以尿液為檢測標(biāo)本的多重PCR診斷結(jié)核病的有效性評價

1、以尿液為檢測標(biāo)本的多重PCR診斷結(jié)核病的有效性評價指導(dǎo)老師簡介：袁仕善，男，醫(yī)學(xué)博士，博士后，副教授，碩士生導(dǎo)師。湖南省121人才工程第三層次人選。湖南省青年骨干教師。曾獲湖南師范大學(xué)優(yōu)秀共產(chǎn)黨員和“三育人”先進(jìn)個人。從事醫(yī)學(xué)研究工作15年，熟悉許多生物化學(xué)、分子生物學(xué)及免疫學(xué)等的相關(guān)技術(shù)，近年主要從事結(jié)核、血吸蟲病、弓形蟲病的診斷以及植物滅螺機理的研究。主持完成國家自然科學(xué)基金一項、省自然基金課題兩項、廳級課題兩項。參與完成國家自然科學(xué)基金三項、省級和廳級課題共四項。指導(dǎo)學(xué)生完成國家大學(xué)生創(chuàng)新實驗項目一項，相關(guān)的研究結(jié)果已被中國防癆雜志接收。發(fā)表論文80余篇，其中第一作者論文20余篇。在Ge

2、nBank登錄日本血吸蟲新基因7個。參與的研究項目獲得省級科技進(jìn)步獎三項。目前指導(dǎo)碩士研究生兩名團隊成員介紹：本團隊成員均來自醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)2007級和2008級。所有成員都已詳細(xì)學(xué)習(xí)了臨床專業(yè)基礎(chǔ)知識和分子生物學(xué)相關(guān)理論及操作并進(jìn)行過多次分子生物學(xué)實驗，理論知識和動手能力均較強，具有完成本項目的能力?，F(xiàn)將各成員具體情況介紹如下：1. 趙聲遠(yuǎn)，醫(yī)學(xué)院2007級醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)學(xué)生，為本項目負(fù)責(zé)人。具有較強的求知欲和學(xué)習(xí)能力，勤奮刻苦，學(xué)習(xí)成績一直在年級名列前茅，曾獲得2009年國家獎學(xué)金、連續(xù)兩年一等獎學(xué)金、校十佳學(xué)習(xí)尖子、中期專業(yè)優(yōu)秀三等獎、英語四六級考試優(yōu)秀、湖南省計算機二級優(yōu)秀，具有扎實的專業(yè)

3、知識基礎(chǔ)，詳細(xì)掌握了本實驗項目的實驗原理和相關(guān)操作步驟，并做過多次分子生物學(xué)實驗，能夠熟練掌握相關(guān)操作技術(shù)。同時，自入學(xué)以來一直擔(dān)任學(xué)生干部，曾任班長、院公關(guān)協(xié)會財務(wù)部長、年級辦公室主任，現(xiàn)任年級學(xué)生會副主席，具有較強的組織領(lǐng)導(dǎo)能力和團隊協(xié)作精神，能夠很好地與老師和同學(xué)進(jìn)行溝通和協(xié)調(diào)，有能力領(lǐng)導(dǎo)并與團隊其他成員協(xié)作以順利完成本項目。2. 陶亞，醫(yī)學(xué)院2007級醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)學(xué)生，具有扎實的基礎(chǔ)知識，學(xué)習(xí)成績優(yōu)秀，曾獲得國家助學(xué)金一等獎，連續(xù)兩年獲得專業(yè)三等獎學(xué)金，中期水平專業(yè)優(yōu)秀三等獎，并順利通過大學(xué)英語四級，國家計算機二級、湖南省計算機二級等過級考試。同時，曾利用暑假期間跟隨袁仕善老師學(xué)習(xí)實驗

4、操作技能，多次進(jìn)行了分子生物學(xué)及病原學(xué)實驗，熟悉掌握了有關(guān)本項實驗的基本原理和操作步驟及有關(guān)注意事項。此外，大一大二期間，依次擔(dān)任了年級組織部部長，年級辦公室副主任，有較好的社會交際能力，在標(biāo)本獲取方面能貢獻(xiàn)自己的一份力量。3王鐘明，醫(yī)學(xué)院2008級醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)學(xué)生，具有較強的動手能力，熱愛思考，省計算機考試獲得優(yōu)秀。同時，善于交際，積極參加學(xué)校組織的活動，在校文化使者服務(wù)隊的迎新晚會中，所表演的節(jié)目被并為優(yōu)秀節(jié)目，并且在心理手抄報的比賽中獲得二等獎，具有團隊協(xié)作精神。暑假時，曾在鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生所里做過暑假社會實踐，積累了相關(guān)操作經(jīng)驗。具有扎實的專業(yè)知識基礎(chǔ)，詳細(xì)掌握了本實驗項目的實驗原理和相關(guān)操作

5、步驟，并做過分子生物學(xué)實驗，能夠熟練掌握相關(guān)操作技術(shù)。同時，擔(dān)任院勤工助學(xué)負(fù)責(zé)人和班委會干部，有奉獻(xiàn)精神，所有這些都有助于在這次創(chuàng)新實驗中為團隊貢獻(xiàn)自己特有的一份力量！4.劉芳君，醫(yī)學(xué)院2008級醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)學(xué)生，具有較強的學(xué)習(xí)和動手能力,喜歡鉆研。熱愛所做事情，曾獲得院優(yōu)秀播音員，院心理手抄報二等獎，湖南省計算機二級優(yōu)秀。在分析化學(xué)，生理學(xué)，分子生物學(xué)等實驗考試中操作優(yōu)秀，系統(tǒng)地學(xué)習(xí)并實踐了與本次課題研究有關(guān)的技術(shù)知識，如多重PCR。同時，能夠很好地與隊員合作，已經(jīng)具備了和隊友們完成此項目的能力。5.劉青林，醫(yī)學(xué)院2008級醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)學(xué)生，喜歡思考，勤于提出疑問并經(jīng)常動手去實踐證實疑問。曾

6、獲駐湘部隊助學(xué)金，院心理手抄報二等獎，院公關(guān)經(jīng)理人三等獎，國家計算機二級和省計算機二級優(yōu)秀等。在班級，擔(dān)任英語，語文，分子生物學(xué)，免疫學(xué)課代表。帶動班級同學(xué)的學(xué)習(xí)積極性，經(jīng)常和老師、同學(xué)一起討論學(xué)習(xí)以及實驗的問題，能夠很好地與同學(xué)合作完成學(xué)習(xí)及活動任務(wù)。同時，系統(tǒng)地學(xué)習(xí)并實踐了與本次課題研究有關(guān)的技術(shù)知識，如多重PCR。已經(jīng)具備了和隊友們完成此項目的能力。本實驗的創(chuàng)新點主要有： 1.無創(chuàng)性，易被患者接受。與肺結(jié)核臨床常規(guī)檢驗方法：血培養(yǎng)和血清免疫學(xué)診斷以及少痰，無痰者取灌洗液檢查法相比較，尿液標(biāo)本采集對被檢查者不會帶去創(chuàng)傷和痛苦，而且易于采集，重復(fù)性好。2. 標(biāo)本污染性小。目前肺結(jié)核臨床常規(guī)方

7、法痰涂片法所用的痰液易污染空氣，對臨床檢驗工作者及所有接觸人員的健康造成威脅。而尿液標(biāo)本檢測項目為基因片段，無菌體存在，對環(huán)境和操作者的污染小。3. 標(biāo)本易于獲取。對于臨床肺結(jié)核病人中無痰、少痰、咳痰困難者如兒童，往往采取支氣管肺泡灌洗液涂片和培養(yǎng)進(jìn)行檢查，給被檢查者造成極大痛苦，而尿液對于任何患病人群不會造成傷害，易于獲取。4.方法先進(jìn)。相比傳統(tǒng)的涂片和培養(yǎng)法，PCR技術(shù)靈敏度高、特異性好。利用多重PCR聯(lián)合檢測結(jié)核桿菌hsp65基因和cfp32基因片段，可以大大提高結(jié)核病診斷的靈敏度和特異性。可行性分析：本項目檢測的hsp65基因和cfp基因分別為分枝桿菌屬特異性和復(fù)合特異性的保守基因。結(jié)核病患者和健康志愿者血清和尿液可從湖南省結(jié)核病防治研究所和學(xué)校附屬醫(yī)院獲得，而且我們在申報前已充分考查了實驗室條件，醫(yī)學(xué)院和醫(yī)學(xué)檢驗實驗室完全具備開展該項實驗課題的條件，如能順利立項，定能順利完成課題。而且，本團隊成