單基因性繼發(fā)性高血壓的基因診斷

1、單基因性繼發(fā)性高血壓單基因性繼發(fā)性高血壓的的基因診斷基因診斷瑞金醫(yī)院高血壓科瑞金醫(yī)院高血壓科 上海市高血壓研究所上海市高血壓研究所朱鼎良朱鼎良k糖皮質(zhì)激素抑制性醛固酮增多癥（糖皮質(zhì)激素抑制性醛固酮增多癥（GRHGRH）k表征性鹽皮質(zhì)激素增多癥（表征性鹽皮質(zhì)激素增多癥（AMEAME）k1111羥化酶缺乏癥羥化酶缺乏癥k1717羥化酶缺乏綜合征羥化酶缺乏綜合征kLiddleLiddle 綜合征綜合征kGordon Gordon 綜合征綜合征k孤立型嗜鉻細(xì)胞瘤孤立型嗜鉻細(xì)胞瘤kII A II A 型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤kII B II B 型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤kVon Hipp

2、el-LindauVon Hippel-Lindau綜合征綜合征k I I 型神經(jīng)纖維瘤型神經(jīng)纖維瘤k高血壓伴短指畸形高血壓伴短指畸形糖皮質(zhì)激素抑制性醛固酮增多癥糖皮質(zhì)激素抑制性醛固酮增多癥表征性鹽皮質(zhì)激素增多癥表征性鹽皮質(zhì)激素增多癥1717羥化酶缺乏綜合征羥化酶缺乏綜合征1111 羥化酶缺乏癥羥化酶缺乏癥Liddle Liddle 綜合征綜合征II A II A 型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤II B II B 型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤I I 型神經(jīng)纖維瘤型神經(jīng)纖維瘤Von Hippel-LindauVon Hippel-Lindau 綜合征綜合征GordonGordon綜合征綜合

3、征CYP11B1/CYP11B2HSD11B2CYP17CYP11B1 SCNN1B, SCNN1GRET proto-oncogeneRET proto-oncogene NF1gene VHL tumour suppressor geneWNK1、WNK4（單基因性繼發(fā)性高血壓）（單基因性繼發(fā)性高血壓） 單基因性繼發(fā)性高血壓單基因性繼發(fā)性高血壓基因診斷（國內(nèi)）基因診斷（國內(nèi)） 病名病名 Liddle 綜合征綜合征IIaIIa型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤糖皮質(zhì)激素抑制性醛固酮增多癥糖皮質(zhì)激素抑制性醛固酮增多癥* *Gordon綜合征綜合征單位單位高研所、北醫(yī)高研所、北醫(yī)高研所高研所內(nèi)研所

4、內(nèi)研所 高研所高研所 歷史歷史 (Liddle 綜合征綜合征) 1963 Liddle 首例報(bào)道首例報(bào)道1994 Shimkets 腎上皮鈉通道腎上皮鈉通道亞單位亞單位 基因突變基因突變 1995 Hansson 腎上皮鈉通道腎上皮鈉通道亞單位亞單位 基因突變基因突變特征特征 (Liddle綜合征綜合征) 遺傳遺傳 臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) 常染色體顯性遺傳病常染色體顯性遺傳病 （16p)腎上皮鈉通道（腎上皮鈉通道（ENaC) 基因突變基因突變高血壓高血壓低醛固酮低醛固酮低血鉀低血鉀 低血漿腎素活性（低血漿腎素活性（PRA） Liddle 綜合征家系綜合征家系-1Liddle綜合征家系先證者綜合征家系

5、先證者的臨床特征的臨床特征 男男, 25 歲歲 18 歲發(fā)生高血壓歲發(fā)生高血壓 血壓：血壓：230/140 mmHg 血鉀血鉀: 2.7mmol/L 高血壓家族史高血壓家族史: 母、兄弟、侄女母、兄弟、侄女 Liddle綜合征家系先證者綜合征家系先證者的臨床特征的臨床特征低低PRA: 0 ng/ml/h (0.1-5.5)低尿醛固酮低尿醛固酮 ：0.7 ug/24h (3.4-12.7)聯(lián)合用降壓藥無效聯(lián)合用降壓藥無效安替舒通治療無效安替舒通治療無效氨苯喋啶氨苯喋啶（triamterene）治療和低鈉飲治療和低鈉飲食后高血壓和低血鉀明顯改善食后高血壓和低血鉀明顯改善 1985年住院資料年住院資

6、料氨苯喋啶和低鈉治療前后氨苯喋啶和低鈉治療前后血壓和生化指標(biāo)改變血壓和生化指標(biāo)改變 血壓血壓 血鉀血鉀 尿尿ald (mmHg) (mmol/L) (ug/24h) 治療前治療前 230/140 2.7 0.7 治療后治療后 110/84 4.2 6.4 Liddle家系一級親屬的臨床及生化檢查家系一級親屬的臨床及生化檢查 病人病人 血壓血壓 年齡年齡 發(fā)病年齡發(fā)病年齡 (歲歲) (mmHg) (歲歲) 高血壓高血壓 卒中卒中-1 130/8076-1* 120/80 46 33 43-3* 126/9241 18 32-5* 138/106 37 18-7* 144/108 31 14 23

7、-2* 160/120 24 15-3 105/7521-4 110/8015-5 98/78 9病人病人 PRA 血漿血漿 alt. 尿尿 ald 血鉀血鉀 尿鉀尿鉀 (ng/ml /h) (ng/ml / h) (ng/dl) (mmol/l) (mmol/l) -1 4.03-1* 1.02 7.4 3.5 3.52 46.6-3* 1.24 10.1 1.3 3.54 40.4-5* 1.08 9.6 0.4 4.07 22.1-7* 0.77 7.7 2.7 3.37 42.0-2* 0 2.1 0.4 3.64 55.7-3 3.80-4 4.25-5 4.06Liddle家系一級

8、親屬的臨床及生化檢查家系一級親屬的臨床及生化檢查基因診斷方法基因診斷方法 (Liddle綜合征綜合征) 制備基因組制備基因組DNA 從外周血從外周血（5-10ml）白細(xì)胞中抽提白細(xì)胞中抽提DNADNA 直接測序直接測序 PCR 擴(kuò)增擴(kuò)增 ENaC 513-638密碼子密碼子 和和 ENaC 524-631密碼子密碼子 PCR純化產(chǎn)物用純化產(chǎn)物用 ABI 377 測序儀進(jìn)行序列分析測序儀進(jìn)行序列分析基因診斷結(jié)果基因診斷結(jié)果 (Liddle綜合征家系綜合征家系-1) 5名家系成員名家系成員 (II-1,3,5,7, III-2)， ENaC基因基因616密碼子存在密碼子存在CCC - CTC (p

9、ro-Leu)的錯(cuò)義突變的錯(cuò)義突變 先證者父親先證者父親(I-1)和其他年青子女和其他年青子女 (III-3,4,5)未檢出這一突變未檢出這一突變Liddle家系成員家系成員 ENaC基因序列分析基因序列分析 II-1 II-3 II-5 II-7CCC-CTCP616L已報(bào)道的已報(bào)道的Liddle綜合征綜合征ENaC基因的致病基因的致病突變突變 亞單位亞單位 密碼子密碼子 堿基改變堿基改變 蛋白改變蛋白改變 _ 564 564 CGA-TGA Arg-stop codonCGA-TGA Arg-stop codon_ 582 582 deletion stop codon deletion

10、stop codon_ 589 CAG-TGA Gln-stop codon 589 CAG-TGA Gln-stop codon 592 ACG-ACCG Thr-frame 592 ACG-ACCG Thr-frame shiftshift_ 594 CCC-CCCC Pro-frame 594 CCC-CCCC Pro-frame shiftshift_ 615 615 CCC-TCC Pro-Ser CCC-TCC Pro-Ser_ 616 CCC-CTC Pro-Leu 616 CCC-CTC Pro-Leu_ 616 CCC-TCC Pro-Ser 616 CCC-TCC Pro-

11、Ser_ 618 618 CTA-TTA Tyr-His CTA-TTA Tyr-His_ 574 TGG-TGA Trp-stop codon 574 TGG-TGA Trp-stop codon Liddle 綜合征家系綜合征家系-2基因診斷結(jié)果基因診斷結(jié)果 (Liddle綜合征家系綜合征家系-2) 3名家系成員名家系成員 (II-5, III-1,4)， ENaC基因基因616密碼子存在密碼子存在CCC - TCC （pro-Ser) 的錯(cuò)義突變的錯(cuò)義突變 其他家系成員其他家系成員 (II-2,3,4,6,7,8, III-2,3)未檢出這一突變未檢出這一突變基因診斷結(jié)果基因診斷結(jié)果 (

12、Liddle綜合征家系綜合征家系-2) 3名名CCC-TCC突變者同時(shí)存在突變者同時(shí)存在632密密碼子的碼子的GAC-CAC（Asp-His)變異變異 150名無關(guān)個(gè)體測序未發(fā)名無關(guān)個(gè)體測序未發(fā)GAC-CAC變變異，證明這是一種突變。該突變與異，證明這是一種突變。該突變與Liddle 綜合征發(fā)病間關(guān)系有待研究綜合征發(fā)病間關(guān)系有待研究Liddle 家系家系-2的的 P616S突變突變 (CCC - TCC, Pro - Ser)Liddle 家系家系-2 D632H 突變突變(GAC - CAC, Asp - His)ENaC 亞單位亞單位 ENaCNH2COOH subunitNedd 4 結(jié)

13、合部位結(jié)合部位 MEN- IIaIIa型：型：甲狀腺髓樣癌（MTC）、甲狀旁腺腺瘤或增生、嗜鉻細(xì)胞瘤 MEN- IIbIIb型型：MTC、嗜鉻細(xì)胞瘤、粘膜神經(jīng)節(jié)瘤、馬凡氏體型 Sipple 1961年報(bào)道第一例年報(bào)道第一例 MEN-II a型（瑞金型（瑞金1998，2002） MEN-II b型（瑞金型（瑞金2002）多內(nèi)分泌腺瘤病IIa型家系圖 女、女、5151歲、歲、“血壓升高血壓升高7 7年、陣發(fā)性心悸、多汗年、陣發(fā)性心悸、多汗2 2年年”、 97 97年入院、年入院、160/100 160/100 mm Hgmm Hg B B 超：雙側(cè)超：雙側(cè)甲狀腺實(shí)質(zhì)性腫塊、甲狀腺實(shí)質(zhì)性腫塊、雙側(cè)腎上腺多發(fā)性占位雙側(cè)腎上腺多發(fā)性占位 性病變性病變 CTCT：雙側(cè)雙側(cè)甲狀腺甲狀腺占位性病變、雙側(cè)腎上腺占位性病變占位性病變、雙側(cè)腎上腺占位性病變 甲狀腺及頸前淋巴結(jié)穿刺：甲狀腺髓樣癌、頸前淋巴轉(zhuǎn)移甲狀腺及頸前淋巴結(jié)穿刺：甲狀腺髓樣癌、頸前淋巴轉(zhuǎn)移 手