生化檢測(cè)基本常識(shí)(共23頁(yè))

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè) 生生生化化化檢檢檢測(cè)測(cè)測(cè)常常常識(shí)識(shí)識(shí) 精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)目錄目錄 第一章第一章 生化檢測(cè)基本常識(shí)生化檢測(cè)基本常識(shí)1.1 標(biāo)本的獲得 （2）第二章第二章 常規(guī)生化檢測(cè)項(xiàng)目簡(jiǎn)介常規(guī)生化檢測(cè)項(xiàng)目簡(jiǎn)介2.1 生化項(xiàng)目的臨床意義 （2）第三章第三章 生化儀參數(shù)測(cè)量原理生化儀參數(shù)測(cè)量原理3.1 自動(dòng)生化儀的分類(lèi)（3）3.2 分立式生化儀結(jié)構(gòu)（5）3.3 生化檢驗(yàn)的原理和方法 （6）3.4 生化分析儀測(cè)定方法的分類(lèi)及應(yīng)用度的計(jì)算 （9）3.5.測(cè)定值計(jì)算方程 （10）3.6 定標(biāo)參數(shù)和濃度的計(jì)算（17）第四章第四章 幾個(gè)重要概念幾個(gè)重要概念

2、51 試劑空白（21）52 樣本空白（21）53 水空白 （21）54 樣本 （21）55 質(zhì)控物質(zhì)（21）56 底物控制（21）第一章第一章生化檢測(cè)基本常識(shí)生化檢測(cè)基本常識(shí)精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)生化檢測(cè)是醫(yī)院檢驗(yàn)科（或化驗(yàn)室）常用的檢測(cè)手段，通常以人的血清為標(biāo)本，通過(guò)測(cè)量血清中各生化成份的含量，為臨床診斷提供依據(jù)。1.1 標(biāo)本的獲得一般要求病人空腹時(shí)采靜脈血（全血） 。全血經(jīng)過(guò)離心機(jī)離心，分層為血清和血細(xì)胞，正常情況下，上層顏色淺且透明（血清） ，下層顏色深且不透明（血細(xì)胞） 。有的血清較為特殊，或分層不明顯（融血） ，或血清不透明（脂血，呈牛奶狀） 。第二章第二章 常規(guī)

3、生化檢測(cè)項(xiàng)目簡(jiǎn)介常規(guī)生化檢測(cè)項(xiàng)目簡(jiǎn)介2.1 生化項(xiàng)目的臨床意義生化項(xiàng)目的臨床意義丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）：）：又稱(chēng)為谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）是衡量肝功能的重要指標(biāo)，許多低端醫(yī)療機(jī)構(gòu)在做體檢時(shí)僅測(cè)此一項(xiàng)生化項(xiàng)目。正常人一般在 40U/L 以?xún)?nèi)。干粉試劑復(fù)溶后為單試劑，液體試劑一般為雙試劑，應(yīng)用動(dòng)力學(xué)法可計(jì)算結(jié)果。蛋白：蛋白：通常測(cè)白蛋白（ALB）和總蛋白（TP） ，終點(diǎn)法。一般用單試劑，有的 TP 試劑為雙試劑，可用兩點(diǎn)終點(diǎn)法測(cè)。蛋白質(zhì)是血清的主要成份，大部份由肝細(xì)胞合成。通過(guò)蛋白的測(cè)定可以協(xié)助某些疾病的診斷。血糖：血糖：血液中的葡萄糖簡(jiǎn)稱(chēng)血糖（GLU） 。常用于糖尿病的診斷。正

4、常人空腹血糖一般為3.96.1mmol/L。市場(chǎng)上單、雙試劑的商品化試劑盒都有，可用終點(diǎn)法（單試劑）或兩點(diǎn)終點(diǎn)法測(cè)量（雙試劑） 。門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）：又稱(chēng)為谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT） ，主要用于心肌和肝膽疾病及骨骼肌病的診斷。是肝功能測(cè)試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在 40U/L 以?xún)?nèi)。同 ALT 一樣，無(wú)論單、雙試劑，用動(dòng)力學(xué)法可計(jì)算結(jié)果。堿性磷酸酶（堿性磷酸酶（ALP）：主要用于肝膽疾病及骨骼病的診斷。是肝功能測(cè)試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在 240U/L 以?xún)?nèi)。用動(dòng)力學(xué)法計(jì)算結(jié)果。-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）：）：主要用于肝膽疾病診斷。是肝功能測(cè)試的常用指

5、標(biāo)之一。正常人一般在 50U/L 以?xún)?nèi)。用動(dòng)力學(xué)法計(jì)算結(jié)果。膽紅素（膽紅素（BiL）：）：膽紅素的測(cè)定，能準(zhǔn)確反映黃疸的程度，判斷黃疸的類(lèi)型。一般測(cè)量總膽紅素（TBil）和直接膽紅素（DBil） 。甘油三酯（甘油三酯（TG）：）：其含量測(cè)定是血脂分析的重要內(nèi)容之一?？偰懝檀迹偰懝檀迹–HOL）：）：是游離膽固醇和膽固醇酯的總稱(chēng)，其測(cè)定對(duì)高脂蛋白血癥和冠心病的診斷及發(fā)病機(jī)理的研究有一定意義。高密度脂蛋白膽固醇（高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）：）：主要在肝臟中合成，是血清中顆粒數(shù)最多的脂蛋白。其含量是冠心病診斷的重要依據(jù)之一。肌酐（肌酐（CREA）：）：是肌酸代謝的最終產(chǎn)物，由腎臟排出。是腎功

6、能的重要指標(biāo)之一。尿素（尿素（Urea）：是蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物。血尿素測(cè)定是腎功能的最敏感指標(biāo)。載脂蛋白載脂蛋白 A1(APOA1): 是高密度脂蛋白的主要組成成分，臨床上主要用于腦血管病風(fēng)險(xiǎn)度的估計(jì)。載脂蛋白載脂蛋白 B(APOB): 是低密度脂蛋白的主要組成成分，臨床上主要用于的風(fēng)險(xiǎn)度的估計(jì)。肌酸激酶（肌酸激酶（CK）：）：肌酸激酶通常存在于動(dòng)物的心臟、肌肉以及腦等組織的細(xì)胞漿和線(xiàn)粒體中，是一個(gè)與細(xì)胞內(nèi)能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP 再生有直接關(guān)系的重要激酶。可用于早期診斷急性心肌梗，常見(jiàn)肌病(如進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良發(fā)作期、病毒性心肌炎、多發(fā)性肌炎、擠壓綜合征等嚴(yán)重肌肉損傷)及腦血管疾病的診斷

7、。-羥丁酸脫氫酶（羥丁酸脫氫酶（HBDH）：）：與肌酸激酶相同，用于診斷心肌梗死。-淀粉酶（淀粉酶（AMY）：）：在臨床應(yīng)用方面，-淀粉酶活力升高與急性胰腺炎、胰腺管道阻塞、腹內(nèi)疾病、流行性腮腺炎及細(xì)菌性腮腺炎。鈣、氯、鐵、鉀、鈉、鎂、磷：鈣、氯、鐵、鉀、鈉、鎂、磷：這 7 項(xiàng)都屬于離子組合，用于診斷人體中離子的含量。精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)常用檢測(cè)項(xiàng)目表常用檢測(cè)項(xiàng)目表序號(hào)項(xiàng)目名稱(chēng)縮寫(xiě)組合參考值1.白蛋白ALB3555g/L2.總蛋白TP6080g/L3.堿性磷酸酶ALP15112U/L4.門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST（GOT）837U/L5.丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT（GPT）06

8、5U/L6.-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶GGT050U/L7.直接膽紅素DB06umol/L8.總膽紅素TB肝功能018umol/L9.肌酐CREA53115mol/L10.尿酸UA210430umol/L11.尿素UREA腎功能2.56.4mmol/L12.膽固醇CHOL3.66.5mmol/L13.甘油三酯TG0.451.81mmol/L14.高密度脂蛋白HDL0.91.68mmol/L15.低密度脂蛋白LDL2.73.1mmol/L16.載脂蛋白 A1APOA11.01.6g/L17.載脂蛋白 BAPOB0.61.1g/L18.脂蛋白Lp（a）血脂030mg/dL19.肌酸激酶CK21190U/L20

9、.肌酸激酶同工酶CK-MB025U/L21.-羥丁酸脫氫酶HBDH70180U/L22.乳酸脫氫酶LDH心肌酶類(lèi)114240U/L23.鈣Ca2.02.6mmol/L24.氯Cl95105mmol/L25.鐵Fe930mol/L26.鉀K3.55.5mmol/L27.鎂Mg0.61.1mmol/L28.鈉Na135145mmol/L29.磷P離子0.81.6mmol/L30.-淀粉酶AMY100220U/L31.葡萄糖GLU其它3.95.8mmol/L第三章 生化儀參數(shù)測(cè)量原理3.1 自動(dòng)生化儀的分類(lèi)自動(dòng)生化儀的分類(lèi)3.1.1 連續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)化分析儀精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)連

10、續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)化分析儀也叫管道式分析儀，其特點(diǎn)是測(cè)定項(xiàng)目相同的各待測(cè)樣本與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)，是在同一管道中經(jīng)流動(dòng)過(guò)程完成的。這類(lèi)儀器一般可分為空氣分段系統(tǒng)式和非分段系統(tǒng)式。所謂空氣分段系統(tǒng)是指在吸入管道的每一個(gè)樣品、試劑以及混合后的反應(yīng)液之間，均由一小段空氣間隔開(kāi)；而非分段系統(tǒng)是靠試劑空白或緩沖液來(lái)間隔每個(gè)樣品的反應(yīng)液。在管道式分析儀中，以空氣分段系統(tǒng)式最多，且較典型，整套儀器是由樣品盤(pán)、比例泵、混合管、透析器、恒溫器、比色計(jì)和記錄器幾個(gè)部件所組成。管道內(nèi)的圓圈表示氣泡，氣泡可將樣品及試劑分隔為許多液柱，并起一定的攪拌作用。但氣泡影響比色，必須在比色前除去。將幾個(gè)單通道管道式分析儀結(jié)合起來(lái)，

11、對(duì)一個(gè)樣品同時(shí)測(cè)定幾個(gè)項(xiàng)目。著名的有 12 通道分析儀，命名為順序多項(xiàng)自動(dòng)分析儀（sequential multiple auto analyzer）簡(jiǎn)稱(chēng) SMA12/60。同時(shí)發(fā)展為SMAC，C 為計(jì)算機(jī)（computer）的縮寫(xiě)。這類(lèi)大型分析儀至今仍有使用者。它對(duì)每個(gè)樣品可同時(shí)分析 12 個(gè)項(xiàng)目，每小時(shí)可分析 60 個(gè)樣品。后來(lái)發(fā)現(xiàn)不加入空氣泡，更有利于結(jié)果的檢測(cè)，發(fā)展為流動(dòng)注射分析法（flow injection analysis） 。試劑的流動(dòng)仍用比例泵驅(qū)動(dòng)，樣品用轉(zhuǎn)動(dòng)閥加入液流，反應(yīng)后比色檢測(cè)。3.1.2 離心式生化分析儀離心式分析儀是 1969 年以后發(fā)展起來(lái)的一種分析儀，由 An

12、derson 設(shè)計(jì)，其特點(diǎn)是化學(xué)反應(yīng)器裝在離心機(jī)的轉(zhuǎn)子位置，該圓形反應(yīng)器稱(chēng)為轉(zhuǎn)頭，先將樣品和試劑分別置與轉(zhuǎn)頭內(nèi)，當(dāng)離心機(jī)開(kāi)動(dòng)后，圓盤(pán)內(nèi)的樣品和試劑受離心力的作用而相互混合發(fā)生反應(yīng)，最后流入圓盤(pán)外圈的比色槽內(nèi)，通過(guò)比色計(jì)進(jìn)行檢測(cè)。離心式分析儀主要由兩部分組成，一為加樣部分，二為分析部分。加樣部分包括樣品盤(pán)、試劑盤(pán)、吸樣臂（或管） 、試劑臂（加液器）和電子控制部分（鍵盤(pán)和顯示器等） 。加樣時(shí)轉(zhuǎn)頭置于加樣部分。加樣完畢后將轉(zhuǎn)頭移至離心機(jī)上。分析部分，除安裝轉(zhuǎn)頭的離心機(jī)外，還有溫控和光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)，并有微機(jī)信息處理和顯示系統(tǒng)。13 分立式生化分析儀所謂分立式，是指按手工操作的方式編排程序，并以有節(jié)奏的機(jī)

13、械操作代替手工，各環(huán)節(jié)用傳送帶連接起來(lái)，按順序依次操作。分立式分析儀與管道式分析儀在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別為：前者各個(gè)樣品和試劑在各自的試管中起反應(yīng)，而后者是在同一管道中起反應(yīng)；前者采用由采樣器和加液器組成的稀釋器來(lái)取樣和加試劑，而不用比例泵；前者一般沒(méi)有透析器，如要除蛋白質(zhì)等干擾，需另行處理。恒溫器必須能容納需保溫的試管和試管架，所以比管道式分析儀的體積要大。除此以外，其它部件與管道式的基本相似。分立式分析儀的基本結(jié)構(gòu)如下圖所示。Depout 公司還推精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)出一種袋式分析儀，即試管變?yōu)樗芰洗?，反?yīng)在袋內(nèi)進(jìn)行，也以袋作比色杯。這種袋只能一次性使用。3.1.3 干片

14、式分析儀干片式分析儀是 80 年代問(wèn)世的。首先 Eastman kodak 公司以其精湛的化學(xué)工藝造出了測(cè)定血清中血糖、尿素、蛋白質(zhì)、膽固醇等的干式試劑片。當(dāng)加上定量的血清后，在干片的前面產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用反射光度計(jì)檢測(cè)即可進(jìn)行定量。這類(lèi)方法完全革除了液體試劑，故稱(chēng)干化學(xué)法。Boehringer Mannheim 公司推出了用全血的干征試劑。即將血細(xì)胞排除于濾膜之外，而血漿與試劑發(fā)生反應(yīng)后顯色檢測(cè)。3.1.4 模塊式自動(dòng)化系列精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)7600 系列全自動(dòng)生化分析儀是日立公司于 1998 年開(kāi)發(fā)出來(lái)的系列分析儀。它是由各種不同功能的模塊組合而成，功能模塊包括有樣本

15、投入部、電解質(zhì)測(cè)定的 ISE 模塊、常規(guī)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目測(cè)定的 D 模塊、特殊實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目測(cè)定的 P 模塊、復(fù)查樣本緩沖部和樣本收納部。根據(jù) D 模塊和 P 模塊數(shù)目組合成不同型號(hào)的分析儀。模塊組合式實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng)包括：樣品前處理系統(tǒng)，樣品輸送系統(tǒng)和樣品后處理系統(tǒng)（生化分析，電解質(zhì)分析，血液分析等） 。樣品前處理系統(tǒng)由能獨(dú)立工作，不同功能的各模塊以同一標(biāo)準(zhǔn)來(lái)連接，通過(guò)計(jì)算機(jī)控制運(yùn)行。由樣品投入部，離心分離部，開(kāi)栓部，在線(xiàn)分注部，非在線(xiàn)分注部，貼條碼部，蓋栓部，樣品分注收存部，標(biāo)本接收部等模塊構(gòu)成前處理系統(tǒng)，每一模塊既是系統(tǒng)的一部分，又是獨(dú)立的單元，可根據(jù)不同需要選擇使用，具有靈活性和擴(kuò)展性。后處理系統(tǒng)有

16、電解質(zhì)分析系統(tǒng)，生化分析系統(tǒng)以及血液分析系統(tǒng)等。16 全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化分析系統(tǒng)從檢驗(yàn)標(biāo)本處理開(kāi)始，即標(biāo)本的識(shí)別、傳輸、處理（分離血清等） 、分注、分類(lèi)（按項(xiàng)目分類(lèi)） 、檢測(cè)和收費(fèi)的自動(dòng)化流水作業(yè)，到分析后自動(dòng)儲(chǔ)存標(biāo)本，檢驗(yàn)結(jié)果的自動(dòng)分析、報(bào)告與傳送，自動(dòng)提示異常值或危險(xiǎn)值，申請(qǐng)檢驗(yàn)醫(yī)師隨時(shí)查詢(xún)檢驗(yàn)結(jié)果的全過(guò)程實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、網(wǎng)絡(luò)化。3.2 分立式生化儀結(jié)構(gòu)分立式生化儀結(jié)構(gòu)精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)全自動(dòng)生化分析儀一般由以下部分構(gòu)成：探針系統(tǒng)、攪拌和沖洗系統(tǒng)、恒溫系統(tǒng)、反應(yīng)盤(pán)、光路系統(tǒng)構(gòu)成。21 探針系統(tǒng) 液面檢測(cè)技術(shù)：通過(guò)檢測(cè)阻抗或電容、電流的變化，感知到空氣和液面，可保證探針的感應(yīng)

17、裝置至液面時(shí)會(huì)自動(dòng)停止下降，即可增加速度也可減少污染，防止堵塞。22 攪拌和沖洗系統(tǒng)攪拌系統(tǒng)是讓樣品和試劑混合后迅速分布均勻，保障測(cè)試正常進(jìn)行。常用的攪拌方法為沖入空氣、攪拌、振蕩等，但是都容易產(chǎn)生氣泡和外溢等問(wèn)題。目前最好的方法是螺旋式攪拌棒附著特富龍涂層，一方面減少氣泡，另一方面減少攜帶和污染。清洗系統(tǒng)一般包括試劑針的內(nèi)外臂清洗、樣本針的內(nèi)外臂清洗、比色杯的清洗。 23 恒溫系統(tǒng) 全自動(dòng)生化儀一般都設(shè)有 30 和 37 度兩種溫度。目前常見(jiàn)的有水浴、空氣浴，最新的是恒溫液循環(huán)加溫方式。 水浴的優(yōu)點(diǎn)是溫度均勻、穩(wěn)定；缺點(diǎn)是升溫緩慢，開(kāi)機(jī)預(yù)熱時(shí)間長(zhǎng)，因水質(zhì)化（微生物、礦物質(zhì)沉積）影響測(cè)定，因此

18、要定期換水和比色杯。 空氣浴的優(yōu)點(diǎn)是升溫迅速，無(wú)需保養(yǎng)；缺點(diǎn)是溫度易受外界環(huán)境影響。 恒溫液循環(huán)加溫集干式空氣浴和水浴的優(yōu)點(diǎn)，即有水浴溫度穩(wěn)定、均勻的優(yōu)點(diǎn)，又有空氣浴升溫迅速、無(wú)需維護(hù)保養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)。24 反應(yīng)盤(pán)現(xiàn)在大多數(shù)采用硬質(zhì)玻璃比色杯（石英杯） ，其透光性好，易清潔，不易磨損。 25 光路系統(tǒng) 光源：光源分為鹵素?zé)艉透邏洪W爍氙燈。相對(duì)而言鹵素?zé)魤勖L(zhǎng)，價(jià)格低，是大部分生化儀的首先。3.3 生化檢驗(yàn)的原理和方法生化檢驗(yàn)的原理和方法 臨床生化檢驗(yàn)，主要在技術(shù)方面的應(yīng)用方面上探討生化檢驗(yàn)新技術(shù)以及新的標(biāo)記物的選擇和評(píng)價(jià)，用于幫助診斷，又稱(chēng)“診斷生化” 。主要應(yīng)用于下列技術(shù)：光譜技術(shù)、電化學(xué)分析技術(shù)

19、、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、離心技術(shù)、抗原抗體特異性反應(yīng)和標(biāo)記技術(shù)、核酸擴(kuò)增、雜交及序列分析技術(shù)等，其中生化分析儀主要運(yùn)用了光譜技術(shù)中的吸收光譜法和比濁法。分別介紹如下： 31 吸收光譜法 311 光譜范圍和電子躍遷波長(zhǎng)從 200nm400nm 的電磁輻射，稱(chēng)為紫外光，波長(zhǎng)從 400nm760nm 的電磁輻射，稱(chēng)為可見(jiàn)光。 312 吸收曲線(xiàn)以波長(zhǎng)（）為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)而繪制出的一條曲線(xiàn)稱(chēng)為吸收曲線(xiàn)。精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)在一段波長(zhǎng)范圍內(nèi)，有最大吸收波長(zhǎng) max和最小吸收波長(zhǎng) min在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定可獲得最大的測(cè)定靈敏度。313 吸光度的定義一束強(qiáng)度為 IO的平行單色光

20、通過(guò)一個(gè)含有濃度為 C 的吸光物質(zhì)、厚度為 L 的吸收池時(shí)，如上圖，一些光子被吸收，光強(qiáng)從 IO衰減為 It，則該溶液的吸光度 A 等于：314Lamber-Beer 定律A=CL其中 為吸光系數(shù)，有兩種表示方法摩爾吸光系數(shù)和比吸光系數(shù)，摩爾吸光系數(shù)的意義為 1 摩爾濃度的溶液在厚度為 1cm 時(shí)的吸光度，比吸光系數(shù)的意義為濃度為 1%（w/u）的溶液在厚度為1cm 時(shí)的吸光度；C 為溶液的濃度；L 為吸收池的厚度（單位為 cm，亦稱(chēng)光徑） 。Lamber-Beer 定律的意義為：某溶液的吸光度等于該物質(zhì)的吸光系數(shù) 、濃度 C 和光徑 L（cm）的乘積，當(dāng)光徑不變時(shí)，濃度和吸光度成正比，這是生

21、化分析儀利用吸收光譜法進(jìn)行定量測(cè)定的基礎(chǔ)，見(jiàn)下圖： Lamber-Beer 定律成立的前提條件是：（1）被吸收光為單色平行光， （2）待測(cè)定溶液為稀溶液。除特種蛋白外的大部分臨床生化項(xiàng)目，配以相應(yīng)的試劑，均可利用吸收光譜法在生化分析儀上進(jìn)行測(cè)定。如：酶類(lèi)：包括 ALT、AST、ALP、ACP、r-GT、a-HBDH、LDH、CK、CK-MB、a-AMY、等。底物/代謝產(chǎn)物類(lèi)：包括 TG、TC、HDL-C、LDL-C、UA、UREA、Cr、Glu、TP、Alb、T-Bil、D-Bil、NH4+、CO2 等。無(wú)機(jī)離子類(lèi)：包括 Ca、P、Mg、Cl 等。32 比濁法321比濁法分兩類(lèi)：透射比濁法和散

22、射比濁法。帶有小粒的懸浮液和膠體溶液都具有向四面八方散射入射光的性質(zhì)，當(dāng)一束平行光通過(guò)含有懸浮質(zhì)點(diǎn)的懸浮液或膠體溶液時(shí)，同時(shí)受到散射和吸收兩個(gè)因素的影響，使光的強(qiáng)度減弱。在光源的光路方向上測(cè)量透射光（實(shí)際上還包括散射光）強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度比值，并通過(guò)該比值測(cè)定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點(diǎn)的溶度，稱(chēng)為投射比濁法；在光路的其他方向上測(cè)量散射光強(qiáng)度，從而測(cè)定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點(diǎn)的濃度，稱(chēng)為散射比濁法。322 測(cè)定原理透射比濁法顆粒大小與光源波長(zhǎng)接近精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)一束強(qiáng)度為 I0的平行單色光通過(guò)一個(gè)含有懸浮質(zhì)點(diǎn)（顆粒大小與光源波長(zhǎng)接近）的懸浮液或膠體溶液時(shí)，如上圖，其透射光強(qiáng)

23、度 I 可用下式表示：I=IOe- L式中,L 為懸浮液或膠體溶液在光前進(jìn)方向上的長(zhǎng)度， 為濁度系數(shù)，與懸浮質(zhì)點(diǎn)的濃度 C 成線(xiàn)性關(guān)系。令 =2.3KC，則：該式與 Lamber-Beer定律相似，這是生化分析儀利用投射比濁法進(jìn)行定量測(cè)定的基礎(chǔ)，該法可以與吸收光譜法共用一個(gè)檢測(cè)器，所以生化分析儀，不需增加任何部件，均可利用此法進(jìn)行測(cè)定。大部分特種蛋白，如載脂蛋白類(lèi)（apoAI,apoB 等） 、補(bǔ)體類(lèi)（C3，C4 等）免疫球蛋白類(lèi)（IgG,IgM 等）等，配以相應(yīng)的試劑，可利用此法在生化分析儀上進(jìn)行測(cè)定。散射比濁法一束強(qiáng)度為 IO平行單色光通過(guò)一個(gè)含有懸浮質(zhì)點(diǎn)（顆粒大小遠(yuǎn)小于光源波長(zhǎng)）的懸浮液

24、或膠體溶液時(shí)，如上圖，與入射光垂直方向上，其散射光強(qiáng)度 I 可用下式表示：式中，n1,n2 分別表示質(zhì)點(diǎn)與介質(zhì)的折射率，V 表示單位體積內(nèi)的質(zhì)點(diǎn)數(shù)，r 表示質(zhì)點(diǎn)半徑?？梢?jiàn)散射光強(qiáng)度與懸浮質(zhì)點(diǎn)的濃度成正比，這是利用散射比濁法進(jìn)行定量測(cè)定的基礎(chǔ)，因另需在光路垂直方向上增加一檢測(cè)器，目前只有極少數(shù)生化分析儀可利用散射比濁法進(jìn)行定量測(cè)定，而幾乎所有的特種蛋白分析儀、免疫分析儀等都能利用散射比濁法進(jìn)行定量測(cè)定。323 方法學(xué)分析（1）散射比濁法與透射比濁法：散射比濁法靈敏度高，線(xiàn)性范圍寬，但干擾因素多。（2）比濁法與吸收光譜法：比濁法特異性差，靈敏度低。3.43.4 生化分析儀測(cè)定方法的分類(lèi)及應(yīng)用度的計(jì)

25、算生化分析儀測(cè)定方法的分類(lèi)及應(yīng)用度的計(jì)算4.4.1 終點(diǎn)法4.4.1 概述指經(jīng)過(guò)一段時(shí)間（一般為 10 分鐘左右）的反應(yīng)，整個(gè)反應(yīng)達(dá)到平衡，由于反應(yīng)的平衡常數(shù)很大，可認(rèn)為所有的被測(cè)定物已轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，反應(yīng)液的吸光度不在增加（或降低） ，吸光度的增加（或降低）程度與被測(cè)定物的濃度成正比。如下圖：顆粒大小遠(yuǎn)小于光源波長(zhǎng)精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)如圖所示：t1 時(shí)刻加入試劑（體積為 V） ，t2 時(shí)刻加入樣本（體積為 S） ，然后攪拌并反應(yīng)，之后測(cè)量反應(yīng)液的吸光度，在 t3 時(shí)刻反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)。T2 t3 為測(cè)定時(shí)間。442 反應(yīng)度 R（Response）的計(jì)算結(jié)果的計(jì)算包括三個(gè)部分：反

26、應(yīng)度 R（Response）的計(jì)算、定標(biāo)參數(shù)的計(jì)算和濃度（或活性）的計(jì)算。這里僅介紹 R 的計(jì)算，定標(biāo)參數(shù)的計(jì)算和濃度（或活性）的計(jì)算在后面專(zhuān)門(mén)討論。1）單試劑單波長(zhǎng)終點(diǎn)法反應(yīng)度 R=t3 時(shí)刻吸光度- t2 前一時(shí)刻吸光度 （體積校正因子)或 R=t3 時(shí)刻吸光度-單試劑空白吸光度。2）雙試劑單波長(zhǎng)終點(diǎn)法t1 時(shí)刻加入第一試劑（體積為 V1） ，t2 時(shí)刻加入樣本（體積為 S） ，之后攪拌，t3 時(shí)刻加入第二試劑（體積為 V2）并立即攪拌，t4 時(shí)刻反應(yīng)打到終點(diǎn)。t3-t2 為孵育時(shí)間，t4-t3 為測(cè)定時(shí)間。反應(yīng)度 R= t4 時(shí)刻吸光度-雙試劑空白吸光度4.4.2 一級(jí)動(dòng)力學(xué)4.4.2

27、概述一級(jí)動(dòng)力學(xué)是指在被測(cè)物參與反應(yīng)的條件下，在一定的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，反應(yīng)速度與反應(yīng)物濃度的一次方成正比，由于反應(yīng)物在不斷的消耗，因此整個(gè)反應(yīng)速度在不斷的減小，表現(xiàn)為吸光度的增加（或降低）速度越來(lái)越小，由于這類(lèi)反應(yīng)達(dá)到平衡的時(shí)間很長(zhǎng)，且平衡常數(shù)不算很大，必需在特定時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，該段時(shí)間內(nèi)吸光度的增加（或）降低與被測(cè)定物的濃度成正比，見(jiàn)下圖。一級(jí)動(dòng)力學(xué)法又被稱(chēng)為初速率法、固定時(shí)間法、二點(diǎn)動(dòng)力學(xué)等。如圖所示：t1 時(shí)刻加入試劑（體積為 V） ，之后測(cè)量試劑空白的吸光度，t2 時(shí)刻加入樣本（體積為 S） ，t3 時(shí)刻反應(yīng)穩(wěn)定，t4 時(shí)刻停止對(duì)反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)；t2-t3 為延遲時(shí)間，t3-t4 為測(cè)定時(shí)間

28、。精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)4.2.2 反應(yīng)度 R 的計(jì)算（單、雙試劑相同）反應(yīng)度 R=t4 時(shí)刻吸光度t3 時(shí)刻吸光度4.4.3 零級(jí)動(dòng)力學(xué)法4.4.31 概述指反應(yīng)速度與被測(cè)定物濃度的零次方成正比，也就是與被測(cè)定物濃度無(wú)關(guān)，因此，在整個(gè)反應(yīng)過(guò)程中，反應(yīng)物可以勻速地生成某個(gè)產(chǎn)物，導(dǎo)致被測(cè)定溶液在某一波長(zhǎng)下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度（A/min）與被測(cè)物的活性或濃度成正比。零級(jí)動(dòng)力學(xué)法即通常所說(shuō)的動(dòng)力學(xué)法，也被稱(chēng)為連續(xù)監(jiān)測(cè)法，主要用于酶活性的測(cè)定。實(shí)際上，由于底物濃度不可能足夠大，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，底物消耗到一定的程度后，反應(yīng)速度不再與酶活性成正比，因此，零級(jí)動(dòng)力學(xué)

29、法是針對(duì)于特定時(shí)間段而言的，各試劑商對(duì)這段時(shí)間有嚴(yán)格規(guī)定，見(jiàn)下圖中的 t3-tn:t1 時(shí)刻加入試劑（體積為 V） ，t2 時(shí)刻加如樣本（體積為 S） ，t3 時(shí)刻反應(yīng)穩(wěn)定，tn 時(shí)刻停止對(duì)反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)；t3 到 tn 之間的時(shí)間內(nèi)，吸光度勻速變化，變化的速率和反應(yīng)物的濃度成線(xiàn)性關(guān)系。t3-t2 為延遲時(shí)間 ，tn-t3 為測(cè)定時(shí)間。432 反應(yīng)度 R 的計(jì)算（單、雙試劑相同）其中 n=t3 到 tn 間的數(shù)據(jù)個(gè)數(shù)Ti=時(shí)間Ai=某一時(shí)間的吸光度3.5.3.5.測(cè)定值計(jì)算方程測(cè)定值計(jì)算方程以下為各種方法學(xué)的測(cè)定值計(jì)算方程及監(jiān)察參數(shù)定以下為各種方法學(xué)的測(cè)定值計(jì)算方程及監(jiān)察參數(shù)定三種基本方法的應(yīng)用

30、如下:- 終點(diǎn)法- 兩點(diǎn)法- 動(dòng)力法3.5.13.5.1 終點(diǎn)法終點(diǎn)法- -單試劑單試劑, , 單波長(zhǎng)及樣本空白扣除單波長(zhǎng)及樣本空白扣除 測(cè)定值 x 單位因子 截距最後報(bào)告結(jié)果最後報(bào)告結(jié)果 = _ 斜率 精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)每個(gè)終點(diǎn), 儀器均測(cè)取三個(gè)讀數(shù)T0, T1 - 18及 T1. 測(cè)定值 = 因子 x Abs (T1) - *Rb1R 標(biāo)準(zhǔn)濃度因子 =_Abs (T1) - *Rb1R(試劑空白值)* RBL 試劑空白值, 可在定標(biāo)數(shù)據(jù)程序內(nèi)查看延時(shí)時(shí)間時(shí)間T0吸光度 (Abs)加入樣本RblRAbs (T1)T1-18” 精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)

31、3.5.23.5.2 反應(yīng)控制反應(yīng)控制是用來(lái)監(jiān)察在終點(diǎn)法中反應(yīng)是否己到終點(diǎn).Abs (T1) - Abs ( 1) 反應(yīng)控制反應(yīng)控制 Abs = Abs (T1) - Abs ( 1) = 0.3336 - 0.3319 = 0.0017 反應(yīng)控制反應(yīng)控制終點(diǎn)法時(shí)：指反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度與前一點(diǎn)的吸光度差值要小于儀器給出的反應(yīng)控制反應(yīng)控制，否則反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)時(shí)會(huì)報(bào)警終點(diǎn)不穩(wěn)定。固定時(shí)間法：判斷參與計(jì)算的兩點(diǎn)線(xiàn)性，例如：時(shí)間1 T1 吸光度 (Abs)加入樣本兩測(cè)的吸光度差值.Abs精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)3.5.33.5.3 試劑試劑白白波動(dòng)波動(dòng)試劑試劑白白波動(dòng)波動(dòng)是試劑本身在測(cè)讀

32、時(shí)間內(nèi)的吸光度變化值.3.5.43.5.4 兩點(diǎn)法（兩點(diǎn)法（I.R.)I.R.) 單試劑單試劑 測(cè)定值 x 單位因子 截距最后報(bào)告結(jié)果最后報(bào)告結(jié)果 = _ 斜率 時(shí)間吸光度(Abs)RGT 波動(dòng) RBLT0T1時(shí)間T0吸光度( Abs)Abs (T1) 樣本或標(biāo)準(zhǔn)T1 Abs (T0) 試劑空白Abs (T1) 試劑空白Abs (T0) 樣本或標(biāo)準(zhǔn)精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)測(cè)定值測(cè)定值= 因子 x Abs 樣本-RGT 波動(dòng) Abs 樣本= Abs 樣本 (T1) - Abs 樣本(T0)RGT 波動(dòng) = Abs 試劑空白= Abs 試劑(T1) - Abs 試劑(T0) 標(biāo)準(zhǔn)

33、濃度因子 = _ Abs 標(biāo)準(zhǔn) RGT 波動(dòng)3.5.53.5.5 兩點(diǎn)法（兩點(diǎn)法（I.RI.R）試劑）試劑測(cè)定值測(cè)定值= 因子 x Abs 樣本-RGT 波動(dòng) 標(biāo)準(zhǔn)濃度時(shí)間吸光度( Abs)T3 R1T1 延遲時(shí)間H20/STD/樣本 T2 讀數(shù)時(shí)間加入 R2 延遲時(shí)間RGT 漂移Abs樣本/標(biāo)本Abs (T2)Abs (T3)R2精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)因子 = _ Abs 標(biāo)準(zhǔn) RGT 波動(dòng)起時(shí)極限起時(shí)極限Afp = Abs (T0) - Abs (T0 - 18)Asp = Abs (T1) - Abs (T1 - 18)若比值不符合以下條件:Afp 線(xiàn)性因子 x As

34、p 起始極限測(cè)結(jié)果會(huì)有報(bào)警反應(yīng)不符合線(xiàn)性.線(xiàn)性因子線(xiàn)性因子 Afp比值 _ =線(xiàn)性因數(shù)時(shí)間吸光度( Abs)T0-18 T0 T1-18 T1AfpAsp精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè) Asp3.5.63.5.6 底物消耗值底物消耗值 正反應(yīng) 負(fù)反應(yīng)3.5.73.5.7 動(dòng)力學(xué)因數(shù)的計(jì)算：動(dòng)力學(xué)因數(shù)的計(jì)算： Vt x 1000 時(shí)間吸光度( Abs) T0 T1底物消耗極限Abs (T0)Abs (T1)沒(méi)有報(bào)警報(bào)警底物耗盡時(shí)間吸光度( Abs) T0 T1底物消耗極限Abs (T0)Abs (T1)沒(méi)有警號(hào)報(bào)警底物耗盡精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)因數(shù) = _ Vs

35、x O.T. x x tVt =反應(yīng)總量 (樣本量 + 試劑量) Vs= 樣本量O.T.= 光徑的長(zhǎng)度(cm).= 消光系數(shù)1000= 單位轉(zhuǎn)換-由 ml 轉(zhuǎn)換為 ul測(cè)定測(cè)定值值 = 因數(shù) x Abs/ 分. = 因數(shù). x Abs(T0) - Abs(T1) x 60 /(T0)- (T1)3.63.6 定標(biāo)參數(shù)和濃度的計(jì)算定標(biāo)參數(shù)和濃度的計(jì)算3.6.1 定標(biāo)參數(shù)的計(jì)算定標(biāo)方法分為兩大類(lèi)，即線(xiàn)性定標(biāo)和非線(xiàn)性定標(biāo)，其中線(xiàn)性定標(biāo)又包括單點(diǎn)線(xiàn)性定標(biāo)（又稱(chēng)因數(shù)法） 、兩點(diǎn)線(xiàn)性定標(biāo)（又稱(chēng)線(xiàn)性法）和多點(diǎn)（大于 3 點(diǎn)）線(xiàn)性定標(biāo)（又稱(chēng)線(xiàn)性回歸法） ，主要適用于比色法測(cè)定的項(xiàng)目；非線(xiàn)性定標(biāo)主要適用于比濁法

36、測(cè)定的項(xiàng)目，下面分別予于介紹。3.6.23.6.2 幾點(diǎn)說(shuō)明幾點(diǎn)說(shuō)明（1）三種測(cè)定方法（終點(diǎn)法、固定時(shí)間法和動(dòng)力學(xué)法）可以和上述的定標(biāo)方法任意對(duì)應(yīng)。（2）后面的定標(biāo)公式中：R 表示反應(yīng)度（詳見(jiàn)上文“R 的計(jì)算” ）C 表示標(biāo)準(zhǔn)液的濃度（或活性） 。K、RO、a、b、c、d 表示定標(biāo)參數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液 亦稱(chēng)基準(zhǔn)溶液，是濃度已經(jīng)準(zhǔn)確測(cè)知的溶液。3.6.33.6.3 線(xiàn)性定標(biāo)線(xiàn)性定標(biāo)（1）單點(diǎn)線(xiàn)性定標(biāo)定標(biāo)公式：R=KC，只有 1 個(gè)定標(biāo)參數(shù)K，定標(biāo)曲線(xiàn)如下圖：精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)只需提供 1 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品。大多數(shù)酶學(xué)項(xiàng)目可以不定標(biāo)而直接輸入因數(shù)（輸入值 F=1/K）（2）兩點(diǎn)線(xiàn)性定

37、標(biāo)定標(biāo)公式：R=DC+b，有 2 個(gè)定標(biāo)參數(shù)，K 和 b其中要求提供兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，C1、C2 為標(biāo)準(zhǔn)品 1 和 2 的濃度，R1、R2 為標(biāo)準(zhǔn)品 1 和 2 的反應(yīng)度。定標(biāo)曲線(xiàn)如下圖：（3）多點(diǎn)線(xiàn)性定標(biāo)定標(biāo)公式：R=KC+b,有兩個(gè)定標(biāo)參數(shù)，K 和 b，其中：要求提供 n（n3）個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，Ci 為標(biāo)準(zhǔn)品 i 的濃度，Ri 為標(biāo)準(zhǔn)品 i 的反應(yīng)度。精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專(zhuān)心-專(zhuān)注-專(zhuān)業(yè)313 非線(xiàn)性定標(biāo)（1）Logistic-Log4P定標(biāo)公式：有 4 個(gè) 參數(shù)，即 R0、K、a 和 b。要求提供至少 4 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，其中第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度（活性）為零，其對(duì)應(yīng)的 R 就等于 R0，用最速下降法+

38、擬牛頓法求解。適用于隨著濃度增加，其反應(yīng)度增加越來(lái)越小的定標(biāo)曲線(xiàn)，如圖：（2）Logistic-Log5P定標(biāo)公式：有 5 個(gè)定標(biāo)參數(shù)即 R0、K、a 、b 和 c。要求提供至少 5 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，其中第 1 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度（活性）為零，其對(duì)應(yīng)的 R 就等于 R0,用最速下降法+擬牛頓法求解，使用范圍同 Logistic-Log4P，只是曲線(xiàn)擬和程度更高。（3）Exponential5P定標(biāo)公式：R=R0+KexpalnC+b(lnc)2+c(lnC)3,有 5 個(gè)參數(shù) R0、K、a 、b 和 c 要求提供至少 5 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，其中第 1 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度（活性）為零，其對(duì)應(yīng)的 R 就等于 R0,用最速下降法+擬牛頓法求解。適用于濃度增加到一定程度后，其反應(yīng)度增加越來(lái)越大的定標(biāo)曲線(xiàn)，如圖：（4）Polynomial5P定標(biāo)公式：有 5 個(gè)參數(shù)R0、K、a 、b 和 c 要求提供至少 5 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，其中第 1 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度（活性）為零，其對(duì)應(yīng)的R 就等于 R0,用最速下降法+擬牛頓法求解。（5）Parabola定標(biāo)公式：R=aC2+bC+c,有 3 個(gè)參數(shù)，即 a、b 和 c。要求提供至少 3 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，解 3元線(xiàn)性方程組，用全選主元高斯消去法求解