醫(yī)學(xué)論文下載川芎嗪聯(lián)合尼莫地平對(duì)腦缺血再灌注皮質(zhì)神經(jīng)元膜性結(jié)

1、醫(yī)學(xué)論文下載川芎嗪聯(lián)合尼莫地平對(duì)腦缺血再灌注皮質(zhì)神經(jīng)元膜性結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用【摘要】 目的探討川芎嗪聯(lián)合尼莫地平治療腦缺血再灌注損傷的機(jī)制。方法采用Bannisters方法復(fù)制大鼠腦缺血再灌注動(dòng)物模型，利用川芎嗪或川芎嗪聯(lián)合尼莫地平治療；在透射電鏡下觀察皮質(zhì)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果模型組神經(jīng)元水腫，質(zhì)膜、線粒體膜破裂；溶酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體破壞。治療組神經(jīng)元質(zhì)膜、核膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體損傷減輕，川芎嗪聯(lián)合尼莫地平治療效果更佳。結(jié)論川芎嗪及川芎嗪聯(lián)合尼莫地平對(duì)腦缺血再灌注神經(jīng)元有明顯的保護(hù)作用。【關(guān)鍵詞】 腦缺血再灌注 川芎嗪 尼莫地平 神經(jīng)元 膜性結(jié)構(gòu)The Protective Effect

2、s of Ligustrazine Unite Nimodipine on Membranous Structure in Cerebral Ischeruia ReperfusionZHANG Hui, DONG Jianfeng, LI Weidong, ZHAO Qiuzhen, ZHU ShengyuanDepartment of Anatomy , Hebei North University, Zhangjiakou 075029, ChinaAbstract:ObjectiveTo indentify the treatment mechanism of ligustrazine

3、 with nimodipine on cerebral ischemia reperfusion (CIR). MethodsThe rats were reconstructed model of CIR, used ligustrazine unite nimodipine treatment. The change of neuron ulstructrure were observed by transmission electron microscope.ResultsIn model group, neurons were dropsying. The membrane of c

4、ell and mitochondria were destroyed , the lysosome and endoplasmic reticulum and golgi complex were broken. The injury of plasma membrane and nuclear membrane and endoplasmic reticulam and mitochondria were lightened in ligustrazin treat group. The effect of treatment were the best that ligustrazine

5、 with nimodipine were used.ConclusionThe protective effects of ligustrazine with nimodipine are sigificant on membrane structure in CIR.Key words:Cerebral; Ischemia reperfusion (CIR); Ligustrazine; Nimodipine; Neuron; Membrane structure腦缺血再灌注(Cerebral Ischemia reperfusion , CIR) 損傷是臨床常見(jiàn)的腦病之一，其發(fā)病率、致殘

6、率和死亡率均較高，因此研究其病理機(jī)制和治療措施，也是當(dāng)前醫(yī)學(xué)界關(guān)心的重要課題1,2。本實(shí)驗(yàn)采用Bannisters3頸動(dòng)脈血引流技術(shù)復(fù)制腦缺血再灌注動(dòng)物模型，然后經(jīng)川芎嗪聯(lián)合尼莫地平進(jìn)行治療，在電鏡下重點(diǎn)觀察皮質(zhì)神經(jīng)元膜性結(jié)構(gòu)的變化，以探討中西藥結(jié)合治療CIR的效果和機(jī)制。1 材料與方法1.1 動(dòng)物分組及給藥劑量利用清潔級(jí)成年Wistar大鼠40只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、治療1組（川芎嗪腹腔注射100 mg/kg）、治療2組（川芎嗪腹腔注射100 mg/kg+尼莫地平1 ml/k g靜滴）。川芎嗪注射液：北京永康藥業(yè)生產(chǎn)，40 mg/2ml；尼莫地平：保定三九濟(jì)山藥業(yè)生產(chǎn)，1 mg/

7、 ml。1.2 復(fù)制動(dòng)物模型參考Bannisters方法將大鼠戊巴比妥鈉麻醉（50 mg/100 g），仰臥位固定大鼠、常規(guī)消毒、頸正中切開(kāi)皮膚、暴露和分離左右頸總動(dòng)脈，自右總動(dòng)脈遠(yuǎn)端逆行插管（并結(jié)扎近心端），將插管近心端插入右頸外靜脈，然后用動(dòng)脈夾夾閉左頸總動(dòng)脈，使椎動(dòng)脈進(jìn)入腦中血液經(jīng)引流管進(jìn)入右頸外靜脈中，從而造成腦缺血。自腦缺血開(kāi)始腹腔注射川芎嗪或川芎嗪+尼莫地平（靜滴）。90 min之后夾閉動(dòng)、靜脈之間的引流管，開(kāi)放左頸總動(dòng)脈夾，導(dǎo)致腦缺血再灌注。再灌注24 h分別麻醉和處死動(dòng)物，取腦。1.3 切片與染色漏斗前后緣將腦組織冠狀切開(kāi)，在額頂葉取大腦皮質(zhì)數(shù)塊（1 mm1 mm1 mm），用

8、2.5%戊二醛固定。常規(guī)梯度丙酮脫水，Epon812浸透和包埋。LKB4型超薄切片機(jī)切片，厚度4050 nm，撈至銅網(wǎng)上。常規(guī)醋酸雙氧鈾-枸櫞酸鉛染色。JEM100CXII型透射電鏡下觀察。2 結(jié)果正常對(duì)照組皮質(zhì)神經(jīng)元，胞質(zhì)中有豐富的核糖體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；形狀不一的管狀或泡狀滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；線粒體形狀與大小不一，其嵴長(zhǎng)短不等；高爾基氏體扁囊與小泡清晰可見(jiàn)。質(zhì)膜與核膜完整清晰。核周隙寬窄均勻，核孔豐富，核內(nèi)常染色質(zhì)呈絮狀；異染色質(zhì)較少，呈高電子密度斑塊狀。模型組神經(jīng)元，核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體和高爾基體明顯減少，甚至消失；質(zhì)膜斷裂，細(xì)胞器外溢。輕者線粒體水腫，嵴減少或消失。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒，

9、高爾基氏體扁囊擴(kuò)張，生成面與成熟面無(wú)法區(qū)分。溶酶體減少，核膜結(jié)構(gòu)模糊，核周隙寬窄不均或消失。核內(nèi)異染色質(zhì)增多。川芎嗪治療組神經(jīng)元水腫減輕，細(xì)胞器相對(duì)增多，但仍有線粒體水腫，局部線粒體膜雙層結(jié)構(gòu)消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)仍較少，附著核糖體較少。高爾基氏體生成泡與成熟泡不易見(jiàn)到。胞質(zhì)中微管消失，核膜仍有斷裂現(xiàn)象，核孔較少，核內(nèi)常染色質(zhì)較少。川芎嗪加尼莫地平治療組神經(jīng)元損傷較輕，胞質(zhì)水腫液較少，胞膜大部分完整，偶有小的斷裂處。線粒體不僅數(shù)目較模型組明顯增多，而且線粒體水腫者較少見(jiàn)，膜斷裂者不易見(jiàn)到；線粒體嵴出現(xiàn)。溶酶體可見(jiàn)，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及游離核糖體增多，大部分核膜結(jié)構(gòu)較清晰，核孔增多。核內(nèi)異染色質(zhì)相對(duì)減少。總之

10、，川芎嗪與尼莫地平聯(lián)合應(yīng)用，能夠使缺血再灌注神經(jīng)元損傷減輕，尤其是神經(jīng)元質(zhì)膜、核膜、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及高爾基氏體等膜性結(jié)構(gòu)的損傷明顯減輕，或者說(shuō)川芎嗪或川芎嗪聯(lián)合尼莫地平，對(duì)神經(jīng)元膜性結(jié)構(gòu)及細(xì)胞器有明顯的保護(hù)作用。3 討論CIR導(dǎo)致神經(jīng)元損傷的原因是多方面的，其中比較公認(rèn)的有自由基學(xué)說(shuō)、鈣超載學(xué)說(shuō)、興奮性氨基酸學(xué)說(shuō)、線粒體功能障礙學(xué)說(shuō)和遲發(fā)性神經(jīng)元死亡學(xué)說(shuō)3,4。由于CIR導(dǎo)致ATP酶活性下降和磷脂蛋白水解酶（PLA2）活性增高，不僅導(dǎo)致膜磷脂降解，同時(shí)細(xì)胞膜受體蛋白質(zhì)平衡遭到破壞5。脂質(zhì)過(guò)氧化作用產(chǎn)生大量自由基，由于自由基的鏈鎖反應(yīng)，進(jìn)一步加重膜性結(jié)構(gòu)的破壞和線粒體功能障礙。本實(shí)驗(yàn)中觀察到模型

11、組皮質(zhì)神經(jīng)元質(zhì)膜破裂，水腫加重；線粒體膜通透性增加，線粒體基質(zhì)水腫，嵴減少或消失，有些嚴(yán)重者線粒體消失。由于細(xì)胞膜損傷打開(kāi)了質(zhì)膜鈣離子通道，使鈣離子內(nèi)流更加嚴(yán)重，由于胞質(zhì)中鈣離子超載可以活化鈣依賴性蛋白酶，從而導(dǎo)致DNA鏈降解，細(xì)胞骨架（微管、微絲）解體等一系列損傷。根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論腦缺血性卒中是“氣虛血淤”為病機(jī)，在治療中應(yīng)該運(yùn)用“益氣活血”藥物，由于川芎嗪注射液具有活血化淤、擴(kuò)張血管、抑制血小板凝集和改善微循環(huán)作用，因此在臨床上已有較為廣泛的應(yīng)用。川芎嗪保護(hù)腦細(xì)胞的機(jī)制是什么呢？據(jù)研究6川芎嗪能降低腦缺氧時(shí)自由基的產(chǎn)生，可以降低丙二醛含量和提高ATP酶活性；川芎嗪也能上調(diào)HSP70（熱休克蛋

12、白）和凋亡抑制基因Bcl-27，從而減輕ICR對(duì)腦組織的損傷；Zhaos等8發(fā)現(xiàn)川芎嗪能抑制腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與淋巴細(xì)胞間的黏附力，從而拮抗促炎性因子（如TNF-，IL-I，IL-8等）導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞與血細(xì)胞黏附造成的炎性反應(yīng)。有研究表明9川芎嗪如果與黃芪、參麥制劑合用，可以降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)生的自由基和減輕細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)提示川芎嗪與鈣離子抑制劑尼莫地平聯(lián)合應(yīng)用，能明顯減輕CIR神經(jīng)元質(zhì)膜、核膜及膜性細(xì)胞器的損傷。其原因可能是由于尼莫地平是脂溶性藥物能很順利地通過(guò)血腦屏障，阻止神經(jīng)元L型鈣離子通道，并且能夠增強(qiáng)線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)儲(chǔ)存鈣離子的能力，從而減輕鈣離子超載對(duì)細(xì)胞損傷10。尼莫地平

13、具有松弛血管平滑肌，擴(kuò)張小血管和改善微循環(huán)，增加腦組織對(duì)缺血的耐受性等作用。本實(shí)驗(yàn)表明CIR對(duì)神經(jīng)元膜性結(jié)構(gòu)的損傷是多途徑、多環(huán)節(jié)和多因素的。川芎嗪對(duì)神經(jīng)元膜性結(jié)構(gòu)有保護(hù)作用，如果聯(lián)合尼莫地平治療CIR，可以提高治療效果，使神經(jīng)元膜性結(jié)構(gòu)的損傷明顯減輕。因此中西藥聯(lián)合應(yīng)用將在治療CIR方面取得更可喜的效果。【參考文獻(xiàn)】 1王東吉，尚改萍，連為民,等.川芎嗪對(duì)兔腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用J.長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，17（4）：245.2趙秀梅，劉育英.大鼠腦缺血及再灌注實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷膽?yīng)用與發(fā)展J.循環(huán)雜志，1997，7（4）：1.3李傳云，李偉華.腦缺血再灌注損傷機(jī)制的現(xiàn)代研究進(jìn)展J.中華現(xiàn)代醫(yī)學(xué)

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15、hylprazine scavenges superoside anion and deereases nitric oxide production in human polymorphonuclear leukoeytes InkocytesJ.Life sci，2003,72(22):2465.7Savitz BA , Rosenbaum MD. Apoptosis in neccrolo gical diseaseJ.Neurosurgery, 1998,42(3):555.8Zhao H , Dong X , Wang X , et al . Study on single-cell adhesion prob