細(xì)菌的分離培養(yǎng)及培養(yǎng)性狀的觀察

1、實(shí)驗(yàn)四 細(xì)菌的分離培養(yǎng)及培養(yǎng)性狀的觀察在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中，細(xì)菌的分離培養(yǎng)是重要的基本技術(shù)之一。從混雜微生物中獲得單一菌株純培養(yǎng)的方法稱為分離；純培養(yǎng)是指一株菌種或一個(gè)培養(yǎng)物中所有的細(xì)菌都是由一個(gè)細(xì)胞分裂、繁殖而產(chǎn)生的后代。分離培養(yǎng)的目的在于從被檢材料中，或者從污染的眾多雜菌中分離出純的病原菌。細(xì)菌分離培養(yǎng)應(yīng)先從被檢材料或病料中分離培養(yǎng)單個(gè)菌落，然后釣取可疑菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，再將純培養(yǎng)物移植培養(yǎng)。 目的要求 1學(xué)習(xí)、掌握需氧菌和厭氧菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和技術(shù)。 2了解細(xì)菌的菌落形態(tài)及其在各種培養(yǎng)基上的培養(yǎng)性狀。 3了解培養(yǎng)性狀對(duì)細(xì)菌鑒別的重要意義。 4掌握釣菌、純培養(yǎng)及移植技術(shù)。操作步驟一需氧性細(xì)菌分

2、離培養(yǎng)法1. 平板劃線分離法 菌種被其他雜菌污染時(shí)或混合菌懸液常用平板劃線法進(jìn)行純種分離，此法是借助將蘸有混合菌懸液的接種環(huán)在平板表面多方向連續(xù)劃線，使混雜的微生物細(xì)胞在平板表面分散，經(jīng)培養(yǎng)得到分散的由單個(gè)微生物細(xì)胞繁殖而成的菌落，從而達(dá)到純化目的。 但劃線分離的培養(yǎng)基必須事先傾倒好，需充分冷凝待平板稍干后才可使用；為便于劃線，一般培養(yǎng)基不宜太薄，每皿約傾倒20 ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)厚薄均勻，平板表面光滑。劃線分離主要有連續(xù)劃線法（圖4-1）和分區(qū)劃線法（圖4-2）兩種。劃線法示意圖見(jiàn)圖4-3。（1）連續(xù)劃線法圖4-3 劃線分離示意圖 圖4-1連續(xù)劃線法 圖4-2分區(qū)劃線法以無(wú)菌操作用接種環(huán)直

3、接取平板上待分離純化的菌落。將菌種點(diǎn)種在平板邊緣一處，取出接種環(huán)，燒去多余菌體。將接種環(huán)再次通過(guò)稍打開(kāi)皿蓋的縫隙伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻，然后從接種細(xì)菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線，劃線時(shí)平板面與接種環(huán)面成3040度角，以手腕力量在平板表面輕巧滑動(dòng)劃線，接種環(huán)不要嵌入培養(yǎng)基內(nèi)劃破培養(yǎng)基，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊。劃線完畢，關(guān)上皿蓋。灼燒接種環(huán)，待冷卻后放置接種架上。培 養(yǎng)皿倒置于適宜的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)后在劃線平板上觀察沿劃線處長(zhǎng)出的菌落形態(tài)，涂片鏡檢為純種后再接種斜面。(2)分區(qū)劃線法（四分區(qū)劃線法）取菌、接種、培養(yǎng)方法與“連續(xù)劃線法

4、”相似。分區(qū)劃線法劃線分離時(shí)平板分4個(gè)區(qū)，故又稱四分區(qū)劃線法。其中第4區(qū)是單菌落的主要分布區(qū)，故其劃線面積應(yīng)最大。為防止第4區(qū)內(nèi)劃線與1、2、3區(qū)線條相接觸，應(yīng)使4區(qū)線條與1區(qū)線條相平行，這樣區(qū)與區(qū)間線條夾角最好保持120度左右。先將接種環(huán)蘸取少量菌在平板上1區(qū)劃3-5條平行線，取出接種環(huán)，左手關(guān)上皿蓋，將平板轉(zhuǎn)動(dòng)6070度。灼燒接種環(huán)，待在平板邊緣上冷卻后，再按以上方法以1區(qū)劃線的菌體為菌源，由1區(qū)向2區(qū)作第2次平行劃線。第2次劃線完畢，同時(shí)再把平皿轉(zhuǎn)動(dòng)約6070度，同樣依次在3、4區(qū)劃線。劃線完畢，灼燒接種環(huán)，關(guān)上皿蓋，倒置于37恒溫箱中培養(yǎng)24h后，在劃線區(qū)觀察單菌落。2. 傾注平皿分離

5、法 被檢材料若含有兩種或兩種以上細(xì)菌時(shí),可借助溶化的瓊脂將細(xì)菌稀釋，待瓊脂冷凝后,分散的細(xì)菌就被固定在原地形成菌落.這樣也能達(dá)到分得純種的目的。根據(jù)材料中存在菌數(shù)的多少，傾注平皿前可將被檢材料不稀釋或用生理鹽水作適當(dāng)稀釋。其具體方法如下：取三支預(yù)先準(zhǔn)備的普通瓊脂培養(yǎng)基試管，水浴加熱融化，冷至約50，用火焰滅菌接種環(huán)釣取待分離物接種至第一管內(nèi)，充分搖勻后，自第一管取一接種環(huán)內(nèi)容物至第二管，以同樣方法自第二管移種至第三管。然后分別傾注一個(gè)已滅菌的平皿，凝固后倒轉(zhuǎn)置于37溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。結(jié)果多數(shù)細(xì)菌在瓊脂內(nèi)生長(zhǎng)成菌落，僅少數(shù)菌落出現(xiàn)在表面，通常第一個(gè)平板內(nèi)的菌落數(shù)較多而密集，第二、三個(gè)平板則逐漸減

6、少，可見(jiàn)單個(gè)菌落。3. 芽胞需氧菌分離培養(yǎng)法 如果被檢材料中可疑有帶芽孢的細(xì)菌，可先將被檢材料加少量生理鹽水或肉湯，置于80水浴箱中維持1520分鐘，或85加熱10分鐘，再進(jìn)行培養(yǎng)。材料中若有帶芽孢的細(xì)菌仍可存活而生長(zhǎng)繁殖，不耐熱的細(xì)菌繁殖體則被殺滅。4利用化學(xué)藥品的分離培養(yǎng)法（1）抑菌作用 有些藥品對(duì)某些細(xì)菌有極強(qiáng)的抑制作用，而對(duì)另外一些細(xì)菌沒(méi)有抑制作用，所以可利用這種特性進(jìn)行細(xì)菌的分離，例如通常在培養(yǎng)基中加入結(jié)晶紫或青霉素等化學(xué)藥品來(lái)抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，以分離得到革蘭氏陰性菌。（2）殺菌作用 將病料如結(jié)核病料用15硫酸溶液處理，其他雜菌均被殺死，而結(jié)核桿菌因具有抗酸性而存活。（3）鑒別

7、作用 利用細(xì)菌對(duì)某種糖的分解能力，通過(guò)培養(yǎng)基中指示劑的變化來(lái)鑒別某種細(xì)菌。例如遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基可以用來(lái)鑒別大腸桿菌與沙門(mén)氏桿菌。5. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分離法被檢病料中疑有某種病原菌存在，可將病料以無(wú)菌操作取出，放入滅菌乳缽或組織勻漿器內(nèi)，加35倍量無(wú)菌生理鹽水制成混懸液，吸取一定量混懸液注射（肌肉、腹腔、皮下或靜脈）入易感實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死后，取其臟器，?？煞蛛x到純的病原菌。例如，疑有豬丹毒桿菌存在的病料，可注射于鴿體，鴿死后，再取其脾臟以分離豬丹毒桿菌，可得到純培養(yǎng)。6. 瓊脂斜面分離法 取瓊脂斜面3管，用接種環(huán)蘸取欲檢病料少許（如為臟器，先將表面燒烙后，用滅菌解剖刀切開(kāi)，以滅菌接種環(huán)由切口插入、轉(zhuǎn)

8、動(dòng)、釣取組織），混合于第1管的凝集水中，再作斜面劃線；然后抽出接種環(huán)，不經(jīng)燒灼，繼續(xù)在第2管、第3管斜面上作同樣劃線。劃畢，置37溫箱中培養(yǎng)。經(jīng)此法分離培養(yǎng)后，第2管的菌落較第1管為少，第3管的菌落更少，如此較易得到單個(gè)菌落，達(dá)到純培養(yǎng)之目的。7. 瓊脂平板涂布分離法 被檢病料如血液、腹水等，可用滅菌毛細(xì)吸管或吸管吸取 12滴置于平板中央，用滅菌的L形玻棒作均勻涂布。如估計(jì)細(xì)菌數(shù)很多，可直接用火焰滅菌的接種環(huán)釣菌，并做分區(qū)劃線。如為臟器病料，可先作成乳懸液再行涂布；或取其一小塊，用鑷子夾住，表面燒烙后，用滅菌刀切開(kāi)，以其切面直接進(jìn)行涂布，此法適用于含菌量較少的病料的分離。8. 營(yíng)養(yǎng)肉湯分離法

9、當(dāng)組織病料中含病原菌少，或有抗菌藥殘留時(shí)，用上述瓊脂斜面或平板分離法可能無(wú)菌落長(zhǎng)出，這時(shí)可以無(wú)菌操作剪取一小塊病料直接投入肉湯，經(jīng)37培養(yǎng)，在肉湯中長(zhǎng)出細(xì)菌后，再用瓊脂斜面或瓊脂平板分離。二、厭氧性細(xì)菌分離培養(yǎng)法細(xì)菌接種后，直接放在恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可以使需氧菌與兼性厭氧菌生長(zhǎng)繁殖；但對(duì)厭氧菌，則需將培養(yǎng)環(huán)境或培養(yǎng)基中的氧氣除去，或?qū)⒀趸臀镔|(zhì)還原，降低其氧化還原電勢(shì)，才能生長(zhǎng)繁殖。在有氧的環(huán)境下，培養(yǎng)基的氧化還原電勢(shì)較高，不適于厭氧菌的生長(zhǎng)。為使培養(yǎng)基降低電勢(shì)，降低培養(yǎng)環(huán)境的氧分壓是十分必要的?，F(xiàn)有的厭氧培養(yǎng)法很多，主要有生物學(xué)法、化學(xué)法和物理學(xué)法，可根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室的具體情況而選用。（一）生物學(xué)方

10、法 培養(yǎng)基中含有植物組織（馬鈴薯、燕麥、發(fā)芽谷物等）或動(dòng)物組織（新鮮動(dòng)物組織小片，或加熱的肌肉、心腦等），因組織的呼吸作用，以及組織中可氧化物質(zhì)的氧化而消耗氧氣（肌肉、腦磷脂中不飽和脂肪酸的氧化，碎肉培養(yǎng)基的應(yīng)用），造成厭氧環(huán)境，以利于厭氧性細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。同時(shí)，組織中所含的還原性化合物（谷胱甘肽）也可使氧化-還原電勢(shì)下降。此外，將厭氧菌與需氧菌共同培養(yǎng)在同一環(huán)境中，則環(huán)境中的氧被需氧菌消耗，造成厭氧環(huán)境，也有利于厭氧菌的生長(zhǎng)繁殖。1. 動(dòng)物組織及其他物質(zhì)加入法 在液體培養(yǎng)基內(nèi)加入肝臟、腎臟等動(dòng)物臟器，因其中的半胱氨酸的一SH基極不穩(wěn)定，為強(qiáng)還原劑，所以可利用此培養(yǎng)基進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，在培養(yǎng)之前將

11、肝片肉湯加熱，以驅(qū)出空氣，冷卻，然后接種培養(yǎng)。2. 共棲培養(yǎng)法 將厭氧菌與需氧菌共同培養(yǎng)在同一個(gè)平皿內(nèi)，利用需氧菌的生長(zhǎng)繁殖將氧氣消耗后，造成厭氧環(huán)境利于厭氧菌生長(zhǎng)。其具體方法是將培養(yǎng)皿的一半接種消耗氧氣能力極強(qiáng)的需氧菌如靈桿菌、大腸桿菌、枯草桿菌等。另一半接種厭氧菌， 接種后將平皿倒扣在一塊玻璃板上，并用石蠟密封，置37恒溫箱中培養(yǎng)23d， 即可觀察到需氧菌和厭氧菌均先后生長(zhǎng)。（二）化學(xué)方法 利用還原能力強(qiáng)的化學(xué)物質(zhì)，將環(huán)境或培養(yǎng)基內(nèi)的氧氣消耗，或還原氧化型物質(zhì)，降低氧化-還原電勢(shì)。1. 焦性沒(méi)食子酸法 焦性沒(méi)食子酸在堿性溶液內(nèi)能大量地吸收氧而造成厭氧環(huán)境，有利于厭氧菌的生長(zhǎng)繁殖。通常100

12、cm3空間用焦性沒(méi)食子酸1g及10氫氧化鈉或氫氧化鉀10m1。具體方法有下列幾種：（1）平板培養(yǎng)法 將厭氧菌劃線接種于適宜的瓊脂平板，取一小團(tuán)直徑約2cm的脫脂棉，置于平皿蓋的內(nèi)面中央，其上滴加0.5ml 10氫氧化鈉溶液；在靠近脫脂棉的一側(cè)放置0.5g焦性沒(méi)食子酸，暫勿使兩者接觸。立即將已接種的平板覆蓋于平皿蓋上，迅速用融化的石蠟密封平皿四周。封畢，輕輕搖動(dòng)平皿，使被氫氧化鈉溶液浸濕的脫脂棉與焦性沒(méi)食子酸接觸，然后置37恒溫箱中培養(yǎng)2448h后，取出觀察。 圖4-4 Buchner氏厭氧培養(yǎng)法 圖4-5 瑞氏厭氧培養(yǎng)法（2）Buchner氏試管法（圖4-4） 取一大試管，在管底放焦性沒(méi)食子酸

13、0.5g及玻璃珠數(shù)個(gè)或放一螺旋狀鉛絲。將已接種的培養(yǎng)管放入大試管中，迅速加入2NaOH溶液0.5ml，立即將試管口用橡皮塞塞緊，必要時(shí)周圍用石蠟密封。37培養(yǎng)2448h后觀察。（3）瑞氏厭氧培養(yǎng)法（圖4-5） 將已接種細(xì)菌的培養(yǎng)管的脫脂棉棉塞在火焰中灼燒滅菌后，塞入管中離培養(yǎng)基11.5cm處，置適量焦性沒(méi)食子酸于其上，加入10%NaOH溶液2ml，迅速用橡皮塞將管口塞緊，以膠泥或石蠟嚴(yán)密封閉置溫箱中培養(yǎng)。（4）史氏厭氧培養(yǎng)法 用圖4-6所示的厭氧培養(yǎng)皿，在皿底一邊置焦性沒(méi)食子酸，另一邊置NaOH溶液，將已接種的平皿翻蓋于皿上，并將接合處用膠泥或石蠟密封，然后搖動(dòng)底部，使氫氧化鈉與焦性沒(méi)食子酸混

14、合，置溫箱中培養(yǎng)。（5）平皿厭氧培養(yǎng)法 置一片中有小圓孔的金屬板于兩平皿之間，上面的平皿接種細(xì)菌，下面的平皿盛焦性沒(méi)食子酸及氫氧化鈉溶液，用膠泥封閉后置溫箱中培養(yǎng)（圖4-7） 圖4-6 史氏厭氧培養(yǎng)法 圖4-7 平皿厭氧培養(yǎng)法（6）玻罐或干燥器法 置適量焦性沒(méi)食子酸于一干燥器或玻罐的隔板下面，將培養(yǎng)皿或試管置于隔板上，并在玻罐內(nèi)置美蘭指示劑一管，從罐側(cè)加入氫氧化鈉溶液于罐底，將焦性沒(méi)食子酸用紙或紗布包好，用線系住，暫勿與氫氧化鈉接觸，等一切準(zhǔn)備好后，將線放下，使焦性沒(méi)食子酸落入氫氧化鈉溶液中，立即將蓋蓋好，密封，置溫箱中培養(yǎng)。 2. 李伏夫（B.M.JIbBOB）氏法 此法是利用連二亞硫酸鈉（

15、Sodium hyerosulphite）和碳 酸鈉以吸收空氣中的氧氣,釋放二氧化碳造成厭氧環(huán)境。其反應(yīng)式如下：Na2S2O4+Na2CO3+O2Na2SO4+Na2SO3+CO2取一有蓋的玻璃罐，罐底墊一薄層棉花，將接種好的平皿重疊正放于罐內(nèi)（如是液體培養(yǎng)基，則直立于罐內(nèi)），最上端保留可容納12個(gè)平皿的空間（視玻罐的體積而定），按玻罐的體積每1000cm3空間用連二亞硫酸鈉及碳酸鈉各30g，在紙上混勻后，盛于上面的空平皿中，加水少許使混合物潮濕，但不可過(guò)濕，以免罐內(nèi)水分過(guò)多。若用無(wú)蓋玻罐，可將平皿重疊正放在淺底容器上，以無(wú)蓋玻罐置于皿上，罐口周圍用膠泥或水銀封閉,如圖4-8所示。3. 硫乙醇

16、酸鈉法 硫乙醇酸鈉是一種還原劑，加入培養(yǎng)基中，能除去其中的氧或還原氧化型物質(zhì)，促使厭氧菌生長(zhǎng)。其它可用的還原劑包括葡萄糖、維生素C及半胱氨酸等。（1）液體培養(yǎng)基法 將細(xì)菌接入含0.1%的硫乙醇酸鈉液體培養(yǎng)基中，并加入美蘭溶液作為氧化還原的指示劑，37培養(yǎng)2448h后觀察，在無(wú)氧條件下，美蘭被還原成無(wú)色。 圖4-8 李伏夫氏厭氧培養(yǎng)法 圖4-9 Brewer氏培養(yǎng)皿 圖4-10 Mc1gtoshFildes二氏厭氧罐（2）固體培養(yǎng)基法 利用特殊構(gòu)造的Brewer氏培養(yǎng)皿，可使厭氧菌在培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)而形成孤立的菌落。具體方法如下：先將Brewer氏培養(yǎng)皿干熱滅菌，將溶化冷卻至50左右的硫乙醇酸鈉固

17、體培養(yǎng)基傾入皿內(nèi)。待瓊脂冷凝后，將厭氧菌接種于培養(yǎng)基的中央部分。蓋上皿蓋，使皿蓋內(nèi)緣與培養(yǎng)基外圍部分相互緊密接觸（圖4-9）。此時(shí)皿蓋與培養(yǎng)基中央部分留在空隙間的氧氣被硫乙醇酸鈉還原，美蘭指示劑逐漸褪色，而外緣部分，因與大氣相通，仍呈藍(lán)色。將Brewer氏培養(yǎng)皿于37恒溫箱內(nèi)2448h后觀察。（三） 物理學(xué)方法 利用加熱、密封、抽氣等物理方法，以驅(qū)除或隔絕環(huán)境及培養(yǎng)基中的氧氣，造成厭氧環(huán)境，有利于厭氧菌的生長(zhǎng)繁殖。1. 厭氧罐法 常用的厭氧罐有Brewer氏罐、Brown氏罐和Mc1gtoshFildes二氏罐（圖4-10）。將接種好的厭氧菌培養(yǎng)皿依次放于厭氧罐中，先抽去部分空氣，代以氫氣至大

18、氣壓。通電，使罐中殘存的氧與氫經(jīng)受鉑或鈀的催化而化合成水，使罐內(nèi)氧氣全部消失。將整個(gè)厭氧罐放入溫箱培養(yǎng)。2. 真空干燥器法 將接種好的平皿或試管放入真空干燥器中，開(kāi)動(dòng)抽氣機(jī)，抽至高度真空后，替代以氫、氮或二氧化碳?xì)怏w。將整個(gè)干燥器放進(jìn)孵育箱中培養(yǎng)。3. 加熱密封法 將液體培養(yǎng)基放在阿諾氏鍋內(nèi)加熱10min，驅(qū)除溶解液體中的空氣，取出，迅速置于冷水中冷卻。接種厭氧菌后，在培養(yǎng)基液面覆蓋一層0.5cm的無(wú)菌凡士林石蠟。置37培養(yǎng)2448h后觀察。4. 高層瓊脂柱法 加熱融化一管適合分離厭氧菌用的瓊脂培養(yǎng)基，待冷至50左右，接入少許經(jīng)適當(dāng)稀釋的待分離的培養(yǎng)物或含菌材料，充分搖震均勻。在瓊脂凝固前，迅

19、速以無(wú)菌滴管吸取上述已接種的瓊脂培養(yǎng)基，注入準(zhǔn)備好的玻璃管內(nèi)（長(zhǎng)約15 cm，一端塞小膠塞或小木塞，另一端塞棉花塞，高壓滅菌備用），裝至45左右之處，塞好棉花塞，放在大試管或玻璃筒內(nèi)，置37恒溫箱中培養(yǎng)。長(zhǎng)出菌落后，拔去膠塞和棉花塞，以無(wú)菌玻棒將瓊脂柱推出于無(wú)菌平皿中，再用滅菌接種環(huán)釣取獨(dú)立菌落作厭氧純培養(yǎng)。三、兼性厭氧菌的分離培養(yǎng)方法(二氧化碳培養(yǎng)法) 在細(xì)菌培養(yǎng)中，有少數(shù)細(xì)菌（如牛型布氏桿菌）在含有510二氧化碳的環(huán)境下才能生長(zhǎng)。最簡(jiǎn)單的二氧化碳培養(yǎng)法是燭缸法：將接種細(xì)菌的培養(yǎng)基置玻璃干燥器或其他可以密閉的玻璃缸內(nèi)，在其內(nèi)點(diǎn)燃一小段蠟燭，加上蓋（蓋邊涂上凡士林以防漏氣），約1min左右蠟燭

20、自然熄滅，此時(shí)缸內(nèi)氧氣已被消耗，缸內(nèi)所含二氧化碳約510。注意蠟燭勿太長(zhǎng)，而且不宜靠近缸壁，以免因局部玻璃過(guò)熱而破裂。也可用化學(xué)物質(zhì)作用生成二氧化碳?xì)怏w如碳酸氫鈉與硫酸鈉或碳酸氫鈉與硫酸。四、細(xì)菌的釣菌、純培養(yǎng)和移植 圖4-11 斜面接種時(shí)試管的拿法將劃線分離培養(yǎng)3724h的平板從溫箱中取出，挑取單個(gè)菌落，經(jīng)涂片、染色鏡檢，證明不含雜菌，此時(shí)用接種環(huán)挑取單個(gè)菌落，移植于瓊脂斜面培養(yǎng)，所得培養(yǎng)物即為純培養(yǎng)物，再作其它各項(xiàng)試驗(yàn)檢查和致病性試驗(yàn)等。具體操作方法如下： 1. 接種環(huán)移植法 兩試管斜面移植時(shí)，左手斜持菌種管和新鮮空白瓊脂斜面各一管，使管口互相并齊，稍上斜，管底握于手中，松動(dòng)兩管棉塞，以便

21、接種時(shí)容易拔出（圖4-11）。右手食指和拇指執(zhí)接種環(huán)，燒灼接種環(huán)，以右手小指扭開(kāi)一管的棉塞，無(wú)名指扭開(kāi)第二管的棉塞。棉塞頭向掌心內(nèi)，將試管口通過(guò)酒精燈火焰滅菌，待冷卻后將接種環(huán)插入菌種管中，釣取細(xì)菌少許取出接種環(huán)立即接種在新鮮空白瓊脂斜面上，不要碰及管壁，直達(dá)斜面底部。從斜面底部開(kāi)始劃曲線或直線，向上至斜面頂端為止，管口通過(guò)火焰滅菌后，塞好棉塞。接種完畢，將接種環(huán)燒灼滅菌后放下接種環(huán)。用蠟筆在試管上標(biāo)明細(xì)菌名稱和接種日期，置37溫箱中培養(yǎng)。斜面接種無(wú)菌操作過(guò)程如圖4-12所示。圖4-12 斜面接種無(wú)菌操作程序2. 吸管或注射器移植法 欲移植定量的液體培養(yǎng)物或表面有液體石蠟油的厭氧菌培養(yǎng)物，可以

22、利用吸管或注射器移植，其操作方法是以無(wú)菌吸管或無(wú)菌注射器吸取培養(yǎng)物，代替接種環(huán)進(jìn)行移植。五、穿刺培養(yǎng)明膠穿刺和瓊脂柱穿刺方法基本上與純培養(yǎng)接種相同，不同的是用接種針挑取菌落，垂直刺入培養(yǎng)基中。要從培養(yǎng)基表面的中部一直刺入管底，然后按原方向退出即可。六、細(xì)菌培養(yǎng)性狀的檢查（一）細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)1. 瓊脂平皿上的生長(zhǎng)表現(xiàn) 細(xì)菌于固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)繁殖，形成單個(gè)肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌集落群體，稱為菌落。各種細(xì)菌的菌落，按其特征的不同，可以在一定程度上鑒別某種細(xì)菌。如葡萄球菌在瓊脂平皿上，由于產(chǎn)生色素的不同，形成各種顏色的圓形而突起的菌落；炭疽桿菌形成扁平干燥，邊緣不整齊的火焰狀菌落，用放大鏡觀察

23、時(shí)，呈卷發(fā)樣構(gòu)造；腸道桿菌屬的細(xì)菌，形成圓形、濕潤(rùn)、粘稠、扁平、大小不等的菌落；巴氏桿菌和豬丹毒桿菌，形成細(xì)小露珠狀菌落。觀察菌落的方法除肉眼外，還可用放大鏡，必要時(shí)也可用低倍顯微鏡進(jìn)行檢查。觀察的主要內(nèi)容有（圖4-13，圖4-14）：1 2 3 4 5 6 7 8圖4-13 菌落的形狀、邊緣和表面構(gòu)造1 圓形、邊緣整齊、表面光滑；2圓形、邊緣整齊、表面有同心圓；3圓形、葉狀邊緣、表面有放射狀皺褶；4圓形、鋸齒狀邊緣、表面較不光滑；5不規(guī)則形、波浪狀邊緣、表面有不規(guī)則皺紋；6圓形、邊緣殘缺不全、表面呈顆粒狀；7毛狀 ；8根狀1 2 3 4 5 6 7 8圖4-14 菌落的隆起度1扁平狀； 2低

24、隆起；3隆起；4臺(tái)狀； 5臍狀；6紐扣狀；7乳頭狀；8褶皺凸面（1）大小 菌落的大小，規(guī)定用毫米（mm）表示，一般不足lmm者為露滴狀菌落； 12mm者為小菌落；24mm者為中等大菌落；46mm或更大者稱為大菌落或巨大菌落。（2）形狀 菌落的外形有圓形、不規(guī)則形、根足形、葡萄葉形。（3）邊緣 菌落邊緣有整齊、鋸齒狀、網(wǎng)狀、樹(shù)葉狀、蟲(chóng)蝕狀、放射狀等。（4）表面性狀 觀察其是否平滑、粗糙、皺襞狀、旋渦狀、荷包蛋狀，甚至有子菌落等。（5）隆起度 表面有隆起、輕度隆起、中央隆起，也有陷凹或堤狀者。（6）顏色及透明度 菌落有無(wú)色、灰白色，有的能產(chǎn)生各種色素；菌落是否有光澤，其透明度可分為透明、半透明及不透明。（7）硬