現(xiàn)代生物工程技術(shù)（吉林大學(xué)）現(xiàn)代生物工程技術(shù)課程補(bǔ)充

1、疫苗檢驗(yàn)方法與設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)項(xiàng)目安全性腰別試驗(yàn)、火活效果驗(yàn) 汕、山件逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)、特 異性褂性檢測產(chǎn)品如減朮活疫苗的神經(jīng)滋力， 活疫苗中的死病事顆粒，滅 活疫苗抗原降解/聚合片常毒性、無菌檢査、 純度、細(xì)繭內(nèi)應(yīng)索、錢 留物（裂解劑、滅活劑、 宿主蛋a細(xì)胞dna, bsa、抗生索等）工藝外部污染、滅活劑/裂解劑、 抗生索、防腐劑、穩(wěn)定劑冇效性效力試驗(yàn)/穩(wěn)定性（抗原含址、病徘滴度、 活菌數(shù)）»制品的確認(rèn)（鑒別試紐重級蛋j呦構(gòu)筲）含的測定（效力試?yán)^、橋?yàn)┑?度、活抗脈蛍等）一致性外觀、裝昴、ph、滲 透壓檢測結(jié)果的分析：適宜的指標(biāo)上k 限値，全過程控制1 起始丿京材料： 咋種，細(xì)胞, 佐

2、劑，其它 添加物質(zhì)2. 生產(chǎn)過程：收獲，純化/ 捉取，裂解 等重變工藝 過程3. 關(guān)徒節(jié)點(diǎn)：原液制備、 半成品配制、 成品檢定的意義在于保證制品的安全性、有效性和-致性，驗(yàn)證全過程的質(zhì)童可控3疫苗的類型與效力試驗(yàn)考慮要點(diǎn)：減毒活疫苗：opv、mmr、je、vzv等 計(jì)算活病毒數(shù)量（cfu, pfu, ccid50）,其效力可以預(yù)期 臨床使用效果明確滅活病毒疫苗（包括裂解、純化）狂犬疫苗、流感疫苗體內(nèi) 方法：（保護(hù)性抗原不明確：如狂犬病疫苗糖蛋白/核蛋白）體 外方法：（保護(hù)性抗原明確：如流感疫苗h/n蛋白）蛋白或多糖疫苗（提取、重組類）：hbv、hpv、流腦多糖 抗 原含量檢測：直接/相對值抗原

3、性/免疫原性：定性明確，結(jié) 構(gòu)穩(wěn)定體內(nèi)試驗(yàn)（或市體內(nèi)向體外方法過渡）減毒活疫苗效力試驗(yàn)：減毒活疫苗有效性以計(jì)算活病毒數(shù)量確定 常用方法：（cfu, pfu, ccid50）減毒活疫苗的效力（臨床有效 性）是可以預(yù)期的細(xì)菌性活疫苗：活菌數(shù)cfu總菌數(shù)計(jì)數(shù)，再以平皿涂布計(jì)數(shù) 菌落確定菌落可進(jìn)一步定性。病毒性減毒活疫苗：活病毒計(jì)數(shù)ccid50 pfu ld50 1 通過活體細(xì)胞或動物間接反應(yīng)病毒數(shù)量2、細(xì)胞、動物、培養(yǎng)或飼養(yǎng) 體系影響因素多3、應(yīng)考慮疫苗中的死病毒占比，特別是滅活 疫苗 呈現(xiàn)免疫增強(qiáng)現(xiàn)象的疾病。滅活疫苗效力試驗(yàn)在制品的研發(fā)階段一采用體內(nèi)和體外兩種方法:建立體內(nèi)和體外方法的相關(guān)性確認(rèn)體

4、外方法監(jiān)測疫苗穩(wěn)定性的適用性建立疫苗抗原性和穩(wěn)定性的數(shù)據(jù)建立體內(nèi)和體外方法的相關(guān)性上市后的效力試驗(yàn) 1、常規(guī)放行檢測f釆用體外方法 2、常規(guī)穩(wěn)定性監(jiān)測：若可行（前期驗(yàn)證）采用體外方法經(jīng)常進(jìn)行體內(nèi)方法試驗(yàn)，以保持實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)熟練驗(yàn)證工藝的重大變更一采用體內(nèi)和體外兩種方法體內(nèi)效力試驗(yàn)一建立的原則適宜的動物模型：動物基因型、體液/細(xì)胞免疫偏離、與人 體疾病及免疫效果的適應(yīng)性、ld50/ed50等；選擇合適的免疫程序：優(yōu)選單劑次免疫，多劑次免疫應(yīng)有 足夠的理由；疫苗的劑量：免疫應(yīng)答應(yīng)當(dāng)落在劑量/效應(yīng)范圍內(nèi)；劑量/效應(yīng)曲線：應(yīng)當(dāng)通過多次試驗(yàn)確認(rèn)；證明檢測方法的敏感性：應(yīng)能夠靈敏發(fā)現(xiàn)制品的降解及效力 下降的信號疫苗效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)如何設(shè)定體內(nèi)和體外效力試驗(yàn)方法的比較體內(nèi)體外法的意義比較模式圖與臨床效果 的相關(guān)性體內(nèi)攻擊 模型法體內(nèi)效力試驗(yàn)的局限性不同動物種屬（品系）免疫應(yīng)答不同：釆用攻擊模型難以達(dá) 到預(yù)期保護(hù)效果；使用的動物模型難以模擬人體的免疫或病理反應(yīng)。商業(yè)化疫苗的質(zhì)量保證： gmp：經(jīng)過驗(yàn)證的生產(chǎn)工藝