PPARα激動劑非諾貝特對肺癌A549細胞生長和侵襲轉移的影響及其機制

1、PPAR激動劑非諾貝特對肺癌A549 細胞生長和侵襲轉移的影響及其機制目的 : 觀察過氧化物酶體增殖因子激活受體 (PPAR) 激動劑非諾貝特對人肺癌 A549 細胞生長、侵襲轉移的影響, 探討 PPAR、基質金屬蛋白酶 (MMPs)及其組織抑制劑 (TIMPs) 在非諾貝特抗腫瘤作用中的意義。方法: 體外培養(yǎng)人肺癌A549細胞 , 用不同濃度 (0 、 12.5 、 25、50、75、100 mol/L) 非諾貝特干預細胞后 , 四甲基偶氮唑藍比色 (MTT)法檢測不同藥物濃度作用下肺癌 A549 細胞的生長抑制情況 ; 流式細胞儀檢測細胞凋亡率及細胞周期的分部情況 ;Hoechest 染色

2、法觀察 A549 細胞的形態(tài)學改變 ; 細胞劃痕實驗觀察 A549 細胞遷移運動能力的影響 ;Transwell 侵襲實驗檢測肺癌 A549細胞侵襲能力的變化 ; 提取 A549細胞總RNA及蛋白 ,RT-PCR檢測細胞中 PPAR、 MMP-2、MMP-9、 TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表達情況 ,Wertern blot檢測細胞中 MMP-2與 MMP-9蛋白的表達水平 ; 酶譜法檢測不同藥物濃度作用下細胞培養(yǎng)液中MMP-2、MMP-9的酶活性。結果 :1. 細胞增殖抑制率 : 與對照組相比 , 非諾貝特組 A549 細胞增殖抑制率增大 (P<0.05),且呈時間

3、- 劑量效應。 2. 細胞凋亡檢測 : 與對照組比較 , 非諾貝特能夠誘導肺癌A549 細胞凋亡 , 且高濃度組誘導凋亡作用更加明顯。3. 細胞周期的檢測 : 與對照組比較 , 非諾貝特組 G0/G1期 A549 細胞數(shù)目減少 ,G2/M 期的細胞數(shù)目增加 , 細胞阻滯于 G2/M期, 非諾貝特對 a549 細胞周期阻滯作用有時間 - 劑量關系。4.hoechst33258 染色觀察發(fā)現(xiàn)非諾貝特作用下肺癌 a549細胞體積縮小 , 部分細胞膜被裂解 , 核固縮 , 呈致密濃染 , 高濃度 (100 mol/l)組伴有凋亡小體出現(xiàn)。5. 細胞劃痕實驗顯示 : 作用 48 小時后 , 陰性對照組細

4、胞劃痕基本愈合, 隨著非諾貝特濃度的增加 , 劃痕寬度越大 , 各組細胞遷移率分別為 : 對照組 :(88.21 ±0.09)%,12.5 mol/l組 :(71.70 ± 0.47)%,25 mol/l組 :(48.23 ± 0.69)%,50 mol/l組:(30.45 ±0.53)%,75 mol/l組:(20.90 ±0.31)%,100 mol/l組 :(16.20 ± 0.29)%,(p<0.05) 。6.transwell 侵襲實驗結果顯示 : 陰性對照組有大量細胞穿過基底膜 , 藥物組有不同數(shù)量的細胞穿越

5、基底膜 , 各非諾貝特藥物組 (100 、75、50、25、12.5) 的侵襲抑制率分別為 :(65.78 ±0.58)%、(48.50 ± 0.23)%、(40.35± 0.19)%、(30.97±0.45)%、(23.10± 0.62)%,(p<0.05)。7.rt-pcr結果顯示: 與對照組相比, 非諾貝特處理48 小時后 , 隨著藥物濃度的增加a549 細胞中ppar 、timp-1、timp-2mrna的表達增加, 而mmp-2與mmp-9mrna的表達下降。 8.werternblot實驗顯示 : 用非諾貝特干預a549 細胞48小時后細胞中mmp-2與mmp-9蛋白的表達水平均下降。9. 酶譜法檢測進一步證實 : 非諾貝特干預肺癌 a549 細胞 , 能夠抑制 mmp-2與mmp-9酶活性 , 且隨著非諾貝特藥物濃度的增加, 其抑制作用增強。結論:1. 非諾貝特能夠抑制肺癌a549 細胞的生長、增殖 , 并誘導其凋亡。2. 非諾貝特能夠抑制肺癌 a549 細胞的遷移、侵襲能力。 3. 非諾貝特抑制肺癌 A549細胞生長及侵襲轉