＢ４７８９．９

６

金黃色葡萄球菌

ＧＢ４７８９．１０

７

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌

ＧＢ４７８９．３０

８

阪崎克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）

ＧＢ４７８９．４０

９

腸出血性大腸桿菌Ｏ１５７：Ｈ７

ＳＮ／Ｔ０９７３

１０

霍亂弧菌

ＳＮ／Ｔ１０２

１

創(chuàng)傷弧菌和溶藻弧菌

ＭＮＫＬＮｏ．１５６

犅．２病毒檢測(cè)樣品制備

病毒檢測(cè)樣品的制備方法見(jiàn)表Ｂ．２。

表犅．２病毒檢測(cè)樣品制備方法

序號(hào)

病毒名稱

樣品制備方法

１

輪狀病毒

ＳＮ／Ｔ２５２０

２

諾如病毒

ＧＢ４７８９．４２

３

甲型肝炎病毒

ＧＢ／Ｔ２２８７

犅．３其他微生物檢測(cè)樣品前處理參考方法

其他微生物檢測(cè)樣品的前處理方法見(jiàn)表Ｂ．３。

８

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犌犅／犜３８４８—２０２１

表犅．３其他微生物檢測(cè)樣品處理參考方法

序號(hào)

樣品類別及目標(biāo)微生物

參考方法

１

出口食品微生物

ＳＮ／Ｔ０３０

２

飼料中沙門氏菌

ＧＢ／Ｔ１３０９１

３

生活飲用水微生物

ＧＢ／Ｔ５７５０．１２

９

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附 錄犆

（資料性）

近紅外免疫層析法檢測(cè)試紙條

犆．１物理性狀

外觀應(yīng)整潔完整、無(wú)毛刺、無(wú)破損、無(wú)污染；膜條寬度應(yīng)不小于３．５ｍｍ；液體移行速度應(yīng)不低于

１０ｍｍ／ｍｉｎ。

犆．２特異性

近紅外免疫層析試紙條與其他細(xì)菌和病毒均無(wú)交叉反應(yīng)，結(jié)果均應(yīng)為陰性。

犆．３重復(fù)性

取同一批號(hào)的試紙１０條，檢測(cè)同一樣本時(shí)，反應(yīng)結(jié)果應(yīng)一致，顯色應(yīng)均一，ＣＶ值應(yīng)小于１５％。

犆．４批間差

同一個(gè)樣本，使用不同批次的試劑進(jìn)行檢測(cè)，ＣＶ值小于１５％。

犆．５穩(wěn)定性

在３７℃條件下放置２０ｄ，產(chǎn)品應(yīng)符合Ｃ．２～Ｃ．４的要求。

犆．６檢測(cè)波長(zhǎng)

激發(fā)波長(zhǎng)７５ｎｍ±５ｎｍ，發(fā)射波長(zhǎng)７９５ｎｍ±５ｎｍ。

犆．７檢測(cè)限

近紅外免疫層析法檢測(cè)沙門氏菌檢測(cè)限為０．６×１０３ＣＦＵ／ｍＬ、霍亂弧菌檢測(cè)限為１×１０２ＣＦＵ／ｍＬ、副溶血性弧菌檢測(cè)限為１．２×１０２ＣＦＵ／ｍＬ、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢測(cè)限為０．７５×１０３ＣＦＵ／ｍＬ。

１０

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文庫(kù)構(gòu)建所需探針序列見(jiàn)表Ｄ．１。

附 錄犇

（規(guī)范性）

探針序列

表犇．１探針序列

編號(hào)

檢測(cè)物種

探針序列

１

阪崎克羅諾桿菌

ＣＣＡＧＧＡＡＴＧＡＣＣＴＣＡＡＡＣＡＧＴＧＧＴＧＡＡＡＣＧＣＴＣＡＡＡＣＡＧＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＣＣＧＧＴＡＡＴＧＧＧＡＴＣＧＣＧＴＧＣＴＴＡＴＣＴＧＡＣＴＴＴＡＴＧＡＴＴＧＡＴＡＡＡＧＡＡＡＴＣＧＡＡＣＡＡＧＧＡＧＡＧＣＴＴＧＴＡＧＡＧ

２

阪崎克羅諾桿菌

ＣＧＣＡＧＡＡＴＧＴＧＧＴＧＧＴＡＣＧＴＣＡＧＣＡＣＣＧＧＡＡＴＧＣＣＧＴＴＡＴＣＣＴＣＣＴＧＣＧＣＧＴＣＣＡＧＧＣＴＡＣＴＧＡＴＡＴＡＧＣＣＣＡＧＣＣＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＧＣＧＧＡＴＣＴＧＡＴＡＣＣＡＧＧＴＣＴＧＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴ

３

阪崎克羅諾桿菌

ＡＴＣＧＴＣＴＴＧＧＧＣＴＴＴＣＴＧＡＴＧＣＣＴＴＴＣＴＴＡＴＣＡＡＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＡＴＴＡＴＣＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＴＴＧＡＧＡＡＡＧＣＧＴＴＣＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＧＧＴＡＧＡＡＧＴＣＧ

４

阪崎克羅諾桿菌

ＡＡＣＴＧＡＡＣＣＴＧＡＣＣＴＣＣＣＧＣＴＣＣＧＧＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＧＴＧＡＡＧＣＡＴＣＧＣＡＴＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＣＡＡＧＡＡＡＡＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＣＴＧＧＡＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＧＡＴＧＣＣＴＴＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＧＣＣＧ

５

阪崎克羅諾桿菌

ＧＣＧＡＴＡＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＣＧＡＴＡＴＧＣＣＧＣＧＣＴＧＧＧＡＧＡＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＡＴＧＣＧＣＣＧＧＧＧＣＧＡＧＣＴＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＧＧＣＧＣＧＧＡＴＡＡＣＣＡＧＣＡＣＧＡＡＧＡＴＡＴＧＣＴＴＣＧＴＣＧＣＴＡＣＡＡＧＣ

６

阪崎克羅諾桿菌

ＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＴＧＣＧＣＣＡＧＡＴＴＴＧＣＣＣＴＴＣＧＴＡＡＡＴＧＣＣＧＡＴＡＴＧＣＣＧＴＧＧＣＴＣＡＡＣＣＧＣＣＴＧＣＴＴＴＣＣＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＡＧＣＧＡＴＴＣＣＧＧＣＡＧＣＣＡＧＴＡＧＣＧＡＡＴＡＡＡＡＣＴＧＣＧＣＧＴＴＴＴＧ

７

阪崎克羅諾桿菌

ＧＴＴＴＡＧＣＡＴＧＡＴＴＧＣＧＣＴＣＴＧＣＧＧＴＧＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＧＴＧＧＡＣＧＣＧＣＡＣＡＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＧＣＡＡＴＴＡＣＧＣＴＧＡＣＡＧＣＧＣＴＡＣＴＧＡＣＡＧＧＣＧＣＧＴＴＡＴＧＧＴＣＡＧＴＣＡＡＴＣＴＣＴＧ

８

阪崎克羅諾桿菌

ＡＣＴＧＧＡＧＧＣＴＣＣＣＴＴＣＡＧＴＴＡＧＣＧＧＧＡＧＧＧＣＡＡＡＴＴＡＡＴＡＣＴＴＡＴＣＡＧＧＧＴＡＡＧＴＡＴＣＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＡＴＧＧＡＴＴＧＣＧＡＡＡＧＧＣＧＣＧＧＧＣＣＧＣＧＧＣＡＴＡＧＧＣＴＴＣＧＣＧ

９

阪崎克羅諾桿菌

ＴＡＡＴＧＣＣＧＧＴＡＡＡＧＣＣＧＧＧＣＡＣＴＧＡＡＴＣＡＣＧＧＡＴＣＧＣＴＴＣＴＡＴＣＴＣＡＴＴＡＡＴＧＡＴＣＧＡＣＴＣＴＴＣＣＧＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＡＡＴＧＣＧＣＣＣＴＴＣＡＴＧＣＴＣＧＧＴＡＡＴＡＧＡＧＣＡＧＡＧＣＧＡＧＣＡＣＣ

１０

阪崎克羅諾桿菌

ＧＡＣＡＧＡＡＴＡＧＣＡＴＣＡＡＧＣＴＣＧＣＴＴＴＣＧＣＴＣＧＣＣＴＣＧＧＣＡＡＡＣＡＧＣＡＣＣＡＣＡＴＣＣＡＧＣＧＣＧＴＧＡＴＣＣＧＡＣＡＣＴＴＴＡＣＡＧＣＣＧＴＧＧＧＣＣＧＣＡＡＡＧＴＧＡＴＣＣＡＧＡＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＧＣＧＣＣＧＴＴ

１

犌犅／犜３８４８—２０２１

表犇．１（續(xù)）

編號(hào)

檢測(cè)物種

探針序列

１

阪崎克羅諾桿菌

ＣＡＣＴＡＡＴＣＴＴＡＧＣＣＧＡＣＣＴＣＧＣＧＡＴＧＣＴＧＧＡＧＴＡＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＣＧＣＴＡＴＣＣＧＣＡＣＧＴＧＧＡＧＣＧＴＣＡＴＧＴＧＴＣＧＧＴＡＣＡＧＧＣＴＴＣＣＧＣＣＡＣＴＡＡＴＧＡＡＧＣＣＧＣＣＡＴＴＣＧＣＴＴＴＴＡＣＣＡＧＣ

１２

阪崎克羅諾桿菌

ＣＣＡＣＧＧＣＧＡＴＣＧＴＣＧＡＣＧＣＧＧＴＧＧＡＴＧＡＴＡＣＴＧＧＣＴＡＴＣＴＣＡＣＣＧＴＧＡＣＧＧＴＧＣＡＧＧＡＴＡＴＴＣＴＣＧＡＣＧＧＣＡＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＴＧＡＴＡＴＣＧＧＣＣＴＣＧＡＡＧＡＧＡＴＣＧＡＡＧＣＴＧＴＡＣ

１３

阪崎克羅諾桿菌

ＣＣＡＣＣＴＣＧＧＴＣＧＡＡＡＣＧＧＣＡＣＡＴＴＣＧＴＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＣＡＴＧＣＣＧＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＡＣＧＣＧＧＡＡＣＡＣＧＣＧＣＴＧＡＡＧＧＴＴＣＴＧＡＧＴＧＴＡＡＡＡＧＴＡＡＧＣＧＧＣＧＡＧＧＣＣＡＴＡＡＧＧＣＧ

１４

阪崎克羅諾桿菌

ＧＣＴＣＧＣＧＴＴＧＴＣＣＧＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＴＴＣＡＡＴＡＡＧＡＡＡＣＡＴＣＡＧＡＴＧＡＡＡＡＣＣＧＧＣＣＡＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＡＣＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＴＴＴＴＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＧＴＣＧＴＧＣＴＧＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＣＡ

１５

阪崎克羅諾桿菌

ＣＡＣＣＣＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧＡＴＣＡＧＧＣＴＧＣＣＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＴＴＧＣＧＣＧＴＡＴＡＧＣＴＧＴＴＧＧＴＣＴＧＣＧＧＣＧＴＴＣＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＴＡＣＧＣＧＣＣＡＣＡＡＧＧＴＴＴＡＣＣＧＡＡＡ

１６

阪崎克羅諾桿菌

ＣＴＧＴＴＣＧＴＡＡＡＡＧＡＡＣＴＧＧＡＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＧＡＴＧＧＣＣＧＣＧＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＣＡＣＴＣＴＡＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＣＣＧＧＴＣＧＡＡＴＴＣＣＣＧＧＡＡＧＧＧＣＴＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＡ

１７

阪崎克羅諾桿菌

ＣＧＣＡＴＡＧＡＧＣＴＧＴＧＧＴＴＴＣＧＣＣＧＣＣＡＴＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＡＴＣＣＧＴＴＴＡＴＴＴＡＣＧＣＣＡＣＣＧＴＣＧＣＴＧＧＣＣＡＣＧＡＡＧＣＧＡＴＧＧＴＡＴＣＧＡＴＧＧＴＣＧＣＧＣＴＧＧＧＣＴＧＣＧＧＣＧＴＧＧＣＡＴＴＧＡＴＡＣＣＴ

１８

阪崎克羅諾桿菌

ＴＴＧＡＡＧＧＣＡＡＴＴＣＧＣＣＴＴＣＴＣＡＣＴＣＡＣＡＴＣＡＡＡＡＣＧＧＡＡＧＧＡＡＴＴＴＣＡＣＡＡＴＧＡＡＣＡＣＴＡＴＣＡＡＡＴＣＴＴＴＴＧＴＴＧＣＡＧＴＴＡＴＧＡＣＧＣＴＴＧＣＴＡＣＣＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＣＴＴＴＣＧＣＴＧＧＣＣＡＧＴ

１９

阪崎克羅諾桿菌

ＴＴＧＧＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＧＣＧＣＡＴＧＧＴＴＡＡＧＣＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＴＧＡＴＡＴＣＣＧＣＴＡＡＧＧＡＴＧＡＣＣＧＣＡＴＣＧＴＡＣＴＡＡＴＡＡＡＣＴＧＣＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＣＡＧＡＧＧＡＴＧＴＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＧＣＧＣＣＧＣＡＡＡＴ

２０

阪崎克羅諾桿菌

ＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＴＴＧＣＴＴＴＴＡＴＡＡＴＧＴＴＡＡＧＣＧＴＴＴＧＡＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＡＡＣＧＡＧＡＡＡＡＣＧＴＡＡＣＧＣＧＴＴＡＡＣＧＧＡＧＴＡＡＡＧＧＧＣＡＧＧＡＴＡＡＴＧＣＧＧＡＧＣＧＧＧＣＡＴＣＣＡＴＴ

２１

阪崎克羅諾桿菌

ＴＧＣＡＣＧＧＴＡＡＡＡＣＴＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＡＴＡＡＣＧＡＡＡＣＴＴＡＣＡＡＣＣＡＡＣＣＧＧＣＴＴＴＧＣＡＡＡＡＴＧＴＡＡＣＴＴＡＴＴＴＴＣＣＣＧＣＣＡＧＴＡＡＣＧＴＴＡＡＴＴＡＴＴＧＧＣＡＧＧＡＡＴＡＴＣＡＡＣＣＴＧＡＴＴＧＣＧＣＴＴ

２

阪崎克羅諾桿菌

ＡＣＧＣＣＧＡＣＡＴＧＧＧＧＣＡＴＴＴＴＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＣＡＡＴＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＴＧＧＴＴＣＴＣＧＧＴＧＧＴＧＴＴＧＣＣＧＴＣＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡＣＴＡＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＧＣＡＴＴＡＴＴＧＣＴＧＡＡＡＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧ

１２

庫(kù)七七標(biāo)準(zhǔn)下載

犌犅／犜３８４８—２０２１

表犇．１（續(xù)）

編號(hào)

檢測(cè)物種

探針序列

２３

阪崎克羅諾桿菌

ＣＡＴＣＡＡＣＧＣＴＡＡＣＧＴＣＧＣＣＧＡＴＡＣＡＴＴＧＣＡＧＴＣＡＴＡＣＧＧＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＡＡＡＴＴＡＴＴＣＧＣＧＴＴＣＴＴＴＴＡＡＧＴＧＴＧＧＧＴＡＴＴＡＡＡＴＴＣＴＧＧＣＡＡＴＡＡＧＡＣＧＡＣＣＡＣＧＧＧＡＣＧＡＡＴＣＧＣＣＴＴ

２４

阪崎克羅諾桿菌

ＴＴＧＣＧＡＣＣＡＴＣＧＣＣＡＣＧＧＡＣＧＣＧＧＧＣＧＧＣＡＣＧＧＣＧＧＡＴＧＣＣＧＴＣＡＴＴＧＡＴＡＡＴＣＡＡＡＣＣＧＧＡＴＴＡＴＴＡＧＴＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＧＡＣＧＣＧＣＡＧＧＣＧＴＴＡＡＡＡＧＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＣＧＧＣＴＣＴＡＴＧ

２５

阪崎克羅諾桿菌

ＧＡＡＡＣＡＣＧＴＡＧＣＣＣＡＧＧＣＧＣＴＧＡＡＴＧＡＡＡＡＧＣＣＣＧＴＣＧＴＧＧＴＧＣＣＧＣＡＣＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＣＧＧＴＣＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＧＴＧＡＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＴＣＴＣＴＴＧＣＣＣＧＧＣＴＴＡＣＴＧＧ

２６

阪崎克羅諾桿菌

ＧＣＣＡＴＴＧＧＣＧＧＡＡＡＴＡＡＣＣＧＣＴＴＴＧＣＧＣＡＴＣＣＣＧＣＧＡＡＡＡＣＧＧＧＴＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＣＧＣＡＧＧＧＴＧＴＴＧＴＣＧＡＧＡＴＡＡＴＣＧＧＣＣＴＣＧＴＧＣＡＡＴＧＧＣＧＴＴＴＣＧＧＣＡＴＴＴＴＣＣＧＣＧＡＣＧＡＣＧＣＣ

２７

阪崎克羅諾桿菌

ＡＣＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＴＧＣＴＣＧＧＣＡＡＣＣＣＧＣＣＧＧＡＴＡＴＴＣＣＧＣＡＡＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＴＣＧＣＧＴＴＧＡＧＧＣＧＡＣＧＣＴＣＧＣＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＣＴＧＣＴＣＡＣＣＡＡＡＡＣＧＧＴＴＴＡＴＣＴＧＣ

２８

阪崎克羅諾桿菌

ＧＧＣＧＧＴＴＧＡＴＴＣＡＣＣＴＧＴＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＧＴＡＡＴＧＣＡＴＧＣＣＧＧＧＣＣＴＴＴＴＡＡＴＧＣＴＴＣＴＧＴＣＧＴＡＡＧＣＣＧＣＧＴＡＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＴＴＣＧＴＧＴＴＴＡＡＣＴＣＡＣＧＴＣＡＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＧ

２９

阪崎克羅諾桿菌

ＡＧＣＧＡＴＧＴＴＴＧＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＣＧＴＧＡＡＣＣＧＧＴＴＧＡＴＴＡＡＡＧＡＴＣＴＧＧＡＴＡＡＡＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＧＴＣＧＧＣＧＧＴＴＡＡＧＣＣＡＧＣＡＡＡＡＣＧＴＡＡＧＴＡＡＴＣＧＣＴＣＧＣＣＣＣＴＧＣＧＴＣＴＴＧＣＡＣ

３０

阪崎克羅諾桿菌

ＣＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＧＴＣＧＣＣＣＧＣＣＣＧＧＧＴＴＧＴＣＧＣＣＴＴＡＧＡＡＡＡＣＧＡＴＧＴＧＧＡＡＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣＴＴＧＴＣＧＣＴＣＡＡＡＴＴＴＣＧＡＧＣＡＧＣＡＴＣＧＡＴＡＣＧＡＴＴＡＧＣＴＡＴＡＣＴＧＡＧＴＴＣＧＴＣＡＡ

３１

阪崎克羅諾桿菌

ＡＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＡＡＴＡＴＧＡＴＴＴＡＧＡＣＧＣＴＧＡＣＧＴＧＡＴＧＧＣＣＧＣＧＣＡＡＡＴＣＣＧＣＧＡＧＴＧＧＧＣＧＣＡＧＴＣＡＧＧＡＴＴＴＣＴＧＡＡＴＡＴＴＧＴＣＧＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧＣＧＧＣＡＣＣＡＣＧＣＣＧＧＡＧＣＡＴＡＴＣＧ

３２

阪崎克羅諾桿菌

ＴＧＣＴＧＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＴＡＴＧＡＣＡＣＧＧＡＡＴＡＴＧＣＡＡＴＧＧＴＣＧＡＴＣＧＧＧＡＣＧＡＣＧＡＴＧＴＧＡＡＡＡＴＣＧＧＣＧＴＧＡＡＧＴＣＧＡＣＡＧＣＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＧＧＧＣＧＴＣＡＣＧＡＣＡＡＧＣＴＧＡＴＡＡＴＣＧＧＡＣＴＧ

３

阪崎克羅諾桿菌

ＧＣＣＡＴＣＣＴＧＣＧＡＣＧＴＴＡＣＡＣＧＣＣＡＧＧＧＣＧＧＣＧＴＣＡＧＧＴＧＡＴＴＴＡＣＣＧＣＣＧＴＣＴＧＣＧＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＡＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＴＴＣＡＴＴＡＡＴＡＴＧＣＡＧＴＡＧＣＧＡＣＣＣＡＧＣＡＣＧＴＣＧＣＣＣＡＧＣＡＡ

３４

阪崎克羅諾桿菌

ＡＣＣＴＧＧＣＣＡＡＴＡＣＣＧＧＣＡＧＡＣＴＧＣＴＣＧＴＧＣＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＴＧＡＴＴＴＣＣＧＴＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡＴＴＧＡＴＣＴＧＡＣＣＧＡＴＧＣＧＧＣＴＧＡＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＣＡＴＣＧＣＣＴＴＡＣＧＴＧＴＣＴＧＣＴＣＡＧＡＡＡＧＣ

１３

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犌犅／犜３８４８—２０２１

表犇．１（續(xù)）

編號(hào)

檢測(cè)物種

探針序列

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阪崎克羅諾桿菌

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阪崎克羅諾桿菌

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阪崎克羅諾桿菌

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阪崎克羅諾桿菌

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１８

庫(kù)七七標(biāo)準(zhǔn)下載

犌犅／犜３８４８—２０２１

編號(hào)

檢測(cè)物種

探針序列

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阪崎克羅諾桿菌

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９

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創(chuàng)傷弧菌

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創(chuàng)傷弧菌

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創(chuàng)傷弧菌

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１０５

創(chuàng)傷弧菌

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創(chuàng)傷弧菌

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表犇．１（續(xù)）

１９

庫(kù)七七標(biāo)準(zhǔn)下載

犌犅／犜３８４８—２０２１

表犇．１（續(xù)）

編號(hào)

檢測(cè)物種

探針序列

１０７

創(chuàng)傷弧菌

ＡＣＧＴＴＣＡＣＡＴＡＣＧＣＴＴＴＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＣＡＡＡＴＧＡＡＣＧＧＴＡＧＡＣＧＣＴＣＴＴＧＣＡＧＧＴＡＴＴＣＴＴＣＧＣＣＴＡＧＧＴＧＧＣＧＣＡＡＡＴＣＴＡＧＧＴＧＴＡＣＣＡＣＧＴＣＡＣＣＧＡＧＡＧＧＧＴＧＣＴＴＧＡＴＧＧＴＧＴＴＧ

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創(chuàng)傷弧菌

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創(chuàng)傷弧菌

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檢測(cè)物種

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