第六、七章-植物原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞融合

1、植物原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞融合原生質(zhì)體的分離與培養(yǎng)原生質(zhì)體的分離與培養(yǎng)概念及研究進(jìn)展概念及研究進(jìn)展原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體原生質(zhì)體(protoplast)：脫去細(xì)胞壁、裸露的細(xì)胞。又稱原生質(zhì)球脫去細(xì)胞壁、裸露的細(xì)胞。又稱原生質(zhì)球 原生質(zhì)體是為質(zhì)膜所包圍的裸露細(xì)胞。原生質(zhì)體是為質(zhì)膜所包圍的裸露細(xì)胞。v亞原生質(zhì)體亞原生質(zhì)體(subprotoplast) 在原生質(zhì)體分離過程中，有時(shí)會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)含物的在原生質(zhì)體分離過程中，有時(shí)會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)含物的斷裂而形成的一些較小的原生質(zhì)體。它可以具有細(xì)斷裂而形成的一些較小的原生質(zhì)體。它可以具有細(xì)胞核，也可不具有細(xì)胞核。胞核，也可不具有細(xì)胞核。v核質(zhì)體核質(zhì)體(nu

2、clearplast) 由原生質(zhì)膜和薄層細(xì)胞質(zhì)包圍細(xì)胞核形成的小原生由原生質(zhì)膜和薄層細(xì)胞質(zhì)包圍細(xì)胞核形成的小原生質(zhì)體。也稱為微小原生質(zhì)體。質(zhì)體。也稱為微小原生質(zhì)體。v胞質(zhì)體胞質(zhì)體(cytoplast) 不含細(xì)胞核，而僅含有細(xì)胞質(zhì)的原生質(zhì)體。不含細(xì)胞核，而僅含有細(xì)胞質(zhì)的原生質(zhì)體。v 植物細(xì)胞育種中的核質(zhì)替換植物細(xì)胞育種中的核質(zhì)替換v 細(xì)胞質(zhì)雜種的獲得細(xì)胞質(zhì)雜種的獲得v 遠(yuǎn)緣雜交創(chuàng)造新物種細(xì)胞遠(yuǎn)緣雜交創(chuàng)造新物種細(xì)胞v 細(xì)胞器的互作研究細(xì)胞器的互作研究意意 義義植物原生質(zhì)體的分離和培養(yǎng)植物原生質(zhì)體的分離和培養(yǎng)v材料預(yù)處理材料預(yù)處理v原生質(zhì)體原生質(zhì)體分離的方法分離的方法v原生質(zhì)體原生質(zhì)體純化純化v原生

3、質(zhì)體原生質(zhì)體活力測(cè)定活力測(cè)定v影響原生質(zhì)體影響原生質(zhì)體數(shù)量和活力的因素?cái)?shù)量和活力的因素v原生質(zhì)體培養(yǎng)方法原生質(zhì)體培養(yǎng)方法v影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素v原生質(zhì)體再生過程原生質(zhì)體再生過程Flash用于分離原生質(zhì)體的材料用于分離原生質(zhì)體的材料材料預(yù)處理材料預(yù)處理用黑暗處理、低溫處理和不同光質(zhì)照射等方法，用黑暗處理、低溫處理和不同光質(zhì)照射等方法，可提高某些材料原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力?？商岣吣承┎牧显|(zhì)體的產(chǎn)量和活力。 龍膽試管苗的葉片用龍膽試管苗的葉片用4 4o oC C處理較好。處理較好。 甘蔗植株必須先在黑暗下培養(yǎng)甘蔗植株必須先在黑暗下培養(yǎng)12h12h后分離的后分離的原生質(zhì)體才能

4、分裂。原生質(zhì)體才能分裂。 馬鈴薯試管苗葉片需在黑暗下處理馬鈴薯試管苗葉片需在黑暗下處理48h48h后分后分離原生質(zhì)體，才能獲得高產(chǎn)量。離原生質(zhì)體，才能獲得高產(chǎn)量。原生質(zhì)體分離的方法原生質(zhì)體分離的方法機(jī)機(jī) 械械 分分 離離 法法酶酶 解解 分分 離離 法法機(jī)械分離法機(jī)械分離法：先將細(xì)胞放在高滲糖溶液中先將細(xì)胞放在高滲糖溶液中預(yù)處理，待細(xì)胞發(fā)生輕微質(zhì)壁分離，原生質(zhì)預(yù)處理，待細(xì)胞發(fā)生輕微質(zhì)壁分離，原生質(zhì)體收縮成球形后，再用機(jī)械法磨碎組織，從體收縮成球形后，再用機(jī)械法磨碎組織，從傷口處可釋放出完整的原生質(zhì)體。傷口處可釋放出完整的原生質(zhì)體。v缺點(diǎn)：獲得完整的原生質(zhì)體的數(shù)量比較少，缺點(diǎn)：獲得完整的原生質(zhì)體

5、的數(shù)量比較少，能夠用此法產(chǎn)生原生質(zhì)體的植物種類受到能夠用此法產(chǎn)生原生質(zhì)體的植物種類受到限制。限制。v優(yōu)點(diǎn)：該方法可避免酶制劑對(duì)原生質(zhì)體的優(yōu)點(diǎn)：該方法可避免酶制劑對(duì)原生質(zhì)體的破壞作用。破壞作用。酶解分離法酶解分離法： 指將材料放入能降解細(xì)胞壁指將材料放入能降解細(xì)胞壁的混合等滲酶液中保溫一定時(shí)間，在酶液的的混合等滲酶液中保溫一定時(shí)間，在酶液的作用下，細(xì)胞壁被降解，從而獲得大量有活作用下，細(xì)胞壁被降解，從而獲得大量有活力的原生質(zhì)體的方法。力的原生質(zhì)體的方法。v常用的酶種類：纖維素酶類（纖維素酶、半常用的酶種類：纖維素酶類（纖維素酶、半纖維素酶、崩潰酶纖維素酶、崩潰酶Driselase）、果膠酶類）、

6、果膠酶類（果膠酶和離析酶（果膠酶和離析酶Macerozyme）、蝸牛）、蝸牛酶和胼胝質(zhì)酶。酶和胼胝質(zhì)酶。酶酶來源來源生產(chǎn)廠家生產(chǎn)廠家纖維素酶類纖維素酶類Onozuka R-10綠色木霉綠色木霉Yakult Honsha Co. Ltd., Tokyo, JapanCellulysin綠色木霉綠色木霉Calbiochem.,San Diego,CA 92037, USADriselaseIrpex lutensKayowa Hakko Kogyo Co., Tokyo,Japan酶酶來源來源生產(chǎn)廠家生產(chǎn)廠家果膠酶類果膠酶類Macerozyme R-10根霉根霉Yakult Honsha Co.

7、Ltd., Tokyo, JapanPectinase黑曲霉黑曲霉Sigma Chemical Co.Pectolyase Y-23黑曲霉黑曲霉Seishin Pharm. Co. Ltd., Tokyo, Japan半纖維素酶半纖維素酶RhozymeHP-150黑曲霉黑曲霉Rohm and Hass Co., Rhiladelphia, UAS酶解法的優(yōu)缺點(diǎn)酶解法的優(yōu)缺點(diǎn)v優(yōu)點(diǎn)：獲得量大，適用廣泛。優(yōu)點(diǎn)：獲得量大，適用廣泛。v缺點(diǎn)：商品酶制劑均含有核酸酶、蛋白酶、缺點(diǎn)：商品酶制劑均含有核酸酶、蛋白酶、過氧化物酶以及酚類物質(zhì)。過氧化物酶以及酚類物質(zhì)。會(huì)影響所獲原生質(zhì)體的活力。會(huì)影響所獲原生質(zhì)體

8、的活力。沉沉 降降 法法漂漂 浮浮 法法不不 連連 續(xù)續(xù) 梯梯 度度 法法原生質(zhì)體純化的方法原生質(zhì)體純化的方法飄浮法飄浮法Protoplastv采用比原生質(zhì)體密度大的高滲溶采用比原生質(zhì)體密度大的高滲溶液（蔗糖、液（蔗糖、Percoll、Ficoll），）， 使原生質(zhì)體漂浮在液體表層的純使原生質(zhì)體漂浮在液體表層的純化方法?；椒ā優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：可以避免分離的原生質(zhì)體因震可以避免分離的原生質(zhì)體因震蕩被組織碎片撞擊而破損。蕩被組織碎片撞擊而破損。 所用藥品簡單，成本低。所用藥品簡單，成本低。v缺點(diǎn)及補(bǔ)救措施：缺點(diǎn)及補(bǔ)救措施：對(duì)離心力要求比較嚴(yán)格，掌握不對(duì)離心力要求比較嚴(yán)格，掌握不好，原生質(zhì)體則不易漂

9、浮?？刹珊?，原生質(zhì)體則不易漂浮?？刹捎貌煌瑵舛群筒煌x心速度分次用不同濃度和不同離心速度分次漂浮的方法。漂浮的方法。沉沉 降降 法法v利用比重原理，在具有一定滲透壓的溶利用比重原理，在具有一定滲透壓的溶液中，先進(jìn)行過濾然后低速離心，使純液中，先進(jìn)行過濾然后低速離心，使純凈完整的原生質(zhì)體沉積于試管底部。凈完整的原生質(zhì)體沉積于試管底部。v優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)缺點(diǎn)： 純化原生質(zhì)體比較簡單。純化原生質(zhì)體比較簡單。 由于原生質(zhì)體沉積于試管底部，造成相互由于原生質(zhì)體沉積于試管底部，造成相互 擠壓，常引起原生質(zhì)體的破碎。擠壓，常引起原生質(zhì)體的破碎。v又稱界面法，采用兩又稱界面法，采用兩種密度不同的溶液形種密度不同的溶

10、液形成不連續(xù)梯度，通過成不連續(xù)梯度，通過離心使原生質(zhì)體與破離心使原生質(zhì)體與破損細(xì)胞分別處于不同損細(xì)胞分別處于不同液相中，從而純化原液相中，從而純化原生質(zhì)體的方法。生質(zhì)體的方法。v優(yōu)點(diǎn)：可以收集到數(shù)優(yōu)點(diǎn)：可以收集到數(shù)量較大的純凈原生質(zhì)量較大的純凈原生質(zhì)體，同時(shí)避免收集過體，同時(shí)避免收集過程中原生質(zhì)體因相互程中原生質(zhì)體因相互擠壓而破碎。擠壓而破碎。12mL碎片帶碎片帶含原生含原生質(zhì)體帶質(zhì)體帶0.6mL 0.45M蔗糖蔗糖0.45M甘露醇甘露醇不連續(xù)梯度法不連續(xù)梯度法原原 生生 質(zhì)質(zhì) 體體 鑒鑒 定定v低滲爆破法低滲爆破法v熒光增白劑法熒光增白劑法(calcoflower white 0.1%)原原

11、 生生 質(zhì)質(zhì) 體體 活活 力力 測(cè)測(cè) 定定v形態(tài)識(shí)別形態(tài)識(shí)別 形態(tài)完整、富含形態(tài)完整、富含細(xì)胞質(zhì)、顏色新細(xì)胞質(zhì)、顏色新鮮的正常球形，鮮的正常球形，放入低滲溶液中，放入低滲溶液中，可正常膨大?？烧Ｅ虼?。原原 生生 質(zhì)質(zhì) 體體 活活 力力 測(cè)測(cè) 定定v熒光顯微鏡識(shí)別熒光顯微鏡識(shí)別(FDA法法) FDA (fluorescein diacetate) 本身不發(fā)熒光也不具有本身不發(fā)熒光也不具有極性，能自由穿過細(xì)胞極性，能自由穿過細(xì)胞質(zhì)膜?；罴?xì)胞內(nèi)質(zhì)膜?；罴?xì)胞內(nèi)FDA可可以被酯酶裂解，將能發(fā)以被酯酶裂解，將能發(fā)熒光的極性部分釋放出熒光的極性部分釋放出來。熒光素則不能自由來。熒光素則不能自由穿越質(zhì)膜，在

12、完整的活穿越質(zhì)膜，在完整的活細(xì)胞內(nèi)積累細(xì)胞內(nèi)積累。使用濃度：使用濃度：0 0.01%01%原原 生生 質(zhì)質(zhì) 體體 活活 力力 測(cè)測(cè) 定定v酚藏花紅染色法（酚藏花紅染色法（0.1%) )酚藏花紅能使無活力的原酚藏花紅能使無活力的原生質(zhì)體染成紅色，有活力生質(zhì)體染成紅色，有活力的原生質(zhì)體不著色。的原生質(zhì)體不著色。v伊凡藍(lán)伊凡藍(lán)(Evans blue)染色法染色法( (0.025%) )有活力但受損傷的細(xì)胞和死細(xì)胞能有活力但受損傷的細(xì)胞和死細(xì)胞能夠攝取這種染料，活細(xì)胞不攝取。夠攝取這種染料，活細(xì)胞不攝取。v氧電極法氧電極法影響原生質(zhì)體數(shù)量和活力的因素影響原生質(zhì)體數(shù)量和活力的因素v供試材料及預(yù)處理方法供

13、試材料及預(yù)處理方法v酶解條件：酶解條件：酶質(zhì)量、組合、濃度、酶質(zhì)量、組合、濃度、pH、光照和溫度、光照和溫度v滲透壓穩(wěn)定劑滲透壓穩(wěn)定劑v質(zhì)膜穩(wěn)定劑質(zhì)膜穩(wěn)定劑v分離條件：分離條件：離心次數(shù)、離心速度、純化方法、分離純化持續(xù)離心次數(shù)、離心速度、純化方法、分離純化持續(xù)時(shí)間。時(shí)間。v分離用具分離用具 酶的種類、組合、濃度酶的種類、組合、濃度材料材料纖維纖維素酶素酶半纖半纖維素維素酶酶崩崩潰潰酶酶果果膠膠酶酶離析離析酶酶蝸蝸牛牛酶酶研究者研究者煙草葉片煙草葉片禾谷類葉片禾谷類葉片油菜花粉油菜花粉馬鈴薯子葉馬鈴薯子葉馬鈴薯花粉馬鈴薯花粉1.02.01.01.01.00.51.00.10.20.50.51.

14、0UchimiyaUchimiyaScottScott李仕瓊李仕瓊戴朝曦戴朝曦王蒂王蒂幾種草本植物原生質(zhì)體分離使用的酶種類及濃度幾種草本植物原生質(zhì)體分離使用的酶種類及濃度(%)材料材料纖維纖維素酶素酶半纖半纖維素維素酶酶崩潰崩潰酶酶果膠酶果膠酶離離析析酶酶研究者研究者枸杞愈傷組織枸杞愈傷組織檀香幼葉檀香幼葉檀香愈傷組織檀香愈傷組織榆幼葉榆幼葉山毛櫸幼葉山毛櫸幼葉胡楊懸浮細(xì)胞胡楊懸浮細(xì)胞0.52.01.00.10.21.00.50.50.50.20.50.050.50.50.010.030.11.00.20.50.5孫勇如等孫勇如等LakshmiLakshmiLakshmiLakshmiDori

15、nDorinAhujaAhuja諸葛強(qiáng)諸葛強(qiáng)幾種木本植物原生質(zhì)體分離使用的酶種類及濃度幾種木本植物原生質(zhì)體分離使用的酶種類及濃度(%)pHpHv分離原生質(zhì)體時(shí)，酶液的分離原生質(zhì)體時(shí)，酶液的pH值是值得注意的值是值得注意的問題。因?yàn)榻到饷傅幕盍图?xì)胞活力最適問題。因?yàn)榻到饷傅幕盍图?xì)胞活力最適pH值是不一致的。值是不一致的。v如制備菜豆葉片原生質(zhì)體時(shí)：如制備菜豆葉片原生質(zhì)體時(shí)： 低低pH（40%40%）交變電場的振幅頻率交變電場的振幅頻率100 V/cm交變電場處理時(shí)間交變電場處理時(shí)間20s支流高頻電壓支流高頻電壓1100V/cm脈沖寬度脈沖寬度60us脈沖次數(shù)脈沖次數(shù)1融融 合合 類類 型型v

16、自發(fā)融合自發(fā)融合v誘發(fā)融合誘發(fā)融合v對(duì)稱融合對(duì)稱融合v非對(duì)稱融合非對(duì)稱融合 核失活核失活細(xì)胞質(zhì)失活細(xì)胞質(zhì)失活FlashFlash影響原生質(zhì)體融合的因素影響原生質(zhì)體融合的因素v原生質(zhì)體質(zhì)量至關(guān)重要，高質(zhì)量的原生質(zhì)體原生質(zhì)體質(zhì)量至關(guān)重要，高質(zhì)量的原生質(zhì)體是細(xì)胞融合的首要條件。是細(xì)胞融合的首要條件。v融合方法融合方法v融合參數(shù)，包括各種融合液都應(yīng)選擇適當(dāng)。融合參數(shù)，包括各種融合液都應(yīng)選擇適當(dāng)。融融 合合 體體 類類 型型v異核體異核體(heterokaryon)或異核細(xì)胞或異核細(xì)胞基因型不同的原生質(zhì)體融合成雜交細(xì)胞基因型不同的原生質(zhì)體融合成雜交細(xì)胞 v同核體同核體(homokaryon)基因型相同的

17、原生質(zhì)體融合成的雜交細(xì)胞基因型相同的原生質(zhì)體融合成的雜交細(xì)胞 v非對(duì)稱雜種或細(xì)胞質(zhì)雜種非對(duì)稱雜種或細(xì)胞質(zhì)雜種細(xì)胞質(zhì)工程細(xì)胞質(zhì)工程(cytoplasmic engineering)v細(xì)胞質(zhì)工程細(xì)胞質(zhì)工程 又稱細(xì)胞拆合工程又稱細(xì)胞拆合工程是通過物理或化學(xué)方法將細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核是通過物理或化學(xué)方法將細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核分開，再進(jìn)行不同細(xì)胞間核質(zhì)的重新組合，分開，再進(jìn)行不同細(xì)胞間核質(zhì)的重新組合，重建成新細(xì)胞。重建成新細(xì)胞。v可用于研究細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的關(guān)系的基礎(chǔ)研可用于研究細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的關(guān)系的基礎(chǔ)研究和育種工作。究和育種工作。 細(xì)胞質(zhì)工程細(xì)胞質(zhì)工程v細(xì)胞質(zhì)雜種細(xì)胞質(zhì)雜種應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)，使兩種來源不同的核應(yīng)用

18、細(xì)胞融合技術(shù)，使兩種來源不同的核外遺傳物質(zhì)與一個(gè)特定的核基因組結(jié)合在外遺傳物質(zhì)與一個(gè)特定的核基因組結(jié)合在一起一起細(xì)胞質(zhì)雜種獲得途徑（細(xì)胞質(zhì)雜種獲得途徑（4條）：條）：v一個(gè)正常原生質(zhì)體與一個(gè)去核原生質(zhì)體融合；一個(gè)正常原生質(zhì)體與一個(gè)去核原生質(zhì)體融合；Lorz等（等（1981）用密度梯度離心（）用密度梯度離心（550% Percoll，2000040000g，4090min）獲得高純度的去核原生質(zhì)體。）獲得高純度的去核原生質(zhì)體。細(xì)胞質(zhì)工程細(xì)胞質(zhì)工程v細(xì)胞質(zhì)雜種獲得途徑細(xì)胞質(zhì)雜種獲得途徑一個(gè)正常原生質(zhì)體和一個(gè)核失活原生質(zhì)體融合一個(gè)正常原生質(zhì)體和一個(gè)核失活原生質(zhì)體融合v使核失活的方法：使核失活的方法：

19、X射線，碘乙酰胺，羅丹明射線，碘乙酰胺，羅丹明異核體形成后，兩個(gè)核中有一個(gè)消失；異核體形成后，兩個(gè)核中有一個(gè)消失；較晚時(shí)期，染色體選擇性消失。較晚時(shí)期，染色體選擇性消失。體細(xì)胞雜種產(chǎn)生的其它途徑體細(xì)胞雜種產(chǎn)生的其它途徑v細(xì)胞器移植細(xì)胞器移植葉綠體移植葉綠體移植v葉綠體的來源葉綠體的來源葉片機(jī)械法低速離心葉片機(jī)械法低速離心原生質(zhì)體低滲漲破低速離心原生質(zhì)體低滲漲破低速離心v葉綠體的純化葉綠體的純化 Percoll或蔗糖密度梯度離心或蔗糖密度梯度離心v葉綠體的轉(zhuǎn)移葉綠體的轉(zhuǎn)移 夾層離心法和夾層離心法和PEG誘導(dǎo)融合誘導(dǎo)融合應(yīng)用應(yīng)用PEG誘導(dǎo)胡蘿卜原生質(zhì)體攝入藻類葉綠體誘導(dǎo)胡蘿卜原生質(zhì)體攝入藻類葉綠體

20、利用葉綠體的轉(zhuǎn)移使低光效作物的原生質(zhì)體通過利用葉綠體的轉(zhuǎn)移使低光效作物的原生質(zhì)體通過攝取高光效作物的葉綠體而提高其光合效率。攝取高光效作物的葉綠體而提高其光合效率。v細(xì)胞器移植細(xì)胞器移植細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植v細(xì)胞核的來源細(xì)胞核的來源植物組織機(jī)械法植物組織機(jī)械法（加（加Triton X-100）過濾離心過濾離心原生質(zhì)體低滲漲破原生質(zhì)體低滲漲破(加加Triton X-100)過濾離心過濾離心v細(xì)胞核的純化細(xì)胞核的純化 Percoll或蔗糖密度梯度離心或蔗糖密度梯度離心v細(xì)胞核的轉(zhuǎn)移細(xì)胞核的轉(zhuǎn)移 夾層離心法：原生質(zhì)體核原生質(zhì)體核夾層離心法：原生質(zhì)體核原生質(zhì)體核 PEG誘導(dǎo)誘導(dǎo) 電場誘導(dǎo)和微注射電場誘

21、導(dǎo)和微注射體細(xì)胞雜種產(chǎn)生的其它途徑體細(xì)胞雜種產(chǎn)生的其它途徑體細(xì)胞雜種產(chǎn)生的其它途徑體細(xì)胞雜種產(chǎn)生的其它途徑v微生物移植微生物移植內(nèi)吞作用內(nèi)吞作用攝入固氮根瘤菌攝入固氮根瘤菌v外源染色體和外源染色體和DNA的的攝入攝入染色體分離染色體分離v細(xì)胞同步化處理原生質(zhì)體漲破差速離細(xì)胞同步化處理原生質(zhì)體漲破差速離心（心（200 g,10 min200 g,10 min；1000g1000g，20 min20 min）轉(zhuǎn)移方法轉(zhuǎn)移方法vPEGPEG誘導(dǎo)，顯微注射誘導(dǎo)，顯微注射v農(nóng)桿菌介導(dǎo)，基因搶，電穿孔，超聲波，激光穿孔農(nóng)桿菌介導(dǎo)，基因搶，電穿孔，超聲波，激光穿孔體細(xì)胞雜種選擇及雜種植株鑒定體細(xì)胞雜種選擇及

22、雜種植株鑒定v根據(jù)可見標(biāo)記性狀根據(jù)可見標(biāo)記性狀的的機(jī)械選擇法機(jī)械選擇法體細(xì)胞雜種選擇及雜種植株鑒定體細(xì)胞雜種選擇及雜種植株鑒定。 FITC( FITC(異硫氰酸異硫氰酸熒光素?zé)晒馑? )在熒光顯在熒光顯徽鏡下呈綠色徽鏡下呈綠色 RITC ( RITC (異硫氰酸異硫氰酸羅丹明羅丹明) ) RITCRITC在熒在熒光顯徽鏡下呈紅色光顯徽鏡下呈紅色體細(xì)胞雜種選擇及雜種植株鑒定體細(xì)胞雜種選擇及雜種植株鑒定v根據(jù)其遺傳和生理生化特性的根據(jù)其遺傳和生理生化特性的互補(bǔ)選擇互補(bǔ)選擇法法互補(bǔ)選擇法互補(bǔ)選擇法v互補(bǔ)選擇法互補(bǔ)選擇法是指利用兩個(gè)親本具有不同遺傳是指利用兩個(gè)親本具有不同遺傳和生理特性和生理特性, ,

23、在特定培養(yǎng)條件下在特定培養(yǎng)條件下, ,只有發(fā)生互只有發(fā)生互補(bǔ)作用的雜種細(xì)胞才能生長的選擇方法。補(bǔ)作用的雜種細(xì)胞才能生長的選擇方法?？剐曰パa(bǔ)選擇法抗性互補(bǔ)選擇法營養(yǎng)代謝互補(bǔ)選擇法營養(yǎng)代謝互補(bǔ)選擇法生長互補(bǔ)生長互補(bǔ)選擇法選擇法矮牽牛矮牽牛+爬山虎融合體的選擇爬山虎融合體的選擇原生質(zhì)體原生質(zhì)體矮牽牛矮牽牛爬山虎冠癭爬山虎冠癭混合體混合體融合處理融合處理矮牽牛矮牽牛+爬山虎爬山虎細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞團(tuán)愈傷組織愈傷組織（異核體）（異核體）NTNT培養(yǎng)基培養(yǎng)基MSMS培養(yǎng)基培養(yǎng)基( (無激素?zé)o激素) )NTNT培養(yǎng)基培養(yǎng)基NTNT培養(yǎng)基培養(yǎng)基細(xì)細(xì) 胞胞 團(tuán)團(tuán)MSMS培養(yǎng)基培養(yǎng)基(無激素?zé)o激素)死亡死亡MSMS培養(yǎng)基培養(yǎng)基(有激素有激素)愈傷組織愈傷組織原生質(zhì)體原生質(zhì)體細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞團(tuán)MSMS培養(yǎng)基培養(yǎng)基( (無激素?zé)o激素) )死亡死亡愈傷組織愈傷組織體細(xì)胞雜種選擇及雜種植株鑒定體細(xì)胞雜種選擇及雜種植株鑒定v細(xì)胞學(xué)鑒定細(xì)胞學(xué)鑒定利用染色體顯帶技術(shù)，以親本染色體為對(duì)利用染色體顯帶技術(shù)，以親本染色體為對(duì)照，對(duì)細(xì)胞雜種的染色體數(shù)目、形態(tài)和照，對(duì)細(xì)胞雜種的染色體數(shù)目、形態(tài)和帶帶型型進(jìn)行