注射液有關(guān)物質(zhì)及含量測定方法學驗證方案

1、注射用XX有關(guān)物質(zhì)及含量測定方法學驗證方案樣品：自制XX供試品：批號：市售品：進口 XX 批號： 國產(chǎn)XX 批號： 對照品：XX對照品：自制，批號： xxxxxx , XX含量：51.27% 水分：1.34%A對照品：來源：批號：B對照品：來源：批號：C對照品：來源：批號：1、方法驗證 注射用XX是以XX為原料通過復溶并重新凍干獲得，制品期間未加入任何輔料，同時注射用XX有關(guān)物質(zhì)及含量測定方法與原料測定方法完全一致，因此注射用 XX有關(guān)物質(zhì)及含量測定方法 學驗證可與XX原料方法學一致，此次方法學驗證使用的樣品用原料（批號： xxxxxx ）代替。 2、檢測方法含量測定照高效液相色譜法（中國藥典

2、 2015年版四部通則0512）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水相-甲醇-乙睛（800:160:16）為流動相；柱溫：30C；檢測波長為 260nm。取對照品溶液作為系統(tǒng)適用性試驗溶液，量取 20 M注入液相色譜儀，各雜質(zhì)峰之間及主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應(yīng)符合規(guī)定，理論板數(shù) 按XX峰計算應(yīng)不低于 3000。測定法 取本品適量，精密稱定，加水溶解制成每1ml中約含XX 0.2mg的溶液，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液 20小 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取 XX對照品適量，同法測 定。按外標法以峰面積計算，按無水物計算，含 XX陽離子應(yīng)為 50.0

3、%54.0%。有關(guān)物質(zhì)照高效液相色譜法（中國藥典 2015年版四部通則0512）測定。取本品，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX 0.5mg的溶液，作為供試品溶液；另分別取A、B、XX、C對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量制成每 1ml中約含A 2.5 g B 2.5 g、 XX5.0聞、C 5.0 g的混合溶液，作為對照品溶液。取對照品溶液 20 口，注入液相色譜儀，出峰順 序依次為A、B、XX、C,調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%30%;再精密量取對照品溶液和供試品溶液各20出分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的6倍。供試品溶液色譜圖中如顯

4、雜質(zhì)峰，按外標法以峰面積計算，A峰面積不得大于對照品溶液中A的主峰面積（0.5%）, B峰面積不得大于對照品溶液中B的主峰面積（0.5%）, C峰面積不得大于對照品溶液中 C的峰面積（1.0%）,其它單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照品溶液中XX主峰面積的0.1倍（0.1%）,其它雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照品溶液中XX主峰面積的0.5倍（0.5%）。3、方法學驗證項目采用自制品（批號：xxxxxx ）按照確定的檢測方法進行詳細的方法學驗證。項目驗證要求專屬性（1）空白溶劑水應(yīng)不十擾測定；供試品溶液色諳圖中主成分峰與對照品溶液色諳 圖中主成分峰保留時間應(yīng)一致；系統(tǒng)適用性溶液中各成分峰保留時間與其單 獨進

5、樣的保留時間基本一致，各已知雜質(zhì)峰之間、主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之 間分離度均應(yīng)大于 2.0,主成分峰理論板數(shù)應(yīng) 3000專屬性（2）供試品破壞試驗（包括酸破壞試驗，堿破壞試驗，氧化破壞試驗，高溫破壞試驗，光 照破壞試驗）中主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)能完全分離，主成分峰純度因子應(yīng)大于980，物料基本守恒，破壞前后峰面積和基本一致。系統(tǒng)適用性（1）有美物質(zhì)方法學配制6份相同濃度的雜質(zhì)對照品混合溶液（系統(tǒng)適用性試驗溶液）進行分析，各雜質(zhì)峰峰面積的 RSD應(yīng)W2.0%保留時間的 RSD應(yīng)W1.0%主峰拖尾因子應(yīng)不大于2.0,理論板數(shù)應(yīng)3000各已知雜質(zhì)峰與相鄰峰分離度應(yīng)2.0系統(tǒng)適用性（2） 含量測定方法學

6、配制6份相同濃度的0.2mg/ml對照品溶液進行分析，主峰峰面積的RSD應(yīng) 2.0%主峰保留時間的 RSD應(yīng)w 1.0%主峰拖尾因子應(yīng) & 2.0主峰的理論板 數(shù)應(yīng)3000線性與范圍（1）有美物質(zhì)方法學A在定量限-200%限度（定量限-5.0 g g/m®濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對照品溶液，分 別測定主峰面積，以濃度（C）為橫坐標，以相應(yīng)的 峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸分析。B在定量限-200%限度（定量限-5科g/ml的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對照品溶液，分別測定 主峰面積，以濃度C）為橫坐標，以相應(yīng)的峰面積（A） 為縱坐標，進行線性回歸分析。XX

7、在定量限-200%限度（定量限-10科g/m的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對照品溶液，分別測 定主峰面積，以濃度 C）為橫坐標，以相應(yīng)的峰面積 （A）為縱坐標，進行線性回歸分析。C在定量限-200%限度（定量限-10 g g/m的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對照品溶液，分別測 定主峰面積，以濃度（C）為橫坐標，以相應(yīng)的峰面 積（A）為縱坐標，進行線性回歸分析?？山邮軜藴剩夯貧w方程的相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng)0.990 丫軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值白2 25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的 RSD應(yīng)W10%線性與范圍（2） 含量測定方法學在50%-300% （0.1mg/ml-0.6mg/ml ）的濃度范圍

8、內(nèi)配制 5份濃度不同的對照品 溶液，分別測定主峰面積，以濃度（C）為橫坐標，以 相應(yīng)的峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸分析?；貧w方程的相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng)0.993 Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的 RSD應(yīng)W2.0%檢測限LOD主峰與噪音峰信號比 3時的各已知雜質(zhì)和主成分對照品溶液濃度（量）。定量限LOQ主峰與噪音峰信號比 10時的各已知雜質(zhì)和主成分對照品溶液濃度（量）；配制6份各已知雜質(zhì)和主成分定量限濃度溶液，所測6份溶液各已知雜質(zhì)和主成分主峰保留時間的 RSD應(yīng)詞,所測6份各已知雜質(zhì)和主成分溶液主峰面 積的RSD應(yīng)磴。精密度（1）有美物質(zhì)方法學包括重復性和中間精密度。重復

9、性：配制6份同一濃度（相當于 100%濃度水平）的供試品溶液，由 1人在盡可能相同的條件下進行雜質(zhì)含量測定，所得6份雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)0 2%中間精密度：配制 6份相同濃度供試品溶液，由另一分析人員用另一臺儀器十/、同日期進行雜質(zhì)含量測定，所得12份雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)w 2%精密度（2）含量測定方法學包括重復性和中間精密度。重復性：配制6份相同濃度的供13t品溶液，由 1人在盡可能相同的條件下進行含量測定，所得 6份含量數(shù)據(jù)的RSD應(yīng)w 1%中間精密度：配制 6份相同濃度供試品溶液，由另 1人用另一臺儀器進行含量測定，所得12份含量數(shù)據(jù)的RSD應(yīng)W1%準確度（1）有美物質(zhì)方法學分別

10、配制含已知雜質(zhì)濃度為各自限度濃度50%、100%、150%的供試品溶液各3份，分別測定已知雜質(zhì)含量，將實測值與理論值比較，計算回收率，各濃度下的平均回收率均應(yīng)在 92%-105%, 9個回收率數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)W10%準確度（2）含量測定方法學分別配制含 XX濃度為80%、100%、120%的供試品溶液各3份，分別測定含量，將實測值與理論值比較，計算回收率，各濃”的平均回收率均應(yīng)在98%-101% , 9個回收率數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)W2.0%耐用性（1）（濃 0.5mg/ml）有美物質(zhì)方法學溶液穩(wěn)定性：供試品溶液分別在室溫和冰箱冷藏室（4C）中放置12h,分別在0、4、8、12h測定雜質(zhì)含量，各已知

11、雜質(zhì)含量的絕對值在10.1%以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報告限度的雜質(zhì)視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。流速耐用性：供試品溶液在 0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達到基線分離，各雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與1.0ml/min測定數(shù)值相比變化 值在M.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。柱溫耐用性：供試品溶液在 25C、30C、35c條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與30c測定數(shù)

12、值相比變化值在 3.1%以內(nèi)，視為耐 用性好，否則為不好。流動相pH值耐用性：供試品溶液在 pH值為3.3、3.5、3.7條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的RSD應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與 pH3.5測定數(shù)值相比變化值在 10.1%以內(nèi)， 視為耐用性好，否則為不好。流動相比例耐用性：供試品溶液在流動相（水相：甲醇：乙睛）比例分別為750: 200: 20; 800:160: 16; 850: 120: 12條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大 于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差

13、 應(yīng)不大于20%,雜質(zhì)含量與800: 160: 16測定數(shù)值相比變化值在 10.1%以內(nèi) 視為耐用性好，否則為不好。耐用性（2）（濃度0.2mg/ml ）含量測定方法學溶液穩(wěn)定性：供試品溶液分別在室溫和冰箱冷藏室（4C）中放置12h,分別在0、4、8、12h測定含量，與0時比較，各放置時間含量變化的絕對值不大于2.0%,視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。流速耐用性：供試品溶液在 0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測定含量，主峰的拖尾因子應(yīng)不大于 2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)達到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應(yīng)不大于 2.0%視為耐用性好，否則為不好。柱溫耐用性：供試品溶

14、液在 25C、30C、35c條件下測定，主峰的拖尾因子應(yīng)不大于2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)達到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。流動相pH值耐用性：供試品溶液在 pH值為3.3、3.5、3.7條件下測定，主峰的拖尾因子應(yīng)不大于2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)達到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。流動相比例耐用性：供試品溶液在流動相（水相：甲醇：乙睛）比例分別為750: 200: 20; 800:160: 16; 850: 120: 12條件下測定，主峰的拖尾因子應(yīng)不大于 2.0,主峰與 相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)達到基線分離，含量數(shù)據(jù)的

15、相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。4.1溶液配制A對照品儲備液：精密稱取 A對照品適量，加水稀釋制成約0.1mg/ml的對照品儲備液B對照品儲備液：精密稱取B對照品適量，加水稀釋制成0.1mg/ml的對照品儲備液。有關(guān)物質(zhì)檢查XX對照品儲備液：精密稱取XX對照品適量，加水稀釋制成約 0.5mg/ml的對照 品儲備液。C對照品儲備液：精密稱取C對照品適量，力口水稀釋制成約0.2mg/ml的對照品儲備液。A雜質(zhì)定位溶液：精密量取A對照品儲備液適量，加水稀釋制成約2.5科g/m對照品溶液。B雜質(zhì)定位溶液：精密量取B對照品儲備液適量，加水稀釋制成約2.5g/ml溶液。5.0g/ml

16、j溶液XX定位溶液：精密量取 XX對照品儲備液適量，加水稀釋制成約C雜質(zhì)定位溶液：精密量取C對照品儲備液適量，加水稀釋制成約5.0 g/m溶液B對照品儲備液、XX對照品雜質(zhì)對照品溶液（系統(tǒng)適用性溶液）：精密量取A對照品儲備液、儲備?C對照品儲備液適量，加水稀釋制成含A約2.5科g/m,l B約2.5科g/m,l XX約5.0科g/ml C約5.0科g/m的混合溶液，同時作為系統(tǒng)適用性溶液。含量測定對照品儲備液：精密量取XX對照品（批號xxxxxx）適量，加水溶解并稀釋制成約含 XX1.0mg/ml的溶液。供試品儲備液：精密稱取 XX （批號xxxxxx、市售樣品1批號xxxxxx、市售樣品2批

17、號xxxxxx） 樣品適量，加水溶解稀釋制成約含XX 5.0mg/ml的溶液。供試品溶液（1）:精密稱取各來源 XX樣品適量，加水溶解稀釋制成約含XX 0.5mg/ml的溶液作為供試品溶液（有關(guān)物質(zhì)檢測）。供試品溶液（2）：精密稱取各來源 XX樣品適量，加水溶解稀釋制成約含XX 0.2mg/ml的溶液作為供試品溶液（含量測定）。對照品溶液：精密量取XX對照品（批號xxxxxx）適量，加水溶解并稀釋制成約含XX 0.2mg/ml的溶液（含量測定）。4.2方法學驗證4.2.1 專屬性（1）（1）空白溶劑干擾試驗：取水溶液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，在主成分峰及各已知雜質(zhì)峰位置應(yīng)不出現(xiàn)色譜

18、峰，以此確定空白溶劑無干擾。(2)雜質(zhì)定位試驗(DAD檢測器)精密量取A雜質(zhì)定位溶液、B雜質(zhì)定位溶液、C雜質(zhì)定位溶液、XX定位溶液、雜質(zhì)對照品溶液各203，依次注入色譜儀中，記錄色譜圖。雜質(zhì)對照溶液中理論板數(shù)按XX峰計算應(yīng)3000各雜質(zhì)峰之間及主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應(yīng)符合規(guī)定，各已知雜質(zhì)定位溶液保留時間與雜質(zhì)對照品溶液各峰保留時間應(yīng)一致，各雜質(zhì)對照峰純度因子應(yīng)大于980。(3)供試品溶液與對照品溶液對比試驗( DAD檢測器)精密量取XX自制供試品溶液(1),供試品溶液(2)和對照品溶液(0.2mg/ml)各20dl分別 注入色譜儀中，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中主成分峰與對照品溶液

19、色譜圖中主成分峰保留時間應(yīng)一致，主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)能完全分離，主成分峰的純度因子應(yīng)大于980。專屬性(1)試驗結(jié)果名稱雜質(zhì)定位溶液雜質(zhì)對照溶液主峰保留時間(min)主峰保留時間(min)理論板數(shù)與相鄰雜質(zhì)峰 之間分離度純度因子ABCXX樣品主峰保留時間(min)理論板數(shù)與相鄰雜質(zhì)峰之 間分離度純度因子對照品溶液(0.2mg/ml )供試品溶液(1)-自制品 (0.5mg/ml)供試品溶液(2)-自制品 (0.2mg/ml)可接受標準空白溶劑應(yīng)不干擾測定；供試品溶液色譜圖中主成分峰與對照品溶液色譜圖中主成分峰保留時間應(yīng)一致，各已知雜質(zhì)峰之間、主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間分離度均應(yīng)大于2.0,理論

20、板數(shù)按 XX計算應(yīng)3000各已知雜質(zhì)及主成分峰純度因子均應(yīng)大于980。4.2.2 專屬性(2)強制降解試驗4.2.2.1 未破壞樣品有關(guān)物質(zhì)檢測(DAD檢測器)6 / 20以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應(yīng)不干擾檢測。分別精密量取供試品儲備液各1ml,分別置于3個10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，精密量取20 d注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，列表總結(jié)雜質(zhì)情況，并對比自家樣品與市售品的質(zhì)量。4.2.2.2 氧化破壞(DAD檢測器)(1)氧化破壞空白試驗量取1ml30%過氧化氫置于10ml量瓶中，在室溫放置 48h后，加水定容至刻度，精密量取此溶 液20dl注入液相色譜

21、儀中，記錄色譜圖。(2)分別量取3個供試品儲備液各 1ml置10ml容量瓶中，加入1ml30%過氧化氫，在室溫放置 48h后，加水定容至刻度，分別精密量取此溶液20 d注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計3個供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個數(shù)及所占比例情況，列表進行對比分析。4.2.2.3 堿破壞試驗(DAD檢測器)(1)堿破壞空白試驗量取1ml0.05mol/L氫氧化鈉溶?夜,置于 10ml量瓶中，在室溫放置 1h后，力口 1ml 0.05mol/l HCl 溶液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。(2)分別量取3個供試品儲備液各1ml

22、置10ml容量瓶中，加入1ml0.05mol/L氫氧化鈉溶液，在 室溫放置1h后，加1ml 0.05mol/l HCl溶液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20 dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計3個供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個數(shù)及所占比例情況，列表進行對比分析。4.2.2.4 酸破壞13t驗(DAD檢測器)(1)酸破壞空白試驗量取1ml1mol/LHCL溶液，置于10ml量瓶中，在室溫放置 24 h后，力口 1ml 1mol/L氫氧化鈉溶 液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。(2)分別量取3個供試品儲備液各1ml置10ml容量瓶

23、中，加入1ml1mol/LHCL溶液，在室溫放 置24 h后，力口 1ml 1mol/L NaOH溶液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20"注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計3個供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個數(shù)及所占比例情況，列表進行對比分析。4.2.2.5 高溫破壞試驗(DAD檢測器)(1)高溫破壞空白試驗以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應(yīng)不干擾檢測。(2)量取3個供試品儲備液各 1ml置10ml容量并S中，加水定容，在50c恒溫放置2h后，精密量取 此溶液20科注入液相色譜儀中， 記錄色譜圖，計算樣品破壞前后的總峰面積比值、

24、統(tǒng)at 3個供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個數(shù)及所占比例情況，列表進行對比分析。4.2.2.6 光照破壞試驗（DAD檢測器）（1）光照破壞空白試驗以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應(yīng)不干擾檢測。（2）分別量取3個供試品溶液于光強為 4500Lux （最高光強），室溫放置48h后，精密量取此溶 液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計3個供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個數(shù)及所占比例情況，列表進行對比分析。可接受標準：1 .各降解條件空白試驗不干擾測定。2 .主峰純度因子應(yīng)大于 980,主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度應(yīng)R2.0。3 .破壞前后物質(zhì)應(yīng)守恒：破壞

25、前后的總峰面積比應(yīng)在90.0-110.0%范圍內(nèi)。4 .自家產(chǎn)品破壞后雜質(zhì)個數(shù)及雜質(zhì)總量不應(yīng)多于其他兩種對比樣品。4.2.3 系統(tǒng)適用性試驗（1）（有關(guān)物質(zhì)）（1）做空白溶劑干擾試驗以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應(yīng)不干擾檢測。（2）配制6份相同濃度的雜質(zhì)對照品溶液， 分別精密量取20 d注入液相色譜儀中， 記錄色譜圖， 各雜質(zhì)峰峰面積的 RSD應(yīng)W2.0%保留時間的 RSD應(yīng)W1.0%主峰拖尾因子應(yīng)不大于 2.0,理論板 數(shù)應(yīng)>3000各已知雜質(zhì)峰與相鄰峰分離度應(yīng) >2.04.2.4 系統(tǒng)適用性試驗（2）（含量測定）（1）做空白溶劑干擾試驗以水為空白

26、：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應(yīng)不干擾檢測。（2）配制6份相同濃度的0.2mg/ml對照品溶液，分別精密量取20 d注入液相色譜儀中，記錄色 譜圖，主峰峰面積的 RSD應(yīng)W2.0%主峰保留時間的 RSD應(yīng)W1.0%主峰拖尾因子應(yīng) <2.0主峰的 理論板數(shù)應(yīng)R3000主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度應(yīng) >2.04.2.5 檢測限分別量取各已知雜質(zhì)和主成分對照品儲備液，加水逐步稀釋成一定濃度的溶液，精密量取20 M注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，信噪比約為3: 1時的各成分濃度及進樣量，為檢測限濃度及量。4.2.6 定量限分別量取各已知雜質(zhì)和主成分對照品溶液，加水逐步稀釋成一

27、定濃度的溶液，精密量取20 d注入液相色譜儀中， 記錄色譜圖，信噪比約為10: 1時的各成分濃度及進樣量，為定量限濃度及量。分別配制6份各已知雜質(zhì)和主成分的定量限濃度溶液，分別精密量取203注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，所測6份各已知雜質(zhì)和主成分的定量限溶液主峰的保留時間的RSD應(yīng)=1%,所測6份各已知雜質(zhì)和主成分溶液主峰面積的RSD應(yīng)您%。4.2.7 線性與范圍（1）（有關(guān)物質(zhì)）4.2.7.1 A線性與范圍(儲備液濃度為0.1mg/ml)精密量取A對照品儲備液適量配制成定量限濃度、1ml (40%)、2ml (80%)、2.5ml (100%)、3ml (120%)、4ml (160%)、5

28、ml(200%),分別置100ml容量瓶中，置于100ml量瓶中，加水稀釋至 刻度。分別精密量取 20dL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以 A濃度(C, mg/ml)為橫坐標，以 峰面積(A)為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程的相關(guān)系數(shù)( R)應(yīng)0.9如，Y軸截距應(yīng)在100% 響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的 RSD應(yīng)W10%結(jié)果見下表。A線性與范圍試驗結(jié)果表濃度（C, mg/ml）峰面積(A)響應(yīng)因子(A/C )響應(yīng)因子RSD%應(yīng)司0%Y軸截距/100%響應(yīng)值應(yīng) <25%回歸方程A=KC+b相關(guān)系數(shù)(R2)應(yīng) 0.9904.2.7.2 B線性與范圍(儲備液濃度為0.1mg/ml)精密量取B

29、對照品儲備液適量配制成定量限溶液、1ml (40%)、2ml (80%)、2.5ml (100%)、3ml (120%)、4ml (160%)、5ml(200%),置于100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。分別精密量取 20 dL 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以 B濃度(C, mg/ml)為橫坐標，以峰面積(A)為縱坐標，進 行線性回歸，回歸方程的相關(guān)系數(shù)(R)應(yīng)0.90, Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的RSD應(yīng)40%。結(jié)果見下表。B線性與范圍試驗結(jié)果表濃度（C, mg/ml）峰面積(A)響應(yīng)因子(A/C )響應(yīng)因子RSD%應(yīng)司0%Y軸截距/100%響應(yīng)值應(yīng) <25%回

30、歸方程A=KC+b相關(guān)系數(shù)(R2)應(yīng) 0.9904.2.7.3 XX線性與范圍(有關(guān)物質(zhì)檢查對照品儲備液濃度為0.5mg/ml)精密量取XX對照品儲備液適量配制成定量限溶液、0.4ml (40%)、0.8ml (80%)、1ml (100%)、1.2ml (120%)、1.6ml (160%)、2ml(200%),置于100ml量瓶中,加水稀釋至刻度。分別精密量取20dL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以 XX濃度(C, mg/ml)為橫坐標，以峰面積(A)為縱坐 標，進行線性回歸，回歸方程的相關(guān)系數(shù)( R)應(yīng)0.90 丫軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的RSD應(yīng)得0.0%。結(jié)果見

31、下表。XX線性與范圍試驗結(jié)果表濃度（C, mg/ml）峰面積（A）響應(yīng)因子（A/C ）響應(yīng)因子RSD%應(yīng)司0%Y軸截距/100%響應(yīng)值應(yīng) <25%回歸方程A=KC+b相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng) 0.9904.2.7.4 C線性與范圍（儲備液濃度為0.2mg/ml）精密量取 C對照品儲備液適量配制成定量限溶液、1ml（40%）、2ml （80%）、2.5ml （100%）、3ml（120%）、4ml（160%）、5ml（200%）,置于100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。分別精密量取20始注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以線性回歸，回歸方程的相關(guān)系數(shù)（C濃度（C, mg/ml）為橫坐標，以峰面積（A）

32、為縱坐標，進行R）應(yīng)0.90, 丫軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的RSD應(yīng)得0%。結(jié)果見下表。C線性與范圍試驗結(jié)果表濃度（C, mg/ml）峰面積（A）響應(yīng)因子（A/C ）響應(yīng)因子RSD%應(yīng)司0%Y軸截距/100%響應(yīng)值應(yīng) <25%回歸方程A=KC+b相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng) 0.9904.2.8線性與范圍（2）（含量測定）4.2.8.1 XX線性與范圍（含量測定對照品儲備液濃度為1.0mg/ml）精密量取 XX 對照品貯備液 1.0ml （50%）、2ml （100%）、3ml （150%）、5ml （300%）分別置10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度。分別精密量取20 dL注

33、入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以 XX濃度（C, mg/ml）為橫坐標，以峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程的相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng)0.9% 丫軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的 RSD應(yīng)W2.0%結(jié)果見下表。XX線性與范圍試驗結(jié)果表濃度（C, mg/ml）峰面積（A）響應(yīng)因子（A/C ）響應(yīng)因子RSD%應(yīng) 2.0%Y軸截距/100%響應(yīng)值應(yīng)2%回歸方程A=KC+b相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng) 0.9984.2.9精密度（1）（有關(guān)物質(zhì)）4.2.9.1重復性取XX樣品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml約含XX 0.5mg的溶液，搖勻，得供試品溶液，同法配制 6份，分別精密量取 2

34、0 口注入液相色譜儀中，記錄色譜圖；另取雜質(zhì)對照品溶液同法測定，計算有關(guān)物質(zhì)，所測6份供試品溶液的有關(guān)物質(zhì)的 RSD應(yīng)V%。有關(guān)物質(zhì)檢查重復性試驗結(jié)果表樣品123456A%平均值%RSD%應(yīng)2%B%平均值%RSD%應(yīng)2%C%平均值%RSD%應(yīng)V%最大未知單雜%平均值%RSD%應(yīng)V%未知雜質(zhì)和%平均值%RSD%應(yīng)V%總雜平均值%RSD%應(yīng)V%由另一 QC人員用另一臺液相，同法測定6份供試品溶液有關(guān)物質(zhì)，12份雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 RSD 應(yīng)V%。有關(guān)物質(zhì)檢查中間精密度試驗結(jié)果表樣品123456789101112A%平均值%RSD%應(yīng)w 2%B%平均值%RSD%應(yīng)W%C%平均值%RSD%應(yīng)w 2%最大未

35、知單雜%平均值%RSD%應(yīng)w 2%未知雜質(zhì)和%平均值%RSD%應(yīng)w 2%總雜平均值%RSD%應(yīng)w 2%4.2.10 精密度（2）（含量測定）4.2.10.1重復性取XX樣品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每 1ml約含XX0.2mg的溶液，搖勻，得供試品溶液，同法配制 6份，分別精密量取 20口注入液相色譜儀中，記錄色譜圖；另取含量測定對照品溶液同法測定，計算含量，所測6份供試品溶液的含量測定的RSD應(yīng)W%。含量測定重復性試驗結(jié)果表樣品123456含量%平均值%RSD%應(yīng)得4.2.10.2中間精密度由另一分析人員于不同日期用不同儀器同法測定6份含量，12份含量數(shù)據(jù)的RSD應(yīng)得。含量測定中間精

36、密度試驗結(jié)果表樣品123456789101112含量%平均值%RSD%應(yīng)得備注：將重復性項下的含量測定結(jié)果作為準確度試驗的已知含量。4.2.11 準確度(1)(有關(guān)物質(zhì))(1)配制供試品儲備液：精密稱取XX樣品適量，加水溶解并定量稀釋制成約含XX 5.0mg/ml的溶液，配制250ml, 4c冰箱中保存。(2)配制供試品溶液：精密量取供試品儲備液1ml,置于10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。(3)配制加標供試液：分別精密量取 A對照品儲備?夜(濃度 0.1mg/ml)、B對照品儲備液(濃 度0.1mg/ml)、C各雜質(zhì)對照品儲備液對口品儲備液(濃度 0.2mg/ml) 2.5、5.0

37、、7.5ml,分別置于3 個200ml量瓶中，分別加入供試品儲備液20ml,加水稀釋至刻度，搖勻，制成分別含 50%、100%、3份，共9份。加水稀釋制成每1ml中約含A150%已知雜質(zhì)的含 XX樣品0.5mg/ml的供試液，每個濃度分別制備(4)配制雜質(zhì)對照品溶液： 精密量取各雜質(zhì)對照品儲備液適量,4.2.12 2.5囚、C 5.0四的混合溶液。20W注入液相色譜儀，記錄92%-105% , 9 個回(5)分別精密量取供試品溶液、雜質(zhì)對照品溶液、各濃度供試液色譜圖，分別測定已知雜質(zhì)含量，計算回收率，各濃度下的平均回收率均應(yīng)在收率數(shù)據(jù)的RSD應(yīng)2%。有關(guān)物質(zhì)檢查準確度試驗結(jié)果表編p加入量(mg

38、)測得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)雜質(zhì)ABCABCABCABCABC50%1-11-21-31002-1精密稱取XX樣品適量，加水溶解并定量稀釋分別制成每1ml中約含XX0.16mg (80%)、0.2mg(100%)和0.24mg (120%)的溶液，各濃度分別制備 3份，共9份，分別精密量取 20 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖；另取含量測定對照品溶液20dL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，分別計算回收率。結(jié)果見下表。各濃度回收率均應(yīng)98%-101%, 9個回收率數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)W2.0%含量測定準確度試驗結(jié)果表編R已知量(mg)測得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)

39、RSD(%)80%1-1應(yīng) 98%-101%應(yīng) W2.0%1-21-3100%2-1應(yīng) 98%-101%2-22-3120%3-1應(yīng) 98%-101%3-23-34.2.13耐用性(1)(有關(guān)物質(zhì))4.2.13.1溶液穩(wěn)定性精密稱取供試品適量， 加水溶解并稀釋制成每 1ml約含XX0.5mg的溶液，分別置室溫和4c冰 箱各放置12h,分別在0、4、8、12h測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)含量的絕對值在 M.1%以內(nèi)，并不 得出現(xiàn)新的大于報告限度(0.05%)的雜質(zhì)視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果表放置時間0h4h8h12h雜質(zhì)變化雜質(zhì)雜質(zhì)與0h差雜質(zhì)與0卜差雜質(zhì)與0卜差AB

40、C新增大于0.05%的雜質(zhì)一4.2.13.2流速耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在流速0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與1.0ml/min數(shù)值相比變化的絕對值在劃1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。有關(guān)物質(zhì)檢查流速耐用性試驗結(jié)果表流速(ml/min )0.81.01.2雜質(zhì)含量RSD%A含量%與1.0ml/min結(jié)果 差值與相鄰峰分 離度拖尾因子B含量%與1.0

41、ml/min結(jié)果 差值與相鄰峰分 離度拖尾因子C含量%與1.0ml/min結(jié)果 差值與相鄰峰分 離度拖尾因子最大未知 單雜含量%未知總雜含量%總雜含量%4.2.13.3柱溫耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在柱溫25C、30C、35c條件下測定，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與 30c測定數(shù)值相比變化的絕對值在 M.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。有關(guān)物質(zhì)檢查柱溫耐用性試驗結(jié)果表柱溫C253035雜質(zhì)含量RSD%A含量%與30 C 差

42、值與相鄰峰分 離度拖尾因子B含量%與30 C差值與相鄰峰分 離度拖尾因子C含量%與30 C 差值與相鄰峰分 離度拖尾因子最大未知 單雜含量%未知總雜含量%總雜含量%4.2.13.4流動相pH值耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在pH值為3.3、3.5、3.7條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與pH值3.5測定數(shù)值相比變化的絕對值在M.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。有關(guān)物質(zhì)檢查流動相 pH值耐用性試驗結(jié)果表PH值3.3

43、3.53.7雜質(zhì)含量RSD%A含量%與 pH3.5差值與相鄰峰分 離度拖尾因子B含量%與 pH3.5差值與相鄰峰分 離度拖尾因子C含量%與 pH3.5差值與相鄰峰分 離度拖尾因子最大未知 單雜含量%未知總雜含量%總雜含量%4.2.13.5流動相比例耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在流動相比例（水相：甲醇：乙睛）750: 200: 20; 800: 160: 16; 850: 120: 12條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含

44、量與流動相比例800: 160: 16測定數(shù)值相比變化值在S.1%以內(nèi)視為耐用性好，否則為不好。有關(guān)物質(zhì)檢查流動相比例耐用性試驗結(jié)果表流動相比例750: 200: 20800: 160: 16850: 120: 12雜質(zhì)含量RSD%A含量%與 800: 160: 16差值與相鄰峰分離度拖尾因子B含量%與 800: 160: 16差值與相鄰峰分離度拖尾因子C含量%與 800: 160: 16 差值與相鄰峰分離度拖尾因子最大未知 單雜含量%未知總雜含量%總雜含量%4.2.14耐用性（2）（含量測定）4.2.14.1溶液穩(wěn)定性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每 1ml約含XX0.2mg的溶液，

45、分別置室溫和4c冰箱放置12h,分別在0、4、8、12h測定含量，與0h主成分含量比較，各放置時間含量變化的絕對 值不大于2.0%,視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。含量測定溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果表放置時間0h4h8h12h含量與0h含量差的絕對值%一4.2.14.2流速耐用性精密稱取供試品（xxxxxx ）適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.2mg的溶液，作為供試品溶液。分別在流速0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測定含量，主峰的拖尾因子應(yīng)不大于2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)達到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。含量測定流速耐用性試驗結(jié)果表流速(ml/min )0.81.01.2含量數(shù)據(jù)RSD（%）含量（）主峰拖尾因子主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度4.2.14.3柱溫耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.2mg的