實(shí)驗(yàn)室常用技術(shù)參數(shù)資料_百度文庫(kù)

1、常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)用溶液的配制方法一 . 常用貯液與溶液1mol/L亞精胺(Spermidine : 溶解 2.55g 亞精胺于足量的水中,使終體積為 10ml 。分裝成小份貯存于 -20。1mol/L精胺(Spermine :溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使終體積為 10ml 。分裝成小份貯存于 -20。10mol/L乙酸胺(ammonium acetate :將 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白 (BSA:加 100mg 的牛血清蛋白(組分 V 或分子生物學(xué)試劑級(jí),無(wú) DNA 酶于 9.5ml 水中(為減少變性,

2、須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白,蓋好蓋后,輕輕搖動(dòng),直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到 10ml ,然后 分裝成小份貯存于 -20。1mol/L二硫蘇糖醇(DTT :在二硫蘇糖醇 5g 的原裝瓶中加 32.4ml 水,分成小份貯存于 -20?；蜣D(zhuǎn)移 100mg 的二硫蘇糖醇至微量離心管,加 0.65ml 的水配制成 1mol/L二硫蘇糖醇溶液。8mol/L乙酸鉀(potassium acetate :溶解 78.5g 乙酸鉀于足量的水中,加水定容到 100ml 。1mol/L氯化鉀(KCl :溶解 7.46g 氯化鉀于足量的水中,加水定容到 100ml 。3mol/L乙

3、酸鈉(sodium acetate :溶解 40.8g 的三水乙酸鈉于約 90ml 水中,用冰乙酸調(diào)溶液的 pH 至 5.2,再加水定容到 100ml 。0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液(0.5mol/L,混合后形成 EDTA 的三鈉鹽?；蚍Q取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O 和 20g 的 NaOH ,并溶于水中,定容至 1L 。1mol/L HEPES :將 23.8gHEPES 溶于約 90ml 的水中,用 NaOH 調(diào) pH (6.8-8.2,然后用水定容至 100ml 。1mol/L HCl :加 8.6ml 的濃鹽酸

4、至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPGT :溶解 250mg 的 IPGT (異丙基硫代 -D-半乳糖苷于 10ml 水中,分成小份貯存于 -20。1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl2·6H2O 于足量的水中,定容到 100ml 。100mmol/L PMSF :溶解 174mg 的 PMSF (苯甲基磺酰氟于足量的異丙醇中,定容到 10ml 。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于 -20。20mg/ml蛋白酶 K (proteinase K :將 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中,輕輕搖動(dòng),直至蛋白酶 K 完全溶解。不要渦旋混合。加水定容

5、 到 10ml ,然后分裝成小份貯存于 -20。10mg/mlRnase(無(wú) DNase (DNase -free RNase :溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0。溶解后 于水浴中煮沸 15min ,使 DNA 酶失活。用 1mol/L的 Tris -HCl 調(diào) pH 至 7.5,于 -20貯存。(配制過(guò)程中要戴手套5mol/L氯化鈉(NaCl :溶解 29.2g 氯化鈉于足量的水中,定容至 100ml 。 四 . 常用抗生素氨芐青霉素(ampicillin (100mg/ml溶解 1g 氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中,最后定容至

6、10ml 。分裝成小份于 -20貯存。常以 25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 羧芐青霉素(carbenicillin (50mg/ml溶解 0.5g 羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中,最后定容至 10ml 。分裝成小份于 -20貯存。常以 25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 甲氧西林(methicillin (100mg/ml溶解 1g 甲氧西林鈉于足量的水中, 最后定容至 10ml 。 分裝成小份于 -20貯存。 常以 37.5ug/ml終濃度與 100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng) 培養(yǎng)基?？敲顾?kanamycin (10mg/ml溶解 100

7、mg 卡那霉素于足量的水中,最后定容至 10ml 。分裝成小份于 -20貯存。常以 10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。氯霉素(chloramphenicol (25mg/ml溶解 250mg 氯霉素足量的無(wú)水乙醇中,最后定容至 10ml 。分裝成小份于 -20貯存。常以 12.5ug/ml25ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 鏈霉素(streptomycin (50mg/ml溶解 0.5g 鏈霉素硫酸鹽于足量的無(wú)水乙醇中, 最后定容至 10ml 。 分裝成小份于 -20貯存。 常以 10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 萘啶酮酸(nalidixic a

8、cid (5mg/ml溶解 50mg 萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中,最后定容至 10ml 。分裝成小份于 -20貯存。常以 15ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。四環(huán)素(tetracyyline (10mg/ml溶解 100mg 四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中,或者將無(wú)堿的四環(huán)素溶于無(wú)水乙醇,定容至 10ml 。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見(jiàn)光,于 -20貯存。常以 10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)室常用技術(shù)參數(shù)資料 見(jiàn)上述配制 30%丙烯酰胺的說(shuō)明, 40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列測(cè)定。3.放線菌素 D 溶液【配制方法】把 20mg 放線菌素 D 溶解于 4ml

9、 100%乙醇中, 1:10稀釋貯存液,用 100%乙醇作空白對(duì)照讀取 OD 440值。放線菌素 D (分子量為 1255 純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為 21, 900,故而 1mg/ml的放線菌素 D 溶液在 440nm 處的吸光值為 0.182,放線菌素 D 的貯存液應(yīng)放在包有 箔片的試管中,保存于 -20。【注意】放線菌素 D 是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時(shí)必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作,而不能在開(kāi)放在實(shí)驗(yàn)桌面上進(jìn)行,謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接 觸到眼睛或皮膚。藥廠提供的作治療用途的放線菌素 D 制品常含有糖或鹽等添加劑。 只要通過(guò)測(cè)量貯存液在 440nm 波長(zhǎng)處的光吸收確定放線菌素 D 的濃度

10、, 這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。4. 0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP 溶液【配制方法】在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP, 用 0.1mol/L NaOH 調(diào)至 pH 值至 7.0,用蒸餾水定容 1ml ,分裝成小份保存于 -705. 10mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中,加水定容至 1L 后過(guò)濾除菌。6. 10%過(guò)硫酸銨溶液【配制方法】把 1g 過(guò)硫酸銨溶解于終量為 10ml 的水溶液中,該溶液可在 4保存數(shù)周。7. BCIP 溶液【配制方法】把 0.5g 的 5-溴 -4-氯 -3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP 溶解于 10ml 1

11、00%的二甲基甲酰胺中,保存于 48. 2×BES 緩沖鹽溶液【配制方法】用總體積 90ml 的蒸餾水溶解 1.07g 鹽溶液 BESN, N-雙(2-羥乙基 -2-氨基乙磺酸 、 1.6g NaCl 和 0.027g Na 2HPO 4,室溫下用 HCl 調(diào)節(jié) 該溶液的 pH 值至 6.96、然后加入蒸餾水定容至 100ml ,用 0.22m濾器過(guò)濾除菌,分裝成小份,保存于 -20。9. 1mol/L CaCl 2溶液【配制方法】在 200ml 蒸餾水中溶解 54g CaCl 2·6H 2O ,用 0.22m濾器過(guò)濾除菌,分裝成 10ml 小份貯存于 -20?！咀⒁狻恐苽?/p>

12、感受態(tài)細(xì)胞時(shí),取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至 100ml ,用 Nalgene 濾器(0.45m孔徑過(guò)濾除菌,然后驟冷至 0。【配制方法】在 20ml 蒸餾水中溶解 13.5g CaCl 2·6H 2O ,用 0.22m濾器過(guò)濾除菌,分裝成 1ml 小份貯存于 -20。11. 1mol/L二硫蘇糖醇(DTT 溶液【配制方法】用 20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2溶解 3.09g DTT ,過(guò)濾除菌后分裝成 1ml 小份貯存于 -20?！咀⒁狻?在 100ml 水中加入 1g 溴化乙錠,磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其完全溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中,保存于室溫。【注

13、意】小心:溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度毒性,使用含有這種染料的溶液時(shí)務(wù)必戴上手套,稱量染料時(shí)要戴面罩。15. 2×HEPES 緩沖鹽溶液【配制方法】用總量為 90ml 的蒸餾水溶解 1.6g NaCl 、 0.074g KCl 、 0.027g Na 2PO 4·2H 2O 、 0.2g 葡聚糖和 1gHEPES ,用 0.5mol/l NaOH 調(diào)節(jié) pH 值至 7.05,再用蒸餾水定容至 100ml 。用 0.22m濾器過(guò)濾除菌,分裝成 5ml 小份,貯存于 -20。16. IPTG 溶液【配制方法】IPTG 為異丙基硫代 -D-半乳糖苷(分子量為 238.3,在 8ml

14、 蒸餾水中溶解 2g IPTG 后,用蒸餾水定容至 10ml ,用 0.22m濾器過(guò)濾除 菌,分裝成 1ml 小份貯存于 -20。17. 1mol/L乙酸鎂溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 214.46g 四水乙酸鎂,用水定容至 1L 過(guò)濾除菌。18. 1mol/L MgCl 2溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 203.4g MgCl 2·6H 2O ,用水定容至 1L ,分裝成小份并高壓滅菌備用。【注意】MgCl 2極易潮解,應(yīng)選購(gòu)小瓶(如 100g 試劑,啟用新瓶后勿長(zhǎng)期存放。19. -巰基乙醇(BME 溶液【配制方法】一般得到的是 14.4mol/L溶液,應(yīng)裝在

15、棕色瓶中保存于 4?！咀⒁狻緽ME 或含有 BME 的溶液不能高壓處理。20. NBT 溶液【配制方法】把 0.5g 氯化氮藍(lán)四唑溶解于 10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于 4。21.酚 /氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等體積混合后用 0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6抽提幾次以平衡這一混合物, 置棕色玻璃瓶中, 上面覆蓋等體積的 0.01mol/l Tris·HC l(pH7.6液層,保存于 4?！咀⒁狻糠痈g性很強(qiáng),并可引起嚴(yán)重灼傷,操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡,穿防護(hù)服。所有操作均應(yīng)在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行。與酚接觸過(guò)的部位皮膚應(yīng) 用大量的水清洗,并用肥皂和水洗

16、滌,忌用乙醇。22. 10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF 溶液【配制方法】用異丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg/ml(10mmol/L,分裝成小份貯存于 -20。如有必要可配成濃度高達(dá) 17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L。 【注意】PMSF 嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進(jìn)或通過(guò)皮膚吸收后有致命危險(xiǎn)。一旦眼睛或皮膚接觸了 PMSF ,應(yīng)立即用大量水沖 洗之。凡被 PMSF 污染的衣物應(yīng)予丟棄。PMSF 在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。 PMSF 在水溶液中的活性喪失速率隨 pH 值的升高而加快, 且 25的失活速率高于 4。 pH 值

17、為 8.0時(shí), 20mmol/l PMSF 水溶液的半壽期大約為 85min ,這表明將 PMSF 溶液調(diào)節(jié) 為堿性(pH>8.6 并在室溫放置數(shù)小時(shí)后,可安全地予以丟棄。23.磷酸鹽緩沖溶液(PBS 溶液【配制方法】在 800ml 蒸餾水中溶解 8g NaCl 、 0.2g KCl 、 1.44g Na 2HPO 4和 0.24g KH 2PO 4, 用 HCl 調(diào)節(jié) 溶液的 pH 值至 7.4加水定容至 1L ,在 15lbf /in2(1034×105Pa 高壓下蒸氣滅菌 20min 。保存于室溫?！九渲品椒ā繉?9.82g 乙酸鉀溶解于 90ml 純水中,用 2mol/

18、L乙酸調(diào)節(jié) pH 值至 7.5后加入純水定容到 1L ,保存于 -20。25.乙酸鉀溶液(用于堿裂解【配制方法】在 60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml 水,即成鉀濃度為 3mol/L而乙酸根濃度為 5mol/L的溶液?！九渲品椒ā吭?80ml 水中溶解 408.1g 三水乙酸鈉,用冰乙酸調(diào)節(jié) pH 值至 5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié) pH 值至 7.0,加水定容到 1L ,分裝后高壓滅菌。 27. 5mol/L NaCl 溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 292.2g NaCl 加水定容至 1L ,分裝后高壓滅菌。28. 10%十二烷基硫酸鈉(SDS

19、溶液【配制方法】在 900ml 水中溶解 100g 電泳級(jí) SDS ,加熱至 68助溶,加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié) 溶液的 pH 值至 7.2,加水定容至 1L ,分裝備用?！咀⒁狻縎DS 的微細(xì)晶粒易擴(kuò)散,因此稱量時(shí)要戴面罩,稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的 SDS , 10%SDS溶液無(wú)須滅菌。29. 20×SSC 溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 175.3g NaCl 和 88.2g 檸檬酸鈉,加入數(shù)滴 10mol/l NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.0,加水定容至 1L ,分裝后高壓滅菌。 30. 20×SSPE 溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 17.5g NaCl 、 27.6g NaH 2PO 4·H 2O 和 7.4g EDTA ,用 NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.4(約需 6.5ml 10ml/L NaOH ,加 水定容至 1L ,分裝后高壓滅菌。31. 100%三氯乙酸溶液【配制方法】在裝有 500g TCA 的瓶中加入 227ml 水,形成的溶液含有 100%(M/V TCA 。32. 1m