谷胱甘肽s轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性與低出生體重關(guān)系研究

1、谷胱甘肽s轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性與低出生體重關(guān)系研究                              作者：李靜 吳滌 楊艷芳 關(guān)明杰 王琨 楊國安【摘要】  目的：探討谷胱甘肽s轉(zhuǎn)移酶theta 1基因（the glutathione S-transferase theta 1 gene，GS

2、TT1)多態(tài)性與新生兒低出生體重的關(guān)系。方法：采用病例對照研究方法，收集母親和新生兒資料，用等位基因特異性PCR方法分析母親GSTT1基因型，采用Logistic回歸法分析母親GSTT1基因型與新生兒出生體重的關(guān)系。結(jié)果：調(diào)整主要混雜因素前后，GSTT1缺失基因型對低出生體重影響未顯示顯著相關(guān)性（OR=1.357, 95 % CI 0.6952.646;OR=2.047, 95 % CI 0.7622.854）。結(jié)論：母親 GSTT1基因多態(tài)性與低出生體重?zé)o相關(guān)性。 【關(guān)鍵詞】  谷胱甘肽s轉(zhuǎn)移酶；多態(tài)性；基因；低出生體重    Abstract

3、0; Objective: To evaluate the association of genetic polymorophisms of the glutathione S-transferase thetal  gene (GSTT1) in mother with low birth weight in neonates. Methods: The case-control study method was used, data of mothers and infants were collected.  Allele specific PCR method wa

4、s applied to examine GSTT1 polymorphisms and logistic regression was used to analyze the association of gentic polymorphisms of  GSTT1 gene in mother with low birth weight in newborns. Results: Before and after adjustment for environmental covariates, no significant correlation was found betwee

5、n polymorphisms of GSTT1 and low birth weight (OR = 1.357, 95% CI 0.6952.646, OR = 2.047, 95% CI 0.7622.854 respectively). Conclusion: There is no significant  correlation between genetic polymorphisms of GSTT1 gene in mother and low birth weight in newborns.    Key words  G

6、lutathiones-transferase; Polymorphism; Gene; Low birth weight    低出生體重是新生兒死亡的主要因素之一 ,低出生體重兒發(fā)生率為活產(chǎn)嬰兒的 5.87 %1。低出生體重的發(fā)生存在很大的個體差異，但導(dǎo)致這些差異的因素知之甚少。許多環(huán)境因素被證明與低出生體重有關(guān)，但這些環(huán)境因素僅能解釋極小的一部分差異。各種預(yù)防措施（包括對孕婦的社會支持、產(chǎn)前保健、健康）的應(yīng)用收效甚微2-3。大量證據(jù)表明低出生體重的發(fā)生是由遺傳和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。以往的研究大部分集中在社會環(huán)境和臨床因素，而遺傳因素導(dǎo)致低出生體重的病理生

7、理機制研究甚少。最近研究表明：低出生體重在美國黑種、白種人群都有明顯的家族聚集性3。.這種多次分娩低體重兒的傾向性歸于遺傳和環(huán)境因素4。為探討中國人群中低出生體重的病理發(fā)生機制，我們采用病例對照研究方法，探討母親GSTT1基因多態(tài)性與低出生體重的相關(guān)性。1  對象與方法1.1  研究對象 調(diào)查2003-2006年在包鋼三就診的孕婦及其新生兒，其中低出生體重兒57名，正常對照兒108名。低出生體重兒的入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）孕周28周 ,體重2 500g;（2）正常分娩 ,剔除意外情況引起的早產(chǎn)兒;（3）剔除雙胎或多胎、先天畸形兒。正常對照兒入選標(biāo)準(zhǔn)：選擇與低出生體重兒同一

8、醫(yī)院出生的孕周28周、體重2 500g、出生時間相差 7 d、單胎正常活產(chǎn)嬰兒。1.2  調(diào)查內(nèi)容與方法1.2.1  問卷調(diào)查 采用統(tǒng)一問卷調(diào)查表，由經(jīng)培訓(xùn)的調(diào)查員對每個孕婦進行逐一詢問，獲得詳細(xì)人口統(tǒng)計資料，包括：一般情況，疾病史、健康狀況、職業(yè)史、吸煙飲酒史、飲食習(xí)慣、月經(jīng)和生育史。1.2.2  新生兒調(diào)查 根據(jù)產(chǎn)房病例記錄了解新生兒出生時狀況，包括孕周、新生兒性別、出生體重等。1.2.3  血樣收集及DNA提取 用EDTA抗凝管經(jīng)無菌操作取母親外周血2 mL, 4 保存, 24 h內(nèi)按標(biāo)準(zhǔn)法提取基因組DNA。1.2.4

9、  基因型檢測 GSTT1基因的遺傳多態(tài)性為大片段基因缺失，其PCR擴增引物5-TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC-3和5- TCACCGGATCATGGCCAGCA-3反應(yīng)體系同時加入CYP1A1基因同時擴增，產(chǎn)生320 bp基因片段為PCR反應(yīng)的陽性對照，其引物5-GCTCCACTCACTTGACACTTCTG-3和5-CAGCTGCATTTGGAAGTGCT-3（引物上海生物工程公司合成），反應(yīng)體系：12.5 L PCR反應(yīng)體系中含有10×Buffer （Mg2 + 15 mmol/L)1.25 L, dNTP （0.2 mmol/L)0.25

10、L,上游引物 （5 mol/L)0.1 L,下游引物 （5 mol/L)0.1 L,基因組 DNA 2.0 L, Taq DNA聚合酶（2 U/L)0.5 L,滅菌雙蒸水 8.3 L）。PCR反應(yīng)條件為94 變性5 min，94 45 s，56 45 s，72 60 s，擴增35個循環(huán)，最后72 延伸7 min。PCR產(chǎn)物用2 %的瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色（Taq DNA 聚合酶、dNTP Mixture、Marker購自大連TaKaRa寶生物公司，瓊脂糖等試劑購自上海生物工程公司）。GSTT1存在基因型個體擴增出480 bp和320 bp兩個片段，而GSTT1缺失型個體僅顯示出一條320

11、 bp片段。1         1.3  統(tǒng)計學(xué)分析 用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。根據(jù)等位基因的頻率，用2檢驗對GSTT1基因型分布進行遺傳平衡檢驗。用Logistic回歸法分析母親GSTT基因型與新生兒出生體重的關(guān)系，并調(diào)整主要混雜因素。2  結(jié)果 2.1  研究對象一般特征 調(diào)查研究對象包括57名病例組和108名對照組的孕婦和她們的新生兒。研究對象一般特征見表1、表2。病例組和對照組T檢驗結(jié)果顯示：母親收縮壓、舒張壓、心率、月經(jīng)首齡、分娩孕周、睡眠時

12、間差異存在顯著性，P值均0.05。 表1  研究對象一般特征（略）表2  研究對象一般特征（略）2.2  GSTT1基因型分析結(jié)果 母親的GSTT1基因型分布見表3。經(jīng)2檢驗符合Hardy-Weinberg平衡（2=0.173,P0.05）。表3  母親GSTT1基因型分布情況（略）2.3  基因多態(tài)性與低出生體重關(guān)系 單因素分析，GSTT1缺失基因型與存在基因型相比未增加低出生體重發(fā)生的危險性 （OR=1.357, 95 % CI0.6952.646，P=0.335),Logistic多因素分析，調(diào)整影響出生體重的影響因素

13、包括：身高、體重、文化程度、健康狀況、收縮壓、舒張壓、孕前體重、分娩孕周、情緒、失眠、多夢、緊張、使用機時間、看電視時間及家人關(guān)照程度后，仍未顯示GSTT1缺失基因型可增加低出生體重的危險性（OR=2.047, 95 % CI0.7622.854，P=0.107)。結(jié)果見表4。表4  母親GSTT1基因多態(tài)性與低出生體重的關(guān)系分析（略）3  討論    分娩代表胎兒在宮內(nèi)生長發(fā)育的終點，它受母親、胎盤、胎兒和一系列生物和環(huán)境因素的影響。以往研究主要集中在社會環(huán)境或臨床因素，對低出生體重的遺傳影響因素研究相對較少。有證據(jù)表明，出生體重受遺傳和環(huán)境

14、因素的影響。在同胞之間出生體重的相關(guān)系數(shù)為0.360.62（中位數(shù)約為0.5）3。有人觀察到低出生體重存在著代與代之間的遺傳，說明遺傳因素在低出生體重的發(fā)生中起一定作用。    谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶（GST）是一組Phase主要的解毒酶，具有保護細(xì)胞免受親細(xì)胞毒物質(zhì)和致畸物影響的作用，基因缺失可導(dǎo)致其解毒功能的損失，進而增加了個體對許多疾病的易感性5-6。可溶性GST家族為二聚體酶，它催化谷胱甘肽與大量的親電子物質(zhì)結(jié)合，進而脫毒，并協(xié)助排出體外。GSTT1基因位于22q11.2，由5個外顯子組成7。大量證據(jù)表明GST酶的表達(dá)水平是決定細(xì)胞對有毒化學(xué)物質(zhì)敏感性的決定因素。

15、在人體內(nèi)，GSTT基因的表達(dá)水平存在顯著的個體差異，人的GSTT1蛋白的不表達(dá)可導(dǎo)致膀胱癌、結(jié)腸癌、皮膚癌和肺癌的易感性增加5。    Wang等8研究發(fā)現(xiàn)同時具有CYPIA1 Aa/aa基因型和GSTT1缺失基因型的母親，在懷孕期間吸煙，可顯著增加分娩低體重兒的危險性。陳大方等9研究發(fā)現(xiàn)具有芳香族暴露史的婦女，其GSTT1基因多態(tài)性與新生兒出生體重?zé)o顯著相關(guān)性，但發(fā)現(xiàn)同時具有GSTT1缺失基因型與EPHX1 His139His純合基因型新生兒可顯著降低其出生體重。原因可能是胎兒GSTT1缺失基因型造成GSTT1酶不表達(dá)因而影響胎兒的生長導(dǎo)致低體重。陳大方等9在另

16、一項研究中顯示GSTT1缺失基因型與新生兒出生身長不相關(guān)，但GSTT1缺失基因與MSPI雜合子/突變純合子基因型這一組合可顯著降低新生兒出生身長。我們研究Phase基因GSTT1 的多態(tài)性對新生兒出生體重的影響。在調(diào)整了混雜因素前后，GSTT1缺失基因型與存在基因型比較，均未見導(dǎo)致增加低出生體重的危險性。這一結(jié)果與上述的研究結(jié)果相一致。因收集低出生體重樣本困難，我們收集的病例樣本數(shù)量較少，可能影響分析結(jié)果，今后將進一步擴大樣本量，進一步探討兩者關(guān)系，及基因與環(huán)境的交互作用對低出生體重的影響,為低出生體重發(fā)生的病理機制提供依據(jù)?！尽?#160; 1 林良明，劉玉琳，張新利，等.低出生體重兒抽樣調(diào)

17、查結(jié)果J.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2002，36（3）：149-153.2 Dyson DC，Danbe KH，Bambe rJA，et al.Monitoring women at risk for preterm labor J. New Engl J Med,1998,338:15-19. 3 Wang XB，Zuckerman B，Coffman GA,et al. Aggregation of low irth weight among whites and blacks in the United States J.New Engl J Med,1995,333:1744-1749 .4

18、 Wildschut HJJ,Lumey LH,Lunt PW.Is preterm delivery genetically determined J. Paediatr Perinat Epidemiol,1991,5:363-372.5 Hayes JD,Pulford DJ.The glutathione S-Transferase supergene family:regulation of GST and the contribution of the isoenzymes to cancer chemoprotection and drug resistanceJ.Cirt Rev Biochem Mol Biol,1995,30:445-600.6 Abdel-Rahman SZ,Anwar WA,Abdel-Aul WE,et al. GSTM1 and GSTT1 gene are potential risk modifiers for bladder cancerJ.Cancer Detect Prev,1998,22:129-138. 7 Cotton SC,Sharp L,Little J,et al.Glutathione S-transferase polymorph