細(xì)胞培養(yǎng)的個人體會2013910

1、肖肖 飛飛(Jinan university，)內(nèi)部交流，僅供參考內(nèi)部交流，僅供參考細(xì)胞培養(yǎng)的個人體會細(xì)胞培養(yǎng)的個人體會2如何做好實(shí)驗(yàn)？如何做好實(shí)驗(yàn)？ “ “播下一種習(xí)慣，你將收獲一種性格；播下一種習(xí)慣，你將收獲一種性格； 播下一種性格，你將收獲一種命運(yùn)播下一種性格，你將收獲一種命運(yùn)” ”。 威廉威廉. .詹姆士詹姆士個人體會：個人體會：題外話：題外話： 1、 “養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣”。實(shí)驗(yàn)前：查資料，計劃好，充分準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)前：查資料，計劃好，充分準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)中：認(rèn)真操作，關(guān)鍵點(diǎn)作好記錄。實(shí)驗(yàn)中：認(rèn)真操作，關(guān)鍵點(diǎn)作好記錄。 （可寫在草稿本上）。（可寫在草稿本上）。實(shí)驗(yàn)后：整理實(shí)驗(yàn)

2、物品，用過的東西要放回原位，實(shí)驗(yàn)后：整理實(shí)驗(yàn)物品，用過的東西要放回原位， 及時清理垃圾，及時清理垃圾， 抽空根據(jù)草稿本詳細(xì)寫下實(shí)驗(yàn)記錄。抽空根據(jù)草稿本詳細(xì)寫下實(shí)驗(yàn)記錄。 （寫在實(shí)驗(yàn)記錄本上）（寫在實(shí)驗(yàn)記錄本上） 實(shí)驗(yàn)其間，聽從老師和師兄、師姐的安排和管理！實(shí)驗(yàn)其間，聽從老師和師兄、師姐的安排和管理！3 2、“養(yǎng)成獨(dú)立思考、獨(dú)立解決問題的習(xí)慣養(yǎng)成獨(dú)立思考、獨(dú)立解決問題的習(xí)慣” 全面提高自己的能力，力求能獨(dú)擋一面。遇到問題，全面提高自己的能力，力求能獨(dú)擋一面。遇到問題，首先自己想辦法去解決。首先自己想辦法去解決。3、“養(yǎng)成良好的心態(tài)養(yǎng)成良好的心態(tài)” “雄心雄心” : 有抱負(fù)和理想，做好文章。有抱負(fù)

3、和理想，做好文章。 “恒心恒心” ：堅持。：堅持。 “平常心平常心” ：從容淡定，慢而不拖，快而不亂：從容淡定，慢而不拖，快而不亂.4、 “苦干苦干 + + 巧干巧干” 苦干：多練習(xí)，熟能生巧?？喔桑憾嗑毩?xí)，熟能生巧?！白鲎觥?巧干：多總結(jié)，掌握規(guī)律。巧干：多總結(jié)，掌握規(guī)律。“思思”4內(nèi)容提要內(nèi)容提要1.細(xì)胞培養(yǎng)簡介細(xì)胞培養(yǎng)簡介2.細(xì)胞的復(fù)蘇和凍存細(xì)胞的復(fù)蘇和凍存 細(xì)胞的復(fù)蘇細(xì)胞的復(fù)蘇 細(xì)胞的凍存細(xì)胞的凍存3.細(xì)胞的換液與傳代細(xì)胞的換液與傳代 個人方法個人方法 無菌操作技術(shù)無菌操作技術(shù) 細(xì)胞計數(shù)和接種細(xì)胞計數(shù)和接種5體外培養(yǎng)（體外培養(yǎng)（in vitro culture）：是將活體成分或其）：是

4、將活體成分或其寄生體內(nèi)取出，放在類似于體內(nèi)生存環(huán)境的體外寄生體內(nèi)取出，放在類似于體內(nèi)生存環(huán)境的體外 環(huán)境中，讓其生長和發(fā)育的方法。環(huán)境中，讓其生長和發(fā)育的方法。可分為器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)三種類型?？煞譃槠鞴倥囵B(yǎng)、組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)三種類型。細(xì)胞培養(yǎng)分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)6簡化環(huán)境因素、排除了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)時一些復(fù)雜的簡化環(huán)境因素、排除了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)時一些復(fù)雜的因素的影響，利于應(yīng)用各種物理、化學(xué)和生物因素的影響，利于應(yīng)用各種物理、化學(xué)和生物等外界因素探索和提示細(xì)胞生命活動的規(guī)律；等外界因素探索和提示細(xì)胞生命活動的規(guī)律；提供了大量生物性狀相同的細(xì)胞，

5、特別是人的提供了大量生物性狀相同的細(xì)胞，特別是人的活細(xì)胞材料作為研究對象。經(jīng)濟(jì)、便利，解決活細(xì)胞材料作為研究對象。經(jīng)濟(jì)、便利，解決了不能用人做實(shí)驗(yàn)的問題。了不能用人做實(shí)驗(yàn)的問題。缺點(diǎn)是無法模擬體內(nèi)的情況，結(jié)果有局限性。缺點(diǎn)是無法模擬體內(nèi)的情況，結(jié)果有局限性。細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)7CO2CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱細(xì)胞培養(yǎng)基本設(shè)備細(xì)胞培養(yǎng)基本設(shè)備定期清潔，換水。定期清潔，換水。拿出細(xì)胞及時關(guān)好門，保持拿出細(xì)胞及時關(guān)好門，保持CO2濃度。濃度。短時不用，將光源調(diào)至最小，避免短時不用，將光源調(diào)至最小，避免 反復(fù)開關(guān)。反復(fù)開關(guān)。長時不用，及時關(guān)電源。長時不用，及時關(guān)電源。使用注意問題：使用注意問題：倒置

6、顯微鏡倒置顯微鏡8超凈工作臺超凈工作臺使用前紫外照使用前紫外照20-3020-30分鐘。分鐘。使用時別忘關(guān)紫外，防止灼傷。使用時別忘關(guān)紫外，防止灼傷。定期換水，保持干凈的水。定期換水，保持干凈的水。使用前檢查水位，不足補(bǔ)充使用前檢查水位，不足補(bǔ)充純水純水。最好細(xì)胞培養(yǎng)專用一個滅菌鍋。最好細(xì)胞培養(yǎng)專用一個滅菌鍋。使用注意問題使用注意問題：高壓滅菌鍋高壓滅菌鍋91.培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)管、細(xì)胞培養(yǎng)板、藍(lán)蓋瓶、吸管；培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)管、細(xì)胞培養(yǎng)板、藍(lán)蓋瓶、吸管；2.離心管、細(xì)胞凍存管、離心管、細(xì)胞凍存管、1ml 、5ml EP管；管；3.血細(xì)胞計數(shù)器；血細(xì)胞計數(shù)器；4.恒溫磁力攪拌器、恒溫水浴振蕩器；恒溫磁力攪

7、拌器、恒溫水浴振蕩器；5.刀、剪、鑷解剖用具，刀、剪、鑷解剖用具，200目不銹鋼網(wǎng)；目不銹鋼網(wǎng)；細(xì)胞培養(yǎng)的基本用品細(xì)胞培養(yǎng)的基本用品1011q大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎(chǔ)上，基礎(chǔ)上， 添加了氨基酸、添加了氨基酸、 維生素和與血清中濃度相似的營養(yǎng)維生素和與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。物質(zhì)。q選擇培養(yǎng)基很重要，不同細(xì)胞需要選擇培養(yǎng)基很重要，不同細(xì)胞需要適合的培養(yǎng)基。適合的培養(yǎng)基。q常見的培養(yǎng)基有：常見的培養(yǎng)基有：DMEM、F12、DMEM/F12、1640等。等。 基礎(chǔ)培養(yǎng)基12q一般是從牛的血液中提取，含有豐富一般是從牛的血液中提取，含有豐富的營養(yǎng)養(yǎng)物

8、質(zhì)。的營養(yǎng)養(yǎng)物質(zhì)。q常用的胎牛血清（常用的胎牛血清（Fetal Bovine Serum,FBS),使用前分裝使用前分裝50ml離心管，離心管，-20保存。注意解凍分裝前請混合均勻。保存。注意解凍分裝前請混合均勻。 q使用時放在使用時放在4 冰箱解凍，需冰箱解凍，需1-2天。天。血 清13q血清和基礎(chǔ)培養(yǎng)基按一定比例混合，一般配血清和基礎(chǔ)培養(yǎng)基按一定比例混合，一般配制含制含10-15%血清的培養(yǎng)基，用于細(xì)胞培養(yǎng)。血清的培養(yǎng)基，用于細(xì)胞培養(yǎng)。q如取如取20ml 胎牛血清，同時加入胎牛血清，同時加入180ml DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，即可配成基礎(chǔ)培養(yǎng)基，即可配成200ml含含10%胎牛的胎牛的 DME

9、M.完全培養(yǎng)基完全培養(yǎng)基141.器皿加洗潔精浸泡數(shù)小時后，用自來水沖洗器皿加洗潔精浸泡數(shù)小時后，用自來水沖洗9次，次， 然后蒸餾水沖洗然后蒸餾水沖洗3次次。2.烘干：洗干凈后烘干。烘干：洗干凈后烘干。3.包裝：用牛皮紙或布包裝。包裝：用牛皮紙或布包裝。 消毒前貼上滅菌條，條上寫明日期、物品、所有者。消毒前貼上滅菌條，條上寫明日期、物品、所有者。 可重復(fù)利用物品的清洗和滅菌可重復(fù)利用物品的清洗和滅菌154.高壓高壓滅菌滅菌：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)，：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)，121 ， 維持維持30分鐘。分鐘。5.滅菌后烘干：高壓消毒后器皿會被蒸氣打濕，要放滅菌后烘干：高壓消毒后器皿會被蒸氣打

10、濕，要放入烤箱內(nèi)烘干備用。入烤箱內(nèi)烘干備用。 注意：泡酸（重鉻酸鉀注意：泡酸（重鉻酸鉀120g：濃硫酸：濃硫酸200ml：蒸餾水：蒸餾水 1000ml）浸泡）浸泡12小時。小時。（玻璃器皿第一次洗需要用，以后可以省這一步）。（玻璃器皿第一次洗需要用，以后可以省這一步）。16細(xì)胞的復(fù)蘇和凍存細(xì)胞的復(fù)蘇和凍存17q細(xì)胞復(fù)蘇與凍存的原則是細(xì)胞復(fù)蘇與凍存的原則是“慢凍速融慢凍速融”。q復(fù)蘇細(xì)胞時，速度要快，使之迅速通過細(xì)胞最易復(fù)蘇細(xì)胞時，速度要快，使之迅速通過細(xì)胞最易受損的受損的50。q凍存細(xì)胞時，向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑二甲基亞砜凍存細(xì)胞時，向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑二甲基亞砜（DMSO），可使冰點(diǎn)降低，在緩

11、慢的凍結(jié)條件），可使冰點(diǎn)降低，在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外，減少下，能使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外，減少 細(xì)胞冰晶的形成。細(xì)胞冰晶的形成。復(fù)蘇與凍存的原則復(fù)蘇與凍存的原則18 1、準(zhǔn)備好、準(zhǔn)備好37水浴燒杯。水浴燒杯。2、將凍存于液氮中的凍存管取出，迅速放入、將凍存于液氮中的凍存管取出，迅速放入3740水浴中使其在水浴中使其在1min內(nèi)融化。內(nèi)融化。3、無菌條件下打開凍存管，取細(xì)胞懸液至離心管中，、無菌條件下打開凍存管，取細(xì)胞懸液至離心管中，補(bǔ)加補(bǔ)加5mL培養(yǎng)液，培養(yǎng)液，1600 rpm低速離心低速離心5min。4、去上清，加入新鮮培養(yǎng)液適量，吹打成細(xì)胞懸液，、去上清

12、，加入新鮮培養(yǎng)液適量，吹打成細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中，置轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中，置37培養(yǎng)。培養(yǎng)。復(fù)蘇的標(biāo)準(zhǔn)方法復(fù)蘇的標(biāo)準(zhǔn)方法19復(fù)蘇前，準(zhǔn)備好含有復(fù)蘇前，準(zhǔn)備好含有5mL培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，放入培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，放入37 培養(yǎng)箱。培養(yǎng)箱。1、 準(zhǔn)備好準(zhǔn)備好40水浴燒杯。水浴燒杯。2、 將凍存于液氮中的凍存管取出，還原保存盒放入液氮中。將凍存于液氮中的凍存管取出，還原保存盒放入液氮中。 將取出凍存管迅速放入水浴中，迅速搖晃加速其融化，將取出凍存管迅速放入水浴中，迅速搖晃加速其融化， 放在水浴中，放在水浴中，5min鐘內(nèi)須完成。鐘內(nèi)須完成。3、 將凍存管放入將凍存管放入15mL離心管（剪去底部的舊離心管）中，離心

13、管（剪去底部的舊離心管）中， 1500rpm，離心，離心3min。4、 從離心管中取出凍存管，小心吸去上清，從培養(yǎng)箱中取出從離心管中取出凍存管，小心吸去上清，從培養(yǎng)箱中取出 培養(yǎng)瓶，加入培養(yǎng)瓶，加入37 的培養(yǎng)液的培養(yǎng)液1mL，吹打，吹打30次，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶次，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶 中，置中，置37培養(yǎng)。培養(yǎng)。個人方法個人方法201、胰酶消化，加含血清培養(yǎng)基終止，離心。、胰酶消化，加含血清培養(yǎng)基終止，離心。2、去上清，加入凍存液、去上清，加入凍存液1.5mL，吹打，吹打60次，轉(zhuǎn)入凍存管。次，轉(zhuǎn)入凍存管。3、凍存管放入、凍存管放入4 30 分鐘分鐘 - -20 60 分鐘分鐘 - -80 16 - 18

14、小時小時(或隔夜或隔夜) - 投入液氮中。投入液氮中。3、或凍存管置于程序降溫盒中，放置、或凍存管置于程序降溫盒中，放置-80，- 投入液氮中。投入液氮中。凍存的個人方法凍存的個人方法：附：凍存液個人配方：附：凍存液個人配方： 培養(yǎng)基：血清：培養(yǎng)基：血清：DMSO 普通細(xì)胞可用：普通細(xì)胞可用： 7份：份： 2份：份： 1份份 細(xì)胞脆弱可用：細(xì)胞脆弱可用： 5份：份： 4.2份：份： 0.8份份21細(xì)胞的換液和傳代細(xì)胞的換液和傳代22貼壁期貼壁期:0.5-4h潛伏期潛伏期:5-24h對數(shù)生長期對數(shù)生長期:24-96h停止期（衰老期）停止期（衰老期）:96h以上以上貼壁生長細(xì)胞的生長過程貼壁生長細(xì)

15、胞的生長過程新鮮培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)基 對數(shù)期對數(shù)期 停止期停止期 （紅）（紅） （淡紅（淡紅 略黃）略黃） （黃）（黃）23貼壁生長細(xì)胞的換液貼壁生長細(xì)胞的換液全換液：完全吸除瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，向瓶內(nèi)加入約全換液：完全吸除瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，向瓶內(nèi)加入約4-6mL培養(yǎng)液。置培養(yǎng)液。置37培養(yǎng)，適合于普通細(xì)胞。培養(yǎng)，適合于普通細(xì)胞。半換液：吸除瓶內(nèi)一半的舊培養(yǎng)液，向瓶內(nèi)補(bǔ)加入約半換液：吸除瓶內(nèi)一半的舊培養(yǎng)液，向瓶內(nèi)補(bǔ)加入約 3mL培養(yǎng)液。置培養(yǎng)液。置37培養(yǎng)。適合于生長較慢的細(xì)胞。培養(yǎng)。適合于生長較慢的細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞沒有滿細(xì)胞培養(yǎng)瓶時，而培養(yǎng)基顏色變成略黃當(dāng)細(xì)胞沒有滿細(xì)胞培養(yǎng)瓶時，而培養(yǎng)基顏色變成略黃狀態(tài)時，說

16、明營養(yǎng)消耗不少，環(huán)境酸性較強(qiáng)，為減少狀態(tài)時，說明營養(yǎng)消耗不少，環(huán)境酸性較強(qiáng)，為減少其對細(xì)胞損傷，須對細(xì)胞補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基。其對細(xì)胞損傷，須對細(xì)胞補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基。死細(xì)胞較多時，需要除掉死細(xì)胞。死細(xì)胞較多時，需要除掉死細(xì)胞。換液時機(jī)：換液時機(jī)：換液方法：換液方法：24 1.細(xì)胞鋪滿瓶底細(xì)胞鋪滿瓶底80%，吸除瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，向瓶內(nèi)加入少量，吸除瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，向瓶內(nèi)加入少量約約12mL消化液（一般含胰蛋白酶、消化液（一般含胰蛋白酶、EDTA），輕輕搖），輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使消化液流遍所有細(xì)胞表面；動培養(yǎng)瓶，使消化液流遍所有細(xì)胞表面；2.在在37環(huán)境下孵育環(huán)境下孵育1-2min，把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進(jìn)行觀，

17、把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大。察，發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大。3.加入含血清培養(yǎng)基，終止消化，用彎頭吸管吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)加入含血清培養(yǎng)基，終止消化，用彎頭吸管吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之脫落，吹打成細(xì)胞懸液。液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之脫落，吹打成細(xì)胞懸液。4.轉(zhuǎn)入離心管，轉(zhuǎn)入離心管，1000-2000 rpm，離心，離心5min。5.去上清，加入新鮮培養(yǎng)液適量，吹打成細(xì)胞懸液，以去上清，加入新鮮培養(yǎng)液適量，吹打成細(xì)胞懸液，以1：2或或1：3的比例接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，置的比例接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，置37培養(yǎng)。培養(yǎng)。傳代的標(biāo)準(zhǔn)方法傳代的標(biāo)準(zhǔn)方法25 1.細(xì)胞鋪滿瓶底

18、約細(xì)胞鋪滿瓶底約80%，吸除舊培養(yǎng)液，向瓶內(nèi)加入，吸除舊培養(yǎng)液，向瓶內(nèi)加入 600uL胰酶，輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使消化液流遍細(xì)胞表面；胰酶，輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使消化液流遍細(xì)胞表面；2.吸除胰酶，在培養(yǎng)箱中孵育吸除胰酶，在培養(yǎng)箱中孵育1-2min，把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡，把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大。下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大。3.加入新鮮培養(yǎng)液加入新鮮培養(yǎng)液2mL，吹打成細(xì)胞懸液，以，吹打成細(xì)胞懸液，以1 ：2或或1 ：3的比例接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)（已預(yù)加新鮮培養(yǎng)基的比例接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)（已預(yù)加新鮮培養(yǎng)基3ml) ，置置37培養(yǎng)。培養(yǎng)。 (比標(biāo)準(zhǔn)方法省比標(biāo)準(zhǔn)方法省

19、2步步)傳代的個人方法傳代的個人方法( (消化消化+ +機(jī)械吹打）機(jī)械吹打）26細(xì)節(jié)決定成敗，要注意的細(xì)節(jié)很多。細(xì)節(jié)決定成敗，要注意的細(xì)節(jié)很多。詳細(xì)的內(nèi)容可參考詳細(xì)的內(nèi)容可參考“細(xì)胞培養(yǎng)無菌技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)無菌技術(shù)”PPT、視頻、視頻。 無菌操作技術(shù)（關(guān)鍵技術(shù)）無菌操作技術(shù)（關(guān)鍵技術(shù)）個人體會：個人體會：1.1.特別注意特別注意Vulnerable areas，吸管吸取液體時盡量不，吸管吸取液體時盡量不接觸瓶口。接觸瓶口。2.2.盡量避免在培養(yǎng)皿和所有瓶口的上方操作。盡量避免在培養(yǎng)皿和所有瓶口的上方操作。3.3.同一根吸管不應(yīng)連續(xù)用于兩個不同的液體或細(xì)胞系。同一根吸管不應(yīng)連續(xù)用于兩個不同的液體或細(xì)

20、胞系。4.4.只要吸管接觸瓶外面任何地方都要丟棄，換新管。只要吸管接觸瓶外面任何地方都要丟棄，換新管。27常見細(xì)胞污染常見細(xì)胞污染A:A:正常正常B:B:桿狀細(xì)菌污染桿狀細(xì)菌污染C:C:球狀細(xì)菌污染球狀細(xì)菌污染D:D:絲狀真菌污染絲狀真菌污染E:E:酵母污染酵母污染281 1號區(qū)號區(qū)5 5號區(qū)號區(qū)細(xì)胞計數(shù)細(xì)胞計數(shù)1 1、使用計數(shù)板人工計數(shù)、使用計數(shù)板人工計數(shù)2 2、使用自動細(xì)胞計數(shù)儀電腦計數(shù)、使用自動細(xì)胞計數(shù)儀電腦計數(shù)29細(xì)胞密度細(xì)胞密度 = (1+2+3+4) / 4 萬個細(xì)胞每毫升萬個細(xì)胞每毫升1 13 34 42 22 230合適細(xì)胞密度是實(shí)驗(yàn)成功關(guān)鍵合適細(xì)胞密度是實(shí)驗(yàn)成功關(guān)鍵31合適的

21、細(xì)胞培養(yǎng)液體積合適的細(xì)胞培養(yǎng)液體積32常用細(xì)胞接種密度計算常用細(xì)胞接種密度計算常見問題：常見問題： 現(xiàn)有現(xiàn)有4ml4ml細(xì)胞懸液，細(xì)胞計數(shù)的結(jié)果為細(xì)胞懸液，細(xì)胞計數(shù)的結(jié)果為110110萬個萬個/ml/ml，現(xiàn)在要接種到現(xiàn)在要接種到9696孔板中，若每孔孔板中，若每孔2 2萬個細(xì)胞，請問如何萬個細(xì)胞，請問如何配制實(shí)驗(yàn)所需的細(xì)胞懸液配制實(shí)驗(yàn)所需的細(xì)胞懸液? ?傳統(tǒng)算法：傳統(tǒng)算法： 本來是本來是9696孔，實(shí)際要多預(yù)留一些，若多算孔，實(shí)際要多預(yù)留一些，若多算1010孔的話，共孔的話，共106106孔?？?。 1 1、所需總細(xì)胞數(shù)：、所需總細(xì)胞數(shù)：2 2萬萬 X 106 = 212X 106 = 212

22、萬萬 2 2、所需總體積：、所需總體積： 100ul X 106 = 10.6ml100ul X 106 = 10.6ml 就是說要把就是說要把212212萬個細(xì)胞放入總體積萬個細(xì)胞放入總體積10.6ml10.6ml培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基中。 需要取需要取212212萬除以萬除以110110萬個萬個/ml=1.93ml/ml=1.93ml細(xì)胞懸液，細(xì)胞懸液， 補(bǔ)加補(bǔ)加10.6-1.93=8.6710.6-1.93=8.67培養(yǎng)基?；靹蚝螅靠准尤肱囵B(yǎng)基?；靹蚝?，每孔加入100ul.100ul.33個人體會：個人體會： 所需細(xì)胞懸液為：所需細(xì)胞懸液為：配制的總體積配制的總體積除以除以稀釋倍數(shù)即可稀釋倍數(shù)即可 細(xì)胞懸液稀釋倍數(shù)細(xì)胞懸液稀釋倍數(shù):110:110萬萬/ml/ml除以除以2 2萬萬/100ul=5.5/100ul=5.5倍倍 所以需要取所以需要取 10.6ml10.6ml 除以除以5.55.5倍倍=1.93ml=1.93ml的細(xì)胞懸液。的細(xì)胞懸液。 補(bǔ)加補(bǔ)加10.6-1.93=8.6710.6-1.93=8.67培養(yǎng)基。混勻后，每孔加入培養(yǎng)基?；靹蚝?，每孔加入100ul.100ul. 原理自己慢慢想！原理自己慢慢想！34細(xì)胞培養(yǎng)中藥物加入的計算細(xì)胞培養(yǎng)中藥物加入的計算常見問題：