常見蛋白酶抑制劑

1、當(dāng)前位置：生物幫 實(shí)驗(yàn)技巧 生物化學(xué)技術(shù) 正文蛋白酶及蛋白酶抑制劑大全日期：2012-06-13 來源：互聯(lián)網(wǎng)標(biāo)簽：相關(guān)專題：解析蛋白酶活性測定聚焦蛋白酶研究新進(jìn)展摘要：破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持 蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點(diǎn)，因?yàn)楦鞣N蛋白酶對(duì)不同蛋白質(zhì)的敏感 性各不相同，因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度恩必美生物新一輪2-5折生物試劑大促銷！Ibidi細(xì)胞灌流培養(yǎng)系統(tǒng)-模擬血管血液流動(dòng)狀態(tài)下的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)廣州賽誠生物基因表達(dá)調(diào)控專題蛋白酶抑制劑破碎細(xì)胞提取

2、蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點(diǎn)，因?yàn)楦鞣N蛋白酶對(duì)不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低，尤其應(yīng)注意在緩沖液中加人蛋白酶抑制劑時(shí)應(yīng)充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。在寶靈曼公司的目錄上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制劑表。常用抑制劑PMSF1）抑制絲氨酸蛋白酶（如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶）和巰基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）；2）10mg/ml溶于異丙醇中；3）在室溫下可保存一年；4）工作濃

3、度:17174ug/ml（0.11.0mmol/L）;5）在水液體溶液中不穩(wěn)定，必須在每一分離和純化步驟中加入新鮮的PMSF。EDTA1）抑制金屬蛋白水解酶；2)0.5mol/L水溶液，pH89;3)溶液在4C穩(wěn)定六個(gè)月以上；4)工作濃度:0.51.5mmol/L. (0.20.5mg/ml);5)加入NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值，否則EDTA不溶解。胃蛋白酶抑制劑(pepst anti n)1)抑制酸性 蛋白酶如胃蛋白酶，血管緊張肽原酶，組織蛋白酶D和凝乳酶;2) 1mg/ml溶于甲醇中；3儲(chǔ)存液在4C一周內(nèi)穩(wěn)定，-20C穩(wěn)定6個(gè)月；4)1作濃度:0.7ug/ml(1umol/L)5)在水中不溶

4、解。亮抑蛋白酶肽(leupeptin)1)抑制絲氨酸和巰基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血漿酶和組織蛋白酶B;2) lOmg/ml溶于水；3)儲(chǔ)存液4C穩(wěn)定一周，-20C穩(wěn)定6個(gè)月；4)工作濃度0.5mg/ml。胰蛋白酶抑制劑(aprotinin)1)抑制絲氨酸蛋白酶，如血漿酶，血管舒緩素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;2) lOmg/ml溶于水，pH783儲(chǔ)存液4C穩(wěn)定一周，-20C穩(wěn)定6個(gè)月；4)工作濃度:0.062.0ug/ml(0.010.3umol/L);5)避免反復(fù)凍融：6)在pH12.8時(shí)失活。蛋白酶抑制劑混合使用35ug/ml PMSF.絲氨酸蛋白酶抑制劑0.3mg/ml EDTA金屬蛋白酶

5、抑制劑0.7ug/ml胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin)酸性蛋白酶抑制劑0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)常用蛋白酶抑制劑表抑制劑靶蛋白酶有效濃度儲(chǔ)藏溶液注解An tipai n木瓜酶和胰酶50卩g/ml1mg/ml水溶液對(duì)胰凝蛋白酶，胃液素，纖溶酶無影響APMSF胰蛋白酶樣絲氨酸 蛋白酶10-40 g/ml或10- 20M100mmol/L水溶液毒性比PMSF氐，不 能抑制胰凝蛋白酶 或乙酰膽堿酯酶抑肽酶絲氨酸蛋白酶0.06- 2卩g/ml10mg/mlPBS溶液避免反復(fù)動(dòng)凍融抑氨肽酶B氨基肽酶40卩g/ml溶于甲醇不能抑制羧肽酶Calpain抑制劑I、nCalpa in

6、(鈣依賴性半胱氨酸蛋白酶)I:17卩g/mln:7卩g/ml溶于乙醇可滲透薄膜抑糜朊酶素胰凝乳蛋白酶6- 60卩g/ml溶于DMSOB.M.綜合酶片絲氨酸， 半胱氨酸和 金屬蛋白酶每10-50ml細(xì)胞提取液內(nèi)加一片不含EDTAEDTA金屬蛋白酶0.2-0.5mg/ml或0.5- 1.3卩mol/L500mmol/L水溶液pH=8.0抑蛋白酶醛肽絲氨酸蛋白酶， 巰基 蛋白酶0.5- 2卩g/ml10mg/ml水溶液a2-巨球蛋白廣譜1U/ml100U/ml PBS溶液避免接觸還原劑Pefabloc SC(boe- hringer Mann heim)絲氨酸蛋白酶0.1-1.0mg/ml或0.4-

7、4mmol/L100mM水溶液無毒，在中性pH下較PMSF穩(wěn)定胃蛋白酶抑制劑酸性蛋白酶0.7卩g/ml1mg/ml甲醇溶液PMSF絲氨酸蛋白酶17- 170卩g/ml10mg/ml異丙醇溶液每一操作步驟時(shí)新鮮加入TLCK胰蛋白酶37- 50卩g/ml1mg/ml溶于50mMmol/L醋酸鹽溶 液，pH=5.0對(duì)胰凝蛋白酶無影響TPCK胰凝乳蛋白酶70- 100卩g/ml3mg/ml乙醇溶液對(duì)胰蛋白酶無影響作者：青嵐點(diǎn)擊：次來源于-生物秀知道首頁實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)中心常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度常用蛋白酶抑制劑(protease inhibito

8、r)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度廣譜蛋白酶抑制劑2014-06-09 23:01:02 來源： 瀏覽次數(shù)：119 網(wǎng)友評(píng)論 0 條常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度在與蛋白相關(guān)的檢測中，首先最關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提取。蛋白質(zhì)的提取過程中，我們要經(jīng)常加和蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)以防止蛋白質(zhì)的降解。另外在磷酸化蛋白的研究過程中，磷 酸酶抑制劑也是必不可少的，本文總結(jié)了常用的蛋白酶抑制劑(protease in hibitor)PMSF，Leupeptin亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白

9、酶抑制劑(proteas蛋白酶抑制劑分 子量溶解性磷酸酶抑制劑工作濃度貯存液胰蛋白酶絲氨酸在與蛋白相關(guān)的檢測中，首先最關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提取。蛋白質(zhì)的提取過程中，我們要經(jīng)常加和 蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)以防止蛋白質(zhì)的降解。另外在磷酸化蛋白 的研究過程中， 磷酸酶抑制劑也是必不可少的，本文總結(jié)了常用的蛋白酶抑制劑(proteaseinhibitor)PMSF，Leupeptin亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制劑(pr otease inhibitor)，EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制劑NaF氟化鈉，Na3VO4原磯酸鈉，B ETA

10、-glycerophosphate甘油磷酸鈉，Na2P2O4焦磷酸鈉等。對(duì)這些蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)的溶解配制，貯存液與工作液濃度，保存都做了詳細(xì)的說明。蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)PMSF:特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)，如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也 抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶(可逆的地面處理)。溶解性：溶于異丙醇，乙醇，甲醇和丙二醇果10mg/ml。在水溶液中不穩(wěn)定。在100%異丙醇，+25C時(shí)穩(wěn)定至少9個(gè)月分子量：174.2使用：貯存濃度：200mM，工作濃度：1mMLeupept in亮

11、肽素特性：抑制絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，纖溶酶，和組織蛋白酶B溶解性：高度溶于水(1mg/ml)。4C一周穩(wěn)定,分成小份冷凍在-20C至少6個(gè)月分子量：C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4:475.6C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 x H2O:493.6使用：貯存濃度：1mg/ml，工作濃度0.5 ug/ml (1mM)Aproti nin抑肽酶特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)，抑制纖維蛋白溶酶，激肽釋放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。不抑制凝血酶或因子X。溶解性：易溶于水(10mg/ml)或緩沖液(例如，tris,0.

12、1M,pH8.0)。pH約7-8的溶液在4C可保存1周，分裝保存在-20C可至少保存6個(gè)月。避免反復(fù)凍融，pH12.8的堿性環(huán)境 可使其滅活。分子量：6,512使用：貯存濃度:1mg/ml,工作濃度：0.06 -2.0 ug/ml(0.01 -0.3 uM)Pepstatin胃蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)特性：抑制天冬氨酸(酸)蛋白酶如胃蛋白酶，腎素，組織蛋白酶D，凝乳酶，許多微生物酸性蛋白酶溶解性：溶于甲醇約1mg/ml;可溶于乙醇，過夜溶解可達(dá)到1 mg/ml;在6當(dāng)量乙酸中溶解度為300ug/ml。4C穩(wěn)定一周，分裝儲(chǔ)存于-20C時(shí)可保存1個(gè)月分子量：685.9使

13、用：貯存濃度：1mg/ml，使用濃度：0.7卩g/ml(1卩M)EDTA -Na2特性：金屬蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)溶解性：溶于水至0.5M，在pH8-9的條件下，4C穩(wěn)定至少6個(gè)月分子量：372.24使用：工作濃度：0.2 -0.5 mg/ml(0.5 T.3 mM)，不需現(xiàn)用現(xiàn)配，在溶液pH值調(diào)至8-9時(shí)再加入。磷酸酶抑制劑NaF氟化鈉溶解性：溶于水分子量：41.99使用： 貯存液：5M工作濃度：10-20mMNa3VO4原磯酸鈉分子量：183.91溶解性：溶于水，我們購買過來的是原磯酸鈉.原磯酸鈉需要經(jīng)過處理以后才能成為激活的磯酸鈉，激活的磯酸鈉才具有抑制去磷酸化的作用.原磯酸鈉變成激活的磯酸鈉的過程是：100mM原磯酸鈉激活儲(chǔ)存液配制(1) .取0.183克的原磯酸鈉溶解于10ml的雙蒸水中，加酸調(diào)節(jié)PH至10(顏色變黃)(2) .煮至無色(3) .室溫冷卻(4) .重調(diào)PH至10重復(fù)(1) (2) (3) (4)直至溶液保持無色，并且PH穩(wěn)定