腦脊液常規(guī)操作規(guī)程

1、指導(dǎo)腦脊液（CSF）常規(guī)測定。2. 方法原理腦脊液是存在于腦室及蛛網(wǎng)膜下腔中的無色透明液體。由于脈絡(luò)叢上皮細胞對血漿中各種物質(zhì)的選擇性分泌和超濾作用，血漿中各種成分對血腦屏障的通透性各有不同。其中最易通過血腦屏障的是氯、鈉、鎂離子及乙醇；其次為清蛋白、葡萄糖、鈣 離子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐；纖維蛋白原、補體、抗體、某些藥物、膽紅素、 膽固醇則極難或不能通過。中樞神經(jīng)系統(tǒng)任何部位發(fā)生器質(zhì)性病變時，如感染、炎 癥、腫瘤、外傷、水腫和阻塞等都可以引起腦脊液成分的改變。通過對腦脊液理學(xué) 檢查，顯微鏡檢查、化學(xué)和免疫學(xué)檢查及腦脊液病原學(xué)檢查，可對疾病的診斷、治 療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。腦脊液（CSF常

2、規(guī)測定內(nèi)容包括：顏色、性狀、有核細胞計數(shù)、紅細胞計數(shù)、潘氏試驗、細菌等。潘氏（pandys）試驗：CSF中的球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性的蛋白鹽而產(chǎn)生白色混濁或沉淀。3. 方法性能參數(shù)（如線性、檢出限、測量區(qū)間、不確定度、準(zhǔn)確性、精密度、靈敏度1顏色（COLOR）6中性粒細胞（NE）2透明度（clearity）7淋巴細胞（LY）3凝固性(coagulability )8單核細胞（MO4腦脊液有核細胞計數(shù)（CSNUCL）9潘氏試驗（pandys test ）5腦脊液紅細胞計數(shù)（CSF-RBC）和特4. 標(biāo)本類型標(biāo)本類型：新鮮CSF標(biāo)本拒收條件：拒收延遲室溫 2h、冷藏6h未送達標(biāo)本。標(biāo)本保存與穩(wěn)

3、定性：一般室溫1h內(nèi)完成檢驗，久置可致細胞破壞，影響細胞計數(shù)及分類檢查。5. 要求的容器、防腐劑或添加物、儀器、試劑或分析系統(tǒng)標(biāo)本容器：BD無促凝成分紅頭管或潔凈干燥帶蓋玻璃管。試劑生理鹽水%Nacl溶液白細胞稀釋液1%冰乙酸（1ml分析純冰醋酸+蒸餾水至100ml）劉氏快速瑞氏染色液A液：曙紅、甲醇B液：亞甲藍潘氏試劑10%苯酚溶液（純苯酚10ml+蒸餾水至100ml）試劑存儲和有效期:試劑名稱存儲條件有效期開瓶有效期位置生理鹽水室溫1年1年存貨柜/血常規(guī)室操作臺冰乙酸室溫2年1年藥品柜1匯酸冷藏1年1年試劑冰箱10嘛酚溶液室溫1年1年藥品柜劉氏快速瑞氏染色液室溫2年6個月藥品柜/染色操作臺

4、儀器：OLYMPUS學(xué)顯微鏡，血細胞計數(shù)板。6. 校準(zhǔn)程序（計量學(xué)溯源性）不適用7. 質(zhì)量控制，控制品使用水平和頻率，允許限的糾正措施不適用8. 程序步驟一般性狀檢查：輕輕混勻 CSF觀察量、顏色、有無凝塊和透明度（一般細胞數(shù)卩l(xiāng)個時或蛋白增加可產(chǎn)生混濁），并記錄顯微鏡檢查（1）清或微混標(biāo)本：a）混勻后直接沖入計數(shù)池，計數(shù)四角四大方格內(nèi)細胞總數(shù)（包括RBC NUCL。b）用白細胞稀釋液作1:1稀釋，計數(shù)有核細胞數(shù)c）紅細胞數(shù)=細胞總數(shù)-有核細胞數(shù)（當(dāng)白細胞數(shù)30個/卩l(xiāng)時，在白細胞計數(shù)池中直接分類至少 50個白細胞）（2）混濁及以上標(biāo)本：外觀稀釋樣本量稀釋液/溶解劑粉色/輕度混濁1:2020卩

5、l380 卩 l紅色/混濁1:5010卩l(xiāng)490 卩 l帶血量極高/極度混濁1:10010卩l(xiāng)990 卩 la）稀釋標(biāo)本： 于清潔 試管中 按上表釋，用以計數(shù)細胞總數(shù)；b）溶解RBC于清潔試管中按上表進行稀釋，用以計數(shù)有核細胞數(shù)；c）沖池；計數(shù)d）紅細胞數(shù)二細胞總數(shù)-有核細胞數(shù) 有凝塊或粘稠標(biāo)本：（1）用吸管旋轉(zhuǎn)并擠壓凝塊，擠出里面的液體及細胞。（2）2000rpm Wmin離心，分離上清液和沉渣。（3）混勻沉渣，涂片，用高倍鏡觀察 NUCL、RBC。（4 ）報告每高倍鏡視野的紅細胞和有核細胞數(shù)。>5min離心,吸出上清液于另一試管，并在試管上編號。6/卩l(xiāng)時進行操作。將沉渣混勻涂片，厚

6、薄根據(jù)有核細胞數(shù)而定，血性標(biāo)本可考慮推片。待干后，瑞氏染色進行分類 （分100個NUCL ;如見有不能分類細胞或懷疑有惡性細胞時，應(yīng)請示上級主管，由有經(jīng)驗的上級主管進行分析，并在報告時另行描 述報告，如腦膜白血病或腫瘤細胞等。潘氏試驗 取小試管一支，加入10%勺石碳酸水溶液約5ml，用一次性吸管加一滴CSF上清液立即在黑色背景燈照下觀察結(jié)果。弱陽性（土）：微呈白霧狀，在黑色背景下才能看到。 陽性（+）:灰白色云霧狀。（2+）：白色渾濁。（3+） ：白色濃絮狀沉淀。（4+）：白色凝塊。9. 計算結(jié)果原理顏色為區(qū)別蛛網(wǎng)膜下腔出血和穿刺損傷應(yīng)注意：（1）離心沉淀后： 如上層液體呈黃色， 隱血試驗陽性

7、， 多為蛛網(wǎng)膜下腔出血，且出血時間已經(jīng)超過 4 小時。如上層液體澄清無色， 紅細胞均沉管底，多為穿刺出血或因病變所致的新鮮出血。（2）紅細胞皺縮，不僅見于陳舊性出血，在穿刺損傷引起出血時也 可看到，因腦脊液滲透壓較血漿高所致。腦膜炎、重癥如核黃疸等引起。素血癥和膿性腦脊液。透明度：腦脊液混濁程度與細胞數(shù)量有關(guān)， 腦脊液中細胞數(shù)超過300X10/L時，可出現(xiàn)混濁。蛋白質(zhì)含量增加或含大量微生物也可產(chǎn)生混濁。凝固性：結(jié)核性腦膜炎靜置 12-24 小時后，標(biāo)本表面有纖細的網(wǎng)膜形成。蛛網(wǎng)膜下腔 梗阻時，可產(chǎn)生黃色膠凍狀。潘氏試驗：有腦組織和腦脊髓膜疾患時常成陽性反應(yīng)如化膿性腦脊髓膜炎、梅毒性中樞神經(jīng)系統(tǒng)

8、疾病、脊髓灰質(zhì)炎、流行性腦炎等。腦出血時多呈陽性反應(yīng)，如外傷性血液混入腦脊液中，亦呈陽性反應(yīng)。細胞分類：性質(zhì)有關(guān)。常以淋巴細胞為主。10. 生物參考區(qū)間顏色（COLOR）無色透明度（clearity）透明凝固性（coagulability ）無凝塊潘氏試驗（pandystest ）陰性O(shè)R弱陽性有核細胞計數(shù)（CSNUCL）成人（0-8 ） X106/L中性粒細胞（NE）成人（0-6%）兒童（0-15） X106/L新生兒（0-8%）新生兒（0-30） X06/L淋巴細胞（LY）成人（40-80%單核細胞（MO成人（15-45%）新生兒（5-35%）新生兒（50-90%）紅細胞計數(shù)（CSF RB

9、C）0X10/L（正常腦脊液中白細胞主要為淋巴細胞、單核細胞，之比約為7:3，可含極少中性粒細胞）。11. 警告值、危急值（適用時）12. 檢驗結(jié)果可報告區(qū)間13. 對超出可報告范圍的結(jié)果的處理如檢到細菌時應(yīng)建議培養(yǎng)確認。有不能分類細胞，應(yīng)請示上級主管，并另行描述報告，如腦膜白血病或腫瘤細胞。14. 實驗室解釋15. 安全防護措施所有樣品按具有潛在傳染性的標(biāo)本處理。測定完成后，上清液及沉渣試管于 2000mg/L有效氯消毒液浸泡4小時以上，倒入 醫(yī)療廢物下水槽，由醫(yī)院統(tǒng)一消毒處理；塑料試管或容器等容器等醫(yī)療廢棄物 倒入黃色醫(yī)療垃圾袋，貼上標(biāo)簽并封口，由醫(yī)院統(tǒng)一銷毀處理。原液保存48小時或以上，倒入黃色醫(yī)