凋亡抑制因子Survivin在腎癌中的表達(dá)及意義

1、凋亡抑制因子Survivin在腎癌中的表達(dá)及意義 08-07-12 11:10:00 編輯：studa20 作者：焉杰克，徐忠華，王洪偉，田 川，劉雙德，徐東升，劉曉立【摘要】 目的 探討新的凋亡相關(guān)基因Survivin蛋白在人腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義。方法 采用免疫組化SABC法分別測(cè)定52例腎細(xì)胞癌組織和10例正常腎組織中Survivin蛋白的表達(dá)，并分析其與腎癌臨床、病理因素的關(guān)系。結(jié)果 Survivin蛋白在腎癌組織中表達(dá)，陽(yáng)性率為92.31%(48/52)，其中弱陽(yáng)性為19例，中等陽(yáng)性為12例，強(qiáng)陽(yáng)性17例，而正常組織中未見(jiàn)表達(dá)，二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。腎癌中Survivi

2、n蛋白的表達(dá)與患者有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腎癌的病理分級(jí)呈正相關(guān)(P0.05)，而和腎癌患者的年齡、性別、腫瘤大小及有無(wú)下腔靜脈癌栓、腎癌患者的Robson分期及腫瘤的病理類型無(wú)顯著相關(guān)性。結(jié)論 腎癌的分化程度越低，越容易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，則Survivin陽(yáng)性表達(dá)率越高，提示檢測(cè)腎癌中Survivin蛋白的表達(dá)，可作為腎癌診斷的靈敏、特異的指標(biāo)，并有助于腎癌的預(yù)后評(píng)估。 【關(guān)鍵詞】 腎癌；Survivin；免疫組織化學(xué) Expression and significance of the inhibitor of apoptosis, Survivin, in renal cell carcinoma

3、s ABSTRACT: Objective To investigate the expression and the clinical significance of survivin proteins in tissues of renal cell carcinoma (RCC). Methods Expression of survivin proteins were detected by immunohistochemical technique in tissues of 52 cases of renal cell carcinoma and 10 cases of norma

4、l kidney. Results Survivin was undetectable in all normal renal tissue, while it was expressed in 92.31% (48/52) of the RCC. In RCC, there was significant correlation between the expression of survivin and lymph node status, but no association between the expression and some clinical characters, inc

5、luding patient age, sex, tumor size and carcinomatous embolus status in inferior vena cava. There was significant relation between the expression of survivin and the pathologic features(P0.05). No significant difference was observed between the expression of survivin and the clinical stage in RCC. T

6、he type of pathology of RCC was not correlated with the expression of survivin. Conclusion These results suggest that the expression of survivin may be upregulated during the development of human renal cell carcinoma. Therefore, survivin might be a useful criterion to propose the diagnosis of RCC. K

7、EY WORDS: renal cell carcinoma (RCC); survivin; immunohistochemistry 我們采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)腎癌組織中Survivin蛋白的表達(dá)，并結(jié)合臨床病理特征進(jìn)行分析，以探討Survivin在腎癌組織中的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義。 1 材料與方法 1.1 臨床資料 本組52例患者標(biāo)本(年齡35-74歲，平均55歲)取自山東大學(xué)齊魯醫(yī)院和山東大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科2002年11月-2005年3月經(jīng)手術(shù)切除的腎臟腫瘤，均經(jīng)病理證實(shí)，診斷明確、術(shù)前未經(jīng)放療、化療，且保存完好。10例腎臟良性病變切除的腎組織作為正常對(duì)照。所有標(biāo)本均經(jīng)10%(

8、體積分?jǐn)?shù))甲醛溶液固定48h，常規(guī)石蠟包埋。腫瘤標(biāo)本病理分級(jí)按WHO的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，G1級(jí)10例，G2級(jí)30例，G3級(jí)12例；根據(jù)Robson分期，期14例，期16例，期18例，期4例。 1.2 檢測(cè)方法 采用高敏SABC免疫組織化學(xué)染色技術(shù)。一抗為兔抗人Survivin多克隆抗體(120)，二抗為羊抗兔IgG(1120)。以上抗體及試劑盒分別購(gòu)自Santa Cruz公司及北京中山生物工程公司等。以該公司提供的陽(yáng)性片做陽(yáng)性對(duì)照，以PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照。 1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)1 Survivin陽(yáng)性染色呈棕黃色，主要定位于細(xì)胞漿。雙盲閱片，2010倍顯微鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)視野， 按陽(yáng)性細(xì)胞比

9、例分為：0級(jí)，無(wú)棕黃色顆粒出現(xiàn)或染色范圍75%。按染色強(qiáng)度分為：0級(jí)，無(wú)棕黃色顆粒出現(xiàn)；1級(jí)，可辨認(rèn)的淡黃色；2級(jí)，亮黃色；3級(jí)，棕黃色。將每張切片的染色強(qiáng)度和陽(yáng)性范圍的分相加分為：-，0、1；+，2、3；，4、5；，6、7。 1.4 統(tǒng)計(jì)分析 所有資料采用CS10.32統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，應(yīng)用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)中spearman等級(jí)相關(guān)、卡方檢驗(yàn)及Fishers精確概率法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P0.05為差異有顯著性意義。 2 結(jié) 果 Survivin蛋白在腎癌組織中表達(dá)(圖1)，而正常組織中未見(jiàn)表達(dá)(圖2)。腎癌組織中的陽(yáng)性染色呈棕黃色顆粒，主要定位于癌細(xì)胞漿，少部分癌細(xì)胞胞核亦有染色反應(yīng)，陽(yáng)性率為92.31%

10、(48/52)。其中弱陽(yáng)性為19例，中等陽(yáng)性為12例，強(qiáng)陽(yáng)性17例。統(tǒng)計(jì)分析表明腎癌組織中Survivin的表達(dá)率顯著高于正常對(duì)照組，兩者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P0.05)(表1)。腎癌的病理分級(jí)越高，Survivin的表達(dá)率越強(qiáng)(P0.05)。 圖1 腎癌組織中Survivin的陽(yáng)性表達(dá) (200)3 討 論 腎癌的發(fā)生不僅與腫瘤細(xì)胞的增殖，而且與其凋亡有密切關(guān)系。研究表明，與凋亡相關(guān)的P16、Rb、Cmyc等因子與腎癌的發(fā)生有密切關(guān)系2。本實(shí)驗(yàn) 圖2 正常腎組織中Survivin的陰性表達(dá) (100)表1 52例腎癌患者Surviv

11、in表達(dá)與臨床病理特征指標(biāo)的關(guān)系表2 腎癌患者的病理分級(jí)與Survivin表達(dá)的關(guān)系從另一個(gè)抑癌基因Survivin來(lái)探討腎癌的發(fā)生發(fā)展。Survivin是1997年由美國(guó)的Ambrosini等發(fā)現(xiàn)的一種新的抗細(xì)胞凋亡因子3，是凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis protein, IAP)家族的新成員，是迄今為止最小的hIAP蛋白。在調(diào)控細(xì)胞周期和抑制細(xì)胞凋亡中起重要作用，主要表達(dá)于細(xì)胞的G2/M期，Survivin通過(guò)直接與caspase3和caspase7結(jié)合而抑制多聚ADP核糖聚合酶(poly ADPribosepolymerase，PARP)裂解來(lái)阻斷凋亡過(guò)

12、程4。另外，Survivin也可通過(guò)阻止p21間接抑制Caspase3的活化,從而抑制細(xì)胞凋亡5。 Survivin蛋白的組織分布與其他細(xì)胞因子有著顯著的不同。Survivin基因在胚胎發(fā)育時(shí)期廣泛表達(dá)，而在成人正常分化的組織中除了胸腺等少數(shù)組織外極少表達(dá)，即使在正常情況下增生比較活躍的組織如皮膚鱗狀上皮的基底細(xì)胞層細(xì)胞、骨髓組織和淋巴結(jié)也不能檢測(cè)出。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示92.31%的腎癌組織中可發(fā)現(xiàn)不同程度的Survivin陽(yáng)性表達(dá)，而在10例來(lái)自腎臟良性病變切除標(biāo)本的正常對(duì)照中，都未檢測(cè)出Survivin蛋白，這說(shuō)明Surivivin蛋白在腎癌組織有高度選擇性表達(dá)的特性，可能是參與腎癌發(fā)生的機(jī)制之一。Lehner等 6報(bào)道45例不同期膀胱癌中Survivin染色陽(yáng)性26例，而正常膀胱黏膜、良性膀胱腫瘤、膀胱癌前病變標(biāo)本Survivin染色均為陰性。高分化組膀胱移行細(xì)胞癌中Survivin表達(dá)低于低分化組。Survivin蛋白表達(dá)陰性的膀胱移行細(xì)胞癌期病例首次復(fù)發(fā)時(shí)間為20-50個(gè)月，Survivin蛋白表達(dá)陽(yáng)性者為6-18個(gè)月，兩者相比差異有顯著性，因而Survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)是膀胱移行細(xì)胞癌復(fù)發(fā)的高危因素。Survivin獨(dú)特的表達(dá)特點(diǎn)，使之可被應(yīng)用于腫瘤的預(yù)測(cè)。另一方面，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也說(shuō)明Survivin可能不參與正常腎組織細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)。在正常機(jī)體中Survivin基因是失