顯微鏡使用方法

1、實(shí)驗(yàn)一光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和使用方法實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .熟悉光學(xué)顯微鏡各局部的結(jié)構(gòu)和用途,掌握顯微鏡維護(hù)的根本知識.2 .初步掌握低倍鏡、高倍鏡和油鏡的使用方法.3 實(shí)驗(yàn)用品1 .材料：羊毛裝片、血涂片、字母裝片、兔脊神經(jīng)節(jié)切片.2 .器材：顯微鏡、擦鏡紙、載玻片、香柏油、二甲苯.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法一、顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡是一種復(fù)雜的光學(xué)儀器.它是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)常用工具之一,其作用是將觀察的標(biāo)本放大,以便觀察和分析.一般光學(xué)顯微鏡包括機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大局部,如圖1-1所示.一機(jī)械裝置1 .鏡座：位于最底部的構(gòu)造,為整個(gè)顯微鏡的基座,用以支持著整個(gè)鏡體,起穩(wěn)固作用.2 .鏡柱：為垂直于鏡座上的短柱,用以支持鏡臂.

2、3 .鏡臂：為支持鏡筒和鏡臺的呈弓形結(jié)構(gòu)的局部,是取用顯微鏡時(shí)握拿的局部.鏡筒直立式光鏡在鏡臂與其下方的鏡柱之間有一傾斜關(guān)節(jié),可使鏡筒向后傾斜一定角度以方便觀察,但使用時(shí)傾斜角度不應(yīng)超過45.,否那么顯微鏡由于重心偏移容易翻ss倒.4 .調(diào)節(jié)器：也稱調(diào)焦螺旋,為調(diào)節(jié)焦距的裝置,位于鏡臂的上端鏡筒直立式光鏡或下端鏡筒傾斜式光鏡,分粗調(diào)節(jié)器大螺旋和細(xì)調(diào)節(jié)器小螺旋兩種.粗調(diào)節(jié)器可使鏡筒或鏡臺作較快或較大幅度的升降,能迅速調(diào)節(jié)好焦距,適于低倍鏡觀察時(shí)調(diào)焦.細(xì)調(diào)節(jié)器可使鏡筒或鏡臺緩慢或較小幅度地升降,使用于在低倍鏡下用粗調(diào)節(jié)器找到物體后,在高倍鏡和油鏡下進(jìn)行焦距的精細(xì)調(diào)節(jié),藉以對物體不同層次、深度的結(jié)構(gòu)

3、做細(xì)致地觀察.5 .鏡筒：位于鏡臂的前方,它是一個(gè)齒狀脊板與調(diào)節(jié)器相接的圓筒狀結(jié)構(gòu),上端裝載目鏡,下端連接物鏡轉(zhuǎn)換器.根據(jù)鏡筒的數(shù)目,光鏡可分為單筒式和雙筒式.單筒光鏡又分為直立式和傾斜式兩種,鏡筒直立式光鏡的目鏡與物鏡的光軸在同一直線上,而鏡筒傾斜式光鏡的目鏡與物鏡的中央線互成45.角,在鏡筒中裝有彳I光線轉(zhuǎn)折45.的棱鏡；雙筒式光鏡的鏡筒均為傾斜式的.6 .物鏡轉(zhuǎn)換器：又稱旋轉(zhuǎn)盤,位于鏡筒下端的一個(gè)可旋轉(zhuǎn)的凹形圓盤上,一般裝有24個(gè)放大倍數(shù)不同的接物鏡.旋轉(zhuǎn)它就可以轉(zhuǎn)換接物鏡.旋轉(zhuǎn)盤邊緣有一定卡,當(dāng)旋至物鏡和鏡筒成直線時(shí),就發(fā)出“咔的響聲,這時(shí)方可觀察玻片標(biāo)本.7 .鏡臺：也不載物臺,是位

4、于鏡臂下面的平臺,用以承放玻片標(biāo)本.載物臺中央有一圓形的通光孔,光線可以通過它由下向上反射.8 .標(biāo)本推進(jìn)器：位于鏡臺的前方或側(cè)面邊緣,連一可動弧形彈簧夾.其上方或下方一側(cè)有兩個(gè)旋鈕,轉(zhuǎn)動旋鈕可調(diào)節(jié)推進(jìn)器,使玻片標(biāo)本前后或左右移動.標(biāo)本推進(jìn)器上有縱橫游標(biāo)尺,用以測定標(biāo)本在視野中的方位及其大小.游標(biāo)尺一般由主標(biāo)尺a和副標(biāo)尺b組成.副標(biāo)尺的分度為主標(biāo)尺的9/10o使用時(shí),首先看副標(biāo)尺的0點(diǎn)位置.然后看主、副標(biāo)尺的一致點(diǎn).如圖i-2所示,副標(biāo)尺的0點(diǎn)主標(biāo)尺的26與27之間,副標(biāo)尺的6與主標(biāo)尺的32一致,即6與主標(biāo)尺上的一個(gè)分度線正對,那么此標(biāo)尺所表示的數(shù)值為26.6mm.A初40_/i口dWIiiI

5、iiBIH11IJ111'"I1''_L.IO>圖1-2游標(biāo)尺的用法二光學(xué)系統(tǒng)1 .反光鏡：是裝在鏡臺下面、鏡柱前方的一面可轉(zhuǎn)動的圓鏡,它有平凹兩面.平面鏡聚光力弱,適合光線較強(qiáng)時(shí)使用.凹面鏡聚光力強(qiáng),適于光線較弱時(shí)使用.轉(zhuǎn)動反光鏡,可將光源反射到聚光鏡上,再經(jīng)鏡臺中央圓孔照明標(biāo)本.2 .聚光鏡：在鏡臺下方,是一組透鏡,用以聚集光線增強(qiáng)視野的亮度.鏡臺上方有一調(diào)節(jié)旋鈕,轉(zhuǎn)動它可升降聚光鏡.往上升時(shí)增強(qiáng)反射光,下降時(shí)減弱反射光.3 .可變光欄：是在聚光鏡底部的一個(gè)圓環(huán)狀結(jié)構(gòu).它裝有多片半月形的薄金屬片,疊合在中央成圓孔形.在圓環(huán)外緣有一突起的小柄,撥動它可

6、使金屬片分開或合攏,用以限制光線的強(qiáng)弱,使物像變得更清楚.4 .目鏡：裝在鏡筒上端,其上一般刻有放大倍數(shù)如5X,10X.目鏡內(nèi)常裝有一指示針,用以指示要觀察的某一局部.圖1-1顯微鏡的結(jié)構(gòu)1.目鏡2.鏡筒3.物鏡轉(zhuǎn)換器4.物鏡5.通光孔6.聚光器7.光圈8.反光鏡9.粗調(diào)節(jié)器10.細(xì)調(diào)節(jié)器11.鏡臂12.推進(jìn)器13.載物臺18.粗調(diào)限位環(huán)凸柄14.傾斜關(guān)節(jié)15.鏡柱16.鏡座17.照明裝置標(biāo)本推進(jìn)器上有縱橫游標(biāo)尺,用以測定標(biāo)本在視野中的方位及其大小.游標(biāo)尺一般由主標(biāo)尺a和副標(biāo)尺b組成.副標(biāo)尺的分度為主標(biāo)尺的9/10.使用時(shí),首先看副標(biāo)尺的0點(diǎn)位置.然后看主、副標(biāo)尺的一致點(diǎn).如圖i-2所示,副標(biāo)

7、尺的0點(diǎn)主標(biāo)尺的26與27之間,副標(biāo)尺的6與主標(biāo)尺的32一致,即6與主標(biāo)尺上的一個(gè)分度線正對,那么此標(biāo)尺所表示的數(shù)值為26.6mm5 .物鏡：裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上,一般分低倍鏡、高倍鏡和油鏡三種.低倍鏡鏡體較短,放大倍數(shù)??；高倍鏡鏡體較長,放大倍數(shù)較大；油鏡鏡體最長,放大倍數(shù)最大在鏡體上刻有數(shù)字,低倍鏡一般有4X、10X,高倍鏡一般有40X、45X,油鏡一般是90X、100X,X表示放大倍數(shù).顯微鏡放大倍數(shù)的計(jì)算：目鏡放大倍數(shù)X物鏡放大倍數(shù)=顯微鏡對實(shí)物的放大倍數(shù).二、顯微鏡的使用方法一低倍鏡的使用1 .把顯微鏡放在桌面的左側(cè),鏡臂對向胸前,坐下進(jìn)行操作.用手轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋,使鏡筒上升,然后轉(zhuǎn)動物鏡

8、轉(zhuǎn)換器,使低倍鏡對準(zhǔn)鏡臺中央圓孔當(dāng)轉(zhuǎn)動到聽見“咔聲響,或同時(shí)亦感到有阻力時(shí)立即停止轉(zhuǎn)動,說明物鏡已與鏡筒成一直線.2 .對光：撥動聚光鏡底部圓環(huán)的小柄,使光欄完全翻開.旋轉(zhuǎn)聚光鏡升降螺旋,使聚光鏡上升到和鏡臺相平.用左眼兩個(gè)眼睛都要睜開在目鏡上觀察,同時(shí)用手調(diào)整反光鏡,對好光源.要求視野到達(dá)完全均勻明亮.3 .放置玻片標(biāo)本：取蛙血玻片標(biāo)本放在鏡臺上,有蓋玻片的一面朝上.玻片兩端用移動器夾住,然后轉(zhuǎn)動螺旋,使玻片上要觀察的標(biāo)本對準(zhǔn)鏡中央圓孔.注意,鏡臺上的刻度可以標(biāo)示玻片的坐標(biāo)位置.4 .調(diào)節(jié)物距：轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋,使低倍鏡距玻片標(biāo)本0.5mm左右.注意：必須從顯微鏡側(cè)面觀察物鏡與玻片的距離.切勿用

9、眼在目鏡上觀察的同時(shí)轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋,以防鏡頭碰撞玻片造成損壞.用左眼從目鏡上觀察,用手慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋下降鏡臺,當(dāng)視野中出現(xiàn)物像時(shí),再調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)螺旋,直至視野中出現(xiàn)清楚的物像許多橢圓形的紅細(xì)胞為止.如果物像不在視野中央,可稍微移動玻片位置注意：移動玻片的方向與觀察物像移動的方向恰好是相反的.反復(fù)練習(xí)上述各操作步驟,做到迅速熟練地找到標(biāo)本,以及取光適宜即較熟練的應(yīng)用反光鏡、光欄和聚光鏡.二高倍鏡的使用1 .一定要先在低倍鏡下找到要觀察的標(biāo)本物像后,并把要放大的局部移至視野正中,同時(shí)調(diào)節(jié)到最清楚程度,才能進(jìn)行高倍鏡的觀察.2 .轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器,使高倍鏡轉(zhuǎn)到鏡臺中央圓孔處.轉(zhuǎn)換高倍鏡時(shí)速度要慢,要細(xì)心,

10、并從側(cè)面進(jìn)行觀察預(yù)防高倍鏡碰撞玻片.如果高倍鏡碰到玻片,說明低倍鏡的物距沒有調(diào)節(jié)好,應(yīng)重新進(jìn)行操作.3 .調(diào)節(jié)物距：轉(zhuǎn)換好高倍鏡后,用左眼在目鏡上觀察.這時(shí)物像往往不清楚、或者要觀察的局部不在視野當(dāng)中,可用細(xì)調(diào)螺旋慢慢向上或向下轉(zhuǎn)動切勿用粗調(diào)螺旋即能清楚看到物像.一般只需轉(zhuǎn)動半圈或一圈就能到達(dá)要求.在高倍鏡下,可見蛙血紅細(xì)胞呈橢圓形,外被細(xì)胞膜,膜內(nèi)為淺紅色細(xì)胞質(zhì),中央有一圓形呈藍(lán)紫色的細(xì)胞核.三油鏡的使用1 .首先在高倍鏡下找到所要觀察的標(biāo)本后,把所要觀察的局部移至視野中央.2 .轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器,移開高倍鏡,在標(biāo)本上所要觀察的位置加一滴鏡油香柏油.3 .轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器,轉(zhuǎn)換油鏡,使之對準(zhǔn)鏡臺

11、中央圓孔處,浸在油滴中.4 .轉(zhuǎn)換好油鏡后,用左眼在目鏡上觀察.物像如不清楚,可用細(xì)調(diào)螺旋慢慢向上或向下轉(zhuǎn)動,即能清楚地看到物像.如仍看不清標(biāo)本,需重新用低倍鏡、高倍鏡觀察,然后再轉(zhuǎn)換油鏡.5 .觀察完標(biāo)本后,用滴加上二甲苯的擦鏡紙擦拭干凈油鏡鏡頭,再用另一張清潔的擦鏡紙蓋在玻片標(biāo)本上,滴上12滴二甲苯,輕拉擦鏡紙,將玻片上的鏡油擦去.注意,勿擦壞標(biāo)本.三、使用顯微鏡考前須知1 .持鏡時(shí)要一手緊握鏡臂,一手托住鏡座,絕不能一把提起顯微鏡便走,以防目鏡從鏡筒滑出或反光鏡脫落.2 .輕拿輕放,不要把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺邊緣,預(yù)防碰翻落地.3 .顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)部件要用清潔的擦鏡紙輕輕揩擦,切勿口吹、手抹

12、或用粗布揩擦.4 .使用時(shí)先用低倍鏡調(diào)整光線.觀察活體標(biāo)本或染色較淺的標(biāo)本時(shí),要適當(dāng)關(guān)小可變光欄便視野變暗,方能看得清楚.5 .放置玻片標(biāo)本時(shí)要對準(zhǔn)鏡臺孔正中央,并且不能反放玻片,如標(biāo)本玻片反放時(shí)高倍鏡下看不到物像,并容易壓壞玻片或物鏡.6 .觀察時(shí)要雙目睜開,切勿閉上一只眼睛.左眼觀察視野,右眼用以繪圖.低倍鏡用粗調(diào)螺旋調(diào)節(jié)物距,高倍鏡要用細(xì)調(diào)螺旋,粗、細(xì)調(diào)節(jié)螺旋都不能單方向過度地旋轉(zhuǎn).單向上升粗調(diào)螺旋會壓碎鏡片和損壞物鏡.7 .不要隨便取出目鏡,以防塵土落人物鏡上.也不要任意拆卸任何零件,以防損壞.8 .使用完畢后,轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋使鏡臺下降,取下玻片,轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器,使物鏡離開聚光孔.再上升

13、鏡臺使物鏡接近鏡臺不要對著鏡臺孔.然后以右手握鏡臂,左手托鏡座輕輕放人鏡箱中.9 .每次使用顯微鏡之前,先按顯微鏡登記卡片逐項(xiàng)檢查顯微鏡各局部有無損壞.如發(fā)現(xiàn)損壞,應(yīng)及時(shí)向教師報(bào)告.使用之后,認(rèn)真填寫顯微鏡使用登記卡片.四、操作練習(xí)一低倍鏡、高倍鏡的使用練習(xí)1 .觀察文字或字母裝片：取一片字母裝片,用低倍鏡觀察,反復(fù)練習(xí)對光、調(diào)光、標(biāo)本放置和調(diào)節(jié)焦距等.如將玻片前后左右移動時(shí),注意物像與玻片移動方向是否一致,玻片上的字母是正像還是反像,為什么2 .觀察羊毛片或頭發(fā)交叉裝片：取一張毛發(fā)交叉裝片,先用低倍鏡觀察,找到兩根毛發(fā)后,再將毛發(fā)交叉點(diǎn)移到視野中央,然后換高倍鏡觀察,再稍微轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)節(jié)器,觀察

14、不同層次,判定哪條毛發(fā)在上方,哪條位于下方.二油鏡的使用練習(xí)另取一張邊緣平整的載玻片,按1 .取一張血涂片或取血一小滴,滴于清潔的載玻片一端,照圖1-3所示做成血涂片.先用低倍鏡再用高倍鏡進(jìn)行觀察.圖1-4蛙血涂片圖1-5運(yùn)動神經(jīng)細(xì)胞2 .用油鏡觀察,并分辨紅細(xì)胞、白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞,比擬三種物鏡的放大倍數(shù)和分辨率.3 .觀察兔脊神經(jīng)節(jié)切片示固定染色的細(xì)胞取兔脊神經(jīng)節(jié)切片標(biāo)本先在調(diào)好光線的低倍鏡下觀察固定染色的標(biāo)本需調(diào)較亮光線,低倍鏡下找到要觀察的標(biāo)本,為淡紫色的神經(jīng)節(jié)切面,在其外圍包有被膜,且向內(nèi)伸入,形成神經(jīng)節(jié)的結(jié)締組織支架,節(jié)內(nèi)有許多大小不等的神經(jīng)細(xì)胞,呈散在分布.然后轉(zhuǎn)換高倍鏡,選擇完整

15、而清楚的圓形圖1-6感覺神經(jīng)細(xì)胞神經(jīng)細(xì)胞仔細(xì)觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu).可見到在細(xì)胞中央有一圓形核,核內(nèi)有著色為深紫紅色的圓形核仁及染色質(zhì)顆粒,核與細(xì)胞膜之間是均勻淺紫色的細(xì)胞質(zhì),在細(xì)胞的外面圍有假設(shè)干個(gè)被囊細(xì)胞,它起保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用.在神經(jīng)細(xì)胞之間還可看到有軸索橫斷面和許多神經(jīng)纖維,多呈交錯(cuò)排列.圖1-3血涂片的制備方法4 .觀察完畢,務(wù)必將油鏡按正確方法擦凈.五、其它幾種顯微鏡簡介目前在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中,常用的顯微鏡,還有以下幾種：1 .雙筒解剖顯微鏡：解剖較小標(biāo)本或觀察玻片標(biāo)本的全貌時(shí),需使用解剖顯微鏡,以觀察自然狀態(tài)下較小的實(shí)體正像和較大的玻片標(biāo)本,或解剖細(xì)小生物.2 .暗視野顯微鏡：是一種具

16、有暗視集中器或中央遮光板的顯微鏡.即在聚光鏡上加一特殊裝置,使光線從集光器透鏡的邊緣衍射或反射到標(biāo)本上,經(jīng)標(biāo)本反射投入物鏡內(nèi),使整個(gè)視野變暗,故能在視野中見到被檢物體衍射之圖像.這種顯微鏡可觀察運(yùn)動著的有機(jī)體.3 .熒光顯微鏡：其特點(diǎn)是以紫外光為光源,利用紫外光照射,使標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)激發(fā)出不同顏色的熒光,以研究標(biāo)本內(nèi)某些物質(zhì)的特征和位置.有些物質(zhì)本身能發(fā)出熒光,有些物質(zhì)需經(jīng)熒光染料染色后才能發(fā)出熒光.4 .相差顯微鏡：活細(xì)胞在普通光鏡下,一般不能分辨其細(xì)微結(jié)構(gòu).這是由于各細(xì)微結(jié)構(gòu)的折光性很近似或比照不夠顯著的緣故.相差顯微鏡那么是在聚光器下裝一個(gè)環(huán)狀光欄,其物鏡是安有相板的相差物鏡.環(huán)狀光欄的作用是造成空心的光線錐,使直射光和衍