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文檔簡介

1、血凝與血凝抑制試驗血凝與血凝抑制試驗 2016.05.01 2016.05.011.了解做試驗的目的；2.試驗器材與試劑；3.血凝試驗的原理；4.血凝抑制試驗原理；5.血凝試驗的操作方法；（紅細胞的配制）6.血凝抑制的操作方法；（四單位的配制）7.掌握試驗的結(jié)果的判定。血凝試驗與血凝抑制實驗目的：用已知抗原來檢測被檢血清中有無相應(yīng)的特異性抗體和滴定該特異性抗體的水平。實驗器材：微量移液器普通離心機微量振蕩器禽用采血器96孔v型血凝反應(yīng)板試驗主要試劑：新城疫標準抗原、陽性血清、陰性血清與待檢血清1%雞紅細胞懸液四單位抗原生理鹽水抗凝劑血凝試驗原理：二、血凝試驗（HA)實驗原理一些病毒表面有血凝素

2、，能使雞、鵝或人的紅細胞發(fā)生凝集，叫做血凝試驗。+ +四、血凝試驗操作步驟(1)先做標記；(2)按表中順序加樣。倒倒加加血凝試驗操作步驟：1%紅細胞的配制：1.為避免有些雞只的紅細胞有自凝現(xiàn)象，因此配制1%紅細胞懸液時應(yīng)最好選擇采取3只SPF雞或未進行過任何免疫過的成年公雞血液。（抗凝劑與血液比例為1:4）2.采血完畢后將血加入至10ml離心管中，加3-4倍體積生理鹽水以20003000r/min，510min離心3-5次。3.棄去上液和紅細胞上層的白細胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液，上下緩慢顛倒（切忌用力過大使紅細胞破裂），使其充分混勻，再離心棄去上清液，反復幾次直至上清液清亮透明為止

3、。4.吸取壓積紅細胞泥與生理鹽水以1:99進行配制1%雞紅細胞懸液。5.在加紅細胞過程中還須不斷輕搖以確保紅細胞均勻，使其每孔加入相同數(shù)量的紅細胞。6.制備好的紅細胞液如果放置后上清液變紅，說明有溶血，不可再使用。(血凝抑制試驗（HI)原理 病毒的懸液中加入特異性抗體，紅細胞的凝集現(xiàn)象被抑制，稱為紅細胞的血凝抑制。？+ + +血凝抑制試驗操作步驟：五、血凝抑制試驗操作步驟4單位抗原的制備： 根據(jù)血凝試驗測定的標準抗原的血凝效價，判定4個血凝單位的稀釋倍數(shù)。方法舉例為：如病毒HA效價為8log2，其4個血凝單位為6log2，則病毒稀釋64倍即可。根據(jù)樣品數(shù)確定所需抗原量做稀釋。血凝抑制試驗結(jié)果判定：以完全抑制紅細胞凝集的血清最大稀釋度為該血清的HI滴度（注：看結(jié)果時96孔板傾斜45度）。注意：確定度數(shù)的孔要

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