黃芩苷地提取和分離純化

1、姓名：黃 冰專業(yè)：藥 化 學(xué)號(hào)：2111140006黃苓中黃苓苷的提取和精制、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握從黃苓中提取、精制黃苓苷的原理、方法及操作要點(diǎn)2掌握黃苓苷的結(jié)構(gòu)鑒定原理及方法。二、實(shí)驗(yàn)原理OHOH 0黃苓苷為一連有葡萄糖醛酸結(jié)構(gòu)的黃酮化合物，具有一定的脂溶性，所以在提取時(shí)可以選擇一定濃度的乙醇溶液 作為提取液。黃苓苷為葡萄糖醛酸苷,具有弱酸性，其可在堿性溶液 中溶解，形成鈉鹽，在提取液中加酸酸化，使黃苓苷游離析 出。利用黃苓苷能溶于堿，不溶于酸的性質(zhì)使之與酸性雜質(zhì)分離，進(jìn)行精制。本實(shí)驗(yàn)選用了 60%乙醇回流提取，酸沉、堿溶、酸沉的方 法進(jìn)行精制，并對精制品進(jìn)行了簡單的定性鑒別，沒有對照 品，所以沒

2、做定量實(shí)驗(yàn)。三、實(shí)驗(yàn)材料與儀器材料：黃苓干燥根， 硅膠G薄層層析板儀器：UV2550紫外可見分光光度計(jì)（日本島津），Spectrum 100 傅立葉紅外光譜儀，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），LXJ-H離心沉淀機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠），200g搖擺式高速中藥粉 碎機(jī)，電子天平，循環(huán)水式真空泵，抽濾裝置，圓底燒瓶（500ml）, 水浴鍋，冷凝管，索氏提取器，層析缸試劑：2mol/L鹽酸，60%乙醇，10%氫氧化鈉，乙酸乙酯，甲醇，甲酸四、實(shí)驗(yàn)步驟1黃苓苷的提取將黃苓干燥根粉碎，稱取粗粉100g,裝入1L的圓底燒瓶，加入4倍量即400ml的60%乙醇，攪拌均勻，90C回流提取 1h。提取完進(jìn)行抽

3、濾，將濾渣倒入圓底燒瓶中，加300ml 60%乙醇繼續(xù)回流30min，重復(fù)上一步再回流 30min。合并3次 濾液，65 C減壓濃縮至無醇味，將水液水浴加熱到80 C，用2mol/L的鹽酸調(diào) PH至12,保溫30min，室溫靜置 12h,沉 淀，2000r/min 離心2min，棄上清，向沉淀中加 10倍水量即700ml，攪拌均勻，加 10%氫氧化鈉調(diào) PH至7,靜置1h, 2000r/min離心2min，棄沉淀，將上清液加熱至 40 C，攪拌 均勻，加入等體積即700ml的60%乙醇，靜置1h，2000r/min 離心2min，棄沉淀，將上清液水浴加熱至 80C，用2mol/L 的鹽酸調(diào)PH

4、至12,保溫30min,室溫靜置1h,沉淀，離心， 棄上清液，得粗黃苓苷濕重 43g。2黃苓苷的精制向粗黃苓苷中加入 7倍水量即300ml，水浴加熱至70C, 10%氫氧化鈉調(diào)PH至7,完全溶解后，用2mol/L的鹽酸調(diào)PH至6,加乙醇至含醇量 70%,未出現(xiàn)明顯沉淀，所以沒過 濾，用2mol/L的鹽酸調(diào) PH至12, 70C保溫20min，靜置 過夜。次日，沉淀很少，又 80C保溫30min，離心，棄上清， 得精制品，向圓底燒瓶中加入約60倍量甲醇，將精制品裝入索氏提取器的濾紙中，加熱回流至提取液顏色很淺，趁熱 抽濾，濾液減壓濃縮一半，冷卻，靜置，結(jié)晶析出，靜置30min , 過濾，甲醇洗滌

5、，得黃苓苷再精制品。用40倍量甲醇加熱回流溶解，重復(fù)上述步驟可得黃苓苷重結(jié)晶。3黃苓苷的薄層層析吸附劑：硅膠 G薄層層析板，厚 0.250.3mm展開劑：乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(7: 2: 0.5 : 0.5 v/v/v )樣品配成合適濃度的甲醇液，用點(diǎn)樣毛細(xì)管點(diǎn)樣，每點(diǎn)一2mm層析次要等到干了才能點(diǎn)下次，點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑不大于缸用展開劑飽和20min后，將點(diǎn)樣板垂直放入層析缸，上行 展開，展層完畢后，取出，晾干，放在254nm紫外燈下觀察 4黃苓苷的紫外吸收圖譜取少量黃苓苷重結(jié)晶樣品于 50ml容量瓶中，加甲醇溶解 至顏色微黃，用紫外分光光度計(jì)在 200-400nm進(jìn)行紫外掃描 5黃苓苷的紅外

6、吸收圖譜精確稱取0.100g的溴化鉀，壓片測紅外作為背景，再精 確稱取0.100g的溴化鉀，加入極少量樣品一起研成細(xì)粉， 壓片，測紅外吸收圖譜。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1黃苓苷得率（ ）=M/ M x 100 %式中：M所得黃苓苷精品重量 M 0一提取時(shí)用黃苓的重量本實(shí)驗(yàn)中 M為0.132g , M為100g，所以收率為 0.132%。2薄層層析3紫外光譜I暫i 最人吸收波心的確定278nm與文獻(xiàn)由下圖可知在200-400nm內(nèi)最大吸收波長為 中（上圖）的標(biāo)準(zhǔn)品的最大吸收波長一致。4紅外光譜圖4*1黃茶蒂標(biāo)準(zhǔn)品的紅外褂圖黃苓苷紅外圖譜3339 cm-1，寬峰：-0H伸縮振動(dòng)3030 cm-1左右：苯環(huán)=C

7、H伸縮振動(dòng)2900 cm-1: C-H伸縮振動(dòng)1611、1575、1478、1450cm1 :苯環(huán)骨架振動(dòng)1736 cm-1 : C=Of申縮振動(dòng)（葡萄糖醛酸）1667cm1： C=O伸縮振動(dòng)（吡喃酮環(huán)）1363 cm-1 : C-O伸縮振動(dòng)1078 cm-1： C-O-C的對稱和不對稱伸縮振動(dòng)900690 cm-1多個(gè)吸收峰：苯環(huán)取代六、討論1由薄層板上的斑點(diǎn)可以看出雖然得到了一個(gè)比較明顯的 斑點(diǎn)，結(jié)合紫外圖譜應(yīng)該是黃苓苷，但是斑點(diǎn)上方有小淡 斑存在，證明得到的結(jié)晶不是很純。2紅外圖譜與文獻(xiàn)中標(biāo)準(zhǔn)品的圖譜大部分吻合，不一致的 原因可能是：黃苓產(chǎn)地不一樣；本實(shí)驗(yàn)中得到的黃苓苷純 度不咼。3本實(shí)

8、驗(yàn)中產(chǎn)率不高，原因可能有：粗粉未浸泡；靜置時(shí) 間短；調(diào)PH時(shí)溫度控制不好。4黃苓苷在一定溫度和濕度下能酶水解成黃苓素及葡萄糖 醛酸。黃苓素分子中具有臨三酚羥基，性質(zhì)不穩(wěn)定，在空氣 中易氧化成醌式結(jié)構(gòu)顯綠色。所以在儲(chǔ)藏及提取過程中應(yīng)注 意防止黃苓苷的酶解、氧化，以減少有效成分的破壞。5在用酸、堿進(jìn)行提取純化黃酮類化合物時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意溫 度和堿度都不宜過高，以免破壞黃酮類化合物的母核。酸化 時(shí)，酸度也不宜過高，否則酸會(huì)與黃酮類化合物生成鹽而溶 解。6黃苓苷在黃苓中以羧酸鹽存在，可以被溶劑溶出，傳統(tǒng)的提取方法以水做提取溶劑 ，但是黃苓苷只能微溶于熱水，而且，在水煎煮的過程中，引入了大量的水溶性雜質(zhì)。黃苓 苷為一連有葡萄糖醛酸結(jié)構(gòu)的黃酮化合物，具有一定的脂溶性，所以在提取時(shí)可以選擇一定濃度的乙醇溶液作為提 取液，不僅大大增加它的溶出率，并且可以抑制象鞣質(zhì)、蛋 白、粘液等高分子雜質(zhì)的溶出，便于過濾純化。文獻(xiàn)指出中 等濃度（50%