完整Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、1. 目的描述Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。2. 適用范圍化驗室3. 責(zé)任者化驗員應(yīng)嚴(yán)格遵照該操作規(guī)程，QC主管負(fù)責(zé)監(jiān)督本規(guī)程的實施。4. 定義HPLC High Performanee Liquid Chromatography ,高效液相色譜儀。5. 安全注意事項5.1有機(jī)溶媒有害健康，各溶劑瓶口應(yīng)封嚴(yán)。5.2注意檢查廢液桶中廢液應(yīng)避光，防止廢液桶滿外溢。6. 規(guī)6.1.Waters HPLC的組成：貯液器 輸液泵 自動進(jìn)樣器 分離柱（柱溫箱） 紫外檢測器 控制及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（Millennium 32化學(xué)工作站）。6.2.HPLC系統(tǒng)的打開及關(guān)閉順序6.2.1打開順序于分體式：

2、 打開開關(guān)， 開 Mill enn i um柱溫箱、檢測器的順最后請按泵、進(jìn)樣器待各部分分別顯示初始化完畢后， 32化學(xué)工作站。泵與色譜工作站的連接：對于510泵，因 為此泵與色譜工作站是 單向聯(lián)系，如要使泵在Remote狀態(tài)下由工作站控制，首先要在泵 的鍵盤上按 Me nu鍵，待顯示屏切換至Mode狀態(tài)下，其狀態(tài)是Loca，按Edit/E nter鍵，在Local的L前有閃動的光標(biāo)顯示，按鍵，Local轉(zhuǎn)換成Rem，再按Edit/Enter鍵，此命令已輸入進(jìn)去,最后按 Stop /Run鍵，使泵處于Run狀態(tài)這時泵和工作站的連接即告成功。泵 的任何動作都可由工作站來控制。還應(yīng)注意這一步工作在

3、每次開機(jī) 時都要進(jìn)行。對于Allianee 2690系統(tǒng)：先打開Allianee 2690主機(jī)、檢測器電源開關(guān), 待初始化完畢后，再進(jìn)入Mille nnium 32化學(xué)工作站。對于流動相的要求：對于液體試劑應(yīng)盡量采用色譜純試劑；對于所 用到的固體試劑應(yīng)采用分析純試劑；對于水，應(yīng)采用經(jīng)純水機(jī)處 理過的超純水；流動相在使用前一定要經(jīng)0.45 m的濾膜（濾膜分 為水相膜與有機(jī)相膜，確保使用正確的濾膜，參見附表）過濾、超聲 真空脫氣方可使用，嚴(yán)禁含鹽的流動相未經(jīng)過濾直接使用。應(yīng)養(yǎng)成良好操作習(xí)慣: 規(guī)范操作，樹立保護(hù)HPLC整套系統(tǒng)的概念，尤其對于輸液泵、色 譜柱、檢測器，在使用后應(yīng)及時沖洗，以免污染而

4、使其壽命縮短或 損壞，尤其如操作者使用了含鹽的流動相，更應(yīng)注意清洗的步驟： 首先用脫過氣的純水在流速為1ml/min左右沖洗3060分鐘，再用 含50 %以上甲醇或乙腈的水溶液以相同的流速沖洗2030分鐘左 右。如要卸下柱子，在經(jīng)過上述沖洗過程之后，再經(jīng)純甲醇或乙腈以1ml/min的流速沖洗20 30分鐘，柱子卸下后應(yīng)馬上擰緊柱堵。流速的變化應(yīng)采用階梯式遞增或遞減的方式，啟動泵時，應(yīng)在2分 鐘之內(nèi)由小流速慢慢增大到所需的流速，泵關(guān)閉時亦然（流速遞 減）。切忌流速的驟變。622 關(guān)閉順序首先退出Millennium 32化學(xué)工作站，再關(guān)閉系統(tǒng)的其他部分。6.3. Millennium 32化學(xué)工

5、作站Mille nn ium 32色譜管理系統(tǒng)是集數(shù)據(jù)采集、處理、HPLC系統(tǒng)的控制、 結(jié)果的管理、報告的打印為一體的綜合系統(tǒng)。下面就著重介紹該系 統(tǒng)的基本操作知識。6.3.1 Millennium 32化學(xué)工作站的進(jìn)入打開化學(xué)工作站，系統(tǒng)自動進(jìn)入P rogram Ma nager界面， 雙擊 Millennium 肖像，這 時進(jìn)入 Millennium 界面， 雙擊 Session Manager 圖 標(biāo)，系統(tǒng)將自動初始化，以使工作站和HPLC整套系統(tǒng)進(jìn)行聯(lián) 接。初始化后，按系統(tǒng)要求鍵入你的User Name和P assword,這時 你已進(jìn)入該系統(tǒng)。6.3.2 Project的進(jìn)入和建立?

6、 Proj ect 的 進(jìn) 入： 在 Session M anager 窗 口 下 ， 擊 Project 肖 像 （或 從 Vi ew 中 選 擇 Projects）, 在 其 中 有 已 建 好 的 Project， 雙 擊你所需的P roject肖像，再進(jìn)行你想做的工作。? Proj ect 的 建 立從 File 中 選 擇 New， 即 顯 示 New Project 的 畫 面 。在 Project Name 中 輸 入 你 的 Project 名 稱 。在 Initiallze Project 項 目 中 選 擇 Copy 中 的 filter and fields 或 Meth

7、ods。在 From Project 中 選 擇 要 拷 貝 的 現(xiàn) 存 Project。選擇 Tablespace size。選 OK， 存 貯并 退出 。當(dāng) Millennium 軟 件在 建 立一 個 新的 Project 時 ， 在屏 幕上 及時 顯 示出 完 成建立新Project的百分比。當(dāng)達(dá)到100%時，在SessionManager畫面即 出現(xiàn)一個新的 Project 肖 像。6.3.3 收 集 數(shù) 據(jù) 的 一 般 過 程使 用 Millennuium 32收 集 數(shù) 據(jù) 的 一 般 過 程 如 下 ：在 Project 窗 口 內(nèi) 建 立 收集數(shù)據(jù)所需 儀器的 儀器方法； 建

8、立包括此儀器方法的方法 組；使用此方法組收集數(shù)據(jù)。本部分包括：建立儀器方法，建立方法組，收集樣品。? 建 立 / 修 改 儀 器 方 法從 Sessoin Man age窗 口，打開 所需的 P roject。選擇 Method 按鈕， 現(xiàn)存的方法的肖像即出現(xiàn)在屏幕上。從 命 令 菜 單中 選 擇 File， 然 后選 擇 其 中 的 New Instrument Method ， 即 出 現(xiàn)System Open對 話 框。在目錄中選擇收集數(shù)據(jù)需 要使用的 色譜硬件系統(tǒng)的 名稱， 如：System_1。 按 OK， 這時 Instrument Method 窗口 即顯 示出來。窗口 的上部分

9、是該系統(tǒng)的所有儀器的肖像。 用鼠標(biāo)器將需要設(shè)定 儀器參數(shù)的儀器部件激活， 然后在儀器肖像上雙擊兩下， 即出現(xiàn) Instrument Dialog Box 畫 面 。對各個部件設(shè)置操作條件，或通過輸入新的參數(shù)來更改以前的參 數(shù)。 例如： 定義泵參數(shù)，先雙擊 SIM/PCM 的肖像。 填寫泵參數(shù)， 按 OK 。當(dāng)所有參數(shù)設(shè)置完成后 ， 按 OK。 即 回 到 Instrument Method 窗 口 。 選 File 中 的 Save As 存 貯 儀 器 方 法 文 件 ， 如 有 需 要 ， 起 一 文 件 名 ， 按 OK。選擇File中的Exit,即回到P roject窗口。新的儀器方法

10、肖像即出現(xiàn)在 此窗口 下。? 建 立 方 法 組 (Method Set) 儀器方法 編好后， 必須存于一方法組中， 才能在 Quick Set Control 中 調(diào) 用 。在 Project 窗 口 下 選 方 法 肖 像 。選 File 中 的 New Method Set， 即 顯 示 出 Method Set 對 話 框 。在 此 畫 面 的 Instrument Method 一 欄 ， 選 擇 已 確 定 的 儀 器 方 法 。 其 他 項 目可空著不填。 然后選 File， Save As。 輸入方法組名后，按 OK。選 File， Exit。 即退回到 Project 窗口

11、。 新設(shè)置的 方法組肖 像即出現(xiàn)在 此窗口 下。? 收 集 樣 品 ： 完 成 以 上 各 步 驟 后 ， 即 可 收 集 樣 品 。在 Project 窗 口 下 選 擇 Quick Set Control 肖 像 。 出 現(xiàn) System Open 對 話 框 。選擇建立儀器方法時確定的色譜硬件系統(tǒng)，按 OK。 即出現(xiàn) Quick Set Control 窗 口 。在 此 窗 口 下 的 Sample Loading Table 中 用 鼠 標(biāo) 器 按 第 一 行 ， 這 時 Millennium 軟 件 會 自 動 填 充 各 項 初 始 參 數(shù) 。 通 過 輸 入 新 值 可 更 改

12、表 中 的 各項參數(shù)， 表中 的 瓶號(對于高效液相色譜儀的 進(jìn) 樣表，除另 有規(guī)定外， 按括號法安排進(jìn)樣順序。 即 第一針為標(biāo)準(zhǔn)品 1作為系統(tǒng) 適用性共進(jìn)6針，要求RSD不大于2%，隨后為標(biāo)準(zhǔn)品2，進(jìn)樣次數(shù) 為 2針， 然后為樣 品 1到 樣品 3， 各進(jìn) 2針。 樣品 3 后為標(biāo) 準(zhǔn)品 1，依 次類推， 直到 將所有樣 品都安排在進(jìn) 樣表中 ) 進(jìn) 樣次數(shù)， 進(jìn)樣體 積， 運行時間等項目對自動進(jìn)樣器有控制作用。在 Method Set Report 一 列 中 選 擇 在 前 面 剛 剛 建 立 的 方 法 組 。在運行 方式 ( mode )中選 Run Only。選擇進(jìn)樣方式：菜單mo

13、de下選單個樣品或樣品組進(jìn)樣。將Samp le Loadi ng Table中 第一行 點黑。 擊Set up In strume nt按鈕，啟動系 統(tǒng)。系統(tǒng)啟動后可擊basel ine mon itor圖標(biāo)，即可觀察基線。待基線平穩(wěn)后， 擊綠燈或樣品盤肖像準(zhǔn)備進(jìn)樣。 出現(xiàn) Injector wait 提 示信息 ， 隨 即 進(jìn)樣。在樣品測試過程中， 系統(tǒng) 會在 Quick Set 窗口下顯示 瓶號和進(jìn)樣次數(shù) 及運行時 間。 并可在 此窗口下觀察檢測器 的 輸出情況。 屏幕上顯 示的檢測器輸出是自 動滿量程方式 （即自 動按最大信號滿格輸出 ）。樣品收如儀器方 印實驗報當(dāng)收集完色譜數(shù)據(jù)后 ，

14、選擇 File， Exit。 退出 Quick Set 窗口 集完成后，Millennuium 32會自動存貯收集的數(shù)據(jù)。6.3.4 建 立 數(shù) 據(jù) 處 理 的 方 法在Mille nn uium 32中，完成不同的任務(wù)需編輯不同的方法， 法 （收 集 數(shù) 據(jù) ）， 處 理 方 法 （定 性 定 量 分 析 ） ， 報 告 方 法 （ 打 告 ）等 。本部分包括：*重新調(diào)出色譜峰進(jìn)行觀察。*譜 圖積 分及 確定積分 表中 的參數(shù)。*輸 入組 分表 資料。*存 貯數(shù) 據(jù)處 理方法。?調(diào)閱色譜圖進(jìn)入在其中收集樣品的 Project， 在此 窗口 下選 Channel 肖像。在 Channel Vi

15、ew Table 中 選 擇 欲 進(jìn) 行 色 譜 分 析 的 文 件 行 并 使 其 變 黑。在 Tools 下 選 擇 Review 肖 像 ， 這 時 在 Review Data 窗 口 下 即 顯 示 出 你 調(diào) 入的色 譜圖 。選 File， New Method 。 在 New Method 對 話框 中指定數(shù)據(jù) 處理的類型， 如 LC ， 選 OK 。? 色 譜 圖 的 積 分 選 View ， Integration Table。 在 屏 幕 下 部 即 出 現(xiàn) Integration Event Table。在 Peak Width， Minimum Area ， Minimu

16、m Height 方 框 中 輸 入 適 宜 的 數(shù) 值 。按 Integration 按 鈕 ， 觀 察 積 分 情 況 ， 并 適 當(dāng) 進(jìn) 行 積 分 參 數(shù) 的 調(diào) 整 。?輸入組分資料選 View ， Component Table。 即 可 見 到 空 的 組 分 表 。選 Options， Fill Table From Result， 即 可 自 動 填 充 積 分 完 畢 的 色 譜 圖 的 組分表 。 也 可 用手動 方式 修改 表中的參 數(shù)。按 Calibration/Quantitate 后 ， 選 View， Result Table。 即 可 看 到 積 分 的 結(jié)

17、果。?存貯數(shù)據(jù)處理方法在 Review Data 窗口下，選 File , Save Method。在 Processing Method Save As 對話框 的窗 口 下輸 入數(shù) 據(jù)處 理方法名 稱。按 OK ， 貯 存 Processing Method。 在 組 分 表 的 上 方 可 看 到 新 的 Processing Method 的 名 稱 。選 File, Exit。即可退出 Review Data 窗口，回到 Project 窗 口 。擊 Resul t Vi ew 肖 像 。6.3.5 重 新 觀 察 色 譜 結(jié) 果? 進(jìn) 入 你 所 需 的 Proj ect 窗 口

18、。? 在 R esul t Vi ew Tabl e 中 選 擇 你 想 觀 察 的 色 譜 數(shù) 據(jù) 。? 擊 Revi ew 肖 像 ， 你 所 選 擇 的 第 一 個 色 譜 數(shù) 據(jù) 的 譜 圖 將 在Revi ew Data 窗 口 下 ， 其 結(jié) 果 將 顯 示 在 Resul t Table 中 的 第 一行。? 按 Next Ch/ In j 的 方 框 即 可 看 到 下 一 針 進(jìn) 樣 的 有 關(guān) 資 料 。? 選 File， Exit。 即 可 回 到 Project 窗 口 。6.3.6 報告 方法 的編 輯及試驗 報告 的打印? 啟 動 報 告 出 版 系 統(tǒng)進(jìn)入 “PR

19、OJECT”窗 口。選 擇 File ， New Report Method。 這 時 即 可 編 輯 新 的 報 告 方 法。在報告排版窗口中，右邊為一張模擬的 白紙，左上 方的 列表為排 版時可放置在右邊紙上的項目。 如圖譜，積分表，樣品信息，儀器 方 法 等， 左 下 方 為 報 告 頭 標(biāo) 和 腳 標(biāo)（ 如 土。 選 擇 Individual 為 每 個 結(jié)果有一個報告，選Summary of Result Sets All方式為打一個集中的報 告。 按 OK 。? 設(shè) 計 報 告 格 式按 一 下 Chromatogram Groups 肖 像。 在 Chromatogram Gro

20、ups 列 表 中 選 擇 Auto-scaled Chromatogram 。 并 在 報 告 頁 面 上 按 一 下， 用 鼠 標(biāo) 器 將 此 圖 形放在畫面合適的位置上。用鼠標(biāo)器將箭頭放在畫面的邊緣， 當(dāng)箭頭變成雙 箭頭時將圖形放 大或縮 小。選 擇 Format， Landscape。 可 將 圖 譜 垂 直 放 置。按 一下 Method Group 肖 像， 從 Method Group 的 列表 中 選擇 Instrument Method， 并 在 報 告 頁 面 上 的 合 適 處 按 一 下。 這 時 Instrument Method 方 框?qū)⒊霈F(xiàn)在報告頁面上。按一下Ta

21、ble Groups肖像，在Table Groups，并在報告格式上的合適位 置上按一下。選 擇 Format， Page Size。 可 改 變 報 告 尺 寸 的 大 小。選 擇 Customize，Header。 即 出 現(xiàn) Header 窗 口。 在 此 窗 口 下 選 擇 General information 肖 像。在 General information Field 列 表 中 按 一 下 Date。 這 時 在 Field Name 的 方 框 中 即 出 現(xiàn) Date 方 框。 可 用 鼠 標(biāo) 器 將 此 方 框 移 動 到 合 適的位 置。可 用 文 字， 容。選 Fi

22、le ，HeaderSave。 窗 口。輸 入 Header 的 名 稱 （如： My_Header， 按 OK ， 返 回 到選 File ，Exit。即 回 到 Report Publisher 窗 口。箭 頭， 方 框 等 工 具 在 Header 窗 口 下 增 加 你 感 興 趣 的 內(nèi)在 Customize，F(xiàn)ooter。 即 出 現(xiàn) Footer 窗 口。按 一 下 General information 肖 像， 在 General information Field 列 表 中 按 一 下 Page Number的方框。將此方框放在報告頁面的注腳位置上。選 File， Sav

23、e。 輸 入 Footer 的 名 稱 （ 如： My_ Footer ）， 按 OK， 返 回 到 Footer 窗 口。選 File， Exit 。 回 到 Report Publish 窗 口。在 Footer 列 表 中 選 剛 編 好 的 腳 標(biāo)。 ?存儲報告方法選File, Sava 輸入此報告的方法名（如：My_ Re port ）,按OK,返回到Report Publisher窗 口。選File，Exit。 即回到PROJECT窗口。在此窗口下即可看到My_ Report 報告方法的 肖 像。? 報 告 格 式 預(yù) 覽： 報 告 格 式 設(shè) 計 好 后， 在 打 印 之 前，

24、可 在 此 預(yù) 先 看 到 打 印 效 果， 如 需 修 改 可 隨 時 切 換 到 報 告 出 版 窗 口， 邊 看 邊 修 改， 直 到 滿 意 為 止。在 PROJECT 窗 口下，選 Result 肖像，即出現(xiàn) Result View Table 表。在此表上選擇需要報告的 結(jié)果文件, 使其變黑。按一下 Preview 肖像，即出現(xiàn) Report Method Selection窗 口。從目錄上選擇 剛才已建立好的 報告方法， 按 OK。 這時即 出 現(xiàn)剛才 所選結(jié)果的 報告。在上畫面上按Next Page或PrevP age即可看到報告的下一頁或上一頁。按方法編輯 肖 像即可對當(dāng)前方

25、法進(jìn) 行編輯。按 打 印 肖 像， 即 可 將 此 報 告 打 印 出 來。選擇File，Exit。即可退出報告畫面，回到“PROJECT”窗口。6.3.7 批量進(jìn)樣結(jié)果的處理及打印報告? 當(dāng) 已 有 確 定 的 處 理 方 法 后 ， 可 用 此 方 法 處 理 數(shù) 據(jù) 。在 Channel View Table 表 中 選 擇 你 要 的 樣 品 行 并 將 其 按 黑 。在 Tools 下 擊 Processand Report 肖 像 。 這 時 即 出 現(xiàn) Process and Report Options 對 話 框 。在 處理 方法一 欄中選擇 Use Specified Prosessing method 并指 定處理方 法，把Print選擇框的叉扇掉。按0K。這時開始處理你所選的數(shù) 據(jù)，在屏幕下方顯示出Result Gen erator肖像。按 Result View