月季組織培養(yǎng)PPT課件

1、 目錄（一）：培養(yǎng)意義（二）：實(shí)驗(yàn)原理（三）: 實(shí)驗(yàn)步驟 1 ：初代培養(yǎng) 2 ：繼代培養(yǎng)（四）: 問題與討論 第1頁/共15頁一、培養(yǎng)意義 月季屬薔薇科薔薇屬多年生草本植物，每年多次開花，而且香味怡人，在觀賞植物中地位很高。另一大優(yōu)點(diǎn)是分布極廣，適應(yīng)性強(qiáng)，栽培容易。使得月季無愧于“花中皇后”之美譽(yù)，古今中外文人墨客詠嘆月季的佳作，不勝枚舉。但品種比較單一，更新?lián)Q代緩慢。隨著組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用成功培育了大量?jī)?yōu)質(zhì)月季組培苗，填補(bǔ)了市場(chǎng)空白，對(duì)加速新老品種更新?lián)Q代，迅速普及名優(yōu)新品種起到了重要作用 。第2頁/共15頁二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞的全能性：細(xì)胞具有全套遺傳物質(zhì)。能夠發(fā)育成完整植株的能力。激素調(diào)控理

2、論：當(dāng)細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比值大時(shí)，誘導(dǎo)芽的產(chǎn)生；當(dāng)比值小時(shí)，誘導(dǎo)根的產(chǎn)生；一樣時(shí)，誘導(dǎo)愈傷組織的形成。第3頁/共15頁三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）無菌培養(yǎng)的建立（1）選材 選取生長(zhǎng)健壯的當(dāng)年生枝條，用飽滿而未萌發(fā)的側(cè)芽作為外植體。以枝條中段芽最好，因?yàn)榻臃N后，中段芽第5天左右就能萌發(fā)，而基部和梢部的芽往往遲至15天才萌發(fā)。 （2）培養(yǎng)基的配制 整個(gè)培養(yǎng)過程都可用MS培養(yǎng)基，誘導(dǎo)芽萌發(fā)所加的植物激素只需要BA一種即可，每升用0.31.Omg。第4頁/共15頁（3）清洗外植體采回的枝條切去葉，再剝?nèi)ジ皆谇o上的葉柄及皮刺，先整段用洗衣粉水仔細(xì)刷洗，再用自來水沖洗，毛巾擦干后，放置在小木板上，用刀切成23厘米

3、一段，每段至少一個(gè)側(cè)芽，裝入消毒過的培養(yǎng)皿，放在超凈工作臺(tái)上。（4）消毒與接種在超凈工作臺(tái)上，用飽和漂白粉上清液作表面滅菌2530分鐘，用無菌水涮洗數(shù)次，無菌紗布吸干莖段外表水分，按無菌操作要求接種，從芽萌發(fā)到芽長(zhǎng)到1厘米左右需要23周。第5頁/共15頁第6頁/共15頁 （二）繼代增殖 （1）將上述無菌芽從原莖段上切下，轉(zhuǎn)接到MS+BA1-2mg/l+IAA0.1-0.3mg/l或MS+BA1-2mg/l+NAA0.01-0.1mg/l的培養(yǎng)基上，促使嫩莖長(zhǎng)出更多的側(cè)芽，原莖段棄去。繼代增殖培養(yǎng)基每升用蔗糖30克 （2）5周后 ，所培育的月季成倍的增加。 （3）每56周做一次繼代增殖，繼代前先

4、制備好培養(yǎng)基，然后在無菌操作條件下，將月季嫩莖切成12節(jié)一段，投入新鮮的增殖培養(yǎng)基上，月季小苗就會(huì)按幾何級(jí)數(shù)增殖起來，也可以將大苗轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基上。第7頁/共15頁 （4） 壯苗培養(yǎng)對(duì)增殖倍率高的品種，所增殖的嫩莖很細(xì)弱，要求進(jìn)行一次壯苗培養(yǎng)，以取得適合生根和今后移栽的苗子。壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基為：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并不特別強(qiáng)調(diào)繁殖速度，也可以一直使用這種培養(yǎng)基，以壯苗為主，增殖為輔，使增殖與壯苗合為一步。培養(yǎng)條件。光照1012小時(shí)/天，光強(qiáng)8001800LX，溫度2023，最高2426。 第8頁/共15頁 （5）生根與移栽月季嫩芽生長(zhǎng)到一定長(zhǎng)度時(shí)，就應(yīng)切割下

5、來，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基。切下的嫩芽長(zhǎng)度以23厘米為宜，讓幼苗基部傷口愈合，已長(zhǎng)出根原基，幼根尚未長(zhǎng)出，即出瓶種植。這種方法不會(huì)損傷根系，移栽速度快，成活率高。 （a）以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，配方為MS+NAA0.5，此外加入300mg/L活性炭，30g/L蔗糖。插植2厘米以上無根嫩莖，經(jīng)2周左右出現(xiàn)根原基，幼根尚未長(zhǎng)出即出瓶種植。第9頁/共15頁 （b）移栽。幼苗出瓶后，先洗去沾附的瓊脂培養(yǎng)基，再種植到粗沙+園田土（1：3）介質(zhì)中，總的原則是疏松透氣，有一定的保水、保肥能力。種植密度23厘米46厘米/株，移栽完畢澆透水，并用0.1的百菌清、多菌靈或甲基托布津等噴霧保苗，能顯著提高成活率。 （c）移栽后

6、管理。移栽后需保持相對(duì)濕度85以上，在溫室、拱棚中移栽，覆好遮蔭網(wǎng)，一般成活率都比較高，并注意通風(fēng)和溫度管理。46周后，須做好第二次移植，通常植入5厘米9厘米的塑料杯中，每杯種1苗，再經(jīng)46周，地上、地下部分都充分生長(zhǎng)，有些植株還能開花。第10頁/共15頁 （d）移栽后植保工作。首次移栽1周后，可少量的追肥，視苗大小，濃度逐漸由0.1提高到0.3左右，施用種類有復(fù)合肥、尿素、磷酸二氫鉀，MS培養(yǎng)液等，通常每710天噴一次殺菌劑，如百菌清等保苗，也可結(jié)合噴藥施肥，以減少管理用工。試管苗第二次移栽后，管理上仍不可放松，須注意除草、施肥、防治病蟲害，及時(shí)掐去頂芽，尤其是花蕾，以促進(jìn)側(cè)芽的生長(zhǎng)，促使早日壯大。 第11頁/共15頁 （四）問題與討論 初代培養(yǎng)外植體的褐變：褐變是由于植物組織中的多酚氧化酶被激活而使細(xì)胞的代謝發(fā)生變化。在褐變過程中產(chǎn)生醌類物質(zhì)，他們多呈褐色，當(dāng)擴(kuò)散到培養(yǎng)基后，就會(huì)抑制其他酶的活性，從而影響從接種的外植體的一種現(xiàn)象。 減輕褐變現(xiàn)象發(fā)生的方法： （1）合適的培養(yǎng)基。降低無機(jī)鹽濃度和細(xì)胞分裂素濃度，但蔗糖濃度不能降低。 （2）使用抗氧化劑PVP半光氨酸 （3）使用吸附劑活性炭，0.1%0.5% （4）連續(xù)轉(zhuǎn)移第12頁/共15頁 繼代培養(yǎng)的材料的玻璃化 玻璃化現(xiàn)象：當(dāng)植物不斷進(jìn)行離體培養(yǎng)繁殖時(shí)，培養(yǎng)物會(huì)呈半透明水壯的現(xiàn)象。 產(chǎn)生的原因：濕