第5章 致病菌的檢驗(yàn)6——革蘭氏陰性微需氧和厭氧菌

1、 第第1212章章 革蘭氏革蘭氏陰性陰性微需氧和厭氧菌微需氧和厭氧菌 n本屬菌共包括本屬菌共包括8個(gè)屬和個(gè)屬和1個(gè)科：個(gè)科：1、彎曲桿菌屬彎曲桿菌屬，2、 水螺菌屬，水螺菌屬，3、螺菌屬，、螺菌屬，4、固氮螺菌屬，、固氮螺菌屬，5、海洋、海洋 螺菌屬，螺菌屬，6、蛭弧菌屬，、蛭弧菌屬，7、吸血弧菌屬，、吸血弧菌屬，8、螺桿螺桿 菌屬菌屬，以及擬桿菌科。，以及擬桿菌科。 n在醫(yī)學(xué)檢疫上有意義的是在醫(yī)學(xué)檢疫上有意義的是彎曲桿菌彎曲桿菌和和螺桿菌屬螺桿菌屬。 第第1節(jié)節(jié) 彎曲桿菌屬彎曲桿菌屬 Campylobacter 一類呈逗點(diǎn)狀或一類呈逗點(diǎn)狀或S形的革蘭氏陰性桿菌，廣泛分布于動(dòng)物界，其中形的革蘭

2、氏陰性桿菌，廣泛分布于動(dòng)物界，其中 有些可引起動(dòng)物和人類腹瀉、胃腸炎和腸道外感染。有些可引起動(dòng)物和人類腹瀉、胃腸炎和腸道外感染。 目前彎曲菌屬有目前彎曲菌屬有18個(gè)種（含亞種），對人類致病的主要是個(gè)種（含亞種），對人類致病的主要是空腸彎空腸彎 曲菌曲菌和和胎兒彎曲菌胎兒彎曲菌的胎兒亞種，前者引起人類急性腹瀉，后者的胎兒亞種，前者引起人類急性腹瀉，后者 在免疫功能低下時(shí)可引起敗血癥、腦膜炎等，其次是在免疫功能低下時(shí)可引起敗血癥、腦膜炎等，其次是胎兒彎曲胎兒彎曲 菌菌和和大腸彎曲菌大腸彎曲菌等。等。 1983年分離的年分離的幽門彎曲菌幽門彎曲菌則與慢性胃炎和則與慢性胃炎和 胃潰瘍、十二指腸潰瘍有關(guān)

3、。胃潰瘍、十二指腸潰瘍有關(guān)。 獸醫(yī)臨床上常見的有五個(gè)種（含亞種）：空腸彎曲桿菌、胎兒彎獸醫(yī)臨床上常見的有五個(gè)種（含亞種）：空腸彎曲桿菌、胎兒彎 曲桿菌（胎兒亞種和性病亞種）、小腸彎曲桿菌、幽門彎曲菌。曲桿菌（胎兒亞種和性病亞種）、小腸彎曲桿菌、幽門彎曲菌。 其中以其中以空腸彎桿菌最多見空腸彎桿菌最多見，胎兒亞種次之。，胎兒亞種次之。 彎曲桿菌屬彎曲桿菌屬 一、形態(tài)與染色一、形態(tài)與染色 1、0.2-0.41.5-3.0m； G-, 呈呈弧形、弧形、S形或海鷗形或海鷗 展翅狀展翅狀，不易著色；，不易著色； 2、無芽孢，一端或兩端、無芽孢，一端或兩端 各有一根鞭毛，運(yùn)動(dòng)活各有一根鞭毛，運(yùn)動(dòng)活 潑，形

4、態(tài)似霍亂弧菌；潑，形態(tài)似霍亂弧菌； 3、從微需氧到厭氧，、從微需氧到厭氧， CO2有利于其生長有利于其生長。 二二 培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性 n微需氧，最適生長環(huán)境微需氧，最適生長環(huán)境: 氧氣氧氣5、二氧化碳、二氧化碳10、氮、氮 氣氣85；通常；通常42初分離空腸彎和大腸彎曲菌，其他初分離空腸彎和大腸彎曲菌，其他 菌株菌株37生長良好。生長良好。 n營養(yǎng)要求高，普通培養(yǎng)基不生長，常用營養(yǎng)要求高，普通培養(yǎng)基不生長，常用含頭孢哌酮的含頭孢哌酮的 選擇性培養(yǎng)基，選擇性培養(yǎng)基，以抑制腸道正常菌群。含血的以抑制腸道正常菌群。含血的Skirrow 培養(yǎng)基、頭孢哌酮培養(yǎng)基、頭孢哌酮-萬古霉素萬古霉素-兩性霉素瓊脂

5、培養(yǎng)基兩性霉素瓊脂培養(yǎng)基 （CVA）和不含血的碳）和不含血的碳-頭孢哌酮頭孢哌酮-去氧膽酸鹽去氧膽酸鹽 （CCDA）、碳基選擇性培養(yǎng)基（）、碳基選擇性培養(yǎng)基（CSM）和半固體動(dòng)）和半固體動(dòng) 力培養(yǎng)基等常用于分離該屬的細(xì)菌。力培養(yǎng)基等常用于分離該屬的細(xì)菌。 三三 生化特性生化特性 氧化酶和觸酶陽性，可還原硝酸鹽，氧化酶和觸酶陽性，可還原硝酸鹽，不分解、不發(fā)酵各種糖類不分解、不發(fā)酵各種糖類，不分解尿素。，不分解尿素。 四四 抵抗力抵抗力 本屬細(xì)菌抵抗力弱，對一般消毒劑敏感，但耐寒，本屬細(xì)菌抵抗力弱，對一般消毒劑敏感，但耐寒， 在在4冰箱或水中可存活冰箱或水中可存活4周周。 本菌具有本菌具有粘附定居

6、粘附定居和和入侵上皮細(xì)胞入侵上皮細(xì)胞的能力，通過產(chǎn)生的能力，通過產(chǎn)生 的的腸毒素、細(xì)胞毒素腸毒素、細(xì)胞毒素和和內(nèi)毒素內(nèi)毒素等多種毒力因子致病，等多種毒力因子致病， 病變部位通常在空腸和回腸，也可蔓延至結(jié)腸。病變部位通常在空腸和回腸，也可蔓延至結(jié)腸。 五五 毒力毒力 六六 致病性致病性 可引起人畜急性傳染病可引起人畜急性傳染病彎曲桿菌病彎曲桿菌病。 1、帶菌者：動(dòng)物和人類，經(jīng)腸道或生殖道排出；、帶菌者：動(dòng)物和人類，經(jīng)腸道或生殖道排出； 2、感染：經(jīng)口、感染：經(jīng)口(污染的食物或水污染的食物或水)；經(jīng)產(chǎn)道感染嬰兒；經(jīng)產(chǎn)道感染嬰兒； 3、臨床癥狀：潛伏期、臨床癥狀：潛伏期1-10d，一般，一般3-5d

7、。 （1）腸炎：腸炎：腹瀉、腹痛、嘔吐及發(fā)熱等，初為水樣，繼而轉(zhuǎn)腹瀉、腹痛、嘔吐及發(fā)熱等，初為水樣，繼而轉(zhuǎn) 為粘液便，少數(shù)呈膿血便。為粘液便，少數(shù)呈膿血便。 （2）腸道外感染：腸道外感染：可致菌血癥、心內(nèi)膜炎、腦脊髓膜炎、血可致菌血癥、心內(nèi)膜炎、腦脊髓膜炎、血 栓性靜脈炎、關(guān)節(jié)炎、肺膿腫和腹膜炎等。栓性靜脈炎、關(guān)節(jié)炎、肺膿腫和腹膜炎等。 （3）母畜感染：母畜感染：上呼吸道癥狀、肺炎、發(fā)熱及菌血癥；死胎上呼吸道癥狀、肺炎、發(fā)熱及菌血癥；死胎 或流產(chǎn)；新生畜敗血癥及或流產(chǎn)；新生畜敗血癥及腦脊髓膜炎腦脊髓膜炎。 七七 微生物學(xué)檢查微生物學(xué)檢查 1. 標(biāo)本采集標(biāo)本采集 采集采集糞便及剩余食物糞便及剩余

8、食物， 立即送檢，或?qū)?biāo)立即送檢，或?qū)?biāo) 本接種于本接種于卡卡-布運(yùn)送布運(yùn)送 培養(yǎng)基培養(yǎng)基中送檢；中送檢； 對于高燒和腦膜炎者，對于高燒和腦膜炎者， 于用藥前抽取于用藥前抽取靜脈靜脈 血或腦脊液血或腦脊液，注入，注入 布氏肉湯送檢。布氏肉湯送檢。 2. 細(xì)菌檢驗(yàn)細(xì)菌檢驗(yàn) （1）顯微鏡檢查）顯微鏡檢查 懸滴法動(dòng)力檢查：顯微鏡下觀察有無螺旋狀或投標(biāo)樣運(yùn)懸滴法動(dòng)力檢查：顯微鏡下觀察有無螺旋狀或投標(biāo)樣運(yùn) 動(dòng)，動(dòng)，腦脊液標(biāo)本腦脊液標(biāo)本經(jīng)離心沉淀后再制成經(jīng)離心沉淀后再制成懸滴標(biāo)本懸滴標(biāo)本檢查；檢查； 染色標(biāo)本檢查：取新鮮糞便或腦脊液染色標(biāo)本檢查：取新鮮糞便或腦脊液離心沉淀物涂片離心沉淀物涂片、 革蘭氏染色

9、，找革蘭氏陰性、彎曲呈革蘭氏染色，找革蘭氏陰性、彎曲呈S狀或螺旋狀桿菌，鞭毛狀或螺旋狀桿菌，鞭毛 染色染色見一端或兩端單根鞭毛見一端或兩端單根鞭毛； （2）分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 將標(biāo)本直接接種于選擇性培養(yǎng)基上，也可將標(biāo)將標(biāo)本直接接種于選擇性培養(yǎng)基上，也可將標(biāo) 本過濾后培養(yǎng)，本過濾后培養(yǎng)，彎曲菌形成的菌落為灰色、扁平、表面濕潤、彎曲菌形成的菌落為灰色、扁平、表面濕潤、 圓形凸起、邊緣不規(guī)則，常沿穿刺線蔓延生長，血平板不溶圓形凸起、邊緣不規(guī)則，常沿穿刺線蔓延生長，血平板不溶 血，布氏肉湯中呈均勻混濁血，布氏肉湯中呈均勻混濁。 3. 細(xì)菌鑒定細(xì)菌鑒定 n彎曲菌屬的鑒定較復(fù)雜，必須綜合多種試驗(yàn)確定。通常彎

10、曲菌屬的鑒定較復(fù)雜，必須綜合多種試驗(yàn)確定。通常氧化酶氧化酶 陽性、革蘭染色陰性、彎曲呈陽性、革蘭染色陰性、彎曲呈S形或螺旋形形或螺旋形，進(jìn)一步鑒定試驗(yàn)：，進(jìn)一步鑒定試驗(yàn)： 馬尿酸鹽水解試驗(yàn)：鑒別空腸彎曲菌馬尿酸鹽水解試驗(yàn)：鑒別空腸彎曲菌空腸亞種空腸亞種和和多氏亞種多氏亞種的重的重 要試驗(yàn)；前者陽性，后者陰性。要試驗(yàn)；前者陽性，后者陰性。 醋酸吲哚水解試驗(yàn)：空腸彎曲菌為陽性而胎兒彎曲菌為陰性。醋酸吲哚水解試驗(yàn)：空腸彎曲菌為陽性而胎兒彎曲菌為陰性。 萘啶酸、頭孢噻吩耐藥試驗(yàn)：萘啶酸、頭孢噻吩耐藥試驗(yàn)： 空腸彎曲菌和大腸彎曲菌對萘啶酸敏感，對頭孢噻吩耐藥；空腸彎曲菌和大腸彎曲菌對萘啶酸敏感，對頭孢噻

11、吩耐藥； 胎兒彎曲菌對萘啶酸耐藥而對頭孢噻吩敏感。胎兒彎曲菌對萘啶酸耐藥而對頭孢噻吩敏感。 近來出現(xiàn)了對萘啶酸耐藥的空腸彎曲菌，應(yīng)結(jié)合醋酸吲哚水解試近來出現(xiàn)了對萘啶酸耐藥的空腸彎曲菌，應(yīng)結(jié)合醋酸吲哚水解試 驗(yàn)進(jìn)行鑒定。驗(yàn)進(jìn)行鑒定。 八、治療八、治療 彎曲菌感染大多呈輕癥和自限性，一般不需特異性治療。彎曲菌感染大多呈輕癥和自限性，一般不需特異性治療。 體外試驗(yàn)體外試驗(yàn)顯示，顯示，頭孢菌素和青霉素耐藥，環(huán)丙沙星治頭孢菌素和青霉素耐藥，環(huán)丙沙星治 療彎曲菌感染療彎曲菌感染對絕大多數(shù)彎曲菌對絕大多數(shù)彎曲菌非常有效非常有效，但近年出，但近年出 現(xiàn)了不少耐藥菌株。現(xiàn)了不少耐藥菌株。 空腸彎曲菌通?？漳c彎曲

12、菌通常對紅霉素敏感，耐藥率小于對紅霉素敏感，耐藥率小于5；而而80 以上的大腸彎曲菌對紅霉素耐藥。胎兒彎曲菌引起以上的大腸彎曲菌對紅霉素耐藥。胎兒彎曲菌引起 的全身感染可用紅霉素、氨芐西林、氨基糖苷類和氯的全身感染可用紅霉素、氨芐西林、氨基糖苷類和氯 霉素治療。霉素治療。 第第2節(jié)節(jié) 螺桿菌屬螺桿菌屬 Helicobacter n螺桿菌屬（螺桿菌屬（Hilicobacter）是一群氧化酶和觸酶陽性、微）是一群氧化酶和觸酶陽性、微 需氧、需氧、37生長、生長、25和和42均生長不良的革蘭陰性彎均生長不良的革蘭陰性彎 曲菌。曲菌。 n本屬細(xì)菌最早根據(jù)形態(tài)染色、培養(yǎng)條件等歸于彎曲菌屬，本屬細(xì)菌最早根

13、據(jù)形態(tài)染色、培養(yǎng)條件等歸于彎曲菌屬， 1989年年Goodwin根據(jù)其超微結(jié)構(gòu)、酶活性、脂肪酸序列、根據(jù)其超微結(jié)構(gòu)、酶活性、脂肪酸序列、 生長特性等的不同，建議將其從彎曲菌屬中劃分出來而生長特性等的不同，建議將其從彎曲菌屬中劃分出來而 成立一個(gè)新的屬成立一個(gè)新的屬Hilicobacter（螺桿菌屬）。（螺桿菌屬）。 n本屬中現(xiàn)已鑒定的有本屬中現(xiàn)已鑒定的有19個(gè)種，研究得最多、最常見的是個(gè)種，研究得最多、最常見的是 幽門螺桿菌幽門螺桿菌(H. pylori，Hp)。 幽門螺桿菌幽門螺桿菌 一、形態(tài)與染色一、形態(tài)與染色 革蘭氏陰性、無芽孢、呈螺旋革蘭氏陰性、無芽孢、呈螺旋 狀彎曲，桿狀，尤其在胃粘

14、膜狀彎曲，桿狀，尤其在胃粘膜 環(huán)境中，幽門螺桿菌具典型螺環(huán)境中，幽門螺桿菌具典型螺 旋形或彎曲形，但在旋形或彎曲形，但在陳舊培養(yǎng)陳舊培養(yǎng) 物中菌體可呈圓球狀物中菌體可呈圓球狀；多數(shù)細(xì)；多數(shù)細(xì) 菌具有位于菌體一端的多根菌具有位于菌體一端的多根帶帶 鞘鞭毛鞘鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。，運(yùn)動(dòng)活潑。 二二 培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性 n微需氧，有氧及無氧環(huán)境均不生長，潮濕，微需氧，有氧及無氧環(huán)境均不生長，潮濕，37，5-10 O2、5-12CO2生長良好，生長良好，5-10H2可刺激其生長；可刺激其生長； 最適溫度最適溫度35-37，30和和42均生長不良，此點(diǎn)可與其均生長不良，此點(diǎn)可與其 他彎曲菌區(qū)別他彎曲菌區(qū)別，生長

15、，生長pH5.5-8.5。 n普通培養(yǎng)基不生長，需補(bǔ)充血、血清、淀粉、活性炭等。普通培養(yǎng)基不生長，需補(bǔ)充血、血清、淀粉、活性炭等。 常用常用心腦浸出液瓊脂、布氏瓊脂、哥倫比亞瓊脂心腦浸出液瓊脂、布氏瓊脂、哥倫比亞瓊脂等。等。 n選擇性培養(yǎng)基：改良的選擇性培養(yǎng)基：改良的Skirrow瓊脂培養(yǎng)基加入萬古霉瓊脂培養(yǎng)基加入萬古霉 素、兩性霉素和頭孢磺啶。素、兩性霉素和頭孢磺啶。 n血平板：經(jīng)血平板：經(jīng)3-5d形成形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶小的半透明灰色菌落，有微弱的溶 血環(huán)，革蘭氏染色淺血環(huán)，革蘭氏染色淺。 三三 生化反應(yīng)生化反應(yīng) n生化反應(yīng)不活潑，氧化酶和觸酶陽性，生化反應(yīng)不活潑，氧化酶和觸

16、酶陽性，不分解任何糖類，不分解任何糖類， 脲酶強(qiáng)陽性，可與本屬其他細(xì)菌區(qū)別脲酶強(qiáng)陽性，可與本屬其他細(xì)菌區(qū)別，也是檢測，也是檢測HP的的 快速診斷方法之一?？焖僭\斷方法之一。 四四 抵抗力抵抗力 n對酸敏感對酸敏感，尿素可保護(hù)該菌，尿素可保護(hù)該菌，1膽鹽可抑制其生長。膽鹽可抑制其生長。 n耐藥性：耐藥性：對多粘菌素、三甲氧芐氨嘧啶、磺胺、萬古對多粘菌素、三甲氧芐氨嘧啶、磺胺、萬古 霉素和萘啶酸天然耐藥。霉素和萘啶酸天然耐藥。 n在體外藥敏試驗(yàn)中，在體外藥敏試驗(yàn)中，該菌對不少抗生素敏感，但體內(nèi)該菌對不少抗生素敏感，但體內(nèi) 用藥效果不佳用藥效果不佳，主要因?yàn)樵摼纳谡骋簩酉碌奈干?，主要因?yàn)樵摼纳?/p>

17、在粘液層下的胃上 皮細(xì)胞表面，皮細(xì)胞表面，抗生素不能滲入胃粘膜深層抗生素不能滲入胃粘膜深層。 n臨床上治療該菌的藥物有阿莫西林、甲硝唑、克拉霉臨床上治療該菌的藥物有阿莫西林、甲硝唑、克拉霉 素、四環(huán)素、呋喃唑酮等。素、四環(huán)素、呋喃唑酮等。 五五 致病因子與致病性致病因子與致病性 n該菌有較強(qiáng)的該菌有較強(qiáng)的鞭毛鞭毛動(dòng)力，對胃粘膜有較強(qiáng)粘附力，在接近中性的動(dòng)力，對胃粘膜有較強(qiáng)粘附力，在接近中性的 粘膜層定植，產(chǎn)生強(qiáng)活性粘膜層定植，產(chǎn)生強(qiáng)活性尿素酶尿素酶以分解尿素，在菌體周圍形成保以分解尿素，在菌體周圍形成保 護(hù)性氨環(huán)境，以抵抗胃粘膜上皮細(xì)胞分泌的胃酸；該菌產(chǎn)生的護(hù)性氨環(huán)境，以抵抗胃粘膜上皮細(xì)胞分泌

18、的胃酸；該菌產(chǎn)生的蛋蛋 白酶白酶能有效分解粘液蛋白，提供營養(yǎng)。能有效分解粘液蛋白，提供營養(yǎng)。 n幽門螺桿菌在胃內(nèi)定植后，粘附于胃粘膜上皮細(xì)胞、通過幽門螺桿菌在胃內(nèi)定植后，粘附于胃粘膜上皮細(xì)胞、通過胃腸激胃腸激 素刺激素刺激和細(xì)胞壁和細(xì)胞壁脂多糖中脂質(zhì)脂多糖中脂質(zhì)A的致炎作用、產(chǎn)生的致炎作用、產(chǎn)生多種酶多種酶(尿素酶、尿素酶、 蛋白酶、過氧化氫酶、脂酶和磷脂酶等蛋白酶、過氧化氫酶、脂酶和磷脂酶等)以及以及細(xì)胞毒素細(xì)胞毒素，共同作，共同作 用導(dǎo)致臨床疾病的發(fā)生。用導(dǎo)致臨床疾病的發(fā)生。 n主要主要引起消化性潰瘍引起消化性潰瘍（十二指腸潰瘍、胃潰瘍）、慢性活動(dòng)性胃（十二指腸潰瘍、胃潰瘍）、慢性活動(dòng)性胃 竇炎等，長期感染易發(fā)展為竇炎等，長期感染易發(fā)展為萎縮性胃炎、胃腺癌萎縮性胃炎、胃腺癌和胃粘膜淋巴組和胃粘膜淋巴組 織淋巴瘤。織淋巴瘤。 六六 微生物學(xué)診斷微生物學(xué)診斷 六六 微生物學(xué)診斷微生物學(xué)診斷 1. 標(biāo)本采集標(biāo)本采集 采集胃和十二指腸粘膜新鮮標(biāo)本，置2ml無菌生理鹽水，運(yùn)輸 途中不超