增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá)在口腔粘膜上皮癌變?cè)\斷中的意義

1、    增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá)在口腔粘膜上皮癌變?cè)\斷中的意義        摘要：目的研究增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)在口腔粘膜上皮癌變過(guò)程中的表達(dá)及其在癌變?cè)\斷中的意義。方法采用免疫組化S-P法對(duì)正常口腔粘膜、輕中重度粘膜上皮異常增生和高分化鱗癌共85例標(biāo)本進(jìn)行PCNA檢測(cè)。結(jié)果正?？谇徽衬せ准?xì)胞層可有少量PCNA陽(yáng)性細(xì)胞；而上皮異常增生和鱗癌時(shí)，隨著病變程度加重，PCNA陽(yáng)性表達(dá)也相應(yīng)提高，且陽(yáng)性反應(yīng)出現(xiàn)在基層以上部位；尤其是重度異常增生，其PCNA陽(yáng)性表達(dá)率較中度異常增生

2、明顯增強(qiáng)(P=0.0008)，而重度異常增生與鱗癌間，PCNA表達(dá)無(wú)顯著性差異(P=0.7215)。結(jié)論P(yáng)CNA表達(dá)在口腔粘膜上皮癌變?cè)\斷中有重要參考價(jià)值，可作為監(jiān)測(cè)其惡性變的重要生物學(xué)指標(biāo)。關(guān)鍵詞：增殖細(xì)胞核抗原；口腔粘膜；上皮異常增生；鱗狀細(xì)胞癌中分類號(hào)：R739.8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1005-4979(2000)03-0219-03 SIGNIFICANCE OF THE EXPRESSION OF PCNA IN DIAGNOSIS OF CARCINOMATOUSCONVERSION OF ORAL MUCOSAL EPITHELIUMCHEN Qiao-er，WU Ji-fe

3、ng，WANG Dao-bin（Dept. of Oral Pathology，Anhui Medical University，Hefei 230032）Abstract： ObjectiveTo study the expression and significance of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) in diagnosis of carcinomatous conversion of oral mucosal epithelium.MethodsS-P immunohistochemical method was used to

4、examine the expression of PCNA in 85 specimens of oral mucosal tissues including normal，mild dysplasia，moderate dysplasia，severe dysplasia and carcinoma.ResultsPCNA immunostaining in normal epithelim was limited to the basal layer with few positive cells in each specimen. As the lesions progessed，th

5、e positive expresion of PCNA accordingly increased and suprabasal PCNA positive reaction was found in dysplasia and carcinoma. The positive expression rate of PCNA in severe dysplasia was much higher than that in moderate dysplasia(P=0.0008)，While no significant difference of PCNA expression was fou

6、nd between severe dysplasia and carcinoma(P=0.7215).ConclusionThe expression of PCNA has an important referential value in diagnosis of carcinomatous conversion of oral mucosal epithelium and may serve as an important biomarker for predicting the malignant change of oral mucosa.Key words： PCNA; Oral

7、 mucosa; Epithelial dysplasia; Squamous cell carcinoma口腔鱗癌是口腔腫瘤中最常見(jiàn)的惡性腫瘤，由正?？谇徽衬ど掀さ疆惓Ｔ錾侔l(fā)展為癌是一個(gè)連續(xù)不斷的由量變到質(zhì)變的發(fā)展過(guò)程，雖然組織病理學(xué)上對(duì)口腔粘膜上皮異常增生有明確的診斷標(biāo)準(zhǔn)，但在實(shí)際應(yīng)用中很難真正區(qū)分上皮異常增生的程度及早期確定是否癌變。本研究應(yīng)用免疫組化方法，觀察增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)在正常口腔粘膜上皮、上皮異常增生及口腔鱗癌中的表達(dá)分布，以探討PCNA在口腔粘膜上皮癌變過(guò)程中的意義及在癌變?cè)\斷中的應(yīng)用價(jià)值。1材料與方法1.1材料收集我室臨床活檢及手術(shù)切除標(biāo)本85例，其中正?？谇徽衬?/p>

8、10例，輕度上皮異常增生20例，中度上皮異常增生16例，重度上皮異常增生14例，高分化鱗癌25例。以上標(biāo)本均常規(guī)石蠟包埋，制成5m切片。1.2免疫組化染色方法采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶免疫組化染色方法(S-P法)。抗PCNA單克隆抗體PC10(即用型)及S-P(廣譜)試劑盒購(gòu)自福州邁新生物公司。染色步驟按試劑盒說(shuō)明書操作。陽(yáng)性對(duì)照為已知的PCNA陽(yáng)性的腫瘤組織切片；用PBS代替-抗作陰性對(duì)照。1.3分級(jí)判定標(biāo)準(zhǔn)以細(xì)胞核呈棕黃色者為PCNA染色陽(yáng)性細(xì)胞；每例隨機(jī)選10個(gè)不重復(fù)，不重疊的高倍視野(10×40)，記錄視野內(nèi)細(xì)胞總數(shù)和PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)識(shí)率。按標(biāo)識(shí)

9、率分為四級(jí)，級(jí)為0%25%，級(jí)為26%50%，級(jí)為51%75%，級(jí)為76%100%。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用非參數(shù)檢驗(yàn)方法。2結(jié)果2.1PCNA陽(yáng)性細(xì)胞分布PCNA陽(yáng)性反應(yīng)定位于細(xì)胞核內(nèi)，細(xì)胞核呈棕黃色反應(yīng)，胞漿與胞膜不著色。正?？谇徽衬CNA染色為陰性或少量散在陽(yáng)性細(xì)胞，且陽(yáng)性細(xì)胞局限于基底細(xì)胞層；上皮異常增生時(shí)，隨著病變程度的加重，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增加；輕度異常增生上皮中，PCNA陽(yáng)性反應(yīng)也主要集中于基底層，沿增寬增長(zhǎng)的上皮釘突呈連續(xù)性分布(1)；中度異常增生時(shí)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)一步增加，且出現(xiàn)于基層以上部位(2)；重度異常增生時(shí)，PCNA陽(yáng)性細(xì)胞更為密集并擴(kuò)展至棘細(xì)胞淺層，呈彌漫性分布(3)；高分

10、化鱗癌中，PCNA陽(yáng)性細(xì)胞主要沿癌巢周邊分布，癌巢中央及角化珠陽(yáng)性比例較少(4)。1輕度異常增生，PCNA陽(yáng)性細(xì)胞位于基底層，沿上皮釘突連續(xù)性分布。S-P法×1002中度異常增生，PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加，且出現(xiàn)于基層以上。S-P法×1003重度異常增生，PCNA陽(yáng)性細(xì)胞密集，并擴(kuò)展至棘細(xì)胞淺層。S-P法×2004高分化鱗癌，PCNA陽(yáng)性細(xì)胞沿癌巢周邊分布。S-P法×2002.2各組標(biāo)本PCNA陽(yáng)性分級(jí)比較見(jiàn)表1。表1各組標(biāo)本PCNA陽(yáng)性分級(jí)比較組別例數(shù)PCNA陽(yáng)性分級(jí)例數(shù)(%)P值*正?？谇徽衬?010(100)0(0.0)0(0.0)0(0.0)輕度異

11、常增生2018(90.0)2(10.0)0(0.0)0(0.0)0.5997中度異常增生1610(62.5)5(31.3)1(6.2)0(0.0)0.0627重度異常增生142(14.3)8(57.1)3(21.5)1(7.1)0.0008高分化鱗癌253(12.0)13(52.0)8(32.0)1(4.0)0.7215Kruskal-wallis: x2=44.269P<0.01*表示與上一組比較Wilcoxon檢驗(yàn)的P值 由表1可見(jiàn)，從正?？谇徽衬さ礁叻只[癌，隨病變程度加重，PCNA陽(yáng)性分級(jí)逐漸升高。正?？谇徽衬CNA陽(yáng)性分級(jí)為級(jí)；輕度異常增生上皮也主要為級(jí)反應(yīng)；中度異常增生時(shí)，

12、PCNA陽(yáng)性分級(jí)升高，但仍以級(jí)反應(yīng)為多；而重度異常增生和鱗癌時(shí)，PCNA反應(yīng)則多為-級(jí)，經(jīng)兩樣本間的兩兩比較，除正?？谇徽衬づc輕度異常增生之間，輕度異常增生與中度異常增生之間，重度異常增生與高分化鱗癌間差異無(wú)顯著性外(P>0.05)，其余各組間均有顯著性差異(P<0.01或0.05)，輕度異常增生與中度異常增生之間，雖經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無(wú)顯著差異(P=0.0627)，但仍顯示出隨病變程度加重，陽(yáng)性分級(jí)也相應(yīng)提高。3討論正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性腫瘤細(xì)胞后，即在增生和分化方面獲得獨(dú)特的性質(zhì)，表現(xiàn)為過(guò)度增殖和異常分化，而細(xì)胞的異常分化必然伴有增殖活性改變，因此，可通過(guò)對(duì)細(xì)胞增殖活性研究來(lái)探索癌變發(fā)生

13、機(jī)制。如何正確診斷口腔粘膜上皮癌前病變階段的上皮異常增生程度，預(yù)測(cè)其惡變潛能，直接關(guān)系到患者的治療及預(yù)后。盡管WHO已經(jīng)規(guī)定了上皮異常增生的12項(xiàng)組織學(xué)診斷依據(jù)，但經(jīng)驗(yàn)診斷的可靠性仍然令人懷疑，為此，各國(guó)學(xué)者做了大量研究，以期找到一種有效的能客觀反映口腔粘膜癌前病變狀態(tài)及惡變風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)手段。PCNA是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種能較好反映細(xì)胞增殖活性的標(biāo)記物，它是一種分子質(zhì)量為36kD的核蛋白，為DNA多聚酶的輔助蛋白，可加強(qiáng)DNA聚合酶作用，與DNA復(fù)制密切相關(guān)1。PCNA又是一種調(diào)節(jié)蛋白，在細(xì)胞周期G1期開(kāi)始升高，S期合成達(dá)最高峰，G2期和M期則又下降，并認(rèn)為它在DNA合成和細(xì)胞增殖調(diào)控中起重要作用。

14、PCNAmRNA一般僅積聚在增殖細(xì)胞中，而在靜止細(xì)胞中則缺乏2，因此，PCNA可很好地反映細(xì)胞動(dòng)力學(xué)的變化，代表細(xì)胞增殖的潛能，目前已廣泛應(yīng)用于癌前病變、良惡性腫瘤細(xì)胞增生活性的研究3。有關(guān)腫瘤組織中PCNA表達(dá)已有大量報(bào)道，在癌前病變中的研究也日益受到重視。Coltrera等4對(duì)56例上消化道粘膜的研究發(fā)現(xiàn)，在正常粘膜和單純?cè)錾?，PCNA表達(dá)僅限于上皮基層；而所有粘膜上皮異常增生和原位癌中，PCNA陽(yáng)性反應(yīng)均出現(xiàn)在基層以上部位，由此得出，基層以上(suprabasal)PCNA表達(dá)可用來(lái)區(qū)分粘膜上皮單純?cè)錾彤惓Ｔ錾?，是識(shí)別癌前病變的有用標(biāo)志。Tsuji等5研究指出，在口腔粘膜癌前病變中，

15、PCNA+細(xì)胞較分散且比在正常上皮各層中有顯著的增加。本研究結(jié)果顯示，正?？谇徽衬ど掀CNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)少，且多局限在基底細(xì)胞層，反映該處細(xì)胞具有一定分裂增殖能力。上皮異常增生時(shí)，隨病變程度加重，PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)不斷增加，且出現(xiàn)在基層以上部位，PCNA陽(yáng)性分級(jí)也相應(yīng)提高，PCNA的表達(dá)與病變程度呈正相關(guān)，說(shuō)明異常增生上皮有更多的細(xì)胞進(jìn)入分裂增殖周期，癌變的可能性較大。尤其是重度異常增生，其PCNA陽(yáng)性表達(dá)率較中度異常增生明顯增強(qiáng)(P=0.0008)，而重度異常增生與鱗癌間PCNA表達(dá)無(wú)顯著性差異(P=0.7215)，表明重度異常增生已與癌組織具有相似的增殖活性，屬高危癌前病變，較之中度異常增

16、生更易癌變，這與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果一致6，也支持Coltrera的觀點(diǎn)4，他認(rèn)為基底層以上細(xì)胞中的陽(yáng)性表達(dá)(suprabasal PCNA)同病變程度有明顯關(guān)系，suprabasal PCNA僅出現(xiàn)在重度異常增生組織中，可作為癌前病變危重程度的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。本研究也觀察到，基底層以上細(xì)胞中的陽(yáng)性表達(dá)也主要出現(xiàn)在重度異常增生上皮中(如3所示)，與重度異常增生上皮具有較高的PCNA陽(yáng)性表達(dá)率也是一致的。通過(guò)上述研究，證實(shí)口腔上皮癌變過(guò)程與細(xì)胞增殖活躍程度有關(guān)，PCNA可以很好反映細(xì)胞增殖狀況和分化水平，并能較好的顯示粘膜癌前病變到癌的發(fā)展過(guò)程。在臨床病理工作中，PCNA免疫組化染色在口腔粘膜上皮癌變?cè)\

17、斷中有重要參考價(jià)值，可作為監(jiān)測(cè)其惡性變的重要生物學(xué)指標(biāo)?；痦?xiàng)目：安徽省教委科研基金資助課題。作者簡(jiǎn)介：陳喬爾(1960-)，男，江蘇人，副教授.作者單位：陳喬爾（合肥安徽醫(yī)科大學(xué)口腔病理教研室230032）吳繼峰（病理解剖教研室）王道斌（病理解剖教研室）參考文獻(xiàn)：1Bravo R, Frank R, Blundell PA, et al. Cyclin/PCNA is the auxiliary protein DNA polymerasealphaJ. Nature, 1987, 326: 515.2Ottavio L, Chang CD, Rizzo MG, et al. Importa

18、nce of introns in the growth regulation of mPNA levels of the proliferating cell nuclear antigen geneJ. Mol Cell Biol, 1990, 10: 303.3Penneys NS, Bogaert M, Serfling U, et al. PCNA expression in cutaneous keratinous neoplasma and verreca vulgarisJ. AM J Pathol, 1992, 141(1): 139.4Coltrera MD, Zarbo RJ, Sakr WA, et al. Markers for dysplasia of the upper aerodigestive tractJ. Am J Pathol, 1992, 141: 817.5Tsuji T, Shrestha P, Yamada K, e