RNAlater使用方法

1、RNAlater（以下內(nèi)容源于Qiagen 公司的產(chǎn)品說明書，僅供參考）1簡介RNAlater 是一種液態(tài)的，無毒的組織保存試劑。它能迅速穩(wěn)定組織，保護(hù)非冷凍細(xì)胞 RNA 于原位。獲得組織塊后，迅速浸泡在 RNAlater 中保存，而不會(huì)引起 RNA 的降解，這樣可以不必馬上處理樣品或?qū)悠防鋬鲈谝旱幸詡湟院筇幚怼?RNAlater 應(yīng)保存在室溫下，保質(zhì)期 6 個(gè)月。如放置在 4條件下則會(huì)引起沉淀，此時(shí)需加熱到 37才可澄清。 RNAlater 可廣泛應(yīng)用于多種脊椎動(dòng)物樣品。包括腦、心、腎、脾、肝、睪丸、骨骼肌、脂肪、肺和胸腺。 RNAlater 對大腸桿菌、果蠅、組織培養(yǎng)細(xì)胞、全血細(xì)胞和

2、一些植物也有效。RNAlater 能否與 RNA 提取試劑盒兼容 RNAlater 可與大多數(shù) RNA 提取方法相協(xié)調(diào)。特別是TRIReagent.,RNAwiz,TTALLYRNA,RNAqueous,andPoly(A)Pure。2.如何使用 RNAlaterRNAlater 只能 用 于新 鮮 組織，在 浸 入 RNAlater 之前不能冷凍組織。簡單切碎組織樣品，任何一邊的最大厚度不能大于(半個(gè)黃豆粒大小 ),然后將組織碎塊放入到 5 倍體積的 RNAlater 中保存。動(dòng)物組織RNAlater 不會(huì)溶解或破壞組織樣品的結(jié)構(gòu)。如果需要的話，仍可將已經(jīng)平衡在 RNAlater 溶液中的組

3、織取出并分割成更小的塊再重新放入到 RNAlater 中。小器官如鼠肝、腎和脾可以完整地保存在RNAlater 中。植物組織許多植物組織可以簡單浸泡在5 倍體積的 RNAlater 中保存。具有自然屏障防止擴(kuò)散的植物如蠟表皮的葉組織可能需要先破壞其屏障，以允許 RNAlater 進(jìn)入組織。組織培養(yǎng)細(xì)胞沉淀細(xì)胞，用 PBS 洗一次，再用少量的 PBS 懸浮細(xì)胞，然后加 510 倍體積的 RNAlater 保存。白細(xì)胞如果將白細(xì)胞從紅細(xì)胞和血清中分離出來，并按組織培養(yǎng)細(xì)胞一樣處理后，白細(xì)胞便能有效地保存 在 RNAlater 中。不要將全血、血漿或血清中的RNA 保存在 RNAlater 中，因?yàn)?/p>

4、它們蛋白含量過高，與 RNAlater 混合后易形成不溶的沉淀。細(xì)菌RNAlater 是 抑 菌 的 ， 雖 然 細(xì) 菌 在 RNAlater 中不能生長，但細(xì)胞仍保持其完整性。大腸桿菌保存在RNAlater 中4條件下 1 個(gè)月仍很完整，產(chǎn)生不降解的 RNA。中樣品的保存保存于 -80建議用于批量保存。將樣品在 4條件下孵育過夜，然后從 RNAlater 溶液中取出樣品保存于 -80。對于組織培養(yǎng)細(xì)胞，不必移去 RNAlater，只需簡單凍存整個(gè)溶液。實(shí)驗(yàn)證明，細(xì)胞在 -80條件下凍存于 RNAlater 溶液中并未出現(xiàn)溶解。樣品可隨后在室溫下解凍及再凍存，其 RNA 的質(zhì)和量都不會(huì)受到影響

5、。保存于 -20建議用于批量保存。將樣品在 4條件下孵育過夜，然后轉(zhuǎn)移到 -20。樣品在 - 20條件下不會(huì)凍結(jié)，但在存貯緩沖液中會(huì)有結(jié)晶形成，這并不影響隨后的 RNA 提取。樣品可隨后在室溫下解凍及再凍存，其 RNA 的質(zhì)和量都不會(huì)受到影響。保存于 4廠家認(rèn)為，目前尚無證據(jù)證明樣品存于41 個(gè)月內(nèi)會(huì)出現(xiàn)RNA 降解。如果沒有冰箱：將樣品放在盡可能冷的環(huán)境中。如果周圍溫度超過 25，應(yīng)盡可能使 RNAlater 中的樣品冰浴數(shù)小時(shí)。中樣品的 RNA 提取組織用消毒鑷子將組織從存貯溶液 RNAlater 中取出，浸泡在 RNA 提取溶液中。一旦將組織放入 RNA 提取溶液中，勻漿一定要迅速進(jìn)行。

6、細(xì)胞從存貯在 RNAlater 中的細(xì)胞中提取 RNA 有兩種操作方法可供選擇：去除RNAlater 或者從細(xì)胞與 RNAlater 的混合物中直接提取 RNA。5.從 RNAlater 中取出樣品去除 RNAlater因?yàn)?RNAlater 的濃度比典型的細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)的濃度高，因此用通常沉淀活細(xì)胞的離心力無法沉淀 RNAlater 中的細(xì)胞。離心沉淀細(xì)胞，去除 RNAlater。（ HeLa 細(xì)胞大約需要 3000×g，但其他細(xì)胞可能不能容忍這個(gè)速度，或者他們需要更大的離心力。）從 RNAlater 中的細(xì)胞直接提取 RNA作為選擇，我們可以用一步法破碎 / 提取溶液（如 TRIR

7、eagent 和 RNAwiz）從沒有去除 RNAlater 的細(xì)胞中純化 RNA。這可通過向細(xì)胞混合物中加入 10 倍體積的一步提取溶液完成，其他照常。PBS緩沖液含%吐溫20 的的磷酸鹽緩沖液(簡稱 為 PB ST)配制方法為：稱取磷酸二氫鉀 (KH2PO4) ， 磷 酸 氫 二 鈉 (Na2HPO4·12H2O) ，氯化鈉 (NaCl) ，氯化鉀 (KCl) ， 吐 溫 - 20 ， 加 水 。PBS:PhosphateBufferedSalinePBS1L配方：磷酸二氫鉀(KH2PO4)：，磷酸氫二鈉(Na2HPO4) ：，氯 化 鈉 (NaCl) ： 8g ，氯 化 鉀 (KCl) ，加 去 離 子 水 約 800mL 充分?jǐn)嚢枞芙?，然后加入濃鹽酸調(diào) pH 至，最 后 定 容 到 1L 。高 溫 高壓滅菌后室溫保存。PBS緩沖NaCl137mmol/LNa2HPO410mmol/L液（，）KClL：，KH2PO42mmol/LPBS 緩沖液一般作為溶劑，起溶解保護(hù)試劑的作用，具體試劑一般也有不