第十七章因重組和基因工程

1、第十七章基因重組和基因工程一、單項(xiàng)選擇題1.限制性核酸內(nèi)切酶切割 DN斫產(chǎn)生A. 5 '磷酸基和3'羥基基團(tuán)的末端B. 5C. 5 '羥基和3'羥基基團(tuán)的末端D. 3E.以上都不是2.可識(shí)別并切割特異 DNA序列的酶是A.非限制性核酸外切酶B.C.限制性核酸外切酶D.E. DNA 酶'磷酸基和3'磷酸基團(tuán)的末端'磷酸基和5'羥基基團(tuán)的末端限制性核酸內(nèi)切酶非限制性核酸內(nèi)切酶3.有關(guān)限制性核酸內(nèi)切酶，以下哪個(gè)描述是錯(cuò)誤的?A.識(shí)別和切割位點(diǎn)通常是48個(gè)bp長度 B.C.在識(shí)別位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵D.E.只能切割含識(shí)別序列的雙鏈DNA分子

2、大多數(shù)酶的識(shí)別序列具有回文結(jié)構(gòu)只能識(shí)別和切割原核生物 DN酚子4.在重組DNA技術(shù)中催化形成重組 DN酚子的酶是A.解鏈酶B. DNAC. DNA連接酶D.E.拓?fù)涿? .對(duì)基因工程載體的描述，下列哪個(gè)不正確?A.可以轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞B.C.可與目的基因相連D.E.有篩選標(biāo)志6 .克隆所依賴的DNA體的最基本性質(zhì)是A.卡那霉素抗性B.C.自我復(fù)制能力D.E.自我轉(zhuǎn)錄能力聚合酶內(nèi)切酶有限制酶的識(shí)別位點(diǎn)是環(huán)狀DNA分子7.重組DNA技術(shù)中常用的質(zhì)粒 DNA是A.病毒基因組DNA勺一部分B.C.細(xì)菌染色體DNA勺一部分D.青霉素抗性自我表達(dá)能力細(xì)菌染色體外的獨(dú)立遺傳單位真核細(xì)胞染色體外的獨(dú)立遺傳單位E.

3、真核細(xì)胞染色體DNA的一部分8.下列哪種物質(zhì)一般不用作基因工程的載體?A.質(zhì)粒B.噬菌體C.哺乳動(dòng)物的病毒D.逆轉(zhuǎn)錄病毒DNAE.大腸桿菌是因組9.A,關(guān)于pBR322質(zhì)粒描述錯(cuò)誤的是,有一些限制酶的酶切位點(diǎn)B ,含有1個(gè)ori.C ,.含有來自大腸桿菌的lacZ基因片段D.含個(gè)氨卞青霉素抗性基因E.含四環(huán)素抗性基因。10.以mR NA為模板催化c DN A合成需要下列酶A. RNA聚合酶B. DNA聚合酶C. Klenow片段D.逆轉(zhuǎn)錄酶E. DNA 酶11.催化聚合酶鏈反應(yīng)需要下列酶A. RNA聚合酶B. DNA聚合酶C. TaqDNAM合酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶E.限制性核酸內(nèi)切酶12 .關(guān)于P

4、C R的描述卜列哪項(xiàng)/、止確？A.是一種酶促反應(yīng)B.引物決定了擴(kuò)增的特異性C.擴(kuò)增產(chǎn)物量大D.擴(kuò)增的對(duì)象是DNA序列E.擴(kuò)增的對(duì)象是RN際列13 .在基因工程中，DNAI組體是指A. /、同來源的兩段DNAI鏈的復(fù)性B.目的基因與載體的連接物C. /、同來源的DN份子的連接物D.原核DNAf真核DNA勺連接物E.兩個(gè)不同的結(jié)構(gòu)基因形成的連接物14 .基因工程操作中轉(zhuǎn)導(dǎo)是指A.把重組質(zhì)粒導(dǎo)入宿主細(xì)胞B.把DNA1組體導(dǎo)入真核細(xì)胞C.把DNAt組體導(dǎo)入原核細(xì)胞D.把外源DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞E.以噬菌體或病毒為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞15 .重組DNA的篩選與鑒定不包括哪一方法A.限制酶酶切圖

5、譜鑒定B. PCR擴(kuò)增鑒定C.顯微注射D.監(jiān)白篩選E.抗藥篩選二、多項(xiàng)選擇題1 .在分子克隆中，目的 DNA可來自A.原核細(xì)胞染色體 DNAC.人工合成的DNAE.真核細(xì)胞mRN阪轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA2 .重組DNA術(shù)基本過程包括A.目的基因的獲取C.目的DNAf載體的連接E.重組DNA子轉(zhuǎn)化受體菌的篩選3 .分子克隆又稱A.基因克隆C.單克隆抗體制備E.基因重組4 .參與聚合酶鏈反應(yīng)體系的組分有A. DNA引物C.三磷酸脫氧核甘E. RNA聚合酶5.從基因組A.基因克隆C.DNA克隆B.真核細(xì)胞染色體DNAD.聚合酶鏈反應(yīng)B.克隆載體的構(gòu)建D.將重組體導(dǎo)入受體菌B.DNA克隆D.構(gòu)建基因組DN

6、A文庫B.目的DNAD. Taq DN咪合酶DNA文庫或cDNAC庫分離、擴(kuò)增某一感興趣基因的過程就是B.分子克隆D.構(gòu)建基因組DNAC庫E.重組DN破術(shù)6 .可用作克隆基因載體的 DNAtA.細(xì)菌質(zhì)粒DNAC.病毒DNAE.噬菌體DNA7 .將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)菌的方法有A.接合B.轉(zhuǎn)座C.感染8 .轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞的方法有A.磷酸鈣共沉淀法C. DEAE葡聚糖法E.顯微注射法9.下述操作可能用于基因工程過程的是A. DNA的制備和酶解B.真核細(xì)胞基因組DNAD.酵母人工染色體D.轉(zhuǎn)染E.轉(zhuǎn)化B.電穿孔D.脂質(zhì)體載體法B .不同來源DNA的拼接D.細(xì)菌的生長和繁殖C.重組DNAt入受體細(xì)胞

7、E.核酸分子雜交10.關(guān)于質(zhì)粒DNA的敘述正確的是A.是基因組DNA的組成部分B.具有獨(dú)立復(fù)制功能C.含有抗生素抗性基因D.含有感興趣的目的 DNAE.具有編碼蛋白質(zhì)的功能三、填空題1、DNA重組技術(shù)主要涉及兩大核心技術(shù)： 和。2、一個(gè)完整的基因克隆過程應(yīng)包括：目的基因的獲取， 的選擇與改造， 的連接，重組DNA分子 受體細(xì)胞， 出含感興趣基因的重組 DNA 轉(zhuǎn)化細(xì)胞。3、限制性核酸內(nèi)切酶是由 產(chǎn)生的一類識(shí)別 ,并在識(shí)別位點(diǎn)切割 鍵的核酸內(nèi)切酶。4、科學(xué)家感興趣的外源基因又稱 ,其來源有、等幾種 途徑。5、常用的目的基因與載體連接的方式有 、。6、根據(jù)采用的克隆載體性質(zhì)不同，將重組DNA分子導(dǎo)

8、入細(xì)菌的方法有、等。7、基因組文庫含有組織或細(xì)胞的,信息，cDNA文庫含有組織或細(xì)胞的 信息。8、 載體的本質(zhì)是 ,它應(yīng)具備下列基本條件： 和。四、名詞解釋4. DNA克隆8.限制性核酸內(nèi)切酶12.轉(zhuǎn)導(dǎo)1.基因工程2. DNA重組3.克隆5.目的基因6.基因載體7.質(zhì)粒9.基因文庫10. cDNA文庫11.轉(zhuǎn)化13.轉(zhuǎn)染五、問答題1 .載體應(yīng)具備以下基本條件2 .常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么?3 .重組DNA技術(shù)常包括哪些基本步驟：4 .常用的目的基因的獲取方法有哪些？5 .常用的目的基因與載體的連接方法有哪些？5 .何謂限制性核酸內(nèi)切酶？寫出大多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)DNA序列的結(jié)構(gòu)特

9、點(diǎn)。6 .解釋質(zhì)粒，為什么質(zhì)?？勺鳛榛蜉d體。參考答案一、單項(xiàng)選擇題1. A2. B 3. D 4. C 5. D 6. C 7. B8. E 9. C 10. D11. C 12. E 13. B14.E 15. C二、多項(xiàng)選擇題1. A、B、C、D、E2. A、B、C、D、E3. A、B、E4. A、B、C、D5. A、B、C 6. A、C、D、E7. C、D、E8. A、B、C、D、E9. A、B、C、D、E10. B、C三、填空題1 . DNA 重組、克隆2 .載體、目的基因與載體、導(dǎo)入、篩選3 .細(xì)菌、雙鏈DNA中的特定堿基序列、磷酸二酯4 .目的基因、制備基因組文庫、構(gòu)建 cDNA

10、文庫、PCR擴(kuò)增、人工合成 DNA技術(shù)5 .黏性末端連接、平頭末端連接、人工接頭法、同源多聚尾連接法6 .轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)7 . DNA、 mRNA 。8. DNA、具有獨(dú)立復(fù)制能力、具有多克隆位點(diǎn)、具有篩選標(biāo)志、具有足夠的容量、能導(dǎo) 入受體細(xì)胞四、名詞解釋1、是指在體外將 DNA分子“剪切”并重新“拼接”形成一個(gè)新的重組 DNA分子，然后將它導(dǎo)入細(xì)菌或動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)使之表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物或改造新的生物品種。2、是指用酶學(xué)方法將不同來源的DNA進(jìn)行切割、連接，組成一個(gè)新的DNA分子的過程。3、克?。╟lone）原指一個(gè)親本細(xì)胞經(jīng)無性繁殖產(chǎn)生無數(shù)個(gè)相同細(xì)胞的子代群體的過程。4、是指將重組 D

11、NA分子導(dǎo)入到合適的受體細(xì)胞中，使其擴(kuò)增和繁殖，以獲得大量的相同 的DNA分子，又稱分子克隆或基因克隆。5、要分離和克隆的相應(yīng)基因常稱為目的基因。因目的基因片段需插入載體，導(dǎo)入宿主細(xì)胞 內(nèi)進(jìn)行復(fù)制或表達(dá)，所以對(duì)宿主細(xì)胞DNA而言，又稱它為外源性基因或外源性DNA。6、能夠攜帶外源 DNA進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)彳T復(fù)制或表達(dá)的DNA分子，被稱為基因載體。7、是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，能自主復(fù)制的共價(jià)閉合環(huán)狀雙鏈DNA。8、是由細(xì)菌產(chǎn)生的一類能特異識(shí)別雙鏈DNA中的特定堿基序列，并在識(shí)別位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵的核酸內(nèi)切酶（簡稱限制酶）。9、將所有的重組 DNA分子都導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，得到分子克隆的混合體，

12、這樣一個(gè) 混合體稱為基因文庫。10、從組織細(xì)胞中分離得到純化的mRNA ,然后以mRNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成其互補(bǔ)DNA,再復(fù)制成雙鏈 cDNA片段，與適當(dāng)載體連接后導(dǎo)入受體菌內(nèi)，擴(kuò)增，構(gòu)建 cDNA 文庫。11、是指以質(zhì)粒為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主細(xì)胞，并使其獲得新的表型的過程。12、以噬菌體或細(xì)胞病毒為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞并獲得新的表型的過程稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）。13、真核細(xì)胞主動(dòng)攝取或被動(dòng)導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程稱為轉(zhuǎn)染。五、問答題1、具有獨(dú)立復(fù)制能力； 具備多個(gè)限制酶的識(shí)別位點(diǎn) （多克隆位點(diǎn)）；具有遺傳表 型或篩選標(biāo)志； 有

13、足夠的容量以容納外源DNA片段；可導(dǎo)入受體細(xì)胞。經(jīng)過人工構(gòu)建的載體，不但能與外源基因相連接，導(dǎo)入受體細(xì)胞，還能利用本身的調(diào)控系統(tǒng)，使外源基因在宿主細(xì)胞中復(fù)制并表達(dá)。2、（1）限制性核酸內(nèi)切酶：識(shí)別并特異切割DNA堿基序列；（2） DNA pol I :催化缺口平移，制備高比度 DNA探針；（3） Klenow片段：合成cDNA第二條鏈，補(bǔ)齊或標(biāo)記雙鏈 DNA3 '端；（4） TaqDNA聚合酶：DNA體外擴(kuò)增（PCR）; （5）逆轉(zhuǎn)錄酶：催化合成 cDNA ;（6） T4DNA聚合酶：聚合補(bǔ)平或標(biāo)記 DNA平末端或3'凹端等；（7） DNA連接酶：催化 2 條DNA鏈之間形成磷

14、酸二酯鍵；（8）大腸桿菌DNA連接酶： 應(yīng)用于黏端 DNA或切口間連接；（9） T4DNA連接酶：應(yīng)用于黏性或平末端DNA的連接；（10）末端脫氧核甘酸轉(zhuǎn)移酶：給載體或cDNA加上互補(bǔ)的同聚尾、加標(biāo)記物；（11）堿性磷酸酶：防止載體自身連接、 32P標(biāo)記5'端；（12） T4多核甘酸激酶：5'端磷酸化、5'端標(biāo)記放射性核素。3、（1）分離制備目的基因一一“分”；（2）切割目的基因和載體一一“切”；（3）目的基因與載體的連接一一“接” ；（4）將重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞一一“轉(zhuǎn)” ；（5）篩選并鑒定含重 組DNA分子的受體細(xì)胞克隆一一“篩”；（6）克隆基因在受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)

15、制或表達(dá)一一“表”。4、（1）制備基因組文庫；（2）構(gòu)建cDNA文庫；（3） PCR擴(kuò)增目的基因；（4）人工 合成DNA技術(shù)。5、黏性末端連接：將靶基因片段和載體DNA經(jīng)相同的限制酶分別切割，使它們兩端產(chǎn)生相同的黏性末端。然后經(jīng)黏性末端堿基配對(duì)，再經(jīng) DNA連接酶作用，共價(jià)連接成新的 重組DNA分子；平頭末端連接：將平末端的DNA分子在T4DNA連接酶催化下，使DNA 分子的3' OH和5' P進(jìn)行共價(jià)結(jié)合；人工接頭法： 是指利用人工接頭加在平端 DNA片段的兩端，然后用相應(yīng)限制酶切割人工接頭以產(chǎn)生黏性末端，再與帶相同黏性末端的載體相連； 同源多聚尾連接法：在末端脫氧核甘酸轉(zhuǎn)移酶催化下，在線型載體分子的兩端加 上單一核甘酸如 dG組成的多聚尾；而在目的 DNA分子的兩端加上 dC尾，兩者混合退火， 然后經(jīng)DNA聚合酶I或Klenow填補(bǔ)裂口處缺失的核甘酸， 再通過DNA連接酶修復(fù)成環(huán)狀 的雙鏈DNA。6、限制性核酸內(nèi)切酶（RE）是由細(xì)菌產(chǎn)生的一類能特異識(shí)別雙鏈DNA中的特定堿基序列，并在識(shí)別位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵的核酸內(nèi)切酶（簡稱限制酶）。限制酶的識(shí)別和切割位點(diǎn)通常是48個(gè)bp長度且具有回文序列